Instructivo de Laboratorio de Toxicologia Forense 2014

UNIVERSIDAD RAFAEL LANDVAR
FACULTAD DE CIENCIAS JURDICAS Y SOCIALES

CARRERAS DE INVESTIGACIN CRIMINAL Y FORENSE CRIMFOR

TOXICOLOGIA FORENSE
Instructivo de Laboratorio

ltima revisin: noviembre de 2013

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Tabla de Contenido
Prctica 1: Intoxicacin por Salicilatos ................................................................. Error! Marcador no definido.
Prctica 2: Anlisis de Alcohol etlico en sangre por microdifusin ..................... Error! Marcador no definido.
Prctica 3: Deteccin de alcohol en el aliento mediante el uso del alcoholmetro porttilError! Marcador no
definido.
Prctica 4: Prctica 3: Anlisis de Plaguicidas Organofosforados......................... Error! Marcador no definido.
Prctica 5: Test Cualitativo de Marihuana ............................................................ Error! Marcador no definido.
Prctica 6: Anlisis de Drogas Test Spot para Casos Generales ......................... Error! Marcador no definido.
Prctica 7: Anlisis cualitativo y cuantitativo de materiales que contienen cocanaError! Marcador no
definido.
Prctica 8: Identificacin de drogas en general con kits especficos .................... Error! Marcador no definido.

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PRCTICA 1: INTOXICACION POR SALICILATOS
1. DEFINICIN DEL PROBLEMA
El cido acetil saliclico (AAS) contina siendo el analgsico antiinflamatorio y antipirtico ms usado a pesar
de la aparicin de nuevos frmacos siendo por dicho motivo por lo que se impone como modelo de
intoxicacin. La accesibilidad, el bajo precio y sobre todo la efectividad de los salicilatos hace que no slo se
utilicen en patologas tanto leves como severas con fines teraputicos, sino que a la vez se extienda su
administracin incontrolada que puede provocar efectos fatales.
Dosis claramente txicas son 300 g/mL, y toxicidad severa se observar a concentraciones plasmticas de
400 g/mL. La dosis letal en adultos oscila entre 10 y 30 g y, en nios, se estima en 4 g.
2. OBJETIVOS
1. Determinar la presencia de salicilatos en una muestra de orina.
2. Determinar la concentracin de salicilatos en una muestra a travs de espectrofotometra.
3. Analizar la presencia de salicilatos en una muestra sangunea.
4. MATERIALES Y EQUIPO
EQUIPO
1 Cepillo para tubo de ensayo
1 Pipeta con bulbo
8 Cubetas para espectrofotmetro
1 Par de lentes de seguridad
1 Caja de paos de limpieza
2 Pipetas Mohr, una de 1.0 ml y una de 0.1 ml
1 Gradilla para tubos de ensayo
1 Espectrofotmetro para operacin en el rango visible del espectro electromagntico
1 Esponja
Tubos de ensayo de 10 cm
REACTIVOS Y MUESTRAS BIOLOGICAS
3 muestras de orina (dos con diferente concentracin de salicilatos y una en blanco)
Muestras de sangre con contenido de salicilatos
Cloruro Frrico al 10%
Nitrato frrico al 1%
cido ntrico 0.07 M
Solucin de nitrato frrico diluida: 5 partes de nitrato frrico 1% y 4 partes de cido ntrico 0.07 M.
cido ntrico 0.039 M: 5 partes de cido ntrico 0.07 M y 4 partes de agua destilada.
Acido Sulfurico concentrado
Solucin de cido saliclico en stock, 100 mg / dl (100 mg/100 ml) que se prepara asi:
transferir 1.16 g de salicilato de sodio a un frasco de 1 litro, diluir a 1 litro con agua destilada. Aadir unas
pocas gotas de cloroformo como preservante, almacenar la solucin en un refrigerador. Descartar la

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solucin luego de 6 meses. Esta solucin es equivalente a 100 mg / dl de cido saliclico. El uso de esta
solucin de cido saliclico como estndar no es recomendado.
Solucin cido saliclico como estndar, 5.0 mg / dl: transferir 5 ml de cido saliclico en stock a 95 ml de
agua.
Solucin de cido saliclico de concentracin desconocida.
5. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD
Debe consultar las hojas de seguridad de cada uno de los reactivos a manipular y debe utilizar guantes de
nitrilo, mascarilla y bata durante la prctica.
6. ANTECEDENTES
Existen diferentes tipos de salicilatos, los cuales son empleados en una gran variedad de productos
farmacuticos. As tenemos el cido acetilsaliclico, utilizado en casi todas las tabletas para uso analgsico;
su nombre comercial ms famoso es ASPIRINA. El cido saliclico se usa en ungentos dermatolgicos o
como salicilato de sodio para uso interno. El salicilato de metilo en preparados dermatolgicos empleados
con propsitos analgsicos, para aliviar dolores musculares.
La dosis letal de cualquier salicilato se estima que es de 0.2 0.5 g/kg.
Una Aspirina de adultos contiene 500 mg de cido acetil saliclico.
Mtodos de Anlisis
La espectroscopia se refiere a la medicin de la cantidad de luz absorbida por una solucin, siendo la
cantidad de luz absorbida proporcional a la concentracin de los compuestos en la solucin. Cada
compuesto tiene asociadas unas cuantas longitudes de onda selectas que sern absorbidas, antes que el
resto de longitudes en el espectro. Por tanto, mediante la seleccin cuidadosa de longitudes de onda, es
muchas veces posible medir la concentracin de un compuesto en la presencia de otros diversos.
Los salicilatos reaccionan con las sales frricas (es decir, de hierro) para producir un color violeta, el cual es
proporcional a la concentracin del salicilato. Para la deteccin de salicilatos se debe utilizar una longitud de
540 nm para medir la absorcin de luz. Dada la simplicidad del procedimiento para al salicilato, el supuesto
de envenenamiento con salicilatos puede ser verificado en minutos, especialmente debido a que el
envenenamiento severo produce un color violeta fuerte y fcilmente observable al aplicar el reactivo
adecuado.
Existen diversos tipos de espectrofotmetros en el mercado, uno de los cuales se presenta en la Figura No.
1. El sendero para la luz y los principales componentes se presentan en la Figura No. 2.
El presente experimento consiste de dos partes. En la primera seccin se obtiene el color prpura del
salicilato para varias soluciones de concentracin conocida, preparando una curva de calibracin, para luego
determinar la concentracin de la muestra desconocida. La segunda parte consiste en la determinacin de
salicilatos en una muestra de sangre.

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Figura No. 1.- Ejemplo de Espectrofotmetro UV-VIS

7. PRE-LABORATORIO
Conteste las siguientes preguntas:
1. debe haber normalmente salicilato presente en la sangre humana? explicar.
2. por qu se debe realizar el anlisis en duplicado?
3. indicar otra situacin en que el anlisis anterior puede resultar til.
8. PROCEDIMIENTO
PARTE A: DETERMINACION CUALITATIVA DE SALICILATOS
ESTA ES UNA PRUEBA CUALITATIVA PARA DETERMINAR LA PRESENCIA DE SALICILATOS EN UNA
DETERMINADA MUESTRA POR LO QUE LOS RESULTADOS SE REPORTAN COMO POSITIVO (presencia) O
NEGATIVO (ausencia).
1. Homogenizar la muestra biolgica
2. Colocar 1 mL de la muestra de orina a analizar en 3 tubos de ensayo (las primeras dos muestra
contienen diferente concentracin de salicilatos y la tercera no referencia o blanco-).
3. A cada muestra agregar 1 mL de Cloruro Frrico al 10%
4. Proceder a calentar cada tubo de ensayo en bao de Mara con el objetivo de eliminar cuerpos
cetonicos que puedan estar presentes. Si los salicilatos estn presentes aparecer un color morado
violeta persistente.
5. Agregar unas gotas de cido sulfrico concentrado, si desaparece el color se confirma la prueba. Si no
desaparece el color es indicativo de cido acetilsaliclico, salicilato de sodio, fenilo y metilo, o de
derivados fenlicos.
PARTE B. ESPECTROFOTOMETRA BSICA
1. colocar siete cubetas para espectrofotmetro en una gradilla pequea para tubos de ensayo.

