Teza Seleniu

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE
GRIGORE T. POPA IAI

FACULTATEA DE FARMACIE

ALIMENTELE I SUPLIMENTELE NUTRITIVE
SURSE DE SELENIU PENTRU ORGANISM

REZUMATUL TEZEI DE DOCTORAT

COORDONATOR TIINIFIC:
PROF. UNIV. DR. RODICA CUCIUREANU

DOCTORAND:
VLAD - IOAN TEODOR

IAI, 2011

Universitatea de Medicin i Farmacie Gr. T. Popa Iai
Facultatea de Farmacie

Doamnei/Domnului
V facem cunoscut faptul c n ziua de 30 noiembrie 2011 la ora
9.00, n sala S.M.N. Iai va avea loc susinerea public a tezei de doctorat
intitulat Alimentele i suplimentele nutritive surse de seleniu pentru
organism elaborat de farmacist Vlad - Ioan Teodor, conductor tiinific
prof. Dr. Rodica Cuciureanu, n vederea conferirii titlului tiinific de
doctor n Domeniul fundamental tiine Medicale, domeniul Farmacie.
V invitm s participai la aceast manifestare!

Comisia de doctorat are urmtoarea componen:

PREEDINTE: Decan Prof. Univ. Dr. Monica Hncianu,
Universitatea de Medicin i Farmacie Gr. T. Popa Iai,

CONDUCTOR TIINIFIC: Prof. Univ. Dr. Rodica Cuciureanu

REFERENI OFICIALI:
Prof. Univ. Dr. Vasile Dorneanu
Conf. Univ. Dr. Lorena Filip
Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu Cluj-
Napoca, Facultatea de Farmacie
Conf. Univ. Dr. Ana Corina Ioni
Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti,
CUPRINS
Introducere................................................................................................................................. 1
Partea general ......................................................................................................................... 5
CAPITOLUL I. SELENIUL I ORGANISMUL UMAN.................................................... 6
I.1. Seleniul i organismul uman. Aspecte generale.................................................................... 6
I.1.1. Scurt istoric................................................................................................................... 6
I.1.2. Stare natural. Surse de seleniu. Cciclul biologic al seleniului.................................... 6
I.1.3. Seleniul microelement eseial pentru organism......................................................... 12
I.2. Farmacocinetica seleniului.................................................................................................... 18
I.3. Rolul seleniului n organismul uman..................................................................................... 20
I.3.1. Seleniul i metabolismul uman..................................................................................... 20
I.3.2. Aciunea detoxifiant a seleniului................................................................................. 26
I.3.3. Necesarul zilnic de seleniu........................................................................................... 28
I.4. Patologia provocat de deficitul de seleniu........................................................................... 33
I.4.1. Deficitul de seleniu i Boala Keshan (cardiomiopatia) ............................................... 33
I.4.2. Deficitul de seleniu i Boala Kashin-Beck (boala Urov) ............................................. 33
I.4.3. Deficitul de seleniu n cretinismul mixedematos endemic.......................................... 34
I.4.4. Implicaii ale seleniului n carcinogenez..................................................................... 34
I.4.5. Deficitul de seleniu i funcia imun............................................................................ 36
I.4.6. Rolul seleniului n infeciile virale .............................................................................. 37
I.4.7. Deficitul de seleniu i bolile cardiovasculare.................................................................. 37
I.4.8. Seleniul i funcia respiratorie...................................................................................... 38
I.4.9. Seleniul i funcia tiroidian......................................................................................... 38
I.4.10. Seleniul i funcia pancreatic.................................................................................... 38
I.4.11. Seleniul - implicaii n alte patologii ......................................................................... 38
I.5. Patologia provocat de excesul de seleniu............................................................................ 39
I.6. Surse alimentare de seleniu................................................................................................... 41
I.6.1. Alimente de origine vegetal - surse de seleniu........................................................... 41
I.6.2. Alimente de origine animal surse de seleniu........................................................... 43
I.6.3. Metode de mbogire a coninutului de seleniu al alimentelor.................................... 45
I.6.4. Suplimente nutritive surse de seleniu......................................................................... 48
Partea experimental.................................................................................................................. 51
CAPITOLUL II. ESTIMAREA APORTULUI DE SELENIU PRIN CONSUM DE
ALIMENTE................................................................................................................................

52
II.1. Introducere............................................................................................................................ 52
II.2. Determinarea spectrofotometric a seleniului din produse alimentare................................ 54
II.2.1. Protocol de validare analitic a metodelor spectrofotometrice................................... 54
II.2.2. Stabilirea condiiilor de aplicare a metodei spectrofotometrice de determinare a
seleniului din produse alimentare...........................................................................................

59
II.2.2.1. Stabilirea lungimii de und la care absorbana este maxim........................... 60
II.2.2.2. Stabilirea volumului soluiei de acid clorhidric necesar sistemului seleniu
(IV) - iodur de potasiu-albastru variamin.....................................................................

61
II.2.2.3. Stabilirea volumului soluiei albastru variamin necesar sistemului seleniu
(IV) - iodur de potasiu- albastru variamin...................................................................

62
II.2.2.4. Stabilirea volumului soluiei de iodur de potasiu necesar sistemului
seleniu (IV) - iodur de potasiu-albastru variamin ...................................................... 62
II.2.2.5. Stabilirea volumului soluiei de acetat de sodiu necesar sistemului seleniu
(IV) - iodur de potasiu - albastru variamin...................................................................

63
II.2.2.6. Studiul influenei EDTA asupra sistemului seleniu (IV)-iodur de potasiu
- albastru variamin.........................................................................................................

63
II.2.2.7. Studiul stabilitii produsului de reacie......................................................... 64
II.2.3. Raportul de validare a metodei de analiz a seleniului..................................................... 65
II.2.3.1. Liniaritatea....................................................................................................... 65
II.2.3.2. Precizia metodei................................................................................................. 67
II.2.3.2.1. Repetabilitatea deteciei.................................................................. 67
II.2.3.2.2. Precizia intermediar...................................................................... 68
II.2.3.2.3. Repetabilitatea metodei.................................................................. 68
II.2.3.3. Exactitatea metodei......................................................................................... 69
II.2.3.4. Randament de recuperare................................................................................ 70
II.2.3.5. Limita de detecie (LD) i limita de cuantificare (LC).................................... 71
II.2.4. Determinarea seleniului din produse alimentare............................................................... 71
II.2.4.1. Probe de analizat.............................................................................................. 71
II.2.4.2. Separarea seleniului din probele de analizat (material vegetal,
pine,semine) (JAOAC, 2000) ....................................................................................

71
II.2.4.3.Determinarea seleniului din probele de produse alimentare............................ 72
Concluzii...................................................................................................................................... 74
CAPITOLUL III. ROLUL SUPLIMENTELOR NUTRITIVE N ASIGURAREA
APORTULUI DE SELENIU PENTRU ORGANISM.......................................................

76
III.1. Suplimente nutritive: aspecte generale................................................................................ 76
III.2. Suplimente nutritive cu seleniu........................................................................................... 78
III.2.1. Determinarea seleniului prin metoda spectrofotometric cu iodur de potasiu -
albastru variamin.................................................................................................................

80
III.2.2. Determinarea seleniului din probele de suplimente alimentare.............................. 81
III.2.3. Studiul cedrii in vitro a seleniului din suplimente nutritive.................................. 82
Concluzii...................................................................................................................................... 88
CAPITOLUL IV. EVALUAREA ROLULUI PROTECTOR AL SELENIULUI N
INTOXICAIA ACUT CU ACRILAMID PE BAZA UNOR PARAMETRI
BIOCHIMICI, HEMATOLOGICI I HISTOPATOLOGICI............................................

90
IV.1. Introducere ......................................................................................................................... 90
IV.1.1. Expunerea populaiei la acrilamid.......................................................................... 92
IV.1.2. Toxicitatea experimentala acrilamidei................................................................... 94
IV.2. Obiectivele cercetrii.......................................................................................................... 97
IV.3. Investigaii biochimice....................................................................................................... 98
IV.3.1.Determinarea activitii transaminazelor................................................................. 98
IV.3.1.1. Determinarea activitii alanin-amino-transferazei (ALT) ........................ 99
IV.3.1.2. Determinarea aspartat-amino-transferazei (AST) ...................................... 100
IV.3.2. Determinarea activitii -glutamil transpeptidazei (GGT) ............................................ 101
IV.3.3.Determinarea lactat dehidrogenazei (LDH) ............................................................ 103
IV.3.4. Determinarea fosfatazei alcaline (ALP) ................................................................ 104
IV.3.5. Determinarea creatin kinazei (Creatin-fosfokinaza, CK)....................................... 105
IV.3.6. Determinarea albuminelor din snge...................................................................... 106
IV.3.7. Determinarea proteinelor totale........................ ..................................................... 107
IV.3.8. Determinarea bilirubinei....................... ................................................................. 109
IV.3.8.1. Determinarea bilirubinei totale....................... ........................................... 109
IV.3.8.2. Determinarea bilirubinei directe................................................................ 109
IV.3.9. Determinarea colesterolului.................................................................................... 110
IV.3.10. Determinarea LDL colesterolului...................................................................... 111
IV.3.11. Determinarea trigliceridelor.................................................................................. 112
IV.3.12 .Determinarea calciului total.................................................................................. 113
IV.3.13. Determinarea magneziului.................................................................................... 114
IV.3.14. Determinarea ferului............................................................................................. 115
IV.3.15. Determinarea sodiului i potasiului..................................................................... 116
IV.3.16. Determinarea nivelului plasmatic al ureei............................................................ 119
IV.3.17. Determinarea creatininei....................................................................................... 120
IV.3.18. Determinarea acidului uric.................................................................................... 121
IV.3.19. Determinarea triiod-tironinei (T3) ....................................................................... 123
IV.3.20. Determinarea tiroxinei (T
4
) .................................................................................. 124
IV.3.21. Determinarea cortisolului...................................................................................... 126
IV.3.22. Determinarea glicemiei......................................................................................... 128
IV.3.23.Evaluarea potenialului protector al seleniului asupra stresului oxidativ
provocat de intoxicaia cu acrilamid.................................................................................

129
IV.3.23.1. Determinarea superoxid dismutazei (SOD) ............................................ 132
IV.3.23.2. Determinarea glutationperoxidazei n snge total................................... 133
IV.3.23.3. Determinarea glutationului redus............................................................. 135
IV.3.23.4. Determinarea malondialdehidei (MDA).................................................. 136
IV.3.23.5. Determinarea statusului total antioxidant (TAS)..................................... 138
IV.4. Evidenierea modificrilor histopatologice........................................................................ 149
Concluzii...................................................................................................................................... 154
CAPITOLUL V. CONCLUZII GENERALE........................................................................
Bibliografie..................................................................................................................................
157
159

1
INTRODUCERE

Seleniul a fost cunoscut, nc de la descoperirea sa de ctre
Berzelius, n anul 1817, ca fiind un element toxic. Cercetrile ulterioare au
demonstrat c acesta este de fapt, un nutrient esenial pentru organismul
uman, cu rol fiziologic mportant n prevenirea i chiar vindecarea unor
afeciuni. Din punct de vedere biochimic, seleniul este un component al
enzimei glutation-peroxidaza care, alturi de alte enzime cum sunt
superoxid-dismutaza, catalaza i de vitamina E, protejeaz componentele
celulare de efectele negative produse de acumularea de peroxizi n esuturi.
Seleniul este un important antioxidant biologic, aciune la care
particip n diferite moduri; este constituent al glutation-SH-peroxidazei,
seleno-enzim care catalizeaz reducerea peroxizilor lipidici i a
peroxidului de hidrogen, i n acest mod previne efectele nocive ale
peroxidrii lipidelor cu un coninut ridicat n acizi grai nesaturai i
protejeaz eritrocitele de hemoliz.n plus, seleniul protejeaz celulele i
membranele celulare de procesele oxidative, facilitnd reacia dintre oxigen
i hidrogen i transferul ionilor la nivel membranar; n concentraii mici are
aciune antinecrotic.
Alturi de vitamina E i de tioaminoacizi, seleniul reprezint un
factor hepatoprotector, numit curent factorul 3-hepatoprotector. De
asemenea, este binecunoscut aciuna detoxifiant a seleniului; n
concentraii mici reduce aciunea nociv a unor ioni metalici toxicogeni:
Hg
2+
, Cd
2+
, Pb
2+
, Cu
2+
, As
3+
.
Deficitul de aport alimentar de seleniu (semnalat n regiunile n
care solul este srac n acest element chimic) este corelat cu apariia unor
manifestri patologice specifice: anemie hemolitic; cardiopatii (mai ales la
copii - maladia Keshan); maladia Kashin-Beck caracterizat prin rigiditate
muscular, dureri articulare, osteoartrit generalizat; malnutriie proteico-
caloric. n concentraii mari are aciune carcinogen.
Alimentaia echilibrat asigur necesarul zilnic de seleniu. Alimente
mai bogate n seleniu sunt: carnea, viscerele (ficat, rinichi), petele (mai ales
cel de ap srat), laptele i derivatele, oul, cerealele, unele legume i fructe;
concentraia de seleniu n alimente este dependent de concentraia acestuia n
sol. Concentraiile seleniului n sol variaz n medie ntre 0,1 i 2 mg/kg, n
zonele selenifere putnd ajunge pn la 1200 mg/kg.
Seleniul este n mod eficient transferat din sol prin intermediul
plantelor i alimentelor de origine animal n organismul uman. Cantitatea
de seleniu din alimente variaz n limite largi n funcie de zona geografic
de provenien i de cantitatea de seleniu din solul regiunii respective.
2
Aportul inadecvat de alimente, respectiv absorbia incomplet a
principiilor nutritive conduce progresiv la stri de dezechilibru concretizate
prin simptome de caren. Explorarea status-ului nutriional al organismului
este necesar pentru a corecta prompt fenomenele de caren sau de aport
excesiv de principii nutritive.
Utilizarea suplimentelor alimentare autorizate este justificat numai
n cazul unei carene dovedite; dozele recomandate trebuie sa corespunda
nevoilor fiziologice. Doza zilnic de seleniu din diet nu este ntotdeauna
de ajuns pentru nevoile nutriionale ale organismului, mai ales pentru
persoanele care locuiesc n zone cu soluri srace n acest element.
Numeroi medici recomand mrirea dozei de seleniu din diet i folosirea
de suplimente nutritive cu acest produs, mai ales ca mijloc de a reduce
riscul apariiei unor forme de cancer. Acest lucru presupune o grij sporit
pentru a gsi forma potrivit de seleniu din suplimente, a supraveghea
calitatea produselor de pe pia, sigurana lor i modul n care sunt ele
consumate. Suplimentarea cu seleniu ar trebui s se fac cu forma care
apare n alimentele consumate n mod uzual.

MOTIVAIA CERCETRII

Tema aleas pentru realizarea tezei de doctorat abordeaz un
subiect de mare actualitate i importan pentru descifrarea mecanismelor
prin care seleniu, ca microelement, este implicat n efortul comun al
farmacologilor i nutriionitilor de a preveni bolile neoplazice.
Subiectul este cu att mai important cu ct datele din literatura de
specialitate privind rolul seleniului n prevenirea carcinogenezei i,
respectiv aciunea carcinogen a aportului excesiv de seleniu sunt
controversate. Implicarea seleniului, sub diferite forme (compui minerali,
respectiv compui organici) suscit nc interesul specialitilor.
Studiile epidemiologice confirm faptul c nivelele sczute de
seleniu plasmatic reprezint indicatori al riscului crescut de apariie i
dezvoltare a maladiilor neoplazice. S-a demonstrat c exist o corelaie
direct a nivelului redus de seleniu plasmatic cu incidena cancerului
tiroidian, existena de leziuni pre-canceroase la nivelul cavitii bucale, a
adenomului colo-rectal, cancerului pulmonar, gastric, de sn sau de
prostat.
Seleniul are aciune dubl: compuii seleniului, printre care
selenitul de sodiu, au aciune pro-oxidanta direct conducnd la toxicitate
acut dar i aciune antioxidant, prin inglobarea n selenoproteine i
participarea reglarea diferitelor procese biologice din organism. Ca parte
3
component a glutation peroxidazei (GSH-Px), seleniul aparine primului i
celui de al doilea nivel de protecie antioxidant a celulei. Doze crescute de
selenit de sodiu pot reduce inflamaia printr-un efect direct pro-oxidativ i
poate crete capacitatea antioxidant a celulei prin incorporarea seleniului
n selenoenzime.
Coninutul n seleniu n alimentelor este dependent de concentraia
acestuia n sol. n Romnia, se cunoate faptul c solul este srac n seleniu
i, n consecin este posibil ca necesarul zilnic s nu fie acoperit. n aceste
condiii, pacienii cu diferite afeciuni, dar i populaia general apeleaz,
cu sau fr recomandarea medical, la consumul de suplimente nutritive
care conin seleniu. Trebuie s recunoatem c aceas practic de a
consuma suplimente nutritive a devenit o mod. Dar, nu trebuie s uitm
c administrarea acestor suplimente, fr a ti dac organismul are sau nu
nevoie de nutrientul respectiv implic riscuri, uneori cu consecine grave
pentru organism.
n Romnia, problematica asigurrii aportului optim de seleniu pentru
organismul uman a fost abordat sporadic, att din punct de vedere analitic ct
i prin prisma evalurii statusului acestui microelement n organismul uman.
Studierea relaiei dintre seleniu i cancer a presupus c acesta i exercit
efectele ca antioxidant. Ca i component a glutation peroxidazei (GPx), o
funcie biochimic larg recunoscut a seleniului este inactivarea speciilor
oxigen reactive (ROS). Dei s-a demonstrat c statusul sczut al Se se asociaz
cu activitate GPx sczut, observaia c efectele anticarcinogene au continuat
s se manifeste dup ce GPx a atins nivelurile optime a fost o sugestie c Se i-
ar putea exercita activitatea anticarcinogen prin alte mecanisme.
Acrilamida este o substan toxic, din categoria probabil
cancerigen pentru om prezent constant n alimentele tratate termic.
Obiceiurile alimentare ale populaiei din Romnia exced n consumul de
alimente, care n procesul culinar intens (cartofi prjii, carne bine fript,
chipsuri etc) favorizeaz formarea acestui toxic.
Specialitii recomand aplicarea unor msuri care s limiteze
coninutul n acrilamid al alimentelor, respectiv, reducerea toxicitii
acesteia. Printre acestea se numr consumul de alimente care conin
componente cu rol antioxidant. In cercetrile noastre am iniiat un studiu
experimental privind capacitatea seleniului de a influena unii parametri
biochimici i histopatologici modificai n intoxicaia subacut cu
acrilamid. Considerm c rezultatele acestor cercetri vor sta la baza altor
studii care vor contribui la optimizarea alimentaiei populaiei i, implicit la
meninerea sntii.

