1

ANTIBIOGRAMA

Prin antibiogram se testeaz sensibilitatea unei tulpini bacteriene izolate dintr-un produs
patologic fa de diferite chimioterapice sau fa de concentraii diferite ale unui
chimioterapic. Se evideniaz efectul bacteriostatic: inhibarea dezvoltrii bacteriei de ctre
chimioterapice. n anumite concentraii chimioterapicele au i un efect bactericid.
Antibiograma se efectueaz dup izolarea n cultur pur i identificarea agentului etiologic.
Tehnici: antibiograma prin metoda difuzimetric, antibiograma prin metoda diluiilor n medii
lichide, metoda cu antibiotic ncorporat n mediu semisolid (galerii ATB), E-test (Testul E).

1) Antibiograma prin metoda difuzimetric - se poate efectua pe mediul Mueller
Hinton; pentru bacterii cu necesiti de cultur speciale se utilizeaz medii corespunztoare (de
exemplu: geloz snge sau geloz ocolatie). nsmnarea pe mediu se poate efectua astfel: 1-
nsmnarea n pnz cu pipeta cu care se rspndete uniform cultura bacterian lichid
diluat 1/100-1/1 000 pe suprafaa mediului de cultur, iar excesul se aspir i se introduce n
dezinfectant; 2 - nsmnarea cu tamponul mbibat n cultura bacterian lichid cu care se
nsmneaz toat suprafaa mediului. Cultura lichid are o anumit densitate bacterian
exprimat n McFarland (de ex. 0,5 McFarland) i msurat cu un aparat numit Densimat.


Pe suprafaa mediului de cultur nsmnat i uscat la temperatura camerei, se dispun la
anumite distane microcomprimate standard cu anumite concentraii de chimioterapice
(g/ml).
Interpretarea antibiogramei difuzimetrice: se face dup o incubare de 18-24 ore la 37
o
C.
n jurul microcomprimatelor se realizeaz un gradient de concentraie prin difuziunea local a
chimioterapicelor care pot inhiba dezvoltarea bacteriei ntr-o zon numit zon de inhibiie.
Diametrul zonei de inhibiie se msoar cu rigla i se exprim n mm, iar valorile obinute se
compar cu valori standard din tabelele interpretative de laborator, apreciindu-se bacteria ca
fiind sensibil (S) sau intermediar sensibil (IS) sau rezistent (R) fa de chimioterapicele
testate.
2
1. Pseudomonas aeruginosa 2. Serratia marcescens


3. Escherichia coli 4. Escherichia coli cu beta-lactamaz cu spectru
extins (BLSE): sinergism ntre Amoxicilin-Acid
clavulanic (AMC) i Cefotaxim (CTX)


5. Klebsiella pneumoniae 6. Klebsiella pneumoniae cu beta-lactamaz cu spectru
extins (BLSE): sinergism ntre Amoxicilin-Acid clavulanic
(AMC) i Cefotaxim (CTX)


3
7. Staphylococcus aureus 8. Salmonella enterica serovar. typhimurium
- Antagonism ntre Clindamicin (DA)-Eritromicin (E)


9. Proteus mirabilis 10. Haemophilus influenzae


11.Antibiograma pe mediul Mueller Hinton cu snge - incubat n anaerobioz (Bacteroides fragilis)

4

2) Metoda diluiilor n medii lichide
-se efectueaza diluii crescnde de chimioterapic n 2 ml bulion glucozat steril;
- se adaug o pictur din cultura bacterian (o cultur de 24 ore obinut n bulion glucozat)
n fiecare eprubet;
- ultima eprubet este eprubeta martor i nu conine chimioterapic;
-se pot utiliza 10 sau 11 concentraii diferite din fiecare chimioterapic;
-pentru fiecare chimioterapic exist diluii de pornire;
- eprubetele se incubeaz timp de 18-20 ore la 37
0
C.
Interpretarea antibiogramei: ultima eprubet n care nu se constat cu ochiul liber o
multiplicare bacterian (mediul este limpede) indic CMI (Concentraia Minim Inhibitorie).
-Prin adugarea unui indicator de pH (de ex.: rou fenol) n bulionul glucozat, se poate reduce
timpul de citire al antibiogramei, deoarece modificarea culorii mediului prin multiplicarea
bacteriei apare mai repede dect tulburarea mediului.

3) Metoda cu antibiotic ncorporat n mediu semisolid - este o micrometod prin
diluie simplificat (se utilizeaz galerii ATB).
-Se lucreaz cu dou concentraii diferite de chimioterapic: o concentraie mai mic (c) i o
concentraie mai mare (C) de chimioterapice introduse n dou iruri de godeuri dintr-o plac
de plastic, de unic utilizare (sunt 16 perechi de godeuri, din care 4 godeuri nu conin
chimioterapic i reprezint martorii).
-Se adaug n fiecare godeu un inocul din cultura bacterian lichid de o anumit densitate (de
ex.: 0,5 McFarland).
-Se incubeaz 18-24 ore la 37
0
C i apoi se interpreteaz antibiograma: - mediu limpede la
ambele concentraii de chimioterapice (la c i C): bacterie sensibil (S); mediu tulbure n
ambele godeuri (la c i C): bacterie rezistent (R); mediu tulbure la concentraia mai mic (c)
i limpede la concentraie mai mare (C): bacterie intermediar sensibil (I).

Exemple:
Klebsiella pneumoniae (ATB G-5):
- bacteria este sensibil fa de Imipenem (IMI), Ciprofloxacin (CIP) - n ambele godeuri (la c i C) mediul
este limpede (multiplicarea bacteriei este inhibat);
- bacteria este rezistent fa de Amoxicilin-Acid clavulanic (AMC), Cefotaxim (CTX) - n ambele godeuri (la
c i C) mediul este tulbure deoarece bacteria s-a multiplicat.








5

Pseudomonas aeruginosa (ATB PSE):
- bacteria este intermediar sensibil fa de Aztreonam (ATM) deoarece se multiplic la concentraia mai mic
(c) de chimioterapic (culoare verde-albastr prin multiplicarea bacteriei) i nu se dezvolt la concentraia mai
mare (C) (mediu limpede).





E-test (Testul E)

E-test (sau Testul E) este o metod n care se utilizeaz langhete (bandelete) subiri, de
plastic inert, neporoase, (5 mm lime i 50 mm lungime) impregnate cu un gradient
exponenial de chimioterapic; la un capt al langhetei este precizat tipul de chimioterapic
printr-un simbol (de ex.: E pentru Eritromicin, TX pentru Cefotaxim); langheta prezint o
scal gradat util pentru determinarea concentraiei minime inhibitorii (CMI); diluiile de
chimioterapic cu care se lucreaz (15 diluii) pot s varieze, de exemplu ntre 0,016 i 256
g/ml sau ntre 0,002 i 32 g/ml (cifra 0 a unitilor nu este trecut pe langhet, astfel
prezena unui punct urmat de alte cifre se citete astfel: .016=0,016, .75=0,75, .094=0,094).
Gradientul de concentraie este obinut n jurul langhetei prin difuziunea chimioterapicului n
mediu.
E-test pentru Streptococcus pneumoniae testat fa de Cefotaxim (TX)

6
Dup incubare la termostat, timp de 16-18-24-48 ore (n funcie de microorganismul testat), se
determin valoarea CMI direct pe langhet - acolo unde zona de inhibiie o intersecteaz
(zona de inhibiie este o zon cu aspect de elips, fr cultur bacterian, care poate s apar
n jurul langhetei). Aprecierea bacteriei ca fiind Sensibil (S) sau Intermediar sensibil (I) sau
Rezistent (R) se face cu ajutorul unor tabele de interpretare ce nsoesc testul.