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2. pipetear las cantidades de material indicadas en la tabla no 1 en las seis cubetas, mezclar bien.
calcular la concentracin de salicilato en mg/dl para cada muestra conocida de salicilato y registrar
el valor en la hoja de datos provista al final de la descripcin de la prctica. (ayuda: la cubeta 2 tiene
una concentracin de salicilato de 0.25 ml/dl).
3. nota: algunos cambios menores pueden ser requeridos en el procedimiento, dependiendo del
espectrofotmetro utilizado. en caso de duda, consultar el manual de uso.
4. encender el instrumento. puede ser necesario que se permita el calentamiento del mismo por 15 a
20 minutos para estabilizar la muestra y el detector.
5. Ajustar la longitud de onda a 540 nm.
6. Verificar que la lectura a realizar en el espectrofotmetro ser de la de transmitancia.
7. Ajustar el 0% T. Asegurarse que el compartimento para la muestra est completamente cerrado.
8. Insertar la cubeta conteniendo el blanco hasta el fondo en el compartimento para muestras.
Alinear la marca gua de la cubeta con la marca del instrumento (realizar una marca en el lado de la
cubeta si se utilizan tubos de ensayo ordinarios).
9. Ajustar la lectura a 100% T. Remover la cubeta del compartimento.
Nota: en caso de que la lectura est fuera de rango, diluir la muestra.
10. Insertar cada estndar conocido de cido saliclico en el compartimento de muestra, y obtener la
lectura de transmitancia para cada muestra. Registrar cada lectura en la hoja de datos.
11. Graficar el porcentaje de transmitancia (% T) en el eje vertical en una hoja de papel milimetrado, y
la concentracin en mg/dl en el eje horizontal para las cubetas 1 a 6. Ajustar una recta por
Mnimos Cuadrados Ordinarios. Esta lnea es conocida como curva de calibracin.
12. Pipetear 1.0 ml de la solucin desconocida en una cubeta, mezclar con 1.0 ml de nitrato frrico
diluido. Determinar la absorbancia.
13. Utilizando la curva de calibracin y la lectura de absorbancia anterior, determinar la concentracin
de salicilato en la muestra desconocida.

PARTE B. SALICILATOS EN SUERO SANGUNEO (AVANZADO)
ESCENA DEL CRIMEN
Un oficial de polica observa un automvil que se mueve errticamente en una autopista, y, de hecho,
observa que este cruza a otro carril, forzando que un auto salga del camino. El oficial detiene al conductor
del vehculo, y este manifiesta que tiene un fuerte dolor de cabeza y ha tomado algunas aspirinas. El
conductor tuvo dificultad para remover la tapa de una botella de agua mientras conduca y esto ha causado
el manejo errtico. No se encuentra ningn empaque para aspirinas, y el conductor indica que ya lo ha
desechado. La persona niega estar bajo la influencia de alcohol u otras drogas. Es llevado a un hospital,
donde voluntariamente provee una muestra de sangre para un test de alcohol y drogas. Ahora le es
entregada una pequea muestra de suero sanguneo para examinar la presencia y/o concentracin de
aspirina en la misma.
Realizar el siguiente procedimiento en duplicado. (Deber efectuar el procedimiento dos veces, tanto a la
muestra desconocida como al estndar de 5.0 mg/dl).
1. Etiquetar dos cubetas para la muestra desconocida y dos para el estndar de 5.0 ml/dl.
2. En cada caso, una de las cubetas ser etiquetada como Test y la otra como Blanco.
3. Pipetear 2.0 ml de agua destilada en cada cubeta.
4. Pipetear 0.2 ml de suero en las cubetas para la muestra desconocida.

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5. Pipetear 0.2 ml de estndar de 5.0 mg/dl en las cubetas para estndar.
6. En las cubetas de etiquetadas como Blanco, pipetear 2.0 ml de cido ntrico 0.039 M.
7. En las cubetas etiquetadas como Test, pipetear 2.0 ml de la solucin diluida de nitrato de hierro.
8. Agitar todas las cubetas para mezclar su contenido.
La Tabla 2 enumera cada cubeta y sus contenidos.
9. Dejar reposar los mismos por 5 minutos.
10. Seguir las instrucciones en la Parte A de este experimento para obtener una lectura para cada
cubeta. Registrar la absorbancia leda en la hoja de clculos.
Tabla No. 1.- Preparacin de Estndares de cido Saliclico
Estndar 5.0 mg/dl Agua Destilada Nitrato de Hierro
Diluido
cido Ntrico 0.039 M
Cubeta 1: Blanco 0.0 1.0 0.0 1.0
Cubeta 2 0.1 0.9 1.0 0.0
Cubeta 3 0.3 0.7 1.0 0.0
Cubeta 4 0.5 0.5 1.0 0.0
Cubeta 5 0.7 0.3 1.0 0.0
Cubeta 6 1.0 0.0 1.0 0.0

9. LIMPIEZA Y DISPOSICIN DE RESIDUOS
Deseche los residuos en el recipiente destinado para el efecto (INORGANICOS EN UN RECIPIENTE Y
BIOLOGICOS EN OTRO).
10. DATOS Y OBSERVACIONES
PARTE A: Indique como POSITIVO si encontr presencia de salicilatos en la muestra y NEGATIVO si no hubo
presencia.
PARTE B. ESPECTROFOTOMETRA BSICA
Cubeta Concentracin de Salicilato
(mg/dl)
Absorbancia
1
2
3
4
5
6
11.
12. Absorbancia de muestra desconocida: _____________________
13. Concentracin de muestra desconocida: _____________________ (mg/dl)
14.
PARTE C. SALICILATOS EN SUERO SANGUNEO (AVANZADO)

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Estndar de 5.0 mg/ml Absorbancia (primera corrida) Absorbancia (segunda corrida)
Estndar (Blanco)
Estndar 5.0 mg/ml
Desconocida (Blanco)
Desconocida

15. ANLISIS Y CONCLUSIONES
CLCULOS
a. Usar la siguiente relacin para determinar la concentracin de salicilato en la muestra desconocida:

b. Calcular cada muestra desconocida de forma separada, y promediar el resultado. Si los resultados
individuales no se acercan en por lo menos 2 a 3 mg/dl, repetir el anlisis una tercera y cuarta vez.
Calcular y comparar los resultados con los obtenidos anteriormente. Promediar los resultados que
se acercan en 2 a 3 mg/dl entre s.
16. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
[1]. Gisbert Calabuig J.A, Gisbert Grifo MS. Intoxicaciones por medicamentos. En: Gisbert Calabuig JA,
editor. Medicina Legal y toxicologa. 5 edicin. Barcelona: Masson, S.A; 1998.p.793-805.
[2]. English M, Marsh V, Amukoye E, et al. Intoxicacin crnica por salicilatos y malaria grave. The
Lancet (ed. Espaola) 1996; 29(5):46-8.

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PRCTICA 2: ANLISIS DE ALCOHOL ETLICO EN SANGRE POR MICRO DIFUSIN
Una de las formas ms utilizadas para determinar si una persona ha ingerido alcohol y que cantidad es la del
anlisis de contenido de alcohol en sangre (BAC). Cuando se consume alcohol, este se libera en el flujo
sanguneo.
Dado a los altos ndices de accidentes y delitos asociados al consumo de alcohol, el etanol es una sustancia
buscada en la mayora de las pruebas de alcohol en sangre. Segn reportes mdicos el 10% del etanol sale
del cuerpo a travs del sudor, la respiracin y la orina. El resto debe ser metabolizado fuera del cuerpo a
travs del hgado. El tiempo que tarda el alcohol en dejar el flujo sanguneo es directamente dependiente de
la velocidad a la que el cuerpo puede metabolizar el alcohol. Por lo tanto una prueba de alcohol en sangre
puede aportar evidencia de el responsable de algn delito.
2. OBJETIVOS
Aplicar la tcnica de micro difusin para determinar la presencia de alcohol en sangre.
Celdas de Conway
1 Destapador de viales
12 Micropipetas
Perillas para micropipetas
Masking tape
Papel kraft para poner en las mesas
Guantes
Dicromato de potasio
Agua destilada
Nitrato de plata
cido sulfrico concentrado
Reactivo de dicromato de potasio: Disolver 1 g de dicromato de potasio en 500 ml de agua. Agregar 0.1 g de
nitrato de plata a la solucin. Cuidadosamente agregar 500 ml de cido sulfrico concentrado. Esta mezcla
es estable por al menos un ao si se protege de la luz y la humedad. Para su uso, es conveniente dispensarlo
en frasco gotero de una onza.
Previamente debe revisar los aspectos importantes de precaucin en las hojas de seguridad de los reactivos
a utilizar. Prepare los reactivos en la campana de extraccin de gases. Utilice bata, guantes de nitrilo y
lentes de seguridad.
5. ANTECEDENTES