4

OBIECTIVELE TEZEI DE DOCTORAT

Obiectivele cercetrilor experimentale care au condus la realizarea
tezei de doctorat au urmrit:
Adaptarea i validarea unei metode spectrofotometrice de
determinare a seleniului din produse alimentare;
Determinarea seleniului din probe de produse alimentare prin
metoda validat;
Determinarea seleniului din suplimente alimentare coninnd
acest microelement. Studiul cedrii seleniului din suplimente
nutritive;
Evaluarea potenialului protector al seleniului la obolani, n
intoxicaia subacut experimental, pe cale oral, cu doze crescute
de acrilamid, prin determinarea unor parametri biochimici i
hematologici.
Studiul comparativ al modificrilor histopatologice aprute n
intoxicaia subacut cu acrilamid dup administrarea de seleniu, la
obolani.

5
PARTEA GENERAL
Capitolul I

SELENIUL I ORGANISMUL UMAN

I.1. Seleniul i organismul uman. Aspecte generale

I .1.1. Scurt istoric
Seleniul ca element chimic a fost identificat n 1817 de ctre renumitul
chimist Berzelius ca element rezidual ce contamina producia de acid sulfuric
ntr-o fabric din Stockholm. Seleniul are proprieti similare cu ale telurului,
descoperit cu 35 de ani mai devreme, i a fost numit dup denumirea greceasc
a Lunii, selene (telurul i-a cptat numele dup latinescul tellus, pmnt).
Berzelius i public noua descoperire anul urmtor, n 1818, n Annales de
chimie et de physique. Vreme de un secol, puine lucruri s-au mai auzit despre
acest element, dar n 1996 se estima c seleniul este subiectul a peste 100 000
de lucrri tiinifice. Mai trziu, acest nou element este gsit i n unele
minerale, de ctre ali cercettori. (Oldfield, 2002; Selenium in Nutrition, 1983;
Environmental Health Criteria 58, 1987).
n 1937, A.L. Moxon a publicat un raport n care seleniul era
identificat ca vinovat de mbolnvirea unor cirezi prin consumul de plante
toxice, boala fiind greit denumit alkali disease-boala alcalin, numit
astzi selenoza. n 1957, biochimistul de origine german Klaus Schwarz a
publicat o lucrare care va schimba radical percepia public asupra
seleniului. El era preocupat de problema necrozei ficatului la obolanii de
laborator hrnii cu drojdie. Cnd a nlocuit drojdia torula cu drojdia de
buctrie (Saccharomyces), problema a disprut. Dup ndelungate
cercetri, a descoperit c torula era deficitar n seleniu, identificnd, deci,
prima boal cauzat de defictul de seleniu. n prezent, seleniul a fost
identificat ca nutrient mineral esenial (McCoy et al., 1969).
Primele utilizri ale seleniului au fost minore: n colorarea sticlei i
n ceramic. n anul 1851, Hittorf observ c seleniul ca i sulful
prezint mai multe stri alotropice, iar n 1873, May i Smith, pe de o parte,
i Sale, pe de alt parte, constat schimbarea conductibilitii electrice a
seleniului sub aciunea luminii (deci proprieti fotochimice). Fenomenul
acesta este lmurit n 1907 de Marc i, ntr-adevr, aceste proprieti i-au
deschis seleniului ci n utilizri moderne, extrem de importante n
fotometrie, telefotografie, redresoare etc. (Oldfield, 2002; Environmental
Health Criteria 58, 1987).
6

I.1.2. Stare natural. Surse de seleniu. Ciclul biologic al
seleniului
Distribuia seleniului pe glob este neuniform. n distribuia i
transportul acestui element, ca i n ciclul su, sunt implicate procese:
- naturale: geografice i biologice
- umane: industriale i agricole.
Ciclul biologic al seleniului nu este n ntregime descifrat, dei au
existat mai multe ncercri de a realize diagrame ale acestui proces (Fig. I.1).

Plante Soluri
Animale
Om
Viaa acvatic

Oceane, mri i
lacuri
Ape curgtoare i de
suprafa
Sedimente i
roci sedimentare
Roci vulcanice
Miezul Pmntului
Atmosfera
Vulcanism
Roci topite

Fig. I.1. Ciclul seleniului n natur (Adaptare dup National Research Council
(U.S), Subcommittee on Selenium, 1983)

I .1.3. Seleniul microelement eseial pentru organism
Seleniul este un oligoelement esenial, ndeplinind criteriile care
definesc acest tip de elemente (Reilly, 2004):
- au o concentraiei relativ constant;
- deficitul induce schimbri biochimice specifice;
- schimbrile sunt acompaniate de anormaliti echivalente la
specii diferite;
- suplimentarea aportului acestui element corecteaz carena.
7
Seleniul ndeplinete o serie de roluri eseniale n organismul uman.
Ca parte a unui numr de selenoproteine active funcional are
funcie de protejare a celulelor mpotriva distrugerilor cauzate de radicalii
liberi, de hidroperoxizi sau de lipoperoxizi.
Seleniul este implicat n controlul i sinteza prostaglandinelor,
prostaciclinelor, leucotrienelor i tromboxanilor. Funciile organelor
reproductive i hormonale depinde de un status suficient al seleniului din
organism.
Seleniul joac, de asemenea, un rol important n funcionarea
creierului. S-a dovedit c seleniul poate influena funcia cognitiv i starea
emoional. ndeprtarea genei selenoproteinei P a dus la scderea nivelului
de seleniului din creier i la disfuncii neuronale. Tot selenoproteina P
poate promova supravieuirea celulei neuronale. Schimbrile statusului
seleniului pot avea implicaii n boala Alzheimer sau n boala Parkinson.
Seleniul este important i pentru c are rol protector mpotriva
perturbrilor genetice aprute ca rezultat al stresului oxidativ excesiv.

Selenoproteine
Ca selenocistein, al 21-lea aminoacid, seleniul este component al
selenoproteinelor, unele dintre acestea avnd funcii enzimatice. Toate
aceste enzime sunt dependente de seleniu. n prezent se cunosc pn la 100
de selenoproteine n sistemele enzimatice ale mamiferelor, dintre care n jur
de 30 au fost identificate. Majoritatea selenoproteinelor prezint funcii
redox enzimatice care le confer activitate antioxidant i catalitic.
Selenoproteinele pot fi mprite n dou grupe:
- reductazele tioredoxinei Sel S (selenoproteina S), Sel R
(selenoproteina R), Sel O (selenoproteina O), Sel I (selenoproteina I). Sec =
L seril tARN (Seleniu transferaz) se afl n regiunea C- terminal.
- a doua grup include restul selenoproteinelor, caracterizate prin
prezena Sec n regiunea terminal-N.
O alt clasificare pentru selenoproteinele mamiferelor (Behne et
al.,2001), le mparte n trei categorii:
- proteine ce conin seleniu ncorporat nespecific;
- proteine ce conin seleniu legat specific;
- selenoproteine specifice care conin selenocisteina.

Selenoproteine umane
Glutation peroxidaza
Glutation peroxidaza (GPx) a fost prima selenoprotein
caracterizat din punct de vedere funcional.
8
Aceast selenoprotein prezint patru izoforme: citosolic
(GPx1), gastrointestinal (GPx2), plasmatic (GPx3) i fosfolipid
hidroperoxid glutation peroxidaza (GPx4).
Glutation peroxidazele sunt enzime tetramerice, fiecare monomer
coninnd cte un atom de seleniu sub form de selenocistein n poziia
35 a lanului polipeptidic. Glutation peroxidaza este o enzim
antioxidant endogen care catalizeaz reacia de descompunere a
peroxidului de hidrogen sau a altor peroxizi organici.
GSH-Px intervine la concentraii mici de H
2
O
2
i protejeaz
celulele de stresul oxidativ produs de speciile reactive ale oxigenului.
Glutation peroxidaza reduce H
2
O
2
i transform hidroperoxizii
lipidici i fosfolipidici n produi inofensivi (ap i alcooli).
Enzima folosete ca substrat glutationul (GSH) i acioneaz
conform reaciei:
ROOH + 2GSH
GSH -Px
> R - OH + GSSG + H
2
O
n care: ROOH - poate fi H
2
O
2
sau un peroxid organic
GSSG - glutation disulfidul (forma oxidat a glutationului)
Glutationul cedeaz enzimei electronii necesari reducerii peroxidului
de hidrogen sau a altor peroxizi. Seleniul este centrul redox al enzimei. n
prima etap, el se oxideaz de la starea de oxidare (-2) n enzim, la starea de
oxidare zero ntr-un compus de tip acid selenenic (-SeOH).
Acesta reacioneaz cu glutationul formnd un compus de tip
selenilsulfid (-Se-SG). Prin adiia unei molecule de glutation, se reface
glutation peroxidaza activ prin gruparea de tip selenolat i, respectiv,
glutation disulfidul (GSSG)

Tioredoxin reductaza (TR)
Tioredoxin reductaza (Koishi et al, 2000; Zhong et al, 2000)
(TR) este o enzim recent identificat, care conine un rest de
selenocistein n secvena terminal i are trei izoforme (TR 1, TR 2, TR
3). Aceasta catalizeaz reducerea tioredoxinei dependent de NADPH
precum i a altor constitueni sau oxidai ai celulelor.
Fiind o enzim reductoare, cu specificitate redus pentru substrat,
tioredoxin-reductaza contribuie la homeostazia redox i este implicat n
prevenirea i ameliorarea dereglrilor provocate de stresul oxidativ generat
de peroxidul de hidrogen.
Activitatea tioredoxin reductazei umane este influenat att de
deficiena de seleniu n diet ct i de suplimetarea excesiv a acestuia.

9
Iodotironin deiodinazele
Iodotironin deiodinazele reprezint o alt clas de selenoproteine
de importan major; iodotironin 5'-deiodinaza conine seleniu sub form
de selenocistein i are trei izoforme (DI 1, DI 2, DI 3). Ele catalizeaz
mono-deiodinarea-55 a tiroxinei prohormon (T4) n hormonul tiroidian
activ 3,35-triiodotironin (T3) i conversia rezervei inactive de T3 n 3-
3diiodotironin. Hormonii tiroidieni joac un rol reglator n expresia
enzimei hepatice i n funcia neutrofil (Arthur JR et al., 1993).

I.2. Farmacocinetica seleniului

Seleniul, sub forma de compui, poate ajunge n organism prin
inhalare sau prin ingestie. Rata de absorbie variaz n funcie de forma
seleniului. Biodisponibilitatea oral a seleniului este independent de
nivelul de expunere, dar poate s creasc la persoanele care au deficit de
seleniu. Selenatul i selenometionina sunt absorbite nemodificate la nivelul
intestinului, iar selenitul i selenocisteina sunt metabolizate n timpul
absorbiei.
Mecanismul absorbiei intestinale este cunoscut. Mecanismele
absorbiei cutanate i pulmonare nu sunt complet elucidate.
Seleniul absorbit este transportat de snge, fiind distribuit ctre
esuturi. Ajuns n snge, seleniul este legat n proteine, iar selenitul este
acumulat n eritrocite printr-un mecanism de transport activ, aa dup cum
demonstraz studiile in vitro. Seleniul este incorporat n selenoproteine ca
selenocisteine.
Indiferent de forma de administrare, modelele de distribuie sunt
similare, dar concentraia atins este mai mare la administrarea de seleniu
organic (selenometionina) dect la seleniul anorganic.
Selenometionina nu este sintetizat de organismul uman, dar poate
fi incorporat n proteine n locul metioninei. De aceea, selenometionina e
pstrat mai mult timp n organism dect formele anorganice, putnd s
reprezinte o form de a depozita seleniul. Selenocisteina i seleniul
anorganic sunt metabolizate. Selenocisteina incorporeaz seleniul n
selenoproteine, dar numai sub aceast form.

I.3. Rolul seleniului n organismul uman

I.3.1. Seleniul i metabolismul uman
Seleniul este ncorporat sub form de selenoaminoacizi la centrul
activ al unui mare numr de proteine, unele dintre ele avnd importante
10
funcii enzimatice. n condiii fiziologice, seleniul din selenocisteine este
aproape n ntregime ionizat i, prin urmare, este un catalizator biologic
extrem de eficient.
Selenoaminoacizii, n principal selenocisteina i selenometionina,
sunt aminoacizi n care atomul de sulf din cistein i respectiv metionin
este nlocuit cu seleniu.
Studiile lui Sunde (1990) au subliniat rolul crucial al selenidului sau al
unei forme echivalente chimic a seleniului n procesul conversiei formelor
anorganice de seleniu n forme organice. Sinteza selenoaminoacizilor, a
selenoproteinelor, a seleno-tARN i a genelor care controleaz aceste procese
pentru sistemele bacteriene este cunoscut. n studiile pe forme mutante de E.
Coli au fost identificate cel puin patru tipuri de gene, Se1A, Se1B, Se1C i
Se1D ca eseniale pentru sinteza proteinelor ce conin selenocistein.

c. Metabolismul seleniului n organismul uman
Biotransformrile suferite de compuii seleniului la om sunt
asemntoare celor de la animale. Metabolismul seleniului n organismul
uman este complex i depinde de forma chimic a seleniului. Cile
metabolice ale seleniului sunt prezentate schematic n figura 10. Formele
organice ale seleniului sunt selenocisteina i selenometionina, iar cele
anorganice sunt selenitul i selenatul. Compuii organici ai seleniului-
selenocisteina, selenometionina, Se-metilselenocisteina-, ct i cei
anorganici selenit, selenat- sunt metabolizai la diferii metabolii ai
seleniului. Dintre formele organice, selenometionina este forma
predominant n alimentaie. Att formele organice, ct i cele anorganice
par s fie utilizate cu aceeai eficacitate n organism pentru a produce
selenoproteine (Shiobara et al., 1998), dar seleniul ptrunde n metabolism
n momente diferite, n funcie de forma chimic, (figura I.11) .

11

Metabolismul
reductor
SELENAT
Na
2
SeO
4

SELENIT
Na
2
SeO
3

Proteinele generale ale
corpului
SELENOMETIONINA
SELENOCISTEINA
GS-Se-SG
GSH
GS-SeH
GSH/NADPH
SELENID
Na
2
Se
Incorporare n
selenoproteine
SELENOFOSFAT
SELENURA DE HIDROGEN
H
2
Se

METILSELENOL
CH
3
SeH
Calea metilrii
TRIMETILSELENONIU
(CH
3
)
3
Se
+

DIMETILSELENID
(CH
3
)
2
Se

Se-METILSELENOCISTEINA
ACID METILSELENIC
SELENOBETAIN
METILSELENOCIANAT
Prezent n aerul
expirat la doze
toxice de Se
Excretat n urin
la doze toxice de
Se
Metioninaz

Fig. I.12. Metabolismul seleniului n organismul uman
(adaptare dup Meuillet et al., 2004)

I .3.2. Aciunea detoxifiant a seleniului
Seleniul reduce toxicitatea unor metale grele precum cadmiul,
mercurul anorganic, metilmercurul, taliul i chiar a argintului, prin
formarea unor compui ineri, neabsorbabili.

I .3.3. Necesarul zilnic de seleniu
Nu exist criterii universal acceptate pentru stabilirea necesarului
zilnic de seleniu i, prin urmare, nici estimri coerente pentru acest necesar,
dei au existat preocupri n acest sens (Thomson, 2004).
Multe dintre estimrile i recomandrile privind necesarul de
seleniu au la baz cercetrile fcute n China, unde distribuia seleniului n
sol este variat (de la un coninut foarte sczut la un coninut crescut).
12
Estimrile necesarului sunt dificil de fcut, innd cont i de aportul zilnic
de seleniu din diferite ri ale lumii.
T
Necesarul de seleniu (WHO/FAO, 2004)
Categoria de populaie
Greutate
medie
Media recomandat Doza
recomandat
(g/zi)
g/ kgc/zi) g /zi)
Sugari i copii
0-6 luni 6 0,85 5,1 6
7-12 luni 9 0,81 8,2 10
1-3 ani 12 1,13 13,6 17
4-6 ani 19 0,92 17,5 22
7-9 ani 25 0,68 17,0 21
Adolesceni
Fete 10-18 ani 49 0,42 20,6 26
Biei 10-18 ani 51 0,50 22,5 32
Aduli
Femei 19-65 ani 55 0,37 20,4 26
Femei 65+ ani 54 0,37 20,2 25
Brbai 19-65 ani 65 0,42 27,3 34
Brbai 65+ ani 64 0,41 26,2 33
Sarcin
Trimestrul II 28
Trimestrul III 30
Alptare
0-6 luni dup natere 35
6-12 luni dup natere 42
*DRN, Doza de Nutrient Recomandat, derivat din SeR + 2x deviaia standard
asumat (12,5%).

