GHIDUL DE STUDIU

Catedra Microbiologie - Medicin General An II

Lucrri practice semestrul I


Tabla de materii:

LP 1 Sterilizarea i dezinfecia................................................................................................ 1
LP 2 - Recoltarea produselor patologice ................................................................................ 2
LP 3 - Preparate microscopice. Coloraia simpl. Coloraia Gram ...................................... 3
LP 4 - Coloraia Ziehl-Neelsen. Coloraii speciale ................................................................. 4
LP 5 - Medii de cultur ........................................................................................................... 5
LP 6 - Teste biochimice utilizate pentru identificarea bacteriilor ......................................... 6
LP 7 - Reacii antigen-anticorp. Generaliti. Reacia de aglutinare. Reacia de precipitare
.................................................................................................................................................. 7
LP 8 - Reacia de fixare a complementului (RFC). Reacii antigen-anticorp cu reactani
marcai: IF; ELISA ................................................................................................................. 9
Reacia de fixare a complementului (RFC) .............................................................................. 9
Teste care utilizeaz vizulalizarea complexelor antigen-anticorp prin artificii tehnice............ 9
LP 9 - Antibiograma metoda difuzimetric ...................................................................... 10
LP10 Antibiograma metoda E-test, metoda diluiilor (CMI) ........................................ 11
LP 11 - Schema de diagnostic etiologic n bolile infecioase ................................................ 12
LP 12 - Diagnostic de laborator n infeciile produse de Enterobacterii
LP 13 Diagnosticul de laborator in infectiile de Enterobacterii oportuniste Error! Bookmark
not defined.
LP 14 Diagnosticul de laborator in infectiile de Enterobacterii cu patogenitate certa .Error!
Bookmark not defined.
Resurse bibliografice ................................................................... Error! Bookmark not defined.

LP 1 Sterilizarea i dezinfecia
Sterilizarea
Definiie
- este procedeul prin care sunt ndeprtate sau distruse toate microorganismele (forme
vegetative i spori) de pe suprafaa i din interiorul unor obiecte.

Pregtirea obiectelor pentru sterilizare.

Metode de sterilizare:
1. Sterilizarea prin caldur (uscat sau umed)
a) Caldura uscat:
- nclzirea la incandescen

- Sterilizarea cu aer supranclzit ( cuptorul Pasteur = Poupinel)

b) Caldura umed:
- sterilizarea prin vapori sub presiune ( autoclavare )

2. Sterilizarea cu substane chimice
3. Sterilizarea cu radiaii ionizante
4. Sterilizarea prin filtrare

La fiecare metod se precizeaz parametrii se sterilizare, materialele care pot fi
sterilizate prin metoda respectiv i metodele utilizate pentru control.

Dezinfecia
Definiie
- distrugerea i/sau ndeprtarea numai a anumitor microorganisme (n special a celor
patogene) de pe suprafaa i din interiorul unor obiecte.

Metode de dezinfecie:
1. Dezinfecia prin cldur
a) Cldur uscat:
- Flambarea
b) Cldur umed:
- fierberea
- pasteurizarea
- tindalizarea
- sterilizarea cu vapori cureni

2. Dezinfecia prin radiaii
3. Dezinfecia cu substane chimice. Antiseptice i dezinfectante, grup heterogen de substane
care nu se supun principiului toxicitii selective.
ntrebri de control:

1. Sterilizarea prin caldura uscata:
a) se face prin autoclavare;
b) se utilizeaza pentru sterilizarea sticlariei de laborator;
c) se utilizeaza pentru sterilizarea
instrumentarului chirurgical;
d) se utilizeaza pentru sterilizarea ansei
bacteriologice
e) se poate efectua prin incalzirea la incandescenta;

2. Flambarea este utilizata pentru sterilizarea:
a) medii de cultura cu zaharuri;
b) gatul eprubeteleor si baloanelor in momentul utilizarii;
c) seringi de unica utilizare dupa intrebuintare;
d) material infectios ( culture microbiene, produse patologice);
e) pipete gradate si pipette Pasteur inainte de utilizare.

LP 2 - Recoltarea produselor patologice

Diagnosticul etiologic depinde n mare masur de recoltarea corect i nsmnarea pe
medii corespunztoare a probelor patologice.

Pentru fiecare boal infecioas trebuie cunoscut:
DE UNDE/ CUM/ CND/ CT- se recolteaz
DE UNDE- selectarea produsului patologic se face n raport cu localizarea infeciei
(poarta de intrare, ci de diseminare, ci de eliminare)

CUM- tehnica corect de recoltare
CND momentul se stabilete n raport cuperioada evolutiv a bolii i obligatoriu
nainte de administrarea de chimioterapice
CT- exist o cantitate suficient pentru examenul bacteriologic/serologic

Definiia produsului patologic
Reguli generale de recoltare
- Prelevarea produsului patologic se face steril
- Proba patologic se eticheteaz
- Proba patologic prelevat n teren se ambaleaz corespunztor
- Expedierea la laborator se face ct mai rapid asigurnd condiii de temperatur,
aerare sau anaerobioz corespunztoare
- Insmnarea pe medii de cultur adecvate se va face ct mai repede dup
recoltare i, dac este necesar chiar la patul bolnavului
Recoltarea produselor patologice de la bolnavi sau purttori
- de la nivelul tractului respirator
- de la nivelul tubului digestiv
- de la nivelul tractului genito-urinar
- sngele
- lichidul cefalorahidian
- puroiul
- fragmente de esut
ntrebri de control:

1. Urina in vederea efectuarii uroculturii, se recolteaza:
a) Prin metoda jetului intrerupt
b) Din prima urina de dimineata
c) Dupa toaleta riguroasa a organelor genitale externe
d) In orice moment al zilei
e) Intotdeauna seara

2. In microbiologie se utilizeaza pentru diagnosticul etiologic al unei boli infectioase:
a) Preparatul nativ
b) Preparatul frotiu
c) Preparatul colorat Gram
d) Preparatul colorat Ziehl-Neelsen
e) Preparatul colorat Moeller

LP 3 - Preparate microscopice. Coloraia simpl. Coloraia
Gram
Tipuri de preparate microscopice:
1. Preparatul nativ:
- Definiie
- Aplicaii n microbiologie
2. Frotiul
- Definiie
- Timpii de executie ai frotiului
- Aplicaii n microbiologie
Coloraia simpl
- se face cu albastru de metilen sau cu fucsin
- Este utila in diagnosticul prin ex. microscopic direct din produsul patologic n gonoree,
meningita cerebrospinal epidemic etc.

Coloraia Gram
- permite clasificarea bacteriilor n Gram-pozitiv i Gram-negativ pe baza diferenelor de
structur ale peretelui celular
- tehnica de colorare
1. frotiul fixat este acoperit cu violet de genian : 1-2 min.(Se spal cu ap de la robinet).
2. se acoper cu o soluie de lugol pentru mordansare, 2 min.(Se spal cu ap).
3. decolorare cu alcool-aceton timp de 20 sec, pn nu se mai dizolv colorant. (Se spal
cu ap).
4. se recoloreaz cu fuxin diluat/ safranin , 2 min.( Se spal cu ap)
5. se usuc frotiul i se examineaz cu imersie.

Care este importana n diagnosticul de laborator a coloraiilor studiate?
ntrebri de control:
1. Coloratia Gram evidentiaza:
a) coci asezati in gramezi;
b) coci asezati in lanturi;
c) bacilli asezati in lanturi;
d) bacilli asezati izolat;
e) coci asezati in diplo;

2. Coloratia Gram:
a) in coloratia Gram decolorarea se face prin tratare cu alcool-acetona;
b) decolorarea se face cu acid-sulfuric si alcool etilic;
c) se foloseste fuxina concentrate la cald;
d) evidentiaza proprietatea de acido-alcoolo rezistenta;
d) lugolul are rol de mordant;

LP 4 - Coloraia Ziehl-Neelsen. Coloraii speciale
Coloraia Ziehl-Neelsen
- evideniaz bacili acido-alcoolo rezisteni (BAAR) genul Mycobacterium
- timpii coloraiei (se pornete de la preparatul etalat, uscat i fixat):

- se acoper lama cu fucsina concentrat 5-10 min. i se nclzete pn la emisia de vapori
(nu se ajunge la fierbere)
- se decoloreaz cu acid sulfuric 20% - 30 sec ( se spal cu ap)
- se decoloreaz cu alcool etilic 96% pn la ndepartarea colorantului - 30 sec (se spal cu
ap)
- se recoloreaz cu albastru metilen 2 min.
- se spala frotiul cu ap
- se lasa la uscat in stativ

Citirea si interpretarea:
- se folosete obiectivul de imersie
- Micobacteriile (bacilul tuberculos, bacilul leprei) apar colorate in rosu pe fond albastru =
bacili acido-alcoolo rezistenti = BAAR, celelalte specii i elementele celulare apar colorate n
albastru.
Coloratii speciale
1. Coloraia pentru capsul (metoda Burri)- cu tu de China = pe fond negru bacteriile apar
colorate in rosu, cu o zona clar, incolor n jur (aceasta zon corespunde capsulei, care
nu se coloreaz).
2. Coloraia Mller pentru spori = sporii se coloreaz n rou, formele vegetative n
albastru.
3. Coloraia cu verde malachit i safranin pentru spori = sporii se coloreaz n verde,
formele vegetative n