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Las determinaciones analticas de alcohol etlico se basan en su volatilidad y su potencial de reduccin.
Ambas propiedades se utilizan en este procedimiento, en el que se utilizan celdas de Conway con reactivo
de dicromato de potasio. Si el etanol (o alguna otra sustancia voltil, reductora) est presente, se difundir
en el interior de las celdas y reaccionar con el reactivo de dicromato de potasio, cambiando su coloracin.
Este mtodo es utilizado como un tamizaje en el que se logra identificar las posibles muestras positivas para
etanol. Una vez obtenido un resultado positivo es decir cambio en la coloracin del reactivo de dicromato
de potasio-, debe confirmarse por medio de una metodologa cuantitativa, siendo de eleccin, la
cromatografa de gases con detector de llama.
No debe olvidarse que las muestras para alcoholemia deben ser preservadas con fluoruro de sodio y el
envase deber ser lo ms adecuado en cuanto a volumen de la muestra.
6. PRE-LABORATORIO
Contestar las siguientes preguntas:
En qu tipo de envase se deben colocar las muestras de sangre?
Con un ensayo de este tipo es posible llevar a un sospechoso a prisin?
7. PROCEDIMIENTO
1. Cubra el fondo del anillo externo de la celda de Conway con sangre u orina, colocndola directamente
desde el envase.
2. Agregue unas cuantas gotas de dicromato de potasio al centro de la celda de Conway.
3. Coloque la cubierta a la celda de Conway y deje estar a temperatura ambiente.
INTERPRETACIN:
El reactivo cambiar de color entre 15 minutos y una hora si el etanol u otra sustancia reductora voltil esta
presente. El cambio de color que se presenta va de amarillo a verde o azul.
Un cambio visible se ha observado en menos de una hora, cuando se ha colocado 1 ml de sangre
conteniendo 200 ug de metanol, etanol o isopropanol, reaccionando con 0.3 ml del reactivo de dicromato
de potasio. El reactivo en dos horas se torna azul. Este mtodo NO es especfico para etanol.
Debe desechar los reactivos inorgnicos por separado de los organicos, habr un recipiente rotulado para el
efecto.
Reporte los resultados obtenidos con las muestras analizadas.
Concluya sobre la metodologa de anlisis y su uso en investigacin forense.

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[1]. Conway, Edward J. (1962) Microdifusion Analysis And Volumetric Error. Crosby Lockwood & Son LT.
London.
[2]. Walllace Hayes A. (2001). Principles and Methods of Toxicology. 4th edicin. Ed:Taylor & Francis.
USA.

PRCTICA 3: DETECCIN DE ALCOHOL EN EL ALIENTO MEDIANTE EL
USO DEL ALCOHOLMETRO PORTTIL
Cada ao, miles de motoristas deben ser examinados para determinar si se encontraban operando un
vehculo o no bajo la influencia del alcohol. El mtodo ms exacto implica el uso de cromatografa gas-
lquido para la medicin del alcohol directamente en la sangre. Sin embargo, siempre existe el problema de
una posible violacin de los derechos de la persona para la obtencin.
2. OBJETIVOS
Realizar mediciones para detectar algohol en sangre a travs de un alcoholmetro porttil.
EQUIPO
1 Medidor de ampolla
1 Bulbo atomizador
1 Breathalyzer o equipo similar
1 Tubo para burbujeo
1 Par de lentes de seguridad
1 Boquilla
REACTIVOS
2 Ampollas de prueba del Breathalyzer o equipo similar
Lquido de enjuague con contenido de alcohol
Debe utilizar guantes, bata y lentes de seguridad durante la practica.
5. ANTECEDENTES
Una forma ms popular para llevar a cabo el anlisis consiste en la captura del aliento de la persona para
determinar su contenido de alcohol. Dos de los procedimientos ms frecuentemente administrados son
mediante la utilizacin del alcoholmetro porttil. Bsicamente, ambos hacen uso del hecho de que el ratio
de alcohol en la sangre al alcohol en el aire en los alveolos es de aproximadamente 2100:1. El alcoholmetro
porttil est diseado para capturar el aliento alveolar y medir el contenido de alcohol mediante la reaccin

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con una solucin de dicromato de potasio, que resulta en una solucin azul, la cual es posteriormente
analizada mediante un espectrofotmetro de rango visible.
PARTE A. EL ALCOHOLMETRO PORTTIL (EL BREATHALYZER)
La Figura No. 1 presenta el alcoholmetro porttil Breathalyzer Modelo 900-A. La Figura No. 2 muestra un
diagrama esquemtico de los componentes ms importantes del instrumento.

Figura No. 1.- Breathalyzer Modelo 900-A

Figura No. 2.- Diagrama Esquemtico del Breathalyzer

La operacin de este alcoholmetro porttil puede ser descrita en tres pasos.
1. Una muestra de aliento alveolar es recolectada. Se pide al sujeto que sople en el tubo del aparato.
El aliento eleva un pistn hasta la parte superior de su recorrido, por sobre dos orificios de venteo.
Cuando la persona deja de soplar, el pistn regresa a su posicin predeterminada, atrapando una
porcin del aliento, y cubre los agujeros de venteo. La cantidad de aliento capturado es de 56.5 ml.
2. La muestra de aliento capturado es pasado a una ampolla de test que consiste de dicromato de
potasio, agua y cido sulfrico. Despus de que la muestra de aliento ha sido burbujeada en la
ampolla de test, se permite que transcurran 90 segundos para completar la oxidacin de cualquier
alcohol que haya estado presente en la muestra. La siguiente ecuacin describe la reaccin qumica
que toma lugar en la ampolla:

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El dicromato de potasio que no ha reaccionado (color naranja) y el sulfato de cromo (de color
verde) se mezclan y forman una solucin de color azul.

3. Se mide la cantidad de dicromato de potasio requerida para oxidar el alcohol presente en la
muestra. Esto es llevado a cabo utilizando un circuito elctrico balanceado con dos celdas
fotoelctricas una montada detrs de la ampolla de prueba y la otra detrs de una ampolla
estndar. Una fuente de luz es localizada en un rack movible entre las dos ampollas. Antes de que
el aliento del sujeto ingrese la ampolla de prueba, la fuente de luz es posicionada entre las dos
ampollas de forma que la misma cantidad de luz pase a travs de las mismas. Cuando esta posicin
es alcanzada, el instrumento presenta una lectura de cero. Despus de que el aliento del individuo
reacciona con el contenido de la ampolla de prueba, la fuente de luz se mueve hasta que el
medidor del instrumento regrese a una medida de cero. La distancia que ha recorrido el bulbo de
luz es indicada en otro lector, que es calibrado en unidades de forma tal que indique directamente
el porcentaje de alcohol en la sangre.
ESCENA DEL CRIMEN
Un hombre que conduce un vehculo motor de forma descuidada es detenido por un oficial que sospecha
que esta persona maneja bajo la influencia del alcohol. Despus de que el conductor falla las pruebas de
balance y coordinacin, es administrado un test con el alcoholmetro porttil anteriormente descrito, el cual
tambin falla. Algunas semanas despus, el conductor se declara como no culpable en la corte. Su defensa
se basa en que el alcoholmetro ha devuelto una lectura anormalmente elevada debido a que anterior a la
prueba haba utilizado un enjuague bucal que contena alcohol. El oficial que ha efectuado el arresto
contesta que han transcurrido 90 minutos entre el momento del arresto y el momento en que se ha
administrado el test. Durante este tiempo, no se ha observado nada que ingrese en la boca del sospechoso.
El oficial indica que este tiempo es ms que suficiente para que cualquier residuo de enjuague bucal
presente en la boca se disipe.
Para determinar quin dice la verdad, se le solicitar que enjuague su boca con un lquido con alcohol. No lo
ingiera. A intervalos de 5, 10, 15 y 20 minutos, realizar pruebas a su aliento utilizando el alcoholmetro
porttil.
6. PRE-LABORATORIO
Conteste las siguientes preguntas:
1. Es el alcoholmetro un equipo confiable? Cul es el margen de error?
2. Que requisitos debe llenar un equipo porttil para que sus mediciones sean aceptadas?
7. PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO
1. Encender el switch del Breathalyzer a la posicin de on y esperar a que el termmetro muestre
una lectura de 50 3C. Esta temperatura indica que la cmara de la muestra y los tubos
conductores para el aliento se encuentran a una temperatura mayor a la del cuerpo. Esto previene
que se condense humedad del aliento.