Statusul seleniului n organism se apreciaz pe termen scurt i,
respectiv, pe termen lung:
statusul seleniului pe termen scurt: concentraia de seleniu din
urin, plasm, ser;
statusul seleniului pe termen lung: concentraia din unghii, pr,
eritrocite.
Valorile de referin ale seleniului au fost stabilite, n general, prin
evaluarea cantitii necesare pentru maximizarea activitii GPx din snge
sau plasm(Thomas, 2004).

13

I.4. Patologia provocat de deficitul de seleniu

Carena de seleniu n organismul uman este responsabil de efecte
i sindroame specifice.

I.4.1. Deficitul de seleniu i Boala Keshan (cardiomiopatia)
Aceast maladie a fost descris n China nc de acum peste 100 de
ani i a avut un puseu important n 1935; legtura dintre boal i deficitul
de seleniu a fost descoperit relativ recent (Ge et al.,1993). Cercettorii au
realizat studii clinice n zonele n care boala este endemic, pe aproximativ
10 000 probe de snge, pr, cereale locale, din care au analizat concentraia
de seleniu i msurtori ale glutation peroxidazei i ale nivelului excreiei
seleniului n urin. n timpul studiilor au fost suplimentate dietele celor
implicai cu selenit de sodiu. Totalul populaiei tratate excede un milion de
persoane. Rezultatele cercetrii confirm relaia strns ntre seleniu i
boala Keshan.

I .4.2. Deficitul de seleniu i Boala Kashin-Beck (boala Urov)
Boala Kashin-Beck este o osteoartropatie endemic care a fost
detectat la copii de 5-13 ani din China i mai puin la cei din Siberia de
sud-est. Se caracterizeaz prin necroz asociat cu degenerarea n regiunea
epifizeal a articulaiilor minilor i picioarelor i duce la scurtarea
structural a degetelor i oaselor lungi cu ntrzierea creterii i chiar
oprirea acesteia.

I .4.7. Deficitul de seleniu i bolile cardiovasculare
Seleniul poate avea aciune protectoare n afeciunile
cardiovasculare. Aceast ipotez se bazeaz pe abilitatea GPx de a combate
modificarea oxidativ a lipidelor i de a reduce agregarea plachetar.
Mortalitatea cauzat de bolile de inim a sczut cu aproximativ 61% n
perioada 1972-1992 n Finlanda, lucru care se datoreaz, n parte, i
creterii nivelului de seleniu din diet dup introducerea, n 1985, a
fertilizrii cu seleniu (se tie c nivelul de seleniu din solul finlandez este
foarte sczut) (Brown &Arthur, 2001).
Studiile epidemiologice au ajuns la rezultate diferite. Unii
cercettori au constatat o cretere de 2-3 ori a morbiditii cardiovasculare
i a mortalitii din aceast cauz la persoanele cu concentraia seleniului n
ser mai mic de 45 g/L, comparativ cu subieci cu o concentraie n
seleniu n ser mai mare, alte studii nu prezint o asociere clar ntre
14
riscurile cardiovasculare i concentraia mic a seleniului (Salonen et al.,
1982;Virtamo et al., 1985). Totui n zonele cu deficien mai mare de
seleniu s-a putut remarca o asociere invers ntre nivelul seleniului i riscul
infarctului de miocard.
I.4.9. Seleniul i funcia tiroidian
Dei activitatea deiodinazei este relativ protejat n condiiile unei
disponibiliti reduse de seleniu, nivelul seleniului la populaiile din Europa
i din alte regiuni poate compromite totui metabolismul tiroidian. n
zonele cu deficit sever de seleniu, incidena tiroiditelor este mai mare, din
cauza scderii activitii glutation peroxidazei dependent de seleniu din
celulele tiroidei. Enzimele dependente de seleniu influeneaz i ele
sistemul imunitar. Chiar i o deficien mai uoar de seleniu contribuie la
dezvoltarea i meninerea bolii tiroidiene autoimune (Negro, 2008). Carena
de seleniu asociat cu cea de iod exacerbeaz hipotiroidismul i poate
determina chiar cretinismul mixedematos aa cum se ntmpl n unele
zone din Zair, unde ambele elemente sunt deficitare. Suplimentarea cu
seleniu este benefic n cazul bolnavilor cu tiroidit autoimun (Grtner et
al., 2002). Suplimentarea cu seleniu n timpul sarcinii i dup natere
inhib progresia tiroiditelor cronice autoimune (Negro et al., 2006).

I.5. Patologia provocat de excesul de seleniu

Toxicitatea seleniului este cunoscut indirect nc din evul mediu;
n timpul cltoriei n China n secolul al XIII-lea, Marco Polo i nsoitorii
si au fost avertizai asupra plantelor otrvitoare. Astzi se tie c aceste
plante sunt cele acumulatoare de seleniu din genul Astragalus (Reilly,
1996).
Efectele toxice la animale sunt bine cunoscute i sunt diferite n
funcie de specie. Toxicitatea depinde de doza i durata ingerrii, dar i de
forma chimic a seleniului. Tolerana la toxicitatea seleniului depinde de
rata excreiei, iar aceasta depinde de rata metilrii seleniului (Mzes &
Balogh, 2009).
Selenoza este prezent la majoritatea rumegtoarelor, din cauza
consumului de plante acumulatoare de seleniu, care transform seleniul
anorganic n seleniu organic.
La om, aportul toxic este de aproximativ 850-900 g/zi.
Simptomele intoxicrii sunt grea, cderea prului, modificri n structura
unghiilor; la dozele mai mari, poate surveni decesul.
Toxicitatea seleniului este cunoscut de mult vreme, i, dei este
mai periculoas, este mai puin luat n seam n comparaie cu a altor
15
elemente, cum ar fi arsenul. Toxicitatea seleniului provoac unele confuzii
din mai multe cauze.
n primul rnd, seleniul este un nutrient esenial utilizat de
selenoproteine. n al doilea rnd, seleniul are beneficii majore pentru
sntatea uman. n al treilea rnd, toxicitatea seleniului este complex.
Toate formele de seleniu sunt toxice, dar concentraiile necesare pentru a
atinge nivelurile toxice similare difer foarte mult. De asemenea, dieta
individual joac un rol important n ceea ce privete pragul toxicitii. La
diete echilibrate, cu aceeai cantitate de seleniu, dar cu diferene n ceea ce
privete cantitatea de vitamina E, un individ poate fi sntos (dac vitamina
E este n exces) sau se poate mbolnvi (dac vitamina E este n cantitate
mai redus).

I.6. Surse alimentare de seleniu

Alimentaia este sursa principal de seleniu pentru organismul
uman (i este natural). Cantitatea de seleniu pe care o lum din alimente
depinde de tipul alimentului, de influena factorilor de mediu asupra
alimentului respectiv (tipul de sol pe care a crescut planta, tipul de hran de
care a beneficiat animalul), de intervenia uman asupra alimentului.
Intervenia obinuit a omului asupra alimentului este prelucrarea materiei
prime (mcinatul grului, de exemplu) i gtitul. n ceea ce privete
seleniul, se tie c muli dintre compuii seleniului sunt instabili i volatili.
Unele vegetale care, n mod obinuit, au nivele ridicate de seleniu
(sparanghelul) pierd n jur de 40% din coninutul de seleniu n procesul
culinar (Higgs et al., 1972). Adugarea de sare, pH-ul acid sau gtitul prea
intens duc la pierderi ale coninutului de seleniu (lucru valabil i pentru ali
nutrieni). De obicei ns, gtitul obinuit nu are efecte semnificative.
Mcinatul i fierberea cerealelor (Ferretti & Levander, 1974)), tratamentul
termic pentru carne de pui sau pete nu au impact semnificativ pentru
coninutul de seleniu.

I.6.3. Metode de mbogire a coninutului de seleniu al
alimentelor
Scderea cantitii de seleniu din organismul uman, constatat n
unele zone ale lumii, poate fi rectificat prin diversificarea n diet,
suplimente minerale la subiecii umani sau la animale, fortificarea
alimentelor n timpul procesrii sau biofortificarea recoltelor.
De vreme ce alimente precum nucile de Brazilia, viscerele i carnea
de crab, care conin n mod natural nivele ridicate de seleniu, nu sunt
16
consumate, de regul, n cantiti mari, potenialul pentru diversificarea
dietei este limitat.
Folosirea suplimentelor cu coninut ridicat de seleniu, inclusiv
formule pe baz de drojdie, pare o opiune eficient i sigur pentru
subiecii umani. Totui, suplimentele sunt relativ scumpe, restricionate la
folosire n unele zone sau ineficiente.
O alt metod ar fi biofortificarea, creterea concentraiilor
biodisponibile ale elementelor eseniale n poriile comestibile ale plantelor
cultivate prin folosirea ngrmintelor (biofortificarea agronomic) sau
prin selecia recoltelor sau raselor (biofortificarea genetic).

1.6.4. Suplimentele nutritive surse de seleniu
Suplimentele nutritive sunt destinate compensrii nevoilor crescute
n principii nutritive n urma efecturii unor activiti particulare (sportivi),
fumtorilor i, n egal msur prevenirii sau optimizrii unor stri
(oboseal, memorie), ncetinirea mbtnirii i chiar, pentru a permite
scderea greutii corpului.
Conform datelor dintr-un studiu aprut n revista Genome Biology
(Lobanov et al., 2008) anumite suplimente alimentare coninnd seleniu ar
putea s nu fie la fel de benefice pentru majoritatea indivizilor, care n
cursul evoluiei au suferit modificri fiziologice de natur s li se reduc
nevoile de seleniu. Consumul de suplimente pe baz de seleniu este
justificat n unele regiuni din China (maladia Kesham, prin deficit de
seleniu) i din Africa (cretinism endemic, prin deficit de seleniu i iod)
unde solul este foarte srac n aceste oligoelement, dar trebuie recomandat
cu precauii pentru populaia sntoas, n general.
Referitor la uurina cu care populaia accept i consum
suplimentele alimentare Hercberg (2006) afirm c cea mai bun surs de
acoperire a nevoilor de nutrieni a organismului este alimentaia. A priori,
n afara indicaiilor medicale foarte exacte pentru suplimentarea aportului la
femeile nsrcinate, la persoanele supuse unor regimuri restrictive, la
subiecii vrsnici cu polimedicaie nu exist nici o justificare ,,nici
biologic, nici clinic, nici epidemiologic pentru a recomanda consumul
de suplimente alimentare pentru populaia general. n plus, au aprut
semnalri (mai ales date epidemiologice) care sugereaz c administrarea
regulat de suplimente nutritive poate induce efecte duntoare, contrare
celor ateptate.
17
PARTE PERSONAL
Capitolul II

ESTIMAREA APORTULUI DE SELENIU PRIN CONSUM DE
ALIMENTE

II.1. Introducere

Valoarea tiinific a rezultatelor analizei unei anumite componente
dintr-o prob complex depinde nu numai de sensibilitatea i specificitatea
metodei de analiz ci i de modul n care sunt parcurse etapele anterioare
determinrii propriu-zise, de la recoltarea probei, separarea, analitului de
interes la stabilirea condiiilor optime de aplicare a metodei. Literatura de
specialitate prezint numeroase metode pentru determinarea seleniului din
numeroase categorii de probe: ap potabil, ap rezidual, produse
alimentare, sol, suplimente nutritive, medicamente, lichide biologice etc.
Obiective
Obiectivele cercetrilor incluse n acest capitol au urmrit:
adaptarea i validarea unei metode spectrofotometrice de
determinare a seleniului din produse alimentare prin stabilirea condiiilor de
aplicare a metodei i determinarea parametrilor de validare ai metodei;
aplicarea metodei validate la determinarea seleniului din probe
de produse alimentare de natur vegetal i animal;
estimarea aportului zilnic de seleniu pe baza coninutului de
seleniu determinat pentru cele trei modele de alimentaie: convenional,
vegetarian i vegetalian;
determinarea seleniului din unele suplimente nutritive care
conin seleniu.

II.2.2. Stabilirea condiiilor de aplicare a metodei
spectrofotometrice de determinare a seleniului din produse alimentare
Principiul metodei
Pentru determinarea spectrofotometric a seleniului din produse
alimentare s-a adaptat i validat metoda spectrofotometric realizat de
Revanasiddappa et al. (2001), o metod indirect bazat pe reacia
seleniului (IV) cu iodura de potasiu n mediu acid. Iodul eliberat
reacioneaz cu albastru variamin, formnd un compus colorat n roz-violet
(Fig. II.1.), cu absorbanta maxim la 545 nm.

18

1
2
I
2
+ CH
3
O NH NH
2
CH
3
O N NH
2

+ I
- +
SeO
3
2
-
+ 4I
-
+ 6H
+
Se
0
+ 2I
2
+
3
H
2
O

Fig. II.1. Reaciile de determinare a seleniului prin metoda indirect
seleniu (I V)- albastru variamin

Metoda este uor de aplicat, sensibil i selectiv i a fost adaptat
la determinarea cantitativ a seleniului (IV) din ap, sol, produse alimentare
de origine vegetal i animal, suplimente alimentare coninnd seleniu.
Pentru ndeprtarea influenei ionilor interfereni asupra intensitii
culorii s-a utilizat EDTA, ca agent de complexare.
Metoda analitic
n vederea stabilirii condiiilor de aplicare a metodei
spectrofotometrice de determinare a seleniului din probe de produse
alimentare s-a urmrit:
Stabilirea lungimii de und la care absorbana este maxim;
Stabilirea volumului soluiei de acid clorhidric necesar sistemului
seleniu (IV)- iodur de potasiu - albastru variamin;
Stabilirea volumului soluiei albastru variamin necesar sistemului
seleniu (IV)- iodur de potasiu- albastru variamin;
Stabilirea volumului soluiei de iodur de potasiu necesar
sistemului seleniu (IV)- iodur de potasiu-albastru variamin;
Stabilirea volumului soluiei de acetat de sodiu necesar sistemului
seleniu (IV)- iodur de potasiu - albastru variamin;
Stabilirea volumului soluiei de EDTA necesar sistemului seleniu
(IV) - iodur de potasiu- albastru variamin pentru complexarea ionilor
interfereni;
Studiul stabilitii produsului de reacie.

II.2.2.1. Stabilirea lungimii de und la care absorbana este
maxim
Volume de soluie etalon de lucru coninnd 25, 50 respectiv 100
g Se
4+
se trateaz cu cte 1 mL soluie iodur de potasiu 2% i 1 mL
soluie acid clorhidric 2M i se agit uor. Se adaug succesiv 0,5 mL
soluie albastru variamin i 2 ml soluie acetat de sodiu i, 1 mL soluie
EDTA 0,2M, se completeaz volumul la 20 mL cu ap distilat.
19
Spectrele de absorbie pentru sistemul Se (IV)-iodur de potasiu -
albastru Variamin s-au nregistrat fa de martorul corespunztor, iar al
martorului fa de ap distilat, la spectrofotometrul UV-VIS T 80 PG
Instruments LTD.

Tabel II.1
Stabilirea lungimii de und cu absorban maxim
Nr.
crt
Lungimea de
und (nm)
Absorbana
25 g Se
4+
50 g Se
4+
100 g Se
4+
1. 400 - 0,032 0,083
2. 420 - 0,054 0,112
3. 440 0,036 0,076 0,139
4. 460 0,049 0,083 0,162
5. 480 0,534 0,101 0,215
6. 500 0,060 0,115 0,252
7. 520 0,069 0,143 0,302
8. 530 0,086 0,169 0,341
9. 540 0,102 0,205 0,425
10. 545 0,106 0,218 0,420
11. 550 0,105 0,215 0,418
12. 560 0,088 0,183 0,368
13. 580 0,064 0,154 0,312
14. 600 0,051 0,121 0,256
15. 620 0,032 0,098 0,218
16. 640 - 0,067 0,134

Din analiza spectrelor de absorbie ale produsului reaciei
sistemului Se (IV)-iodur de potasiu - albastru Variamin se constat un
maxim de absorbie la lungimea de und 545 nm. La acest lungime de
und, absorbana martorului este neglijabil.
n urma stabilirii parametrilor optimi de desfurare a reaciei a
rezultat modul de lucru pentru determinarea seleniului tetravalent din probele
de analizat: volume de soluie etalon de seleniu coninnd 5-100 g Se
4+
se
trateaz cu cu 1 ml soluie de iodur de potasiu, 2 mL acid clorhidric i se
agit lent. Se adaug 1 ml soluie albastru variamin, 1mL soluie EDTA
0,2M i 2 mL soluie acetat de sodiu, se completeaz volumul la 20 ml cu
ap distilat i se msoar absorbanele la 545 nm, cuva de 1 cm, fa de un
martor preparat n aceleai condiii.

