Sunteți pe pagina 1din 15

133

CAPITOLUL 9

Separarea cromatografic aspecte generale

9.1. Clasificarea metodelor cromatografice

nceputurile separrilor cromatografice se datoreaz lui vet (1903), care a
realizat primele separri de colorani vegetali pe coloan umplut cu carbonat de calciu.
Termenul de eluie cromatografic a fost introdus mai trziu, de ctre Reichstein i van
Euw (1938), care s descrie principial procesul cromatografic de separare a
componenilor probei la trecerea printr-o faz staionar. Tot n acelai an, Izmailov i
Shraiber i-au publicat rezultatele privind primele separri cromatografice pe strat subire.
Separarea cromatografic are la baz interacia difereniat a componenilor unei
probe fa de dou faze, numite: faza staionar i faza mobil (aflat n micare fa de
faza staionar). Procesul se petrece ntr-o coloan cromatografic, sau pe suprafaa
plan a unei plci pe care este depus faza staionar. Analiza cromatografic este un
proces cuplat ntre separarea cromatografic i determinarea (detecia) compuilor
separai (proces care se bazeaz pe msurarea unei proprieti fizice).
Din aceast prezentare, rezult c separrile cromatografice pot fi clasificate fie
din punct de vedere al naturii celor dou faze (staionar i mobil), fie din punct de
vedere al mecanismului de separare, sau fie din punctul de vedere constructiv al
ansamblului de faze.
Din punct de vedere al naturii celor dou faze distingem urmtoarele clase de
separri cromatografice:
- cromatografie de gaze (GC) n care faza mobil este un gaz inert; n funcie de natura
fazei staionare se disting urmtoarele tehnici gaz-cromatografice:
a) separarea gaz-lichid n care faza mobil este un gaz inert, iar faza staionar
este un lichid, depus pe un suport inert, sau pe peretele unei coloane
cromatografice;
b) separare gaz-solid (SGC), n care faza mobil este un gaz inert, iar faza
staionar este un solid;
- separare prin cromatografia de lichide (LC), n care faza mobil este un lichid, iar faza
staionar este de regul un solid;
- cromatografie n fluide supercritice (SFC), n care faza mobil este un fluid supercritic.
Mecanismul care st la baza de separrii cromatografice se poate baza pe: 1)
adsorbie; 2) repartiie; 3) schimb ionic; 4) excluziune steric, etc. Adeseori, procesele
cromatografice pot decurge printr-o combinaie a acestor mecanisme.
In funcie de mecanismul de separare cromatografia de lichide (n care
polaritatea i hidrofobicitatea analiilor, a fazei staionare i a fazei mobile joac un rol
determinant) se mparte n trei variante:
i) cromatografia de lichide n faza normal (denumit aa mai degrab din punctul de
vedere istoric), n care faza staionar este polar, iar faza mobil este nepolar;
ii) cromatografia de lichide n faza invers, n care faza staionar este nepolar i
hidrofob, iar faza mobil este polar.
iii) cromatografie de lichide prin mecanism de schimb ionic, n care faza staionar

134
este un schimbtor de ioni, iar faza mobil este apoas cu pH controlat.
Din punct de vedere constructiv se disting: cromatografia pe coloan i
cromatografia planar (pe hrtie sau pe strat subire). In prezent, cromatografia pe
coloan, n una din clasele menionate anterior reprezint una dintre cele mai importante
tehnici de investigare a probelor multicomponent n chimia analitic. Dup cum spune i
denumirea, rolul central n separarea cromatografic l are coloana cromatografic, n
care se gsete faza staionar.


9.2. Parametrii unei separri cromatografice

Cromatograma reprezint dependena n timp a proprietii msurate de
detectorul sistemul cromatografic. Intr-o cromatogram ntlnim picuri cromatografice i o
linie de baz (constant sau variabil). O separare cromatografic a unui amestec de n
componeni trebuie s conduc la o cromatogram cu n picuri cromatografice. De
exemplu, n figura 9.1 este redat cromatograma HPLC a unei probe coninnd 14
hidrocarburi aromatice polinucleare n acetonitril. Dup cum se poate observa, numrul
de picuri cromatografice este egal cu 14; dintre acestea doar picurile 10 i 11 nu sunt
perfect separate n linia de baz.



