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2. Medir dos ampollas selladas con el medidor provisto en el aparato. Cuando la ampolla se encuentra
en el medidor, el fondo del menisco debe encontrarse al nivel del tope del medidor, o ligeramente
sobre el mismo. Remover la ampolla del medidor.
3. Colocar una ampolla sellada en el compartimento izquierdo del instrumento.
4. Romper el sello de la otra ampolla, colocarla en el compartimento derecho del instrumento.
Conectar el tubo que inyecta el gas en la ampolla a la toma de gas externa del instrumento, de
caucho. Insertar el tubo en la ampolla.
5. Con el selector en la posicin de toma, bombear aire en el tubo de muestra con un bulbo
atomizador por un espacio de 10 segundos. Durante este tiempo, la luz verde se encender,
indicando que la cmara se encuentra llena.
6. Encender el selector a la posicin de analizar. Este aire pasar de la cmara y ser inyectado a la
ampolla de prueba. La luz verde se apagar cuando el pistn deje la parte superior de su recorrido.
Al fondo del mismo, un contacto elctrico se llevar a cabo y una luz roja se encender. Esto
debera tomar unos 25 a 35 segundos, aunque el tiempo no resulta una variable crtica.
7. Noventa segundos despus de que la luz roja desaparezca, una lmpara verde que indica lectura
se encender. En este momento, encender la fuente de luz, y mover el nodo de balance al lado
derecho del panel hasta que el puntero del medidor nulo se encuentre en la lnea del centro.
8. Establecer el medidor de escala en la posicin de cero. En el Breathalyzer modelo 900, el nodo del
puntero debe ser jalado hacia el operador para ser liberado.
9. Insertar la boquilla en el tubo plstico de muestra. Esta es una medida precautoria para mantener
la saliva u otros lquidos fuera del instrumento; sin esta medida, el pistn podra tornarse pegajoso
y dar una medida baja.
10. Tornar el selector a la posicin de tomar, y soplar en la boquilla. No es necesario que se respire
profundamente, pero el sujeto debe vaciar sus pulmones tanto como sea posible al dar la muestra.
11. Repetir el paso 6.
12. Despus de una pausa de 90 segundos a partir del momento en que la luz roja se encienda, ajustar
el nodo de balance mientras que la luz fuente se encuentre encendida hasta que la aguja del
medidor nulo se encuentre centrada. El puntero mostrar el porcentaje de alcohol en la sangre.
Registrar la lectura.
13. Repetir los pasos 4 al 11, de manera que se sople en el Breathalyzer aproximadamente 5, 10, 15 y
20 minutos despus de enjuagar la boca con alcohol. La misma ampolla de prueba puede ser
utilizada para cada prueba.
14. Registrar en qu momento el alcohol ya no es detectable en el aliento.
PARTE B. EL INTOXILYZER
Existen diversos modelos del Intoxilyzer. Todos de basan en la absorcin de la radiacin infrarroja del
alcohol en el aliento del sospechoso.
Figura 3
El Intoxilyzer mide el contenido de etanol
en el aliento de una persona, basado en

espectroscopia de absorcin infrarroja. En el presente, filtros de interferencia aslan tres longitudes de onda,
a 3.39, 3.48 y 3.80 para medir el etanol y corregir por presencia de acetona y agua. Originalmente era
considerado, que aunque docenas de compuestos orgnicos han sido detectados en el aliento humano, la
cantidad total de los mismos era insignificante en comparacin con la presencia del etanol despus de que
una persona ha consumido una bebida alcohlica. Sin embargo, posteriormente se encontr que si una
persona es diabtica, puede encontrarse presente un exceso de acetona
lo que produce

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una lectura de
a 3.48 que en presencia solamente de etanol. El Intoxilyzer mide la frecuencia de

tensin asimtrica a 3.39 del grupo metilo, as como a la frecuencia de tensin asimtrica de 3.48
micrmetros. Un ratio de la intensidad de las dos frecuencias es utilizado para determinar si se est
midiendo nicamente etanol. Este ratio es ajustado a cerca de 1.0. El agua
tiene una fuerte banda

simtrica de tensin del grupo a 2.74 adjacente a las bandas , que se traslapa levemente
con las frecuencias del grupo metilo. Inicialmente se supuso que este fenmeno no creaba interferencia
puesto que el aliento de una persona se encuentra saturado de agua, y se asumi que el hombro de
absorcin sera constante. Sin embargo, se ha encontrado que este no es siempre el caso, por lo que un
tercer filtro fue adicionado para su correccin, a 3.80 La Figura 3 muestra el espectro de transmisin
infrarroja de etanol, acetona y agua como se muestra en la patente del instrumento.
ESCENA DEL CRIMEN
Alrededor de las 11:30 p.m., una camionetilla, desplazndose a gran velocidad en un camino de doble va,
pasa una patrulla estacionada. El polica inicia a seguir el vehculo y nota que el automvil parece cruzar lo
que juzga debera ser la divisin al centro del camino (no se encuentra marcada la lnea) en diversas
ocasiones. El conductor detiene su carro y se baja. El viento es bastante fuerte, lo que pudo dificultar el
descenso del piloto, pero el oficial decide aplicar una prueba de estado de ebriedad a la persona de
cualquier forma. El conductor falla la prueba y es llevado a la estacin. La prueba que se ha efectuado es una
de coordinacin, grabada en video, y a continuacin le ser aplicada una prueba con el Intoxilyzer. Su
trabajo es aplicar dicha prueba.
PROCEDIMIENTO
Nota: el procedimiento de esta seccin es especfico para el modelo Intoxilyzer 5000.
Puesto que no se puede permitir que un estudiante consuma alcohol previo a efectuar la prueba, se le
pedir que utilice un enjuague con contenido de alcohol, para posteriormente efectuar la prueba. El modelo
5000 detectar que no se trata de alcohol presente en los pulmones en base a su desaparicin rpida, y as
lo indicar. Sin embargo, este procedimiento permitir demostrar la operacin bsica del aparato. Esta es
una prueba tpica de blanco (aliento-aire blanco). Como se ver, esta prueba es bastante sencilla de llevar a
cabo.
Lectura Significado
1. Listo para Iniciar Insertar una nueva boquilla al final del tubo para soplar. Para inicial la prueba,
oprimir el botn de inicio en cualquier momento.
2. Insertar Tarjeta Insertar una tarjeta de evidencia en la ranura para tarjeta (parpadeante)
localizada en el panel frontal del instrumento. Asegurarse de insertar la carta
con la cara superior hacia arriba y con el borde que lee in, de acuerdo a las
instrucciones impresas en la tarjeta.
3. Blanco de Aire
4. Tiempo ##HR
##MIN

5. Fecha MM/DD/YY
6. Blanco de Aire
.000

7. >
8. Por favor, soplar
en la boquilla hasta
Solicitar al sujeto que sople en la boquilla hasta que el tono se detenga; el sujeto
tiene tres minutos para proveer una muestra de aliento adecuada.