20
I I .2.3. Raportul de validare a metodei de analiz a seleniului
Metoda de validare i procedura de analiz a probelor s-a realizat n
conformitate cu normele de validare pentru metodele analitice prezentate n
protocolul de validare.
Validarea metodei a fost realizat pe baza verificrii urmtorilor
parametri: liniaritate/domeniu de concentraie, precizie, acuratee, stabilitate,
randament de recuperare, limit de detecie, limit de cuantificare.

II.2.3.1. Liniaritatea
Pentru studiul liniaritii metodei au fost preparate soluii de lucru
prin diluarea unei soluii stoc care conine 100 g Se
4+
/mL cu ap distilat
la concentraii n ioni seleniu cuprine ntre 5 i 100 g Se
4+
/prob, respectiv
0,5 5,0 g Se
4+
/mL, care se prelucreaz conform modului de lucru stabilit
anterior.
Rspunsul ionului de seleniu este liniar pentru un interval de
concentraie de 0,5-5 g Se
4+
/mL avnd un coeficient de corelaie (R
2
) de
0,9977. Valorile absorbanelor reprezint media a 3 determinri i sunt
redate n tabelul II.9.
Tabel II.9.
Liniaritatea funciei de rspuns
Nr. crt
Concentraie Absorbana
(g/mL) g/prob I II II IV Medie
1. 0,5 10 0,0399 0,0411 0,0420 0,0414 0,0411
2. 1,0 20 0,0800 0,0790 0,0786 0,0783 0,0789
3. 1,5 30 0,1549 0,1505 0,1489 0,1503 0,1511
4. 2,0 40 0,1706 0,1720 0,1698 0,1721 0,1711
5. 2,5 50 0,2135 0,2202 0,2181 0,2106 0,2156
6. 3,0 60 0,2605 0,2597 0,2561 0,2543 0,2576
7. 3,5 70 0,3108 0,3200 0,3115 O,3102 0,3131
8. 4,0 80 0,3412 0,3409 0,3398 0,3429 0,3412
9. 4,5 90 0,3800 0,3901 0,3814 0,3827 0,3835
10. 5,0 100 0,4209 0,4261 0,4303 0,4265 0,4259

Se reprezint grafic variaia absorbanei medii n funcie de
concentraie i se determin intervalul de concentraie pentru care aceast
variaie este liniar.
Se traseaz dreapta de regresie pentru acest interval, iar datele
obinute se evalueaz statistic, determinndu-se coeficientul de corelaie (r),
deviaia standard a pantei dreptei de regresie (s), eroarea standard a dreptei
de regresie (SD) i ecuaia dreptei, Absorbana = f(c):
21
Absorbanta = p x C + b,
n care: p = panta; C = concentraia; b = interceptul
Reprezentarea grafic a variaiei concentraiilor calculate funcie de
concentraia teoretic este prezentat n fig. II.2.

Fig. II.2. Curba de calibrare pentru validarea liniaritii metodei

Curba de calibrare obinut n studiul liniaritii metodei de
determinare a seleniului n sistemul seleniu-iodur de potasiu-albastru
variamin.
Ecuaia dreptei de calibrare, calculat prin regresie matematic, este:
Absorbana = 0,00425 x Concentraia (g/prob) +0,0041

Tabel II.10.
Datele evalurii statistice
Nr. crt. Parametrul Valoarea
1. Coeficient de corelaie (r) 0,9954
2. Coeficient de regresie (r
2
) 0,9977
3. Eroare standard a dreptei de regresie (SD) 0,00927
4. Interceptul (b) + 0,00411
5. Panta (p) 0,00425

Evaluarea liniaritii rezultatelor se realizeaz prin calcularea
concentraiei regsit utiliznd ecuaia dreptei de calibrare. ntre
concentraia introdus teoretic i cea calculat folosind ecuaia dreptei calibrare
exist o corelaie liniar, panta acestei drepte fiind egal cu +0,00425;
interceptul este +0,00411. Coeficientul de corelaie a acestei drepte are
valoarea r
2
= 0,9954. n concluzie, ntre concentraia teoretic i cea calculat
utiliznd ecuaia dreptei de calibrare, corelaia este optim.
22
n urma prelucrrii statistice a datelor experimentale privind
liniaritatea metodei de determinare spectrofotometric a ionului de seleniu
tetravalent se desprind urmtoarele concluzii. Metoda este liniar n domeniul
de concentraie ales (0,5-5gSe
4+
/mL) (10 100 g Se
4+
/prob).
Ecuaia dreptei este:
Absorbana = 0,00425c + 0,00411
Datele experimentale obinute n urma cercetrilor confirm
validitatea metodei spectrofotometrice de determinare a seleniului n
intervalul 10 -100 g Se
4+
; coeficientul de corelaie are valoarea 0,9954.
II.2.3.4. Randament de recuperare
Randamentul de recuperare a fost determinat pe trei tipuri de
probe: pine integral i usturoi. Probele de produs alimentar au fost
prelucrate n vederea separrii seleniului, i anume, cantiti de 5-10 g
prob de analizat au fost tratate cu volume de soluie de selenit de sodiu
etalon, corespunztoare concentraiilor de 50 i 100 g/kg produs
alimentar. Separarea seleniului s-a realizat prin dou variante: calcinare la
450C i mineralizare umed nitro-sulfuric.

Tabel II.16.
Randamentul de recuperare determinat pe probe de pine integral
Seleniu
adugat
(g/kg)
Concentraie
teoretic
(g/kg)
Concentraie determinat
(g/kg)
Randament de recuperare
(%)
Mineralizare
uscat
Mineralizare
umed
Mineralizare
uscat
Mineralizare
umed
- 253,45 258, 34
50 303,45 204,17 256,20 67,28 84,43
- 234,12 237,09
50 284,12 196,38 236,35 69,12 83,19
- 264,32 270,14
50 314,32 224,51 264,53 71,43 84,16
- 253,45 258, 34
100 353,45 313,72 342,10 88,76 96,79
- 209,74 252,44
100 309,74 273,68 300,88 88,36 97,14
- 216,75 255,38
100 316,75 276,64 307,43 87,34 97,06

Rezultatele obinute au evideniat diferene ale randamentului de
recuperare att n funcie de metoda de separare a seleniului din probele de
analizat, ct i de concentraia de seleniu adaugat (Tabel II.16).
Astfel, pentru probele de pine integral, la care separarea
seleniului s-a realizat prin calcinare randamentul de recuperare a avut valori
de 67,28 % pentru concentraia adugat de 50 g/kg i 84,43% la
23
adugarea selenitului de sodiu n concentraie de 100 g/kg. Separarea
seleniului prin mineralizare umed a condus la procente mai mari ale
randamentului de recuperare, de 88,36% i, respectiv 97,14%.

II.2.3.5. Limita de detecie (LD) i limita de cuantificare (LC)
Limita de detecie se poate aprecia prin cantitatea sau concentraia
minim de analit, care se poate detecta fa de blanc, cu un anumit nivel de
ncredere ales i care poate fi distins de zero.
Pentru determinarea limitei de detecie am utilizat relaia:

Limita de cuantificare (cea mai mic concentraie de analit care
poate fi determinat cu un nivel acceptabil al repetabilitii i exactitii) se
calculeaz dup formula:

II.2.4. Determinarea seleniului din produse alimentare

I I .2.4.1. Probe de analizat
n cercetrile noastre am analizat 45 de probe de produse
alimentare de origine vegetal procurate din reeaua comercial i de la
productori individuali de pe teritoriul oraelor Iai i Buhui.
I I .2.4.2. Separarea seleniului din probele de analizat (material
vegetal, pine, semine) (JAOAC, 2000)
Mineralizarea umed nitro - sulfuric
n jur de 5g prob (produs vegetal proaspt, pine, semine)
mrunit se aduc n baloane Kjehdahl de 250 mL; se adaug 10-15 mL
amestec 1:1 (v/v) de acid sulfuric i acid azotic concentrat (d= 1,27) i se
menine pe baia de nisip pn la obinerea unei soluii limpezi i incolore.
Soluia a fost diluat cu ap deionizat, filtrat i adus cantitativ la
volumul de 50 mL. Soluia mineralizat obinut servete la determinarea
cantitativ a seleniului tetravalent din probe.
Mineralizarea uscat (calcinare)
Cantiti de prob de analizat n jur de 5g se aduc n capsule de
platin cu masa cunoscut (probele de produs vegetal se menin n etuv la
temperatura de 105 - 110C pentru ndeprtarea apei) i se introduc n
cuptorul de calcinare (Nabertherm). Mineralizarea uscat se realizeaz la
temperatura de 450C. Cenua se reia cu 5mL soluie de acid azotic 5% se
dilueaz cu ap deionizat se filtraz i se aduce cantitativ la volumul de 50
(g/mL) = 0,36 g/mL
(g/mL) = 1,09 g/mL
LC
24
mL. Soluia mineralizat obinut servete la determinarea cantitativ a
seleniului tetravalent din probe.

II.2.4.3.Determinarea seleniului din probele de produse alimentare
Determinarea seleniului sub form de seleniu tetravalent (Se
4+
) s-a
realizat prin metoda spectrofotometric bazat pe oxidarea ionului iodur la
iod elementar i reacia acestuia cu albastru variamin, adaptat i validat
de noi dup metoda Revanasiddappa et al., (2001), (validat de noi).
Modul de lucru pentru determinarea seleniului din probele de
produse alimentare
Volume de 1-10 mL de soluie mineralizat se prelucreaz n
modul indicat la trasarea curbei de calibrare. Cu ajutorul curbei etalon se
determin coninutul de seleniu din prob, iar rezultatul se exprim n mg
Se
4+
/ 100 g produs alimentar.
Rezultatele i discuii
Rezultatele obinute la determinarea seleniului din cele 46 probe de
produse alimentare sunt consemnate n tabelele II.19 21.

Tabel II.19.
Coninutul n seleniu al produselor alimentare studiate
Nr.
crt
Denumirea probei Masa probei
Concentraia n seleniu
g/prob g/kg
1. Arahide prjite cu sare 4,2132 0,4220 10,02
2. Franzel alb 4,7853 0,1510 3,17
3. Pine neagr coapt vatr 4,2092 0,1772 4,21
4. Paine alb feliat la vatr Afer 2,0704 0,0797 3,85
5. Pine integral Vita Star 2,3839 0,0967 4,03
6. Ridiche neagr - Romnia 5,3416 0,0357 0,67
7. Sfecl roie - Romnia 5,3854 0,0096 0,18
8. Kiwi Grecia 9,6449 0,0617 0,64
9. Ptrunjel - Romnia 6,3395 0,0312 0,49
10. Mrar - Romnia 6,2740 0,0263 0,42
11. Msline - Grecia 5,1635 0,0294 0,57
12. Hrean - Buhui 2,3865 0.0334 1,40
13. elin - Buhui 2,4105 0,0127 0,52
14. Morcov - Buhui 5,2987 0,1166 2,20
15. Varz roie 6,0548 0,1290 2,13
16. Varz alb Romnia vrac 5,2881 0,1090 2,06

25
Tabel II.20.

Nr.
crt
Denumirea probei
Masa
probei
g/prob g/kg
17. Banane 5,1492 0,0324 0,63
18. Portocale - Grecia 6,9798 0,0865 1,24
19. Lamai - Turcia 6,8381 0,0500 0,74
20. Porumb dulce "Aro" - Ungaria 4,8750 0,0234 0,48
21. Fasole - bob alb Deroni"Polonia 2,4889 0,0154 0,62
22. Linte verde "Deroni" - Canada 2,1090 0,0099 0,47
23. Texturat din soia - vrac 2,2223 0,0246 1,11
24. Orez 1,4800 0,0316 2,14
25. Spaghete "Pambac" 1,3713 0,1151 8,40
26. Biscuiti obisnuiti vrac 2,3611 0,1444 6,12
27. Malai extra "Pan Group" 1,9005 0,0203 1,07
28. Faina alba 000 "Pambac" 1,3900 0,1932 13,90
29. Ciuperci 3,4222 0,9281 27,12

Concentraiile n seleniu determinate n cele 46 de probe de
produse alimentare studiate variaz n limite foarte largi; astfel, pentru
acelai tip de aliment mere, concentraiile de seleniu sunt cuprinse ntrte
0,23 g/100g i 0,43 g/100g. Pentru probele de ardei gras, concentraiile
determinate variaz de la 0,18 g/100g la 0,32 g/100g. Coninutul n
seleniu al probelor de pine analizate variaz ntre 3,17 i 4,21 g/100g.
Cele mai mari concentraii de seleniu s-au determinat n probele de ciuperci
(27,12 g/100g) usturoi (14,54 g/100g), arahide prjite (10,02 g/100g) i
fin alb 000 (13,90 g/100g). Aceste rezultate sunt destul de apropiate de
cele publicate n literatura de specialitate. Astfel, Barclay et al., (1992) au
raportat pentru fina alb o concentraie medie de seleniu cuprins ntre 7,9
i 23,4 g/100g de produs. Diferenele sunt explicate prin coninutul diferit
n proteine al finii; fina cu cel mai ridicat nivel al seleniului are un
coninut ridicat n proteine (mai mult de 150g/kg) comparativ cu cea cu un
coninut proteic de 130g/kg care are cel mai cobort nivel de seleniu. Ali
autori (Barkley et al., 1995) au determinat n probe de fin de referin
concentraii de seleniu de 14 g/100g de produs.

26
Tabel II.21.

Nr.crt Denumirea probei
Masa
probei
g/prob g/100g
30. Morcovi vrac Olanda 5,0965 0,0571 1,1223
31. Roii vrac Turcia 5,9737 0,0262 0,4397
32. Ardei iui vrac Turcia 6,1944 0,0076 0,1243
33. Ardei capia rou 5,4450 0,0125 0,2313
34. Ardei gras verde Turcia 5,6883 0,0102 0,1800
35. Ardei gras Bianca vrac Turcia 5,8901 0,0188 0,3208
36. Ardei gras portocaliu Spania 6,2447 0,0147 0,2354
37. Cartofi Romnia - Buhui 5,4525 0,0163 0,3007
38. Cartofi albi - Romnia 5,4209 0,0195 0,3607
10. Usturoi China 5,3079 0,7718 14,5422
39. Ceap roie - Romnia - Buhui 5,6904 0,0359 0,6322
40. Ceap alb - Romnia - Buhui 5,4776 0,0280 0,5123
41. Mere Golden delicious - Austria 5,6883 0,0134 0,2356
42. Mere - Romnia - Buhui 5,8021 0,0248 0,4276
43. Mere Starkinson vrac Grecia 5,4548 0,0106 0,1954
44. Mere Yonagold Belgia 5,6633 0,0246 0.4378
45. Grapefruit alb vrac Turcia 8,6108 0,0448 0,5208

Concentraia seleniului n pine, raportat de Barcley et al. (1995)
variaz ntre 3,5 i 4,8 g/100g de produs. Autorii egipteni (Hussein et al.,
1999) au raportat pentru fina alb concentraii de seleniu de 19,3 g/100g
de produs. Analizate comparativ, datele obinute de noi i cele prezente n
literatura dev specialitate, evideniaz valori suficient de apropiate pentru
aceleai tipuri de produse alimentare. Pe aceast baz se poate estima
aportul zilnic de seleniu prin consumul de produse alimentare de origine
vegetal. Valorile mai mici pentru unele produse recoltate din Romnia ar
putea fi explicate prin nivelul sczut al seleniului n sol (Lctuu et al.,
2010; Lctuu et al., 2002; Lctuu et al., 1992).
Concluzii
Cercetrile experimentale incluse n acest capitol au condus la
adaptarea i validarea unei metode spectrofotometrice de determinare a
seleniului din produse alimentare prin stabilirea condiiilor de aplicare a
metodei i determinarea parametrilor de validare ai metodei Astfel, dup
stabilirea lungimii de und la care absorbana este maxim s-au stabilit
volumele optime ale tuturor reactivilor utilizai la aplicarea metodei.
27
Raportul de validare a confirmat valori optime pentru parametrii
impui metodelor spectrofotometrice de analiz. Astfel, liniaritatea metodei
este corespunztoare pentru intervalul de concentraii 0,5-5 g/mL (10-100
g/prob), coeficient de regresie (r
2
) are valoarea 0,9954, coeficientul de
corelaie (r) = 0,9977; panta = 0,00425, iar interceptul = 0,00411.
Precizia metodei, indic pentru deviaia relativ standard (RSD %)
valori de 0,9493% pentru repetabilitatea deteciei, 1,2900% pentru
repetabilitatea metodei i 1,8302% pentru precizia intermediare. Valoarea
limit admis pentru deviaia standard relativ este de 5%; cerina este
ndeplinit, ceea ce dovedete o bun repetabilitate a metodei.
n ceea ce privete exactitatea metodei, regsirea medie este de 100,19% pe
intervalul 97,97 103,60%. Valorile experimentale obinute indic faptul
c metoda este exact.
Rezultatele obinute au evideniat diferene ale randamentului de
recuperare att n funcie de metoda de separare a seleniului din probele de
analizat, ct i de concentraia de seleniu adaugat. Astfel, pentru probele
de pine integral, la care separarea seleniului s-a realizat prin calcinare
randamentul de recuperare a avut valori de 67,28 % pentru concentraia
adugat de 50 g/kg i 84,43% la adugarea selenitului de sodiu n
concentraie de 100 g/kg. Separarea seleniului prin mineralizare umed a
condus la procente mai mari ale randamentului de recuperare, de 88,36% i,
respectiv 97,14%. Pentru probele de usturoi, randamentele de recuperare
sunt apropiate de cele determinate pentru probele de pine i sunt cuprinse
ntre 76,16% i 97,73%.
Calcularea limitei de detecie (LD) i a limitei de cuantificare (LC)
a condus la concentraii de 0,36 g/mL i respectiv 1,07 g/mL. Aceste
valori confirm nivelul modest de sensibilitate a metodelor
spectrofotometrice de determinare a seleniului din probe a cror
concentraie a acestui element este sczut.
Determinarea seleniului din produsele alimentare de origine
vegetal a condus la rezultate comparabile cu cele raportate de ali autori
pentru produse similare. Valorile mai mici pentru unele produse recoltate
din Romnia ar putea fi explicate prin nivelul sczut al seleniului n sol.
28
Capitolul III