Fig. 9.1. Cromatograma unui amestec de 14 compui.
(amestec de 14 hidrocarburi aromatice polinucleare separate prin HPLC
n faz invers i detecie prin spectrometrie de absorbie molecular UV).


Semnalul cromatografic este numit pic cromatografic, a crui form red de fapt o
imagine a echilibrelor de distribuie ale moleculelor de analit ntre faza mobil i faza
staionar, care se petrec n coloana cromatografic. Parametrii matematici ai unui pic
cromatografic ideal (picul 5 din Fig. 9.1, apropiat de forma Gauss) sunt dai n figura de
mai jos, care la rndul lor sunt utilizai la determinarea aa-numiilor parametri
cromatografici ai unei separri.
[85]

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
14
13
12
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
A
b
s
o
r
b
a
n
t
a

(
m
A
U
)
Timp (min)

135
7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
min
S
e
m
n
a
l
t
R

Linia de baz
w
Punct de inflexiune

w
1/2

Y
0

Y
0
/2
w
10%

Y
0
/10
























Fig. 9.2. Parametrii unui pic cromatografic ideal (de form Gauss).


Forma ideal a picului cromatografic este descris de ecuaia de tip Gauss, n
forma urmtoare:

2 ln
w
) t t ( 4
0
2 / 1
2
R
e Y Y

= (9.1)

, n care Y
o
este nlimea maxim a picului cromatografic, msurat la valoarea timpului,
numit timp de retenie (t
R
), w
1/2
este semi-limea picului (limea picului msurat la
jumtatea nlimii); ln 2 = 0,693.
Forma unui picul cromatografic simetric, dar mai larg n baz poate fi descris la
fel de bine i de funcia Cauchy:

2
2 / 1
R
0
]
w
) t t ( 2
[ 1
Y
Y

+
= (9.2)

unde, de asemenea: Y
0
este nlimea picului pentru t = t
R
, iar w
1/2
este limea picului la
jumtatea nlimii (semi-lime).
[87]
Forma celor dou funcii nu difer foarte mult, aa
dup cum se poate observa din regresiile respective aplicate unui pic real n figura
urmtoare, prelucrat din cele redate n Fig 9.1.


136
4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 4.8 4.9 5.0 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
S
e
m
n
a
l
Timp de retentie (min)
4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 4.8 4.9 5.0 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
S
e
m
n
a
l
Timp de retentie (min)
Gauss
Cauchy
















Fig. 9.3. Modelarea unui pic cromatografic real (punctat gros) prin
funcia Gauss, respectiv prin funcia Cauchy (linie continu).


Pentru un pic simetric de tip Gauss, limea acestuia msurat ntre punctele de
inflexiune este 2. Cum punctele de inflexiune sunt mai dificil de evideniat, se prefer a
se msura limea picului la jumtatea nlimii acestuia, notat mai sus cu w
1/2
. Intre w
1/2

i exista relaia simpl:

w1/2 = 2,35 (9.3)

Aria picului (A) care este o mrime cantitativ, ce depinde de cantitatea de analit
injectat n coloana cromatografic, se obine din integrarea funciei Gauss:
[88]



2 ln

w Y
2
1
A
2 / 1 0
= (9.4)

sau a funciei Cauchy:


2 / 1 0
w Y
2

A = (9.5)

In practic, integrarea picurilor se face n mod automat cu ajutorul soft-ul sistemului de
achiziie i prelucrare a datelor cu care este dotat sistemul cromatografic. Analistul
trebuie s precizeze aria minim de pic care poate fi msurat. Sub aceast limit
picurile cromatografice din cromatograma nregistrat nu vor fi raportate de ctre soft-ul
sistemului de achiziie i prelucrare a datelor. Integrarea se poate face i manual de ctre
analist. Problema alegerii liniei de baz (baseline), fa de care se va face integrarea,
este dificil atunci cnd picurile cromatografice se apropie ca mrime de semnalele din
linia de baz (analitul se gsete n proba injectat la limita de detecie a detectorului
cromatografic). In acest caz, analistul trebuie ntr-o bun aproximaie vizual s
stabileasc media semnalului de baz fa de care vor alege punctele X i Y n care se