14

que se detenga el
tono; por favor
soplar
9. Por favor soplar
.### Seguido de
Por favor soplar
0.###
De manera que una muestra de aliento adecuada sea provista, el sujeto debe
soplar por un mnimo de 4 segundos. Mientras que el sujeto sopla en la boquilla,
el instrumento hace sonar un tono continuo y despliega un mensaje en su parte
izquierda: Por favor soplar .### El nmero de tres (u opcionalmente dos)
dgitos es la concentracin medida de alcohol del sujeto medida como
porcentaje peso/volumen. El tono continuo indica que el sujeto est soplando
con suficiente presin. Cuando el cero aparece antes del valor BAC (0.###), el
sujeto ha provisto una muestra de aliento adecuada. No instruya al individuo,
sin embargo, a que deje de soplar al aparecer el 0. Si se muestra S5 como
apagado durante la prueba, el instrumento no mostrar el valor de la
concentracin de alcohol en la sangre hasta que el sujeto termine de soplar,
habiendo provisto una muestra adecuada de aliento. El instrumento no
mostrar tampoco el 0 indicando que dicha muestra es adecuada.
Si el sujeto deja de soplar antes de probar una muestra suficiente, se mostrar
la seal de Por favor soplar y se escuchar un tono cada 5 segundos. Si esto
ocurre, pedir al sujeto que sople en la boquilla hasta que el tono se detenga.
En el evento de que el sujeto falle en proporcionar una muestra adecuada
dentro de un espacio de 3 minutos, se mostrar el mensaje de Muestra
Deficiente, acompaado por un tono bajo-alto que suena intermitentemente
por cinco segundos. A continuacin, el instrumento desplegar Prueba Sujeto
.### (el BAC ms alto alcanzable de las muestras de aliento) y completar la
secuencia. En la tarjeta de evidencia, el instrumento indica el BAC ms alto
alcanzable imprimiendo un asterisco (*) antes del mensaje Prueba Sujeto
.###. El asterisco es una referencia al mensaje impreso al final de la tarjeta de
evidencia: Muestra deficiente- valor impreso es el ms alto obtenido.
10. Prueba a sujeto
.###

11. Blanco de Aire
.###

12. Prueba
Completada
Remover tarjeta de evidencia despus de que esta es liberada por el
instrumento.
13. Listo para Iniciar

Disponga de las boquillas del alcoholmetro en un recipiente para desinfectar y tratar en autoclave.
Reporte los resultados obtenidos en funcin de los valores indicados en el alcoholmetro.
Analice los resultados y concluya.

15

[1]. Borkenstein, R. F., Smith, H. W. The Breathalyzer and its Applications. Medicine, Science and the
Law. 2 (1962) pp. 13 a 22.Apellido, Nombre (Ao).

[2]. Draeger Hispania. Manual de anlisis de alcohol en el aire respirado. 2000. Madrid.

16

PRCTICA 4: PRCTICA 3: ANLISIS DE PLAGUICIDAS
ORGANOFOSFORADOS
La frecuencia con que se lee en los peridicos sobre casos graves de intoxicacin o sobre muerte de
personas o familias enteras por causa de ingestin de una sustancia desconocida ilustra la necesidad de
orientar a la poblacin en general y en particular a los usuarios de los insecticidas, ya que el descuido en el
almacenamiento, manejo y aplicacin de plaguicidas resulta altamente peligroso.
Todo plaguicida tiene cierto grado de toxicidad para los humanos. Los efectos qumicos que pueden matar
otras formas de vida son desde perjudiciales para la salud hasta letales. Los insecticidas ingresan al
organismo por va digestiva, respiratoria o drmica.
2. OBJETIVOS
Observar la presencia de insecticidas en diferentes muestras de alimentos.
4 Beakers de 25 ml
4 Beakers de 100 ml
Papel Filtro
Embudos pequeos
Estufa de plato
Micropipetas o capilares sin heparina
Cromatoplacas de Silica gel
Pipetas de 5 ml
Perillas succionadoras para pipetas
Frascos para correr las placas
Asperjador o en su defecto frasco spray o gotero
Guantes
Masking Tape
N-Hexano
Acetona
25 ml de solucin dbilmente clorhdrica de cloruro de paladio al 0.5% (revelador)
Muestra de maz
Antes de la prctica consulte las Hojas de Seguridad de cada uno de los reactivos a manipular, utilice la
campana de extraccin de gases. Utilice guantes de nitrilo, bata y lentes de seguridad durante toda la
prctica.
5. ANTECEDENTES

17

Los insecticidas pertenecen a un grupo de sustancias denominadas plaguicidas, los cuales son sustancias o
mezclas de sustancias destinadas para prevenir o controlar toda especie indeseable de plantas y animales
(plagas).
El trmino plaguicida abarca adems, cualquier sustancia que se emplea para combatir plagas durante la
produccin, almacenamiento, transporte, comercializacin o elaboracin de alimento para el hombre y los
animales o se administre a estos ltimos para combatir insectos o arcnidos que se encuentren dentro o
sobre su cuerpo.
Entre los plaguicidas ms importantes se encuentran los insecticidas organofosforados. Su mecanismo de
accin consiste en ejercer su accin txica al combinarse con colinesterasas, inhibiendo a la
acetilcolinesterasa eritroctaria y de los tejidos nerviosos.
Algunos insecticidas Organofosforados:
Paratin (Tamarn)
Etilparatin (Folidol)
Metilparatin
Malatin
6. PRE-LABORATORIO
1) Cules son los plaguicidas que ms casos de intoxicacin provocan en Guatemala?
2) El plaguicida identificado en la prctica de hoy, a qu grupo de plaguicidas pertenece?
3) Investigue cules son los signos y sntomas ms caractersticos de este tipo de intoxicaciones. No
olvide incluir referencias.
4) El anlisis de cromatografa en capa fina desarrollado en la prctica es un anlisis cualitativo o
cuantitativo? Por qu?
7. PROCEDIMIENTO
Extraccin de plaguicidas organofosforados:
1. Macerar 20 g de muestra, previamente disgregados o molidos, con n-Hexano durante 24 horas.
2. Filtrar la solucin y evaporar el solvente a sequedad.
3. Disolver el residuo en n-Hexano y sembrar en una cromatoplaca cubiertas con slicagel.
Investigacin de organofosforados (CCF)
a. Mtodo: Baumler y Ripptein
Eluentes n-Hexano:acetona (4:2)
Revelador solucin dbilmente clorhdrica de cloruro de paladio al 0.5%
b. Procedimiento:
Activar las cromatoplacas a 105C por 5 10 min.

18

Sembrar con una pipeta Pasteur en la cromatoplaca, la solucin a investigar y la solucin patrn. Dejar
secar.
Eluir con el solvente (n-hexano:acetona)
Asperjar la placa con el revelador
Deseche los residuos inorgnicos en el recipiente que se le indique.
Reporte los resultados obtenidos.
Comparando los valores de Rf obtenidos con respecto a los de los patrones, puede identificarse el
insecticida presente. Sin embargo, es necesario aclarar que esto es un test presuntivo, por lo que debe
realizarse una prueba confirmativa.
[1]. M. Calonge, Y. Prez Pertejo, C. Ordez, RM. Reguera, R. Balaa Fouce, D. Ordez.
Determinacin de residuos de siete insecticidas organofosforados en rutas mediante cromatografa
de gases con detector de nitrgenofsforo y confirmacin por espectrometra de masas Revista de
Toxicologa, vol. 19, nm. 2, cuatrimestral, 2002, pp. 55-60.

[2]. Lu FC (1995) A review of the acceptable daily intakes of pesticides assessed by the World Health
Organization. Regul. Toxicol. Pharmacol. 21: 351-364.

19

PRCTICA 5: TEST CUALITATIVO DE MARIHUANA
La marihuana y el hachs, junto a otras sustancias relacionadas, pertenece a la clase de sustancias
denominadas cannabis. En aos recientes, el consumo de marihuana por jvenes en Norte Amrica ha
alcanzado proporciones epidmicas. El inters pblico en los efectos de largo y corto plazo de la droga se ha
vuelto intenso. En 1964, el principal componente activo, el Tetrahidrocannabinol (THC) ha sido aislado y se
ha determinado su estructura. La frmula estructural del componente es:

2. OBJETIVOS
Evaluar la presencia de marihuana y sus derivados en muestras especificas mediante test de Duquenois-
Negm.
EQUIPO
16 botellas de rosca, tapas de rosca, 2 onzas;
1 cepillo para tubo de ensayo;
6 tapones de corcho para los tubos de ensayo;
1 probeta graduada de 10 ml;
1 par de lentes de seguridad;
1 microscopio estereoscpico;
1 mortero y pistilo, pequeo;
1 gradilla para tubos de ensayo;
6 varillas de agitacin de vidrio
6 tubos de ensayo de 15 cm.
REACTIVOS
Cloroformo
cido Clorhdrico concentrado (HCl)
Caf, diversas marcas
Organo
Hierba gatera
Tabaco de cigarros, cigarrillos y de pipa.
Reactivo de Duquenois (debe ser preparado)

20

Hojas o flores de marihuana.
Preparacin del Reactivo de Duquenois:
Mezclar 50 ml de etanol absoluto, 1 gramo de Vanilina y 12 gotas de acetaldehdo (fresco). Almacenar en un
refrigerador por un mximo de 3 a 4 das.
Previo a la prctica debe revisar las hojas de seguridad de cada uno de los productos a utilizar. Debe utilizar
bata, guantes de nitrilo y lentes de seguridad durante toda la prctica.
5. ANTECEDENTES
Uno de los tests cualitativos ms ampliamente utilizados para la identificacin de la marihuana es el test de
Duquenois-Negm, desarrollado en 1938. ste test presenta un color prpura como indicativo de la presencia
de marihuana. La prueba carece de especificidad, sin embargo, puesto que otras sustancias pueden tambin
producir el color prpura al ser analizadas con el mismo test. La modificacin de Levine del test de
Duquenois-Negm le hace bastante ms especfico. En el procedimiento modificado, solamente el color
prpura debido a la presencia de marihuana es extrado con cloroformo. La marihuana es una de las pocas
sustancias que presenta esta extraccin de color, y en esta forma, la versin modificada del test Duquenois
ha sido utilizada oficialmente desde 1941.
ESCENA DEL CRIMEN
El conductor de un vehculo est involucrado en un accidente de trfico resulta lesionado y es trasladado a
un hospital. Sus posesiones personales han sido removidas de su ropa, dentro de las cuales se ha
encontrado una pipa. EL oficial en la escena del accidente ha detectado lo que l pens era el olor del humo
de marihuana en el carro de la persona accidentada. La pipa le ha sido enviada a su laboratorio de
criminalstica, donde se ha obtenido una muestra del interior de la pipa y el test de Duquenois-Levine ser
ahora aplicado.
En el rea encontrar el material extrado de la pipa etiquetado como Muestra A. LA Muestra B es tabaco de
pipa. La Muestra C esta constituida de hojas molidas pertenecientes a una pipa, del que se conoce que no es
marihuana. Deber realizar el test Duquenois modificado en las tres muestras. Esto le permitir comparar el
resultado entre el tabaco, una hierba desconocida y el material sospechoso. Efecte cuidadosamente las
pruebas, puesto que los resultados sern tomados como evidencia en una situacin real.
6. PRE-LABORATORIO
Cuales mtodos existen para el anlisis forense de drogas? Describa e indique las ventajas y desventajas.
7. PROCEDIMIENTO
PARTE A. MARIHUANA, HIERBAS Y TABACO
1. Obtener una muestra del material que se sospecha es marihuana.
2. Obtener una muestra de tabaco y de la planta que se conoce que no es marihuana.

21

3. Moler las hojas y colocar cada muestra por separado en un tubo de ensayo de 15 cm. Se debe
colocar aproximadamente 1 cm de muestra de material en cada tubo de ensayo.
4. Aadir 2 ml del reactivo de Duquenois a cada tubo de ensayo, mezclar para extraer el residuo.
5. Aadir 2 ml de cido hidroclrico, mezclar, y dejar reposar por 10 minutos.
6. Observar y registrar el cambio de color de la solucin en cada tubo de ensayo en el lugar adecuado
en la hoja de datos originales.
7. Aadir 2 ml de cloroformo a cada tubo de ensayo, agitar para mezclar el contenido.
8. Colocar los tubos de ensayo en la gradilla, y permitirlos reposar hasta que los lquidos se separen.
Anotar el color de la capa de cloroformo. Un color prpura es un resultado positivo para el test en
presencia de marihuana.
9. Registrar todas las observaciones en la hoja de datos originales.
10. Lavar la cristalera, regresarla a su lugar de almacenamiento.
11. Completar la hoja de clculos y responder a las preguntas. Entregar estos resultados al instructor de
laboratorio.
PARTE B. POSIBLE INTERFERENCIA DE CAF
Ha sido reportado que algunas clases de caf devuelven un resultado positivo con el test modificado de
Duquenois de marihuana. Especficamente, las marcas Eight oCLock, Bokar, y Red Circle han sido reportadas
en este caso.
1. Obtener pequeas muestras de diferentes tipos de caf, apropiadamente etiquetados e
identificados.
2. Realizar el test de Duquenois en casa muestra, reportar los resultados.
3. En caso de obtener algn resultado positivo, repetir el test para dicha muestra.
PARTE C. IDENTIFICACIN CON MICROSCOPIO
La identificacin de la marihuana depende en buena medida de la identificacin de sus caractersticas
botnicas. LA marihuana se caracteriza por la presencia de pelos cistolticos en uno de los lados de la hoja.
Estos pelos son pequeos en longitud y tienen apariencia de garra de oso o de espinas. Confirmacin
adicional de la presencia de la marihuana se obtiene a travs de la identificacin de pelos no-glandulares de
mayor tamao en el lado opuesto del fragmento de la hoja.
En este experimento, 10 mezclas de vegetacin desconocida han sido preparadas en el laboratorio. Colocar
cada una de ellas en el microscopio estereoscpico y examinar cada espcimen por la presencia o ausencia
de marihuana. Las muestras contienen marihuana, organo, hierba gatuna, o alguna mezcla de ellas.
Registrar los resultados.
Deseche los materiales utilizados en el recipiente indicado para el efecto, no deseche nada en la basura,
excepto papel.
Elabore una tabla indicando los resultados de las pruebas (positivas o negativas)

22

Indique la confiabilidad del mtodo utilizado y su uso en anlisis forense.
[1]. Hughes, R.; Warner, V. A study of false positives in the chemical identification of marihuana drug
enforcement administration laboratory notes. Microgram, Vol. IX, No. 7, July, 1976.

[2]. Pitt, C.G.; Hemdron, R.W.; Hsia, R.S. The specificity of the duquenois color test for Marijuana and
Hashish. J. Forensic Sci., 1972, 17(4), 693-700.

23

PRCTICA 6: ANLISIS DE DROGAS TEST SPOT PARA CASOS GENERALES

Cuando se trae al laboratorio una muestra que se sospecha es una droga, una serie de pruebas spot son
realizadas en primera instancia para identificar la posible presencia de drogas y, en caso afirmativo, de qu
clase general es dicha sustancia. Diversas drogas formadoras de hbito pueden ser obtenidas en dosis
suficientemente pequeas para no ser dainas, y sin embargo encontrarse en concentracin suficiente para
dar positivo en el test adecuado
2. OBJETIVOS
Utilizar diferentes tipos de pruebas spot para la identificar la presencia de drogas.
Equipo
1 Beaker de 50 ml
1 Beaker de 250 ml
8 Frascos con gotero
1 par de Lentes de seguridad
1 Mortero y pistilo, pequeo
4 Placas con hendiduras, 3 por 4
1 Gradilla para frascos con gotero
6 Varillas de agitacin de vidrio de 10 cm
3 Esptulas
Guantes desechables

Reactivos
Hidrxido de potasio en etanol: 5 g de KOH disueltos en 100 ml de EtOH
Cloroformo
Acetato de cobalto: 0.1 g de Co(OAc)_2 4H_2 O en 100 ml de metanol seco, ms 0.2 ml de cido actico
glacial.
Tiocianato de cobalto: 2 g/100 ml de H_2 O
p-Dimetilaminobenzaldehdo: 2 g en 50 ml de etanol al 95% y 50 ml de cido hidroclrico concentrado.
Muestra estndar de las drogas a testear.
Isopropilamina: 5 ml ms 95 ml de metanol seco.
Reactivo de Marquis: 8-10 gotas de formaldehido al 40% agregados a 10 ml de H_2 SO_4; reactivo decae con
el tiempo.
Reactivo de Mecke: 0.25 g de H_2 SeO_3 en 25 ml de H_2 SO_4.
Cloruro de estao: 5 g de SnCl_2 en 10 ml de HCl, diluir a 100 ml con agua.


24

Consulte las hojas de seguridad para el manejo adecuado y disposicin correcta de los reactivos, utilice
bata, guantes de nitrilo y bata durante toda la prctica.

5. ANTECEDENTES
Si una droga se encuentra presente y se desea una identificacin definitiva, entonces se puede llevar a cabo
un proceso de separacin de capa fina, seguido de la obtencin del espectro infrarrojo.
Los tests spot ms comnmente efectuados son:
Reactivo de Marquis: usualmente se torna violeta en la presencia de alcaloides de opio, tales como herona,
morfina y codena. Las anfetaminas o estimulantes, tales como dextroanfetamina y metanfetamina, tornan
el reactivo de Marquis en un color caf-rojizo.
Tiocianato de cobalto: para los alcaloides de coca, en particular la cocana; se forma un precipitado azul
escamoso.
p-Dimetilaminobenzaldehdo (p-DMAB): forma un color azul en presencia de LSD.
Test de Duquenois: forma un color prpura en presencia de marihuana (ver prctica anterior).
Test de Dille-Koppanyi: utiliza acetato de cobalto e isopropilamina para testear presencia de barbitricos. Un
color rojo-violeta es formado por el cido barbitrico y sus derivados. Estos son sedantes. Ejemplos de ellos
son el fenobarbital, secobarbital, amobarbital y el pentobarbital.
Reactivo de Mecke: cido selenioso en cido sulfrico; se trata de un test alternativo para los alcaloides de
opio que devuelve una secuencia de cambios de color para cada alcaloide, tal como un color verde para la
codena.
ESCENA DEL CRIMEN
Tras la queja de un vecino, dos oficiales de polica llegan a una casa para calmar un disturbio. Lo que
observan en el lugar les produce la sospecha de que se han utilizado drogas. Obtienen diversas muestras de
un tazn de ponche en una mesa del cuarto y la traen al laboratorio. Su trabajo es entonces determinar si las
muestras contienen drogas, y en caso positivo, de qu tipo.
Primeramente se correr el procedimiento sobre un conjunto de muestras conocidas, para posteriormente
testear las muestras desconocidas a ser provistas por el instructor.
6. PRE-LABORATORIO
Haga un diagrama de flujo de proceso para la identificacin y anlisis de drogas de acuerdo a las
instrucciones en el procedimiento
7. PROCEDIMIENTO
Las muestras que se le proporcionarn pueden ser preparadas de alguna de estas drogas, o bien pueden ser
muestras reales. Su muestra desconocida puede contener cualquiera de las drogas listadas en la Tabla No. 1.

25

Primeramente, deber realizar cada uno de los tests indicados, posteriormente realizar los exmenes sobre
una o ms muestras desconocidas.
1. Obtener una o ms placas con hendiduras, acomodarlas de manera que sea posible realizar las
pruebas detalladas en la Figura No. 1. Se necesitar un total de 30 espacios en un arreglo de 6 x 5.
2. Obtener muestras conocidas del instructor de sustancias tales como:
a. Alcaloides de opio codena
b. LSD (si est disponible)
c. Anfetaminas dexedrina
d. Alcaloides de coca cocana
e. Barbitricos nembutol
3. Tratar cada una de las muestras como sigue: colocar unos pocos cristales o gotas de la muestra en
cada una de las hendiduras de la placa (hendiduras 1 a 5 para los alcaloides de opio; 6 a 10 para los
alcaloides de coca; 11 a 15 para LSD; etc.), como se muestra en la figura 1.
4. Aadir unas pocas gotas del reactivo de Marquis en la primera hendidura (1, 6, 11, 16, 21 y 26).
Mezclar y observar los resultados. Registrar estos resultados en la hoja de datos originales. Un color
violeta es considerado un resultado positivo para alcaloides naturales de opio.
5. En la segunda posicin (2, 7, 12, 17, 22, 27), aadir 3 gotas de Tiocianato de cobalto, esperar unos
pocos minutos. Si se forma un precipitado azul, aadir 3 gotas de cloruro de estao y agitar. Este es
un test para drogas del tipo de la cocana.
Registrar los resultados. La cocana formar un precipitado no soluble en cloruro de estao,
mientras que la novocana ser soluble.
6. En la tercera posicin (3, 8, 13, 18, 23, 28), aadir 15 a 20 gotas de agua si la muestra se encuentra
en estado slido. Aadir 10 gotas de la solucin de p-DMAB. La formacin de un color azul despus
de 10 a 20 minutos es un resultado positivo para la presencia de LSD. Registrar los resultados.
7. En la cuarta posicin (4, 9, 14, 19, 24, 29) aadir 20 gotas de solucin de acetato de cobalto y
mezclar. Aadir despus 10 gotas de solucin de isopropilamina y mezclar. Un color rojo es
caracterstico de los barbitricos.
8. En la quinta posicin (5, 10, 15, 20, 25, 30) aadir 10 gotas del reactivo de Mecke. Este reactivo
produce diferentes colores con cada droga, y usualmente el color cambia dos, tres o incluso cuatro
veces durante la prueba. Observar cuidadosamente y registrar los cambios. Referirse a la Tabla No.
1.
9. Repetir todas las pruebas anteriores en la muestra de droga desconocida. Tomar una decisin, y
registrarla en la hoja de datos.
10. Limpiar el equipo y almacenarlo en el lugar apropiado.

26

Figura No. 1.- Arreglo en la placa con hendiduras para las pruebas en general

Reactivo de
Marquis
p-DMAB
Reactivo de Mecke
Alcaloides de Opio

Alcaloides de Coca

LSD

Barbitricos

Anfetaminas

.Tabla No. 1.- Pruebas de Color para Drogas Selectas
Droga Reactivo de
Marquis
Tiocianato de
Cobalto
Isopropilamina
Acetato de Cobalto
cido Selenioso p-DMAB
Morfina Violeta
Codena Rojo-violeta a azul-
violeta
Verde a azul
verdoso

Dihidrocodena Amarillo a naranja
a caf a violeta
Amarillo a verde
Narcotina Violeta que se
difumina

Papaverina Rosa a azul Verde a azul
Herona Violeta
Cocana Precipitado azul
insoluble en SnCl2

Novocana Precipitado azul
soluble en SnCl2

Demerol Amarillo a verde
oscuro

Metadona Ningn color Precipitado azul Rosa
LSD Azul
Nembutol Rojo-violeta
Fenobarbital Rojo-violeta
Seconal de Sodio Rojo-violeta
D-anfetamina-SO4 Rojo-naranja a caf
cido
acetilsaliclico
Rojo, transcurridos
15 minutos

Descarte los desechos en el recipiente indicado para el efecto.
En una tabla reporte los resultados de las pruebas realizadas a las muestras que se le proporciono indicando
si el resultado fue: POSITIVO, NEGATIVO o si existieron FALSOS POSITIVOS O FALSOS NEGATIVOS.
1 2
6 7 8 9 1
0
5 4 3
1
1
1
6
2
1
1
2
1
7
2
2
1
3
1
8
2
3
1
4
1
9
2
4
1
5
2
0
2
5

27

Concluya sobre la confiabilidad de los tests en el anlisis forense y la posibilidad de procesar como resultado
de la aplicacin FALSOS POSITIVOS O FALSOS NEGATIVOS.
[1]. Drugs Working Group of the European Network of Forensic Science Institutes (ENFSI) and UNODC
(2009), Guidelines for representative drug sampling, disponible en:
www.unodc.org/unodc/en/scientists/guidelines-on-representative-drug-sampling.html).

[2]. Jackson, B.P. and Snowdon, D.W. (1968), Powdered Vegetable Drugs, J&A Churchill Ltd., London

28

PRCTICA 7: ANLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO
DE MATERIALES QUE CONTIENEN COCANA
Cuando se trata de identificar una droga que ha sido confiscada y se presume que normalmente esta
contenida en un material sospechoso, el anlisis debe enfocarse en la determinacin de al menos dos
parmetros no correlacionados, de los cuales uno de ellos debera proporcionar informacin acerca de la
estructura qumica de la sustancia analizada.
En cualquier caso, al seleccionar los parmetros deber tomarse la droga en cuestin y los recursos con los
que cuenta el laboratorio para el anlisis.
2. OBJETIVOS
Utilizar un mtodo de anlisis cualitativo para muestras confiscadas con materiales sospechosos.
Utilizar un mtodo cuantitativo para la identificacin de cocana en muestras compuestas de materiales
sospechosos.
Portaobjetos
Varilla de agitacin
cido Clorhdrico
Para el ensayo de Scott:
a) Reactivo 1: Disolver 1,0 g de tiocianato de cobalto en 50 ml de cido actico al 10% (vol / vol), y
aadir 50 ml de glicerina.
b) Reactivo 2: cido clorhdrico (concentrado)
c) Reactivo 3: Cloroformo
Precaucin 1
Precaucin 2
5. ANTECEDENTES
Muestreo de sustancias sospechosas
El objetivo es conseguir que un anlisis quimico sea preciso., y ya que los mtodos cualitativos o cuantitavios
que usan los laboratorios forenses disponen de porciones de material muy pequeos, es importante que las
porciones sean representativas de la masa de la que han sido extraidas. El muestreo debe realizarse con

29

arreglo a los principios que determinan las farmacopeas. Tambien puede considerarse un mtodo de
muestreo descrito en: Guidelines on Representative Drug Sampling (http://www.unodc.org/
unodc/en/scientists/publications_manuals.html).
Si la sustancia incautada exhibe caracteristicas externas evidentes, es preferable utilizar el metodo de
muestreo basado en el modelo de Bayes en lugar delmodelo hipoegeometrico.
Ensayos presuntivos de determinacin de cocana
Los ensayos presuntivos son procedimientos rpidos diseados para indicar la la presencia o ausencia de
determinadas clases de drogas en la muestra y eliminar rpidamente las muestras negativas.
Buenas tcnicas de ensayo presuntivas aumentan la probabilidad de obtener un resultado verdadero y
reducen al mnimo la probabilidad de obtener un falso positivo. Sin embargo, los ensayos presuntivos no se
consideran suficientes para la identificacin de drogas y resulta necesario confirmar los resultados mediante
otros ensayos de laboratorio.
Ensayo del color
los ensayos del color los resultados positivos nicamente son indicios de la posible presencia de cocana. Las
reacciones del color se deben a compuestos que tienen una estructura qumica concreta. Sin embargo el
color obtenido en un determinado ensayo puede variar en funcin de las condiciones en que se realiza, la
cantidad de sustancia empleada y la presencia de material extrao en la muestra.
Los ensayos del color utilizados para determinar la cocana son especialmente propensos a dar falsos
positivos.
6. PRE-LABORATORIO
Consulte las referencias descritas en la seccin de antecedentes y proponga dos mtodos de muestreo de
sustancias sopechosas.
7. PROCEDIMIENTO
PARTE A: Ensayo de Scott
Mtodo
1. Colocar una pequea cantidad (no ms de 1 mg) del material sospechoso en un tubo de ensayo. Aadir
cinco gotas del reactivo 1 y agitar el tubo de ensayo durante diez segundos. La cocana y sustancias
conexas producen un precipitado azul y una solucin azul.
2. Aadir una gota del reactivo 2 y agitar la mezcla durante algunos segundos. La solucin azul debera
volverse rosa. Si el color azul no vara, adase otra gota. Si el color sigue sin alterarse, repetir el ensayo
con una muestra ms pequea de material sospechoso.
3. Aadir cinco gotas del reactivo 3 y agitar. Si hay cocana presente, la capa inferior de cloroformo se
volver de un intenso color azul, mientras que la capa superior adquirir una tonalidad rosa.
OBSERVACIONES: Es importante utilizar una muestra inferior a 1 mg. Tomar en cuenta que la relacin entre
la cantidad utilizada de los reactivos 1 y 2 s lo es. Si agrega una cantidad excesiva de cido clorhdrico al

30

reactivo 1 despus de aparecer el color azul con la cocana, la solucin resultante ser de color azul en lugar
de rosa.
PARTE B: 5.3.1.2 Ensayo del olor
La actividad biolgica de la cocana no posee un olor caracterstico, sin embargo cuando se mezcla con
algunos reactivos especficos existe una transferencia de la funcin benzoica de la cocana desde la
metilecgonina al metanol y que se logra en presencia de hidrxido sdico o potsico metanlico seco. La
evaporacin del exceso de metanol deja un residuo que contiene benzoato metlico el cual resulta
fcilmente identificable por su olor.
Reactivo
Disolver 1 g de potasio o de hidrxido sdico en 20 ml de metanol para obtener hidrxido sdico o potsico
metanlico.
Mtodo
1. Humedecer completamente el material seco objeto del ensayo con el reactivo.
2. Dejar que se evapore el exceso de alcohol, comparar el olor caracterstico de la muestra con el del
patrn de cocana.
PARTE C: Ensayo de microcristales
Ensayo con cloruro de platino: Disolver un 1 g de cloruro de platino en 20 ml de agua destilada.
1. Colocar dos gotas de la solucin muestra (unos 2 3 mg de muestra / 5 gotas de cido clorhdrico al
10%) en un portaobjetos de microscopio limpio.
2. Colocar dos gotas del reactivo cerca de las gotas de muestra y utilizar una varilla de agitacin para
crear un pequeo canal que conecte ambas soluciones.
3. Observar la reaccin y los cristales resultantes, sin colocar un cubreobjetos, a una ampliacin de
entre 100 y 200 aumentos en un microscopio.
Observaciones:
La cocana forma agujas finas, largas y en forma de V con ramificaciones.


31

Disponga los residuos en los recipientes rotulados para el efecto.
Registre los datos y observaciones realizadas durante la prctica.
Indique la confiabilidad de los mtodos empleados para la identificacin de cocana. Son tiles para el
anlisis e investigacin forense?
[1]. Manual para el uso de los laboratorios Nacionales de anlisis de estupefacientes: Mtodos
recomendados para la identificacin y el anlisis de cocana en materiales incautados. Oficina de
las Naciones Unidas contra la Droga y el Delito. Disponible en:
http://www.unodc.org/documents/scientific/Cocaine_S.pdf

[2]. Rapid Testing Methods of Drugs of Abuse (ST/NAR/13/REV.1), United Nations, New York (1995).

[3]. Tsumura, Y., T. Mitome y S. Kimoto, False positives and false negatives with a cocaine-specific field
test and modification of test protocol to reduce false decision. Forensic Science International, 155
(2005), 158-164.

[4]. 11. Grant, F. W., C. Martin y R. W. Quackenbush, A simple sensitive specific field test for cocaine
based on the recognition of the odour of methyl benzoate as a test product. Bulletin on Narcotics,
27 (1975), 33-35.

32

PRCTICA 8: IDENTIFICACIN DE DROGAS EN GENERAL CON KITS ESPECFICOS
Existen kit comerciales especficos para poder identificar la naturaleza de varios tipos de drogas. Este tipo de pruebas
aunque presuntivas permiten hacer una optimizacin de recursos de anlisis y el uso correcto de los indicios fsicos
encontrados ya que en muchos casos estas muestras tienden a ser recolectadas en cantidades limitadas. Por lo tanto es
necesario realizar una prueba presuntiva antes de enviar las muestras al laboratorio forense para su identificacin final.
2. OBJETIVOS
Reconocer los kits comerciales usados para realizar pruebas presuntivas de drogas en general.
Evaluar los resultados de las pruebas (positivas, negativas, falsos positivos o falsos negativos)
previo a decidir a qu tipo de anlisis final sern sometidos los indicios fsicos.
Muestras de material sospechoso
Kit varios de anlisis rapido de drogas
Disponga del material utilizado en el lugar que le indique el instructor, deseche los guantes en los
recipientes destinados para ello, deje limpio su lugar de trabajo. Antes de salir lvese las manos con
abundante agua y jabn.
5. ANTECEDENTES
6. PRE-LABORATORIO
1. Cul es la composicin qumica de los kits comerciales utilizados para identificacin de drogas?
2. Qu ventajas tiene el uso de los kits comerciales? Que desventajas?
3. Que aporte tiene este tipo de kit comerciales a la investigacin y anlisis de indicios fsicos?
7. PROCEDIMIENTO
1. Seleccione la muestra que va a analizar
2. El instructor le proporcionara los kits comerciales para proceder a la identificacin de los fluidos
3. Revise el instructivo de aplicacin segn indique cada kit y reptalo en el orden indicado
4. Anote los resultados
5. Repita el procedimiento con una muestra que contenga una muestra de origen desconocido y
comprelo con las muestras que tienen los otros equipos de trabajo.

33

Anote lo que observo durante la prctica de aplicacin de los kits comerciales. En forma de tabla presente
los resultados obtenidos, incluyendo los resultados de la muestra desconocida.
Despus de comparar las muestras con el resto de los equipos de trabajo anote sus conclusiones.
[1]. Manuales de uso de productos de investigacin forense, visitar: www.sirchie.com,
http://www.sirchie.com/Assets/Manuals/pdf/TB300_TB03-246ENG.pdf

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