ROLUL SUPLIMENTELOR NUTRITIVE N ASIGURAREA
APORTULUI DE SELENIU PENTRU ORGANISM

III. 2. Suplimente nutritive cu seleniu

Doza zilnic de seleniu din diet nu este ntotdeauna de ajuns pentru
nevoile nutriionale ale indivizilor, mai ales pentru cei care locuiesc n zone cu
soluri srace n acest element. Numeroi medici recomand mrirea dozei de
seleniu din diet i folosirea de suplimente nutritive cu acest produs, mai ales
ca mijloc de a reduce riscul apariiei unor forme de cancer. Acest lucru
presupune o grij sporit pentru a gsi forma potrivit de seleniu din
suplimente, a supraveghea calitatea produselor de pe pia, sigurana lor i
modul n care sunt ele consumate.
Suplimentele cu seleniu necesit o mai atent supraveghere, iar
populaia trebuie informat mai corect referitor la coninutul acestor
suplimente, la forma de seleniu din suplimente, la posibilele intercaiuni cu
alte substane, la pericolele supradozrii.
Obiectivele cercetrii
Suplimentele alimentare care au seleniu n compoziia lor sunt
recomandate i administrate pentru completarea necesarului de seleniu
pentru organism. Deoarece, n general aceste suplimente nu se
administreaz dup evaluarea statusului nutriional al organismului n
seleniu, se impun precauii pentru a se evita aportul excesiv al acestui
microelement. Inregistrarea i punerea pe pia a suplimentelor alimentare
nu este supus acelorai reglementri ca i n cazul medicamentelor i de
aceea, n cazul seleniului, microelement la care balana deficit-exces este
att de sensibil este necesar respectarea concentraiei microelementului
pe doza unitar administrat.
Cercetrile experimentale incluse n acest capitol au urmrit:
Determinarea coninutului n seleniu al unor suplimente
nutritive
Studiul cedrii in vitro a seleniului din suplimente nutritive
coninnd seleniu.

29

III.2.1. Determinarea seleniului prin metoda spectrofotometric
cu iodur de potasiu - albastru variamin.
Material i metode
Probe de analizat
Probele de analizat - 12 suplimente alimentare coninnd seleniu au
fost achiziionate din reeua farmaceutic a oraului Iai:
1. Taxofit (V) comprimate cu eliberare retard
2. Se spirulin comprimate acoperite
3. Additiva superform (V) - comprimate acoperite
4. Additiva 50+ (V) - comprimate filmate
5. Diabetiker (V) - comprimate filmate
6. Bio Seleniu Zinc (V) - comprimate filmate
7. Additiva Okio-clar (V) - comprimate filmate
8. Complex de antioxidani (V) - capsule moi
9. Walmark Seleniu formula forte (VI) comprimate
10. Walmark Antioxidant (V) comprimate
11. Multivitamine i minerale junior pulbere oro solubil (2 g
compoziia)
12. Multivitamine i minerale aduli pulbere oro solubil (2 g
compoziia)

I I I .2.2. Determinarea seleniului din probele de suplimente
alimentare
Separarea seleniului din probe
Separarea seleniului din probe s-a realizat prin mineralizare uscat,
la temperatura de 600C. Reziduul final reluat cu amestec acid sulfuric
concentrat - acid azotic concentrat (1:1), s-a neutralizat i dup filtrare s-a
adus cantitativ cu ap distilat la volumul de 50 ml soluia mineralizat.
Soluia obinut a fost utilizat pentru dozarea seleniului prin cele dou
metode spectrofotometrice prezentate n capitolul anterior.
Cot parte din soluia mineralizat (1-3 mL) se prelucreaz n
modul indicat la trasarea curbei de etalonare. Dup 20 de minute se
msoar absorbanele la 545 nm, cuva de 1 cm, fa de un martor preparat
n aceleai condiii,
Rezultate i discuii
Rezultatele obinute la determinarea seleniului prin metoda
spectrofotometric cu iodur de potasiu-albastru variamin sunt nserate n
tabelul III.2.

30
Tabel III.2.
Coninutul n seleniu al probelor analizate
Nr.
probei
Coninut n seleniu (g/comprimat/ capsul) Abatere
(%)
Declarat Determinat
1. 15 15,45 +3,00
2. 50 53,23 +6,46
3. 40 37,12 -7,20
4. 30 30,07 +0,23
5. 100 101,15 +1,15
6. 17,5 18,32 +4,68
7. 15 16,06 +7,06
8. 100 98,14 -1,86
9. 50 49,05 -1,90
10. 50 51,14 +2,28
11. nedeclarat 24,45/2 g pulbere -
12 nedeclarat 44,14/2 g pulbere -

Din analiza rezultatelor obinute la determinarea seleniului din
probele de suplimente alimentare luate n studiu se constat variaii fa de
concentraiile declarate. Abaterile procentuale fa de concentraiile
declarate variaz ntre 7,2% i +7,06%.

III.2.3. Studiul cedrii in vitro a seleniului din suplimente nutritive
Testul de dizolvare este un test de studiu al cedrii (eliberrii) in
vitro a substanei active dintr-o form farmaceutic solid.
Punerea la dispoziia organismului a substanei active din formele
farmaceutice orale este diferit de aceea a unei forme cu aplicare topic sau
pe mucoase (ovule, supozitoare).
Timpul de dizolvare stabilete cantitatea de substan activ
dizolvat dintr-o form farmaceutic solid cu administrare oral, ntr-un
anumit timp, n mediul de dizolvare prevzut.
Principiul determinrii
Comprimatul se plaseaz ntr-un recipient n lichidul de dizolvare.
Cu un sistem de agitare, are loc o agitare lent n jurul comprimatului, dar
suficient pentru a asigura omogenitatea mediului, n vederea prelevrii
probelor.
Agitarea mediului se realizeaz mecanic prin intermediul unei tije,
care la primul aparat se termin cu o palet, iar la al doilea, cu un coule
31
confecionat dintr-o sit. n primul aparat, comprimatul se introduce n mediul
de dizolvare, iar n al doilea aparat, comprimatul este plasat n coule i se
rotete o dat cu el.
Condiii de calitate pentru comprimatele cu minerale
Tabletele cu minerale conin dou sau mai multe minerale derivate
din substane recunoscute general ca fiind sigure, furniznd dou sau mai
multe din urmtoarele elemente sub form ionizabil: calciu, crom, cupru,
fluor, iod, fier, magneziu, mangan, molibden, fosfor, potasiu, seleniu i
zinc. Tabletele conin nu mai puin de 90.0 la sut i nu mai mult de 125.0
la sut din cantitatea etichetat de calciu (Ca), cupru (Cu), fier (Fe),
magneziu (Mg), mangan (Mn), fosfor (P), potasiu (K) i zinc (Zn) i nu mai
puin de 90.0 la sut i nu mai mult de 125.0 la sut din cantitile etichetate
de crom (Cr), fluor (f), iod (I), molibden (Mo) i seleniu (Se). Ele nu conin
vitamine. Pot conine alte substane adugate, menionate pe etichetate n
cantiti care nu sunt subiectul obieciilor.

Rezultate
Testul de dizolvare in vitro (probele 1-9)
Pahar Proba
Masa (g)
3
comprimate
Coninut Se
declarat
(g)/cp
Observaii
1 B 2,74 15
- dup 60 min. toate cele trei
comprimate prezentau nucleu
palpabil
2 C 4,20 50
- 1 comprimat a prezentat nucleu
palpabil, dup 60 min
3 D 3,70 40 - dizolvare total
4 E 3,55 30
- dup 60 min. toate cele trei
comprimate prezentau nucleu
palpabil (> 50% din masa
comprimatului)
5 F 1,32 100 dizolvare total
6 G 3,51 17,5 dizolvare total
7
I
(clasa VI)
1,01 100 - comp. au dezagregat dup 10 min.
8
J
(clasa V)
1,69 50 - comp. au dezagregat dup 10 min.
9
H
(clasa V)
2,53 50
- nveliul i-a pstrat integritatea
pe parcursul celor 60 de min. (la
prox. 20 min. am observat o gonflare
evident a caps.).

32
Tabel III.7.
Estimarea capacitii de dizolvare a suplimentelor nutritive, prin
determinarea seleniului cedat
Intervalul
de timp
(minute)
Concentraiile de seleniu cedate {(g/comprimat sau capsul)/ %}
Proba 1 Proba 2 Proba 3 Proba 4
Proba
5
Proba 6
Proba
7
Proba 8 Proba 9
10 4,35/29 16/32 19,2/48 - 47/47 8,4/48 92/92 48,25/96,5 -
20 6,45/43 19/38 21,2/53 - 59/59 11,02/63 96/96 - -
30 8,53/57 27/54 25,6/64 3,6/12 61/61 13,82/79 = = 9,6/19,2
40 9,15/61 29,5/59 28,8/72 7,5/25 73/73 15,22/87 = = 13,25/26,5
50 10,20/68 35/70 31,6/79 8,7/29 84/84 16,1/92 = = 16/32
60 10,45/70 36,5/73 33,2/83 11,1/37 92/92 16,8/96 = = 23,4/46,2

Discuii
Rezultatele obinute la determinarea capacitii de dizolvare a celor
9 probe de suplimente nutritive luate n studiu scot n eviden faptul c n
unele situaii forma farmaceutic cedeaz, in vitro, mai puin de 50% din
cantitatea de seleniu declarat. Dou dintre probe (proba 7 i proba 8) au
cedat seleniul dup numai 10 sau 20 de minute de experiment. n schimb,
probele 1, 2, 4 i 9 au prezentat o capacitate de cedare a seleniului de 70%,
73%, 37,5 i, respectiv 46,2%.
Rezultatele obinute de noi sugereaz c nu toate suplimentele
alimentare condiionate sub form de comprimate sau capsule respect
condiiile impuse privind capacitatea de dizolvare in vitro. Aceast
concluzie susine rezultatele unui studiu realizat n Frana asupra calitii
suplimentelor alimentare n care, pentru 382 de produse s-a determinat
coninutul n principii nutritive (valoare nutritiv, vitamine, minerale),
conservani i ali aditivi, metale grele, pesticide, etichetare, s-a constatat c
75% dintre ele erau necorespunztoare: prezentau substane neautorizate,
conineau plante sau pri din plante neautorizate n alimentaia uman,
erau adugate vitamine i substane minerale sub form neautorizat i n
concentraii mai mari dect dozele zilnice recomandate, prezentau pesticide
organoclorate n concentraii care nu pot fi neglijate, prezentau etichetare
incomplet.
Concluzii
Rezultatele obinute la determinarea seleniului din probele de
suplimente alimentare luate n studiu evideniaz variaii fa de
concentraiile declarate. Abaterile procentuale fa de concentraiile
declarate variaz ntre 7,2% i +7,06%.
33
Pentru rezultatele obinute de noi, concentraiile de seleniu
determinate variaz ntre 92,8% i 107,06%, valori care se ncadreaz n
limitele impuse de legislaia n vigoare (variaii cuprinse ntre 90% i 125%
fa de concentraia declarat).
Rezultatele obinute la determinarea capacitii de dizolvare a celor
9 probe de suplimente nutritive luate n studiu scot n eviden faptul c n
unele situaii forma farmaceutic cedeaz, in vitro, mai puin de 50% din
cantitatea de seleniu declarat. Dou dintre probe au cedat seleniul dup
numai 10 sau 20 de minute de experiment, n schimb, altele dintre probele
analizate au prezentat o capacitate de cedare a seleniului de 70%, 73%, 37,5
i, respectiv 46,2%.
Rezultatele obinute de noi sugereaz c nu toate suplimentele
alimentare condiionate sub form de comprimate sau capsule respect
condiiile impuse privind capacitatea de dizolvare in vitro.

34
Capitolul IV

EVALUAREA ROLULUI PROTECTOR AL SELENIULUI N
INTOXICAIA SUBACUT CU ACRILAMID PE BAZA UNOR
PARAMETRI BIOCHIMICI, HEMATOLOGICI I
HISTOPATOLOGICI

IV.1. Introducere

Pe lng efectele favorabile pe care procesul culinar le produce
asupra alimentului n general, sau asupra anumitor principii nutritive din
componena acestuia, tratamentul termic poate avea i consecine nedorite:
reducerea valorii biologice prin distrugerea unor principii nutritive
(aminoacizi, vitamine), modificarea unor proprieti senzoriale (culoare,
textur), apariia unor compui de degradare nocivi (acrolein, compui
furanici, acrilamid) (Cuciureanu, 2005).
Acrilamida (AA), compus chimic cunoscut nc de la sfritul
secolului XIX pentru efectele sale neurotoxice i cancerigene, a fost
decelat n alimentele prelucrate termic prin prjire sau coacere (produse pe
baz de cartofi, chips-uri, pine) de ctre cercettorii suedezi n aprilie 2002
(Mottram et al.,2002; SNFA, 2002 ). Se gsete n fumul de igar i, este
inclus i n categoria toxicilor de mediu (environmental) toxic pe baza
efectelor neurotoxice consecutive expunerii, la fumtorii activi sau pasivi.
Dup anul 2002, Organizaia Mondial a Sntii a lansat programe
de cercetare care abordeaz aspecte ncepnd cu mecanismul de formare,
concentraia n alimente, aciunea toxic, pn la elaborarea recomandrilor
privind prelucrarea termic a alimentelor n vederea reducerii formrii AA.
Aceste cercetri (studii experimentale i date epidemiologice) au confirmat
aciunea cancerigen a AA la animalele de laborator. n plus, au fost puse n
eviden efecte toxice asupra funciei de reproducere, a dezvoltrii, n
general, precum i efecte genotoxice (WHO 2002).

IV.2. Obiectivele cercetrii

Prezentul capitol i propune ca obiective:
Studierea potenialului protector al seleniului (administrat sub
form de selenit de sodiu) i a unor suplimente alimentare cu seleniu asupra
obolanilor Wistar n intoxicaia experimental, pe cale oral, cu doze
crescute de acrilamid prin:
35
Evaluarea modificrilor biochimice, hematologice i
histopatologice la obolani cu intoxicaie subacut cu acrilamid
(50mg/kgc/zi);
histopatologice la obolanii la care administrarea de acrilamid (intoxicaie
subacut) a fost asociat cu administrarea simultan de seleniu (selenit de
sodiu), respectiv un supliment nutritiv coninnd seleniu (Celnium).
Material i metode
Protocol experimental
obolani Wistar aduli cu greutatea cuprins ntre 180-220g, au fost
constituii n 8 loturi de cte 3 animale crora, timp de 12 zile, dup 12 ore de
post, li s-a administrat prin gavaj gastric:
Lot I (Control) ser fiziologic = Control;
Lot II acrilamid, soluie apoas (50 mg/kgc/zi) = AA;
Lot IV acrilamid, soluie apoas (50 mg/kg/zi) i soluie de
selenit de sodiu 1mg/kg/zi (echivalent cu 1 mg Se) = AA + Se 1;
selenit de sodiu 0,2 mg/kgc/zi (echivalent cu 0,2 mg Se) = AA + Se 0,2;
Lot V - acrilamid, soluie apoas (50 mg/kg/zi) i soluie Celnium
(supliment nutritiv cu seleniu, echivalent cu 0,2 mg Se/kgc/zi = AA + Ce.
La finalul experimentului, dup 12 ore de post animalele au fost
sacrificate i s-au recoltat probe de snge n eprubete cu anticoagulant n
funcie de tipul de analiz. Probele din esutul hepatic (pentru analizele pe
omogenat de ficat) au fost recoltate pe ser fiziologic la temperatura de 2-3
grade i pstrate la - 35C pn la efectuarea determinrilor (GSH, GPx, TAS,
MDA).
Probele pentru examenul histopatologic (ficat, rinichi, creier,
testicul, pancreas) au fost recoltate i pstrate n soluie de formol 10 %.

IV.3. Investigaii biochimice

Dup recoltare, probele de snge destinate determinrilor
biochimice au fost centrifugate pentru 15 minute, la 3000 rotaii pe minut.
Plasma obinut a fost supus imediat determinrilor biochimice care s-au
realizat metode standardizate folosind kituri ELITech.
Determinrile cantitative ale parametrilor biochimici vizai de
experimentul realizat s-au efectuat pe analizoarele semiautomate LITech,
Randox sau prin determinri spectrofotometrice clasice. Toate rezultatele
prezentate reprezint media a 5 determinri (fiecare parametru a fost
determinat individual pe plasma recoltat de la 5 obolani).
36
IV.3.1.1. Determinarea activitii alanin-amino-transferazei (ALT)
Rezultate i discuii

Fig. IV. 3. Valorile plasmatice ale alanin-amino-transferazei

Rezultatele obinute (figura IV.3.) evideniaz creterea valorilor
activitii ALT la lotul AA comparativ cu lotul Control. Asocierea
administrrii AA cu seleniu a avut ca efect creterea valorilor ALT de la
51,1 U/L la lotul Control la 95,5 la loturile la care AA a fost asociat cu
seleniu sub form de selenit de sodiu (0,2 mg/kg), respectiv Celnium.
Evoluia alanil aminotransferazei, enzim cu localizare strict citosolic,
evideniaz creteri semnificative ale activitii, sugernd permeabilizarea
membranei hepatocitului i migrarea sa n spaiul intercelular.