137
Semnal
tR (min)
X Y
Linie de baz greit
Linia medie
de baz
Pic
cromatografic
de integrat
va integra picul cromatografic. Aceast situaie este ilustrat n figura de mai jos, cu
alegerea greit i corect a punctelor de integrare.























Fig. 9.4. Fereastra unei poriuni dintr-o cromatogram n care picul cromatografic
este corect integrat prin alegerea punctelor X i Y n linia media a semnalului de baz
(ales neconstant cu drift).


In general, ntre aria picului (A
pic
) i cantitatea de analit injectat n coloan
(
injectat
analit
Q , exprimat n g, sau n ng, sau n pg, etc) exist o relaie de linearitate n
conformitate cu funcia de rspuns 1.3 i a discuiei asupra domeniului de linearitate din
cap. 1.2:


injectat
analit
pic
Q b a A + = (9.6)

Mrimea Q poate fi substituit i prin concentraia probei injectate, cu condiia ca n
procedura de calibrare i cea de analiz, volumele de soluii standard, respectiv de prob
analizat, s fie identice.
Factorul de rspuns (F
i
) al unui detector fa de un anumit analit i detectat la
ieirea din coloana cromatografic este dat de raportul dintre aria picului corespunztor
analitului i i cantitatea de analit (uniti de mas) injectat n coloan:


injectat
i , analit
i , pic
i
Q
A
F = (9.7)


138
Atunci cnd picul cromatografic crete ca arie, poriunea de arie rezultat prin
integrarea mai puin corect, ilustrat n figura de mai sus, devine nesemnificativ n
raport cu aria acestuia, astfel c n practic nu se mai mrete imaginea semnalului de
fond pentru a gsi punctele corecte de integrare.
De foarte multe ori, forma picurilor este asimetric. In acest caz, alegerea unei
funcii utile n descrierea formei picului cromatografic este mai dificil. De regul,
asimetria se datoreaz unei aa-zise cozi (tailing) a picului cromatografic, care poate fi
n faa picului (pre-tailing) sau n spatele picului (post-tailing).
[89]

Simetria unui pic cromatografic (notat cu Sim) poate fi exprimat n mai multe
moduri. Dac aceasta se msoar n punctele de inflexiune a curbei picului redat n Fig.
9.2, Sim devine:

'
Sim = (9.8)

Simetria poate fi msurat mai exact la jumtatea nlimii picului cromatografic, atunci
cnd w
1/2
este mprit de verticala din maximul picului n dou pri: B n partea dreapt
i C n partea stng. In acest caz simetria devine:


C
B
Sim = (9.9)

In mod practic, cozile picurilor cromatografice se evideniaz dup jumtatea
nlimii maxime a picului cromatografic. In acest caz simetriile redate de ec. 9.8 sau 9.9
nu mai sunt corecte. De aceea, se prefer msurarea lui B i C, la o nlime a picului
cromatografic ct mai aproape de linia de baz, dar suficient de mare ca s se evite
erorile legate delimitarea picului (msurarea lui w este afectat de erori). In acest caz,
cea mai recomandat msurare este la 10% din maximul nlimii picului, cnd parametrii
B i C sunt notai cu B
10%
, respectiv C
10%
, iar simetria are expresia:


% 10
% 10
C
B
Sim = (9.10)

Un parametru important a unei separri cromatografice este timpul mort (notat cu
t
0
). Acesta semnific durata de timp n care faza mobil parcurge coloana cromatografic.
Acest parametru se poate msura cunoscnd debitul fazei mobile i lungimea coloanei
(n cromatografia de gaze) sau introducnd n proba injectat un component total inert
fa de faza staionar (n cromatografia de lichide), care va elua astfel din coloana
cromatografic la timpul de retenie notat cu t
0
. Cu ajutorul acestui parametru se pot
calcula ali doi parametrii foarte importani ai unei separri cromatografice: timpul de
retenie ajustat, numit i timp de retenie net (t
R
) i factorul de capacitate (k), definii prin
relaiile:


0 R R
t t ' t = (9.11)


0
R
0
0 R
t
' t
t
t t
' k =

= (9.12)


139
Din punct de vedere practic, minimul separrii cromatografice a doi compui
injectai (notai n ordinea eluiei cresctoare cu i i j) n coloana cromatografic se obine
atunci cnd picurile lor cromatografice ajung n semnalul liniei de baz. Gradul de
separare cromatografic este exprimat prin rezoluia cromatografic (R
s
). Pentru picuri
simetrice formula de calcul a acestui parametru este dat de expresia:

) w w (
) t t (
2
) w w ( 5 , 0
) t t (
R
2 1
i , R j , R
j i
i , R j , R
s
+

=
+

= (9.13)

In felul acesta se poate deduce c minimul lui R
s
pentru ca cele dou picuri
cromatografice i i j s fie separare n linia de baz este 1. Dac picurile nu sunt
separate, msurarea pentru w
i
i w
j
nu poate avea loc. innd cont c: w
i
= 2w
1/2,i
i w
j
=
2w
1/2,j
, formula rezoluiei devine:


j , 2 / 1 i , 2 / 1
i , R j , R
s
w w
t t
R
+

= (9.14)

O msur a selectivitii cromatografice este dat de factorul de separare (notat
cu
ij
) a doi compui i i j (elund n aceast ordine), care este definit prin relaia:
[90]


1
' k
' k
' t
' t

i
j
i , R
j , R
ij
= = (9.15)

Eficiena unei separri cromatografice se reflect n lrgimea picului
cromatografic: cu ct picul cromatografic este mai ngust, cu att mai mare este eficiena
separrii cromatografice. Cantitativ, eficiena unui proces de separare se exprim prin
numrul de talere teoretice (notat cu N). Conceptul de taler teoretic este mprumutat din
teoria distilrii, care n cazul unei separri cromatografice s-ar traduce prin poriunea din
coloana cromatografic n care se stabilete echilibrul de distribuie al analitului ntre faza
mobil i faza staionar. Formula de calcul a numrului de talere teoretice N
i

corespunztor unui analit i este urmtoarea:
[90]



2
i
i , R
i
)

t
( N = (9.16)

innd cont de relaia 9.3, formula de calcul a parametrului N devine:


2
i , 2 / 1
i , R
i
)
w
t
( 54 , 5 N = (9.17)

nlimea talerului teoretic (notat cu h) se poate calcula cunoscnd lungimea
coloanei cromatografice L: h = L/N.
Cu aceste ultime noiuni, se poate reveni la formula de calcul a rezoluiei. innd
cont de relaiile anterioare se poate deduce formula de calcul a rezoluiei, pentru picuri
cromatografice de arii aproximativ egale i caracterizate ntr-o bun aproximaie de
aceiai eficien (N):

140
) 1 (
1 ' k
' k
7 , 4
N
R
ij
i
i
s

+
= (9.18)

Ecuaia de baz pentru rezoluia ntre 2 picuri cromatografice inegale ca arie, notate cu i
i j poate fi propus prin modificarea celei de mai sus, n forma:

) 1 (
1 ' k
' k
7 , 4
N
R
ij s

+
= (9.19)

, unde ' k este media aritmetic a celor doi factori de capacitate pentru analiii i i j, k
i
i
respectiv k
j
. Cu aceste precizri, rezoluia dintre cele dou picuri cromatografice devine:

2 ' k ' k
' k ' k
' k
' k ' k
7 , 4
N
R
j i
j i
i
i j
s
+ +
+

= (9.20)

Maximul raportului
2 ' k ' k
' k ' k
j i
j i
+ +
+
este 1, atunci cnd k
i
i k
j
sunt foarte mari. Pe de alt parte,
pentru k mare, picurile cromatografice devin foarte largi, cu timp de retenie foarte mare,
uneori greu de integrat. De aceea, valoarea lui k ntre 1 i 20 este considerat ca
acceptabil.