I V.3.1.2. Determinarea aspartat-amino-transferazei (AST)
Rezultate i discuii
Rezultatele obinute n urma investigaiei activitii primului
indicator de citoliz hepatic, aspartat aminotransferaza, sunt redate n
figura IV.4.
Studiul acestor rezultate evideniaz variaii majore, a cror
interpretare poate conduce la date importante privitoare la farmacocinetica
acrilamidei administrate oral.
Se observ o cretere a activitii acestei enzime celulare de la
203,66 la 229,66 26 UI pentru lotul la care s-a administrat AA. Aceast
tendin de cretere a activitii hepatice a AST este neconcordant cu
rezultatele raportate de Yousef et al. (2005) care evideniaz o scdere a
valorilor AST hepatic pentru toate dozele de acrilamid administrate
37
(Fig.IV.5). Pentru lotul la care AA a fost administrat simultan cu selenitul
de sodiu n concentraie de 1 mg/kg, valoarea plasmatic a aspartat-amino-
transferazei a sczut la 145,51 U/L.

Fig. IV.4. Valorile plasmatice ale aspartat-amino-transferazei

Aceste valori sugereaz c ar avea loc migrarea AST din
citoplasma hepatocitelor n spaiul intercelular datorit creterii
permeabilitii membranare. Aceast permeabilizare a membranei
hepatocitului fi datorat lezrii consecutive legrii acrilamidei sau a unor
metabolii de proteinele membranare.

38

Fig.IV. 5. Evoluia activitii ALT, AST i ALP n ficat dup tratamentul cu
acrilamid (Yousef et al. 2005)

IV.3.2. Determinarea activitii -glutamil transpeptidazei (GGT)
Rezultate i discuii
Aa cum arat aceste date (Fig.IV.7.), activitatea y-glutamil
transpeptidazei pentru lotul de referin este de 8,1U/L; activitatea GGT
nregistreaz o cretere semnificativ pentru lotul AA, tratat cu acrilamid
la 11,6U/L. Aceast cretere se coreleaz cu evoluia indicatorilor de
citoliz hepatic la acest lot. Pentru loturile de animale care au primit
acrilamid n asociere cu seleniu valorile -glutamil transpeptidazei au
evoluat spre cele caracteristice lotului Control.
39

Fig. IV.7. Valorile plasmatice ale -glutamil transpeptidazei

I V.3.5. Determinarea creatin kinazei (Creatin-fosfokinaza, CK)
Rezultate i discuii

Fig. IV.10. Concentraiile plasmatice ale creatin-fosfokina

Rezultatele obinute la determinarea activitii creatin-fosfokinazei
(figura IV.10.) evideniaz valorile crescute pentru lotul intoxicat cu
acrilamid, comparativ cu lotul control (1606,2 U/L, comparativ cu 1127,1
U/L). Din datele prezentate n figur reiese capacitatea seleniului administrat
simultan sub form de selenit de sodiu sau de supliment alimentar (Celnium)
40
de a contracara aciunea toxic a acrilamidei i a normaliza leziunea
biochimic produs de aceasta. Rezultatele obinute de noi nu sunt corelate
cu cele raportate de ali autori (Fig. IV.11.) (Yousef et al., 2005).

Fig. IV.11. Valorile plasmatice ale creatin kinazei n urma tratamentului cu
acrilamid (Yousef et al., 2005).

I V.3.7. Determinarea proteinelor totale
Rezultate i discuii
Rezultatele concentraiei proteinelor plasmatice (figura IV.13) pentru cele 5
loturi de obolani luate n studiu evideniaz concentraii diminuate ale
proteinemiei la loturile intoxicate cu acrilamid n concentraie de 50
mg/kg corp. Asocierea seleniului normalizeaz evident valorile plasmatice
ale proteinelor totale n plasma sanguin. Valorile obinute n acest
experiment sunt n concordan total cu cele raportate de Yusef et al.
(2006) i Odland (1994).

Fig. IV.13. Concentraia plasmatic a proteinelor totale

41
Yusef et al. (2006) au obinut pentru lotul de obolani intoxicat cu
acrilamid administrat oral (50 mg/kgc) o scdere a proteinemiei la 6,3
mg/dl, fa de 6,8 pentru lotul control (figura IV.14).

Fig.IV.14.Valorile plasmatice ale unor proteine plasmatice n urma
tratamentului cu acrilamid (Yousef et al., 2005)

I V.3.8.2. Determinarea bilirubinei directe
Principiul metodei determinare
Determinarea bilirubinei conjugate (directe) se bazeaz pe
capacitatea bilirubinei directe de a reaciona cu acidul sulfanilic i reactivul
diazo (fr accelerator). Se formeaz un compus colorat n rou, intensitatea
culorii fiind direct proporional cu concentraia bilirubinei directe n ser.
Rezultate i discuii
n ceea ce privete bilirubina direct (figura IV.16), situaia este
asemntoare; valoarea plasmatic a acestui parametru a crescut de 19 ori
pentru lotul intoxicat cu acrilamid (0,38mg/dl) fa de martor (0,02 mg/dl).
i n cazul bilirubinei directe se poate afirma, pe baza valorilor obinute, c
42
administrarea de seleniu ar normaliza traseul bilirubinei totale la nivel
hepatobiliar.

Fig. IV. 16. Valorile plasmatice ale bilirubinei directe

I V.3.10. Determinarea LDL colesterolului
Rezultate i discuii
Dinamica valorilor colesterolului total este n concordan cu datele
publicate de Khalil et al. (2005). Astfel, concentraiile colesterolului total sunt
mai mari dect ale lotului control. Administrarea a 50 mg acrilamid/kgc a
condus la o cretere a total colesterolului la 85,2 mg/dl (figura IV.17).

Fig. IV.17. Concentraiile plasmatice ale colesterolului total
43

Fig. IV.18. Concentraiile plasmatice ale LDL colesterolului

i pentru loturile la care administrarea acrilamidei a fost asociat cu
seleniu s-a obinut o cretere a valorilor colesterolului, dar n msur mult mai
redus. Astfel, pentru lotul care a primit 1 mg selenit de sodiu/kgc valoarea
parametrului este de 55,8 mg/dl, comparativ cu 67,1 mg/dl pentru lotul care a
primit 0,2 mg selenit/kgc.
Aceeai dinamic a fost obinut i la determinarea valorilor LDL
colesterolului. Astfel, pentru lotul intoxicat cu acrilamid, valoarea LDL
este de 10,33 mg/dl, comparativ cu martorul la care sau obinut 8,66 mg
colesterol/dl. i pentru acest parametru, putem aprecia c seleniul a
manifestat aciune protectoare. Astfel comparativ cu lotul care a primit
acrilamid, la cel la care toxicul a fost asociat cu 1 mg selenit de sodiu/kg,
valoare LDL colesterol a sczut la 9,23 mg/dl (figura IV.18).

I V.3.14. Determinarea ferului
Principiul metodei- determinare
Fierul se dozeaz; prin metoda colorimetric cu ferozina. Ionul
feric din ser este disociat de pe proteina transportoare, transferina, n mediu
acid i, simultan, redus la ionul feros. Acesta reacioneaz cu ferozina din
reactivul cromogenic i formeaz un compus colorat, care are maximum de
absorban la 546 nm i a crei intensitate de culoare este direct
proporional cu concentraia de fier msurat.
Reacia este linear pn la concentraia de 198 mol/l, n caz de
rerun, liniaritatea merge pn la 398 mol/l.
44
Concentraia minim detectabil de Fe cu aceast metod este de
2.0 mol/l.
Rezultate i discuii

Fig. IV.22. Concentraiile ferului plasmatic

Concentraiile ferului plasmatic au crescut semnificativ la lotul de
animale intoxicat cu acrilamid, 223,1 mg/dL comparativ cu 107,1 mg/dl la
lotul martor. Loturile care au primit acrilamid i selenit de sodiu prezint
concentraii ale ferului de 133,8 mg/dL pentru lotul AA+Se 1, 141,1mg/dL
pentru lotul AA+se 0,2, respectiv 153,4 pentru lotul AA+Ce (figura IV.22).
Rezultate concordante cu cele obinute de noi au fost raportate de
Allam et al. (2010) care au obinut creteri ale concentraiilor plasmatice
ale ferului la obolani alimentai cu hran coninnd acrilamid timp de 21
de zile.
Pe toat durata experimentului realizat de autorii citai, de 28 de
zile concentraia plasmatic a ferului a sczut uor. Astfel, dup 21 de zile
valoarea ferului a fost de 94,11 mg/dl, comparativ cu lotul martor, la care
valoarea a fost de 106,97 mg/dL.
Dup 28 de zile de experiment concentraia ferului a sczut de la
104, 46 mg/dL la maror la 95, 56 mg/dl la lotul intoxicat cu acrilamid.
Perturbarea homeostaziei ferului se poate explica prin scderea n greutate
a animalului n prima etap a experimentului i prin formarea unor aduci
acrilamid-hemoglobin, respectiv glicidamid-hemoglobin (Ling et al.,
1996; Konings et al., 2003).

45
I V.3.16. Determinarea nivelului plasmatic al ureei

Fig. IV.25. Concentraiile plasmatice ale ureei

Rezultatele obinute la determinarea ureei n snge confirm
toxicitatea renal a acrilamidei (BIBL). Astfel, la animalele intoxicate cu
acrilamid nivelul ureei a crescut de la 38,9 mg/dL la martor la 57,5 mg/dL
(figura IV.25).
Valorile obinute pentru loturile la care aciunea toxic a
acrilamidei ar putea fi protejat prin asocierea cu seleniu sub form de
selenit de sodiu, respectiv sub form de supliment alimentar, Celnium,
evideniaz faptul c valorile plasmatice ale concentraiei ureei au sczut
pn la valori mai apropiate de ale lotului martor.

I V.3.17. Determinarea creatininei
Rezultate i discuii
Creatinina, ca parametru al evalurii funciei renale a prezentat
valori crescute la lotul de animale intoxicat cu acrilamid. La toate loturile
la care acrilamida a fost asociat cu seleniu, nivelurile plasmatice ale
creatininei sunt mai sczute dect cele ale lotului martor (figura IV.26).
Rezultatele obinute sunt n concordan cu cele publicate de Khalil et al.
(2007), care au obinut creteri ale valorilor creatininei de la 1,18 mg/dL la
grupul martor la 1,83 la lotul care a consumat cartofi prjii i la 2,20
mg/dL la animalele de laborator alimentate cu pine prjit cu un coninut
ridicat de acrilamid timp de 6 sptmni.

46

Fig. IV.26. Concentraiile creatininei din plasm

I V.3.19. Determinarea triiod-tironinei (T3)
Rezultate i discuii
Rezultatele obinute pentru valorile triiodtironinei sugereaz
confirmarea ipotezei conform creia seleniul intervine n metabolismul
tiroidian. Pentru lotul de animale intoxicat cu acrilamid, concentraia T3 a
sczut de la 2,63 g/ml la 2,53 g/ml. Intervenia seleniului s-a concretizat
prin modificri ale concentraiilor T3 necorelate cu doza de seleniu
administrat (Fig. IV. 28).

Fig. IV.28. Valorile plasmatice ale triiod-tironinei
47

I V.3.20. Determinarea tiroxinei (T
4
)
Rezultate i discuii

Fig. IV.29. Valorile plasmatice ale tiroxinei

Valorile plasmatice ale tiroxinei au sczut dramatic la animalele
tratate cu acrilamid, comparativ cu lotul martor (fig. IV.29). Rezultatele
sunt concordante cu cele obinute de Bowyer et al. (2008), (fig. IV.30).
Scderea este mult mai redus la asocierea seleniului n concentraie de 1
mg/kg (de la 10,63 g/ml la 10,3 g/ml).
Prin urmare, n studiile de administrare de doze mari de seleniu la
animale, lipsa relaiei ntre efectul asupra enzimelor care metabolizeaz
medicamentele i metabolismul glutationului n ficat, funcia neutrofil i
schimbrile n activitatea GSHPx au necesitat ca investigaiile s fac
asocierea ntre seleniu i statusul tiroidei.

IV.3.23. Evaluarea potenialului protector al seleniului asupra
stresului oxidativ provocat de intoxicaia cu acrilamid
Obiective
Ca parametri pentru cercetarea prezenei perturbrilor biochimice
provocate de intoxicaia cu acrilamid i evidenierea rolului seleniului ca
antioxidant n normalizarea valorilor acestor parametri s-au determinat:
superoxid dismutaza (SOD),
glutathion peroxidaza (GPx),
glutationul redus (GSH),
malondialdehida (MDA),
48
statusul total antioxidant (TAS).
Material i metode
Rspunsul sistemelor antioxidative mpotriva nivelurilor ridicate de
acrilamid administrate la sobolani ;ieventualul potential protector al
seleniului a fost evaluat ]n cadul unui experiment ]n care s-a lucrat pe
obolani albi Wistar cu greuti cuprinse ntre 220-250 g. Animalele au fost
achiziionate de la Institutul Cantacuzino i au fost meninute n condiii
standard de laborator. Animalele au fost inute n cuti de dimensiuni
corespunztoare conform normelor n vigoare; de asemenea au fost
asigurate condiiile de ventilaie.
obolanii au fost repartizai aleator n 5 loturi (de cte 5 animale
fiecare) care au primit: Lot I (Control) ser fiziologic = Control;
Lot II acrilamid, soluie apoas (50 mg/kgc/zi) = AA;
Lot III acrilamid, soluie apoas (50 mg/kg/zi) i soluie de
selenit de sodiu 1mg/kg/zi (echivalent cu 1 mg Se) = AA + Se 1;
selenit de sodiu 0,2 mg/kgc/zi (echivalent cu 0,2 mg Se) = AA + Se 0,2;
Lot V - acrilamid, soluie apoas (50 mg/kg/zi) i soluie Celnium
(supliment nutritiv cu seleniu, echivalent cu 0,2 mg Se/kgc/zi = AA + Ce. La
finalul experimentului, dup 12 ore de post animalele au fost sacrificate i s-
au recoltat probe de snge n eprubete cu anticoagulant n funcie de tipul de
analiz. Probele din esutul hepatic (pentru analizele pe omogenat de ficat) au
fost recoltate pe ser fiziologic la temperatura de 2-3 grade i pstrate la -
35C pn la efectuarea determinrilor (GSH, GPx, TAS, MDA).
Cercetarile pe modele experimentale animale au respectat conditiile
impuse de ghidul Societatii Internationale de Studiu al Durerii (IASP) si al
Comitetului Consiliului European (86/609/EEC) cu privire la folosirea
animalelor de experienta si a preparatelor biologice.
S-au recoltat probe de snge din plexul retroorbitar la 72h de la
administrare sub anestezia obolanilor cu ketamin (75mg/kg i.p.), n
scopul efecturii analizelor biochimice.
Activitile glutation peroxidazei din snge i a antioxidanilor
totali din plasm au fost msurai folosind trusa Randox.
Analiza statistic a fost efectuat folosind o variant a analizei
ANOVA). Testul Tukey a fost utilizat pentru comparaii multiple (software
Statistici Direct versiunea 2.6). Rezultatele sunt prezentate ca medie a 5
determinri.
Rezultate i discuii
Rezultatele obinute la determinarea superoxid dismutazei n
omogenatele de ficat sunt incluse n fig. IV.35.
49

Fig. IV. 35. Valorile activitii SOD n omogenatele de ficat

Determinarea activitii glutationperoxidazei n snge, respectiv n
omogenatele de ficat a condus la valorile incluse n fig.IV. 36 i IV.37.

1993,64
1770,72
1824,13
1803,02
1811,83
1650
1700
1750
1800
1850
1900
1950
2000
C ontrol AA AA +S e 1 AA +S e 0,2 AA+ C e

U
/
L

Fig. IV.36. Valorile glutation peroxidazei n snge

50
35,42
30,24
41,62
39,11
40,14
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
m
o
l
/
g

t
i
s
s
u
e
s

Fig. IV.37. Valorile glutation peroxidazei din omogenatelede ficat

Concentraiile glutationului redus i ale dialdehidei malonice,
determinate in omogenatele de ficat sunt consemnate n fig. IV. 38 i IV. 39.

35,42
30,24
41,62
39,11
40,14
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
m
o
l
/
g

t
i
s
s
u
e
s

Fig. IV.38. Valorile glutationului redus in omogenatele de ficat

Determinarea statusului total antioxidant, ca parametru global al
evaluarii intensitatii stresului oxidativ a condus la valorile inserate n fig.
IV.40.
Din analiza comparativ a valorilor privint influentarea de ctre
acrilamid a statusului antioxidant i capacitatea eventual a seleniului de a
normaliza valorile parametrilor afectai rezult c valorile activitii
superoxid dismutazei au sczut semnificativ la lotul la care s-a administrat
acrilamida. Valoarea medie determinat este de 133,2 U/mL la lotul AA,
51
comparativ cu 205,1 uniti/ml la lotul martor. Pentru loturile la care s-a
asociat administrarea acrilamidei cu seleniu, valorile activitii SOD au
crescut uor. Astfel pentru lotul AA+Se 1 valoarea este de 185,1 U/mL, iar
pentru AA+Se 0,2 activitatea SOD este de 145,7 U/mL. Aceste date
sugereaz existena unor diferene ntre capacitatea antioxidant n funcie
de concentraia n seleniu i forma sub care acesta este administrat.
Enzimele antioxidante (SOD, GPx) reprezint suportul aprrii
organismului fa de RLO (Shigeoka et al., 1991; Tabatabaie et al., 1994;
Bandhopadhay et al., 1999).

55,42
92,14
84,36
68,81
57,83
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
n
m
o
l
/
G

t
i
s
s
u
e
s

Fig. IV.39. Valorile malondialdehidei (MDA) in omogenatele de ficat

11,48
6,31
8,6
7,12
8,02
0
2
4
6
8
10
12

m
m
o
l
/
L
0

Fig. IV.40. Valorile statusului total antioxidant din plasm

52
Scderea activitii SOD i GPx la lotul tratat cu acrilamid poate fi
datorat creterii peroxidrii lipidice sau inactivrii enzimelor prin "cross-
linking" cu malondialdehida. Consecina acestor procese este acumularea
radicalilor peroxid i hidrogen peroxid cu consecine directe asupra
peroxidrii lipidelor. Rezultatele obinute n urma acestui studiu
experimental, n concordan cu cele raportate de Yousef et al., 2006; Allam
et al., 2010; Khalil et al., 2005) evideniaz capacitatea seleniului de a inhiba
acumularea H2O2 i a altor specii reactive de oxigen (Diplocke, 1994).
Cercetrile experimentale realizate au condus la confirmarea
rolului acrilamidei n intensificarea stresului oxidativ, raportat de Yousef et
al., (2006), fig. IV. 41. Astfel, valorile GPx la lotul intoxicat cu acrilamid
au sczut de la 1993,64 U/L la lotul martor la 1770,72 U/L (fig. IV. 36).
Administrarea simultan a seleniului a contracarat n mic msur aciunea
nociv a acrilamidei. Valorile de GPx au sczut considerabil la loturile care
au fost tratate cu asocierea acrilamida - seleniu comparativ cu lotul control,
sugernd c acrilamida declaneaz scderea activitii protectoare a
antioxidanilor din celul.
Valorile GPx prezint o scadere semnificativ atunci cnd sunt
comparate cu probele AA sugernd c o cantitate semnificativ de reactani
ar consuma acest agent reductor. O cretere neateptat a fost observat
cnd au fost comparate toate probele de seleniu cu probele de control.
Aceste date ar putea sugera c seleniul are un rol antioxidant din cauza
aceasta a fost inclus n activitatea antioxidant a GPx (fig. IV. 36; IV. 37).

Fig.IV.41. Modificri n activitatea superoxid dismutazei n ficat n urma
tratamentului cu acrilamid (Yousef et al., 2005).

Analiza valorilor glutationului (Fig. IV. 38) susin experimental
dublul rol al acestuia: cel de antioxidant i de detoxifiant. Dac pentru lotul
control valoarea GSH este de 35,42 mol/g de esut hepatic, la lotul tratat cu
acrilamid valoarea a sczut la 30,24 mol/g de esut.
53
Aceast scadere a valorilor glutationului sugereaza fie intervenia
glutationului n combaterea suprancrcrii celulare cu radicali liberi ai
oxigenului, fie implicarea sa n mecanismele de metabolizare i conjugare a
acrilamidei (Ohkawa et al., 1979, Jihen et al., 2009).
Pentru loturile tratate simultan cu acrilamid i cu seleniu se
constat o cretere a valorilor glutationului redus, proportional cu doza de
seleniu administrat. Astfel, pentru lotul AA + Se1 glutationul redus are
valorea 41,62 mmol/l, mai mare chiar dect a lotului martor; aceeai
tendin de normalizare s-a constatat la lotul AA + Se 0,2 i la cel care a
primit seleniu sub forma unui supliment nutritiv, Celnium.

Fig. IV.42. Variaia valorilor GSH dup administrarea de acrilamid
(Yousef et al., 2005)

Evoluia valorilor obinute la determinarea dialdehidei malonice
(Fig. IV. 39) evideniaz n primul rnd intervenia sever a acrilamidei n
procesele de intensificare a stresului oxidativ; valorile parametrului cresc
de la 55,42 mmol/g de esut hepatic la 92,14 mmol/g de esut. Aciunea
antioxidant a seleniului se manifest prin tendina de normalizare a acestor
parametri; valorile MDA au sczut semnificativ fa de cele ale lotului
tratat cu acrilamid, dar rmn mai mari dect cele ale lotului Control.
Rezultatele obinute sunt concordante cu ale altor autori care semnaleaz
normalizarea valorilor pentru parametrii de stres oxidativ la loturile de
animale intoxicate cu diferite xenobiotice (Newairy et al., 2007; Kesiket al.,
2008; Moghadaszadeh et al., 2006; Tong et al., 1999).
Statusul total antioxidant (Fig. IV. 40) prezint o scdere semnificativ
la toate probele care conin AA, respectiv acrilamid i seleniu fa de probele
lotului Control. Aceste date sugereaz c valorea sczut a statusului total
antioxidant este o consecin a administrrii acrilamidei. Cea mai mare scdere
a statusului total antioxidant este ntlnit n probele AA, n celelalte probe
scderea a fost mai puin sever. Este surprinztor faptul c, chiar dac GSH a
nregistrat o cretere n proba AA + SE1, statusul total antioxidant a sczut.
54
Valorile parametrilor care evalueaz intensitatea stresului oxidativ
sunt n concordan cu concluziile la care au ajuns Yousef et al, (2000).
Radicalii liberi sunt produi continuu in vivo i exist un numr de enzime
protectoare cu aciune antioxidant, unele dependente de statusul seleniului
din organism, care fac fa agresiunii unor substane toxice.

IV.3.29. Evidenierea modificrilor histopatologice
Examenul histopatologic a urmrit identificarea unor modificri
morfologice consecutive administrrii de acrilamid, respectiv acrilamid
asociat cu seleniu i suplimente nutritive pe baz de seleniu, la nivelul
creierului, ficatului, rinichiului, pancreasului i splinei, considerate posibile
organe-int.
Rezultate i discuii
Rezultatele obinute la examenul histopatologic al probelor
recoltate n acest scop sunt prezentate n figurile urmtoare.
Analiza acestor imagini histopatologice evideniaz:
Lotul martor: organele int au prezentat o structur
histoarhitectonic normal, nefiind decelat nici o modificare morfologic
(figurile IV.43 - IV.46).
Lotul tratat cu acrilamid, 50 mg/kgc, examenul histopatologic a
evideniat:
Creier: moderat edem perineuronal i perivascular, reacie zonal
de proliferare glial n substana alb, rari neuroni apoptotici (figura IV.47).
Ficat: organizare lobular pstrat, focare de degenerescen
granulo-vacuolar hepatocitar (subcapsular i n jurul venei centro-
lobulare), inconstant zone cu capilare sinusoide dilatate i congestive
(figura IV.48), rare focare de piecemeal necrosis (figura IV.49), moderat
proliferare a celulelor Kupffer, limfocite prezente n spaiile porto-biliare.
Rinichi: corpusculi renali de dimensiuni inegale, majoritate avnd
dimensiuni mici; leziuni glomerulare de la proliferare mezangial moderat,
limitat la matricial, la proliferare mezangial important (matrice i celule
mezangiale) (figura IV.50), n asociere cu lobulaie schiat sau evident,
focare izolate de scleroz intracorpuscular (figura IV. 51); predominant tubi
contori normali, rari tubi contori cu degenerescen granulo-vacuolar;
congestie la nivel cortical; medular fr modificri.
Pancreas: insule Langerhans de dimensiuni foarte mari
(hipertrofiate), componenta acinar prezentnd zone de acini mici alternnd
cu zone de acini mari, dilatai, plini de secreie cu localizare adiacent
insulelor Langerhans (figura IV.52); mici focare de necroz acinar n
55
interiorul zonelor cu acini dilatai (figura IV.52), sugernd posibilitatea ca
hipertrofia acinar s precead necroza.

Fig.IV.47.Creierlot acrilamid Fig.IV.53. Creierlot acrilamid
protecie Se 1

Fig. IV.48. Ficatlot acrilamid Fig.IV.49. Ficat lot acrilamid

Fig.IV.54. Ficat lot acrilamid
protecie Se1
Fig.IV.56. Ficat lot acrilamid
protecie Se 0,2

56

Fig. IV.50. Rinichilot acrilamid Fig.IV.51. Rinichilot acrilamid

Fig.IV.55. Rinichi lot acrilamid
protecie Se1
Fig.IV.57. Rinichi lot acrilamid
protecie Se 0,2

Fig.IV.52.Pancreaslot acrilamid Fig.IV.58. Pancreas lot acrilamid
protecie Se 0,2

57
Splina: histoarhitectonic normal.
Pentru loturile tratate cu 1 mg/kgc selenit de sodiu i acrilamid, 50
mg/kgc, modificrile histopatologice la nivelul creierului, ficatului i
rinichilor sunt mai puin severe:
Creier: moderat edem perineuronal i perivascular (fig.IV. 53).
Ficat: organizare lobular pstrat, capilare sinusoide dilatate n
treimea intern a lobulilor, adiacent venelor centro-lobulare (figura IV.54),
foarte rare limfocite n spaiile porto-biliare.
Rinichi: 50% din corpusculii renali prezint ghemul glomerular fin,
fr ncrcare mezangial; 50% din corpusculii renali prezint proliferare
mezangial important (matricial) (figura IV.55).
Pancreas: histoarhitectonic normal.
Splin: histoarhitectonic normal.
Concentraiile mai mici de seleniu (0,2 mg selenit de sodiu/kgc) i
cele trei suplimente nutritive administrate n vederea evaluarii aciunii
potenial protectoare n intoxicaia cu seleniu acioneaz n sensul
normalizrii structurilor histoarhitectonice ale organelor investigate.
Creier: moderat edem perineuronal i perivascular.
Ficat: organizare lobular pstrat, infiltrat inflamator limfocitar
prezent n spaiile porto-biliare (figura IV.56).
Rinichi: n jur de 50% din corpusculii renali prezint ghemul
glomerular fin, fr ncrcare mezangial; n plus, mai puin de jumtate
din corpusculii renali prezint proliferare mezangial important (celule
mezangiale) (figura IV.57).
Pancreas: histoarhitectonic normal (figura IV.58).
Splin: histoarhitectonic normal.

IV.4. Concluzii
histopatologice la obolanii la care administrarea de acrilamid (intoxicaie
subacut) a fost asociat cu administrarea simultan de seleniu (selenit de
sodiu), respectiv un supliment nutritiv coninnd seleniu (Celnium) a
urmrit determinarea unor parametri specifici pentru:
- Testarea integritii celulare dup administrarea de acrilamid i
seleniu, pentru evidenierea modificrii permeabilitii membranei
hepatocitului,
- Controlul capacitii de sintez a ficatului prin evidenierea
perturbrii funciei proteosintetice;
- Evaluarea stresului oxidativ consecutiv intoxicaiei cu
acrilamid, respectiv dup administrarea acrilamidei n asociere cu seleniu;
58
Examenul histopatologic a urmrit identificarea unor modificri
morfologice consecutive aportului de acrilamid la nivelul creierului,
ficatului, rinichiului i pancreasului, considerate posibile organe-int i
evidenierea capacitii poteniale a seleniului de a diminua aceste modificri.
Evoluia valorilor alanil aminotransferazei, enzim cu localizare
strict citosolic, evideniaz creteri semnificative ale activitii acesteia,
sugernd permeabilizarea membranei hepatocitului i migrarea sa n spaiul
intercelular. Dinamica valorilor determinate pentru AST sugereaz c ar
avea loc migrarea AST din citoplasma hepatocitelor n spaiul intercelular
datorit creterii permeabilitii membranare. Aceast permeabilizare a
membranei hepatocitului fi datorat lezrii consecutive legrii acrilamidei
sau a unor metabolii de proteinele membranare.
Activitatea GGT nregistreaz o cretere semnificativ pentru lotul
de animale tratat cu acrilamid; aceast cretere se coreleaz cu evoluia
indicatorilor de citoliz hepatic la acest lot. Pentru loturile de animale
care au primit acrilamid n asociere cu seleniu valorile -glutamil
transpeptidazei au evoluat spre cele caracteristice lotului Control.
Rezultatele concentraiei proteinelor plasmatice pentru cele 5 loturi
de obolani luate n studiu evideniaz concentraii diminuate ale
proteinemiei la loturile intoxicate cu acrilamid n concentraie de 50
mg/kg corp. Asocierea seleniului normalizeaz evident valorile plasmatice
ale proteinelor totale n plasma sanguin.
Rezultatele obinute n urma determinrii concentraiilor plasmatice
ale bilirubinei totale confirm afectarea sever a funciei hepato-biliare n
intoxicaia cu acrilamid.
Situaia este asemntoare i n ceea ce privete bilirubina direct;
valoarea plasmatic a acestui parametru a crescut de 19 ori pentru lotul
intoxicat cu acrilamid fa de martor. i n cazul bilirubinei directe se
poate afirma, pe baza valorilor obinute, c administrarea de seleniu ar
normaliza traseul bilirubinei totale la nivel hepatobiliar.
Dinamica valorilor colesterolului total este n concordan cu datele
publicate de ali autori. Astfel, concentraiile colesterolului total sunt mai mari
dect ale lotului control dup Administrarea a 50 mg acrilamid/kgc. i pentru
loturile la care administrarea acrilamidei a fost asociat cu seleniu s-a obinut o
cretere a valorilor colesterolului, dar n msur mult mai redus. Aceeai
dinamic a fost obinut i la determinarea valorilor LDL colesterolului.
Perturbarea homeostaziei ferului (creterea concentraiilor plasmatice
la loturile intoxicate cu acrilamid i tendina de normalizare la cele la care
aceasta a fost asociat cu seleniul) se poate explica prin scderea n greutate a
59
animalului n prima etap a experimentului i prin formarea unor aduci
acrilamid-hemoglobin, respectiv glicidamid-hemoglobin.
Rezultatele obinute la determinarea sodiului i a potasiului
plasmatic reflect o uoar perturbare a homeostaziei acestor minerale, ca
urmare a afecrii funciei renale.
Determinarea parametrilor care evideniaz afectarea renal
confirm toxicitatea renal a acrilamidei; astfel, valorile plasmatice ale
ureei, creatininei i acidului uric au crescut semnificativ la lotul tratat cu
acrilamid, dar au manifestat tendin de normalizare la administrarea
simultan de seleniu.
Investigarea funciei tiroidiene prin determinarea T
3
i T
4
i
urmrirea raportului acestora a evideniat scderea dramatic a valorilor
plasmatice ale tiroxinei la animalele tratate cu acrilamid, comparativ cu
lotul martor. Scderea este mult mai redus la asocierea seleniului n
concentraie mai crescut. Faptul c administrarea de seleniu a perturbat
raportul T3/T4 sugereaz intervenia seleniului n metabolismul tiroidian.
Concentraiile plasmatice ale glucozei au crescut la toate loturile
comparativ cu martorul; s-a constatat i o uoar creterea valorilor glucozei la
loturile la care acrilamida a fost asociat cu seleniul. Se poate presupune
intervenia acrilamidei n metabolismul glucidic care conduce la creterea
valorilor glicemiei. Aceast perturbare a metabolismului glucidic s-ar
suprapune peste intensificarea gluconeogenezei provocat de administrarea de
seleniu.
acrilamid administrate la sobolani i eventualul potential protector al
seleniului a fost investigat prin determinarea (n snge total, plasm sau
omogenate de ficat) parametrilor de stres oxidativ: superoxid dismutaza
(SOD), glutathion peroxidaza (GPx), glutationul redus (GSH),
malondialdehida (MDA) i statusul total antioxidant (TAS). Din analiza
comparativ a valorilor privind influenarea de ctre acrilamid a statusului
antioxidant i capacitatea eventual a seleniului de a normaliza valorile
parametrilor afectai rezult c valorile activitii superoxid dismutazei au
sczut semnificativ la lotul la care s-a administrat acrilamida i existena unor
diferene ntre capacitatea antioxidant n funcie de concentraia n seleniu i
forma sub care acesta este administrat. Scderea activitii SOD i GPx la
lotul tratat cu acrilamid poate fi datorat creterii peroxidrii lipidice sau
inactivrii enzimelor prin "cross-linking" cu malondialdehida. Analiza
valorilor glutationului susine experimental dublul rol al acestuia: cel de
antioxidant i de detoxifiant. Scderea valorilor glutationului sugereaza fie
intervenia glutationului n combaterea suprancrcrii celulare cu radicali
60
liberi ai oxigenului, fie implicarea sa n mecanismele de metabolizare i
conjugare a acrilamidei.
Pentru loturile tratate simultan cu acrilamid i cu seleniu se
constat o cretere a valorilor glutationului redus, proportional cu doza de
seleniu administrat.
Statusul total antioxidant prezint o scdere semnificativ la toate
probele care conin AA, respectiv acrilamid i seleniu fa de probele
lotului Control. Valorile parametrilor care evalueaz intensitatea stresului
oxidativ sunt n concordan numeroase date din literatura de specialitate;
radicalii liberi sunt produi continuu in vivo i exist un numr de enzime
protectoare, unele dependente de statusul seleniului din organism, cu
aciune antioxidant, care fac fa agresiunii unor substane toxice.
Evaluarea histopatologic a fragmentelor de creier provenite de la
animalele lotului de Control prezint o structur histoarhitectonic normal.
Pentru lotul tratat cu acrilamid n concentraie de 50 mg/kg corp, analiza
histopatologic a evideniat prezena unor edeme perineuronale i
perivasculare moderate, reacie zonal de proliferare glial n substana
alb, precum i rari neuroni apoptotici.
Examenul histopatologic al ficatului pentru lotul Control a relevat o
histoarhitectonic normal. Imaginile obinute n urma evalurii
histopatologice la animale din lotul AA reliefeaz focare de degenerescent
granulo-vacuolar hepatocitar (subcapsular i n jurul venei centro-
lobulare), inconstant zone cu capilare sinusoide dilatate i congestive rare
focare de piecemeal necrosis (fig. moderat proliferare a celulelor Kupffer.
Asocierea AA + Ce, Se 1mg/kgc i Se 0,2 mg/kgc protejeaz ficatul,
stimulnd aprarea fapt susinut de exacerbarea infiltratului inflamator
limfocitar prezent n spaiile porto-biliare; cel mai bine a protejat SE1,
numrul de limfocite prezente fiind foarte mic.
Spre deosebire de lotul de referin, unde analiza histopatologic a
fragmentelor de rinichi nu au evideniat nici o modificare morfologic
imaginile obinute pentru lotul intoxicat cu acrilamid au prezentat corpusculi
renali de dimensiuni inegale, majoritatea avnd dimensiuni mici. De asemenea,
s-au putut observa leziuni glomerulare de la proliferare mezangial moderat,
la proliferare mezangial important (matrice i celule mezangiale).
Asocierea AA + Ce, Se 1mg/kgc i Se 0,2 mg/kgc protejeaz rinichiul,
la nivelul cruia leziunile identificate mai sunt reduse fa de cele prezente la
lotul tratat exclusiv cu AA: exist o populaie important de corpusculi renali
(aproximativ 50%) cu aspect normal, iar afectarea mezangial alterneaz ntre
proliferare matricial, respectiv matricial i celular.

61

CONCLUZII GENERALE

Finalizarea cercetrilor pentru realizarea tezei de doctorat au
condus la urmtoarele concluzii generale:

Stabilirea protocolului de lucru pentru metoda de determinare
spectrofotometric a seleniului din probe de produse alimentare i
suplimente nutritive (lungimea de und, stabilitatea culorii, volumele
optime de reactivi etc) a stat la baza validrii acesteia. Parametrii de
validare studiai (liniaritate, repetabilitate, exactitate, limit de detecie,
limit de cuantificare, etc) s-au nscris n limitele acceptate pentru aplicarea
acestui tip de metode. Reproductibilitatea metodei a variat ntre 84, 43 i
97,06% la determinarea pe probe de pine integral i ntre 81,14 i 96,52
la determinarea realizat pe probe de usturoi. Aceste valori se ncadreaz n
cerinele impuse pentru validarea metodelor spectrofotometrice.

Metoda validat a fost aplicat pentru determinarea seleniului din
probe de produse alimentare. Separarea seleniului din probe s-a realizat
prin mineralizare umed nitro-sulfuric. Rezultatele obinute, exprimate n
g Se/100g de produs alimentar sut n concordan cu valorile raportate de
ali autori pentru acelai tip de produse.

Aceeai metod spectrofotometric a fost aplicat pentru
determinarea seleniului din suplimente nutritive cu seleniu, comercializate
n Romania. Abaterea procentual calculat variaz ntre (- 7,20%) i
(+7,06%) i se ncadreaz n reglementrile n vigoare (Standarde de
referin USP).

Cercetarea capacitii de cedare a seleniului din suplimentele
nutritive luate n studiu scoate n eviden faptul c n unele situaii forma
farmaceutic cedeaz, in vitro, mai puin de 50% din cantitatea de seleniu
declarat. Dou dintre probe au cedat seleniul dup numai 10 sau 20 de
minute de experiment. n schimb, alte 4 probe au prezentat o capacitate de
cedare a seleniului de 70%, 73%, 37,5 i, respectiv 46,2%. Aceste rezultate
sugereaz c nu toate suplimentele alimentare condiionate sub form de
comprimate sau capsule respect condiiile impuse privind capacitatea de
dizolvare in vitro.

62
Studierea potenialului protector al seleniului (administrat sub form
de selenit de sodiu) i a unor suplimente alimentare cu seleniu asupra
obolanilor Wistar n intoxicaia experimental, pe cale oral, cu doze
crescute de acrilamid realizat prin evaluarea modificrilor biochimice,
hematologice i histopatologice la obolani cu intoxicaie subacut cu
acrilamid (50mg/kgc/zi), respectiv prin evaluarea modificrilor biochimice,
hematologice i histopatologice la obolanii la care administrarea de
acrilamid (intoxicaie subacut) a fost asociat cu administrarea simultan
de seleniu (selenit de sodiu), respectiv un supliment nutritiv coninnd
seleniu (Celnium) a evideniat intervenia benefic a seleniului prin tendina
de normalizare a u unor parametri biochimici.

acrilamid administrate la sobolani i eventualul potential protector al
seleniului a fost evaluat n cadrul unui experiment n care s-a lucrat pe
obolani albi Wistar. Ca parametri pentru cercetarea prezenei perturbrilor
biochimice provocate de intoxicaia cu acrilamid i evidenierea rolului
seleniului ca antioxidant n normalizarea valorilor acestor parametri s-au
determinat: superoxid dismutaza (SOD), malondialdehida (MDA),
glutationul redus (GSH), glutathion peroxidaza (GPx) i statusul total
antioxidant (TAS).

Administrarea acrilamidei (AA grup) a fost asociat cu o cretere
semnificativ statistic a nivelurilor MDA n omogenatele din ficat
comparate cu probele control. Mai mult, comparat cu probele control,
acrilamida a cauzat descreterea glutation peroxidazei din ficatul omogenat
i a statusului total antioxidant din snge i, respectiv, plasm. Co
administrarea selenitului de sodium i a Celnium-lui cu acrilamid a fost
asociat cu creteri semnificative ale parametrilor de stress oxidativ n
ficatul omogenat prin comparaie cu probele de acrilamid. Nivelul de
MDA din ficatul omogenat a crescut puin n probele care au primit
acrilamid, selenit de sodiu i Celnium, ca ageni hepatoprotectori.
Nivelurile de GPx au sczut considerabil cnd au fost comparate cu
probele care au primit acrilamid i probele de control, sugernd c
acrilamida declaneaz scderea activitii protectoare a antioxidanilor din
celul. Cea mai mare degradre a fost observat n lotul AA care conin
numai acrilamid sau cu o doz diferit de selenium.
Statusul total antioxidant prezint o scdere semnificativ la lotul
AA n comparaie cu Lotul Control. Aceste date sugereaz c activitatea
sczut a antioxidanilor totali este o consecin a administrrii acrilamidei.
63
Este surprinztor faptul c, dei GSH a nregistrat o cretere n proba AA +
SE1, capacitatea antioxidant (TAS) a sczut. Concentraiile MDA din
probele AA au sunt semnificativ mai mari dect probele control. n probele
ce conin diferite concentraii de selenium, valorile MDA evideniaz
refacerea parial a activitii antioxidante a esutului hepatic al animalului.

BIBLIOGRAFIE SELECTIV

Allam A. A, El-Ghareeb A. W, Abdul-Hamid M., Bakery A. E, Gad
M., Sabri M., Arch Toxicol. 2010; 84(2):129-41.
Arthur J. R., Nicol F., Becket GT. Selenium deficiency, thyroid
hormone metabolism and thyroid hormone deiodinases. Am.J.
Clin. Nutr., 1993; 57: 5236-5239.
Barclay M.N.I., MacPherson A., Dixon J., Selenium content of a
range of UK foods. Journal of Food Composition and Analysis,
1995; 8(4): 307-318.
Brown K. M., Arthur J. R. Selenium, selenoproteins and human
health: a review, Public Health Nutr. 2001 Apr; 4(2B):593-9.
Canter P. H., Wider B., Ernst E., The antioxidant vitamins A, C,E
and selenium in the treatment of arthritis: a systematic review
of randomized clinical trials, Rheumatology, 2007; 46(8):
1223-1323.
Cuciureanu R., Elemente de Igiena alimentaiei, Ed. Gr. T. Popa,
Iai, 2005;
Diplocke A. T. Antioxidant and free radical scavengers. In: Catherine
Rice-Evans and R H Burdon, "Free Radical Damage and its
Control", 1994; (4) 113-130. Elsevier, New York.
Environmental Health Criteria 58, Selenium, Geneva: World Health
Organisation, 1987. Eurola M, Hietaniemi V (ed.) Report of the
Selenium Monitoring Programme 1997-1999. Publications of
Agricultural Research centre of Finland, series B24, 2000
Jokoinen, Finland: Agricultural Research Centre of Finland.
Ferretti R. J., Levander O.A., Effect of Milling and Processing on the
selenium content of grains and cereal products, J. Agric. Food
Chem, 1974; 22(6), 1049-1051.
64
Foster H. D. Selenium and Health: Insights from the People's
Republic of China. Journal of Orthomolecular Medicine, 1989;
4(3): 123-135.
Grtner R., Gasnier B. C. H., Dietrich J. W. Selenium
Supplementation in Patients with Autoimmune Thyroiditis
Decreases Thyroid Peroxidase Antibodies Concentrations. The
Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 2002;
87(4):16871691.
Ge K., Yang, G. The epidemiology of selenium deficiency in the
etiological study of endemic diseases in China. Am. J. Clin.
Nutr., 1993; Supplement 57: 259S-263S.
Hussein L., Bruggemann J. Selenium analysis of selected Egyptian
foods and estimated daily intakes among a population group.
Food Chemistry 65, 1999; 527 532.
Hussein M. M., Yousif A. A., Saeed A. M. Serum Levels of
Selenium, Zinc, Copper and Magnesium in Asthmatic Patients:
a Case Control Study, Sudan Journal of Medical Science,
2008; 3 (1): 45-49.
Khalil1 F. A., Abd El Aziem B. H. Effect of Dietary acrylamide
formed in otato crisps and toasted bread on rats, Egyptian
Journal of Natural Toxins, 2005; Vol. 2, 57-70.
Koishi R. Production of functional human selenocysteine-containing
KDRF/ thioredoxin reductase in E-coli. Journal of
Biochemistry, 2000; 127(6): 977-983.
Lctuu R., Ghelase I. Seleniul n solurile zonelor hematurigene din
Carpaii Orientali, Bul. Inf. ASAS, 1992; 22, 35-50.
Lctuu R., Tripdu I., Lungu M., Crstea S., Kovacsovics B.,
Crciun I., Selenium abundance in some soils of Dobrogea
(Romania) and ovine myodistrophy incidence, Trans. of
Macro- and Trace Elem. Symp., Jena, Germqany, 2002; 114-
119.
Lctuu R., Lungu M., Aldea M., Lctuu A-R, Stroe V.M., Lazr
D., et al., Selenium in the rock soil system from south/eastern
part of Romania present environment and sustainable
development, , 2010 (4): 145-157.
65
Lobanov A. V., Hatfield D. L., Gladyshev V. N. Reduced reliance on
the trace element selenium during evolution of mammals,
Genome Biol. 2008; 9(3):R62.
McCoy K. E. M., Weswig P. H. Some selenium responses in the rat
not related to vitamin E. Journal of Nutrition, 1969; 98: 383-
389.
Meuillet E., Stratton S., Cherukuri D. P. Chemoprevention of
prostate cancer with selenium: An update on current clinical
trials and preclinical findings. Journal of Cellular
Biochemistry, 2004; 91(3): 443458.
Mzes M., Balogh K., Prooxidant mechanism of selenium toxicity- a
review, Acta Biologica Szegediensis, 2009; 53 (1): 15-18.
Moghadaszadeh B., Beggs AH. Selenoproteins and their impact on
human health through diverse physiological pathways.
Physiology, 2006; 21: 307-15
Mottram D. S., Wedzicha B. L., Dodson A. T. Acrylamide is formed
in the Maillard reaction, Nature, 2002; 419: 448-449.
National Research Council (U.S), Subcommittee on Selenium,
Selenium in Nutrition, Washington D.C.: National Academy
Press, 1983.
Negro R. Selenium and thyroid autoimmunity. Biologics: Targets &
Therapy, 2008; 2(2): 265-273.
Newairy A. A., El-Sharaky A. S., Badreldeen M. M., Eweda S. M.,
Sheweita S. A. The hepatoprotective effects of selenium
against cadmium toxicity in rats. Toxicology 2007; 242: 23-30.
Odland I., Romert L., Clemedson C., Walum E. Glutathione content,
glutathione transferase activity and lipid peroxidation in
acrylamide-treated neuroblastoma NIE 115 cells. Toxicol. In
Vitro, 1994; 8, 263-267.
Oldfield J. E. A brief history of selenium research: From alkali
disease to prostate cancer (from poison to prevention).
Reilly C., Selenium in food and Health, Blackie Academic and
Professionals, Londra, 1996.
Reilly C. The Nutritional Trace Metals. Oxford, Blackwell
Publishers, 2004.
66
Revanasiddappa H. D. Kumar T. N. A facile spectrophotometric
method for the determination of selenium, Anal. Sci., 2001; 17
(11):1309-12.
Salonen J., Alfthan G., Huttunen J. Association between serum
selenium and the risk of cancer. Am. J. Epidemiol.1982; 120:
342-349.
Shigeoka S., Takeda T., Hanaoka T. Characterization and
immunological properties of selenium-containing glutathione
peroxidase induced by selenite in Chlamydomonas reinhardtii,
Biochem. J., 1991; 275: 623627.
Shiobara Y., Yoshida T., Suzuki K. T. Effects of dietary selenium
species on Se concentrations in hair, blood, and urine., Toxicol
Appl Pharmacol., 1998; 152(2): 309-314.
Sunde R. A. Molecular biology of selenoproteins. Annu Rev. Nutr.,
1990; 10: 451-474.
Swedish National Food Agency, Press release, (2002),
http://www.slv.se/engdefault.asp;
Tabatabaie T., Floyd R. A. Susceptibility of glutathione peroxidase
and glutathione reductase to oxidative damage and the
protective effect of spin trapping agents, Biochemistry and
Biophysics, 1994; 314: 112-119.
Tarp U., Overvad K., Thorling E.B. Selenium treatment in
rheumatoid arthritis. Scand J Rheumatology, 1985; 14: 364
368.
Thomas C. D. Assessment of requirements for selenium and
adequacy of selenium status, A review, Eur J Clin Nutr, 2004;
58, 391-402.
Thompson C. D., Chisholm A., McLachlan S. K., Campbell J. M.,
Brazil nuts: an effective way to improve selenium status. Am.
J. Clin. Nutr., 2008; 87: 379-384.
Virtamo J. E., Valkeila G., Alfthan S., Punsar J. K., Huttunen,
Karvonen M. J. Serum selenium and the risk of coronary heart
disease and stroke. Am. J. Epidemiol., 1985; 122: 276-282.
World Health Organization and Food and Agriculture Organization
of the United Nations, Vitamin and mineral requirement in
human nutrition, 2nd ed., 2004.
67
World Health Organization. Acrylamide in Food (Update), Weekly
Epidemiological Record, 2002; 77(30): 253-254.
Yousef M. I., El-Demerdash F. M. Acrylamide-induced oxidative
stress and biochemical perturbations in rats. Toxicology, 2006;
219(1-3):133-141.
Yousef M. I., El-Demerdash F. M. Acrylamide-induced oxidative
stress and biochemical perturbations in rats. Toxicology, 2005;
219 (1-3): 231-239.
Zhong L., Holmgren A. Essential Role of Selenium in the Catalytic
Activities of Mammalian Thioredoxin Reductase Revealed by
Characterization of Recombinant Enzymes with Selenocysteine
Mutations. Journal of Biological Chemistry, 2000; 275(24):
18121-18128.

ARTICOLE PUBLICATE DIN TEZA DE DOCTORAT

1. Vlad-Ioan Teodor, Magdalena Cuciureanu, Cristiana
Filip, Nina Zamosteanu, Rodica Cuciureanu - Protective effects of
selenium N-acrylamide toxicity in rats liver. Effects on the oxidative
stress, Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat. Iai 2011;115(2): 612-618;
2. Vlad-Ioan Teodor, Magdalena Cuciureanu, Bogdan
lencu, Nina Zamosteanu, Rodica Cuciureanu - Potential protective
role of selenium in acrylamide intoxication. A biochemical study,
Studia Universitatis Vasile Goldi, Seria iinele Vieii 2011; 21
(2): 163-168.
3. Vlad-Ioan Teodor, Irina Vrlan, Nina Zamosteanu, D.
Chelrescu, Magdalena Cuciureanu, Rodica Cuciureanu
-
Potential
protective role of selenium dietary supplements in experimental
acrylamide intoxication, European Journal of Drug Metabolism and
Pharmacokinetics (14th Pan-Hellenic Pharmaceutical Congress, 9-11
May, 2009), in extenso n CD-ul Congresului.

Teza Seleniu

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Teza Seleniu

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE

GRIGORE T. POPA IAI

S-ar putea să vă placă și