9.3. Teoria talerelor

Aceasta teorie este una dintre cele mai importante teorii n modelarea procesului
cromatografic, iniiat de Martin i Singh i apoi dezvoltat de Said.
[91]
Teoria talerelor
descrie practic curba de eluie (cromatograma) unui anumit compus chimic. Aceast
teorie propune c un analit participant la un proces cromatografic particip la un echilibru
de repartiie (distribuie) ntre faza mobil i faza staionar, pe o poriune mai mult sau
mai puin ngust din coloana cromatografic. Aceast imagine (modelare) conduce
imediat la o conexiune cu teoria distilrii, care consider c o coloan este structurat
ntr-un numr de celule sau talere, numite n cazul procesului cromatografic talere
teoretice. Fiecare taler are o lungime finit, n care analitul se gsete (staioneaz) un
anumit interval de timp. Cu ct un taler are dimensiunea mai mic, cu att mai eficient
este procesul de partiie al analitului ntre cele dou faze; cu micorarea dimensiunii unui
taler, numrul acestora atribuit unei coloane cromatografice crete. Ca urmare, numrul
de talere teoretice atribuit unei coloane cromatografice a fost identificat cu eficiena
coloanei.
Teoria talerelor arat c limea unui pic cromatografic (dispersia unui pic
cromatografic) este invers proporional cu rdcina ptrat a eficienei, sau altfel spus:
cu ct eficiena este mai mare, cu att picul cromatografic este mai ngust.
Pentru aceasta s considerm echilibrul de repartiie cromatografic a unui analit
X, ntre o faz mobil (notat cu indicele m) i o faz staionar (s):

X
m

X
s
(9.21)


141
Faza
staionar
v
s

[X]
s,p-1

Faza
mobil
v
m

[X]
m,p-1

Faza
mobil
v
m

[X]
m,p

Faza
staionar
v
s

[X]
s,p

Faza
staionar
v
s

[X]
s,p+1

Faza
mobil
v
m

[X]
s,p+1

Taler (p-1) Taler p Taler (p+1)
Fig. 9.5. Reprezentarea a trei talere teoretice
succesive dintr-o coloan cromatografic.
Acest echilibru este caracterizat de constanta respectiv de echilibru (K), dat de ecuaia:


m
s
] X [
] X [
K = (9.22)

Prin [X] este notat concentraia analitului X n faza staionar sau mobil indicat prin
indicele respectiv. Prin diferenierea ecuaiei 9.22 se va obine urmtoarea relaie:


m s
] X [ d K ] X [ d = (9.23)

Teoria talerelor i propune s stabileasc o relaie ntre concentraia analitului X n faza
mobil dup parcurgerea a n talere din coloana cromatografic. Pentru aceasta s
considerm 3 talere teoretice consecutive, notate cu (p 1), p i (p + 1), iar parametrii
eluiei cromatografice n aceste talere redai n Fig. 9.5.















Prin dv se noteaz variaia de volum de faza mobil ce trece din talerul (p 1) n talerul
p, iar dm reprezint variaia de mas de analit din talerul p. Variaia dm reprezint
diferena de mas de analit X, atunci cnd volumul dv de faz mobil iese din talerul (p
1) i intr n talerul p. In acest caz se poate scrie:

dv ) ] X [ ] X ([ dm
p , m 1 p , m
=

(9.24)

In condiii de echilibru de distribuie a analitului X ntre faza mobil i faza staionar
valoarea lui dm poate fi scris:


p , m m p , s s
] X [ d v ] X [ d v dm + = (9.25)

Substituind pe d[X]
s,p
din ec. 9.23 se va obine:


p , m s m
] X [ d ) Kv v ( dm + = (9.26)

Din ec. 9.24 i 9.26 se obine urmtoarea ecuaie:


142

K v v
] X [ ] X [
dv
] X [ d
s m
p , m 1 p , m p , m
+

=

(9.27)

Numitorul din aceast ecuaie este definit ca volumul talerului i este notat cu v
t
. Numrul
de talere () din coloana cromatografic avnd volumul V devine:


s m t
v K v
V
v
V

+
= = (9.28)

De unde prin difereniere se va obine:


s m
v K v
dV
d
+
= (9.29)

Cu aceasta, ecuaia 9.27 devine:


p , m 1 p , m
p , m
] X [ ] X [
d
] X [ d
=

(9.30)

Aceasta ecuaie diferenial descrie viteza de modificare a concentraiei unui analit n
faza mobil din talerul notat cu p, la trecerea fazei mobile prin el. Soluia acestei ecuaii
red concentraia analitului X n faza mobil din talerul notat cu p, pentru un numr de
talere teoretice din coloana cromatografic notat cu :


! p
e ] X [
] X [
p
0
p , m

=

(9.31)

, unde [X]
0
reprezint concentraia iniial a analitului X, la injectarea sa n coloana
cromatografic, care se gsete n faza mobil. Ecuaia (9.31) arat c modelul
distribuiei continue ntre faza mobil i faza staionar este unul de tip Poisson. Pentru
valori mici ale lui distribuia este asimetric, devenind simetric pentru valori mari ale lui
. In practic este mult mai mare dect 100, iar distribuia de mai sus devine una
Gauss, n acord cu forma experimental obinut pentru picurile cromatografice.
nlimea unui taler teoretic este notat cu H. Numrul de talere teoretice dintr-o
coloan cu lungimea L fiind notat cu N, rezult c H va fi:


N
L
H = (9.32)

nlimea redus a talerului teoretic este dat de raportul H/d
p
, unde d
p
este
diametrul particulelor fazei staionare.


9.4. Ecuaia van Deemter

Teoria talerelor red din punct de vedere cantitativ o imagine asupra proceselor
care au loc n coloan i exprim calitatea unei coloane prin numrul de talere teoretice

143
atribuite procesului cromatografic pentru un anumit analit injectat n coloan. Cu toate
acestea, aceast teorie nu red i o explicaie asupra mecanismelor i fenomenelor care
stau la baza echilibrelor de distribuie ale analiilor ntre faza mobil i faza staionar.
Teoria dispersiei frontului de analit n coloana cromatografic studiaz
fenomenele care au loc la transferul probei n coloana cromatografic. Aceasta se
bazeaz pe viteza fazei mobile i a parametrilor procesului, precum viteza transferului de
mas ntre cele dou faze participante la procesul cromatografic, viteza de difuziune a
moleculelor de analit (solut) de-a lungul coloanei i hidrodinamica fazei mobile. O
reprezentare a acestui fenomen este redat n figura urmtoare.












Fig. 9.6. Reprezentarea lrgirii frontului de analit la trecerea prin coloana cromatografic.


Glueckauf a studiat efectele a trei factori asupra procesului cromatografic,
descrii n continuare:
[92]

1) difuzia obinuit n faza mobil n direcia de deplasare a acesteia; acest proces are
loc de regul atunci cnd exist o regiune de concentraie mare i una de concentraie
mic, n acord cu legea lui Fick;
2) difuzia longitudinal n faza mobil, n special datorit ciocnirilor moleculelor de analit
cu particulele fazei staionare (pentru coloane umplute) i ntre moleculele de analit i
cele ale fazei mobile;
3) mrimea particulelor fazei staionare.
Msura mprtierii zonei dup o distribuie normal Gauss este dat de deviaia
standard. Aceast mprtiere este definit de modelul deplasrii aleatoare ale
moleculelor de analit prin numrul de pai efectuai (n) i lungimea fiecruia (notat cu l):

n l = (9.33)

Aceast relaie simpl arat c mprtierea zonei este proporional cu lungimea porilor
i rdcina ptrat a numrului acestora.
Din teoria statistic se tie c deviaia standard nu este o mrime aditiv, n cazul
influenei mai multor factori. In schimb, ptratul deviaiei standard este aditiv i este
demonstrat de teoria propagrii erorilor (vezi cap. 1.5):

=
i
2
i
2
(9.34)


144
, unde
i
reprezint deviaia standard pentru fiecare din cele 3 procese discutate ca
influennd lrgirea zonei moleculelor de analit.
Termenul procesului de difuziune obinuit (
d
) este definit prin ecuaia de
difuziune a lui Einstein:

t D 2
2
d
= (9.35)

, n care D este coeficientul de difuziune, iar t reprezint intervalul de timp n care o
molecul de analit o petrece n faza mobil i este dat de relaia:


u
L
t = (9.36)

(L lungimea total a deplasrii, u viteza fazei mobile).
De aici rezult c:


u
L D 2

2
d

= (9.37)

Difuzia turbulent descrie modificarea traseelor (canalelor) i a vitezei moleculelor de
solut n raport cu zona central. Aceasta poate fi imaginat prin traseele dintre particulele
fazei staionare prin care se pot mica moleculele de solut. Dac o molecul se gsete
ntr-un canal rapid aceasta va migra n faa frontului, iar dac aceasta se gsete pe un
canal ncet, atunci molecula va rmne n spatele zonei centrale a frontului. Numrul
pailor (notat cu n) pe care molecula i strbate prin parcurgerea coloanei de lungime L
va depinde de diametrul particulelor (notat cu d
p
):


p
d
L
n = (9.38)

Deviaia standard atribuit acestui proces (
E
) poate fi derivat din ec. 9.33:


2 / 1
p
2 / 1
p
p E
) d L ( )
d
L
( d = = (9.39)

Pentru a evalua efectele de ne-echilibru, referitoare la intervalele de timp n care
moleculele de solut se afl n una din cele dou faze, s considerm urmtoarele mrimi
cinetice necesare:
k
1
viteza de tranziie a unei molecule de solut din faza mobil n faza staionar
(adsorbie);
1/k
1
intervalul de timp pentru ca adsorbia s aib loc;
k
2
viteza de tranziie a unei molecule de solut din faza staionar n faza mobil
(desorbie);
1/k
2
intervalul de timp pentru ca desorbia s aib loc.
O molecul de solut n faza mobil se mic mai repede dect centrul zonei.
Viteza zonei va fi u, n care este fracia de molecule de solut n faza mobil, iar u este
viteza fazei mobile. Prin urmare, (1 - ) va fi fracia de molecule din faza staionar cu o

145
vitez de deplasare 0. Astfel, moleculele de solut se deplaseaz n fa sau n spatele
zonei centrale la fiecare transfer ntre faze. Intervalul de timp necesar zonei solutului s
se deplaseze prin coloana de lungime L la o vitez u este:


u
L
t

= (9.40)

Intervalul de timp n care fracia (1 - ) de molecule se gsete n faza staionar va fi:


u
L ) 1 (
t


= (9.41)

Numrul de desorbii (n
des
) care au loc n acest interval de timp va fi dat de intervalul de
timp, dat de relaia 9.41, mprit la 1/k
2
:


2
des
k
1
u
L ) 1 (
n


= (9.42)

Numrul de transferuri interfazic (n) va fi dublu celui de desorbie:


2
des
k
1
u
L ) 1 ( 2
n


= (9.43)

In intervalul de timp n care o molecul de solut este n faza staionar, zona central a
frontului solutului se deplaseaz n fa cu lungimea de u/k
2
. Folosind ec. 9.33 prin
substituia lui l cu u/k
2
i n cu expresia de mai sus, se va obine deviaia standard (
k
)
caracteristic procesului de transfer de mas ntre cele dou faze (contribuia de ne-
echilibru):


2 / 1
2
k
]
k
u L ) 1 ( 2
[

= (9.44)

Aceast ecuaie arat c prin creterea vitezei de curgere u (imprimat de faza mobil),
efectele de ne-echilibru cresc, msura acestei creteri fiind dat de
k
.
Introducnd expresiile lui
d
,
E
i
k
n rel. 9.34 se obine expresia:

]
u
1
D 2 u
k
) 1 ( 2
d [ L
2
p
2
+

+ = (9.45)

Martin i Synge au introdus nlimea echivalent a talerului teoretic H, dat de relaia:


L

H
2
= (9.46)

Cu aceasta, expresia lui H devine:


146
H
u (cm/s)
Hmin
uoptim
A

u
1
D 2 u
k
) 1 ( 2
d H
2
p
+

+ = (9.47)

Minimul nlimii talerului, H
min
, se stabilete din condiia dH/du = 0 i conduce la expresia
vitezei fazei mobile pentru care valoarea nlimii talerului teoretic este minim:


2 / 1 2
]
) 1 (
D k
[ u


= (9.48)

Ecuaia 9.47 este cunoscut ca ecuaia van Deemter i scris n forma simplificat:

u C
u
B
A H + + = (9.49)

Termenul A reprezint constanta de difuziune turbulent (datorit neomogentitii
mediului prin care curge faza mobil), B este constanta difuziei longitudinale, iar C
constanta transferului de mas al analitului n faza staionar.

















Fig. 9.7. Reprezentarea grafic a ecuaiei van Deemter.

Reprezentarea grafic a acestei ecuaii este dat n figura de mai sus. Din
aceast dependen a nlimii talerului teoretic (H) determinat din mrimi ale separrii
cromatografice funcie de viteza fazei mobile (u) se stabilete valoarea optim u
optim

pentru care H este minim, i prin urmare separarea are o eficien maxim.


9.5. Semnificaia cinetic i termodinamic a factorului de capacitate

Factorul de capacitate pentru un compus i (k
i
) este definit ca raportul cantitilor
de analit n faza staionar i faza mobil, la un moment dat. Experimental valoarea sa
este stabilit prin msurarea parametrilor cromatografici de retenie, dai de ec. 9.12. Din
punct de vedere cinetic, acesta poate fi exprimat de ecuaia urmtoare, derivat din

147
definiia de mai sus:

K
V ] i [
V ] i [
n
n
' k
i
. m . f m
. s . f s
m , i
s , i
i
=

= = (9.50)

, n care:
n
i,s
numrul de moli de analit i din faza staionar;
n
i,m
numrul de moli de analit i din faza mobil;
V
f.s.
volumul fazei staionare din coloana cromatografic;
V
f.m.
volumul fazei mobile din coloana cromatografic;
- raportul de volume al celor dou faze (V
f.s.
/V
f.m.
);
K
i
constanta de echilibru a partiie analitului i ntre faza mobil i faza
staionar.
Din punct de vedere termodinamic trebuie inut cont de relaia general a
constantei de echilibru K
i
:


RT
G
i
0
e K

= (9.51)

G
0
reprezint variaia de entalpie liber standard Gibbs pentru transferul speciei i din
faza mobil n faza staionar i la rndul su poate fi scris n funcie de variaie de
entalpie standard (H
0
) i variaia de entropie standard (S
0
):


0 0 0
S T H G = (9.52)

Prin introducerea lui K
i
i G
0
n ecuaia 9.51, urmat de logaritmare rezult ecuaia
fundamental n cromatografie, ce descrie dependena factorului de capacitate de
temperatura la care are loc procesul de retenie cromatografic (temperatura din coloana
cromatografic):


T
1
R
H
R
S
ln ' k ln
0 0
i
+ =

(9.53)

Prin urmare, factorul de capacitate scade prin creterea temperaturii coloanei
cromatografice. Dependena valorii ln k este linear n raport cu inversul temperaturii
absolute, iar ecuaia de mai sus este cunoscut n literatura de specialitate din domeniu
ca ecuaia vant Hoff. Din regresia ln k ~ 1/T se poate stabili variaia de entalpie standard
H
0
din panta dreptei, iar din intersecia cu ordonata (T ) se poate determina cu o
bun aproximaie (cunoscnd parametrul constructiv ) valoarea variaiei de entropie
standard S
0
a procesului de transfer al analitului din faza mobil n faza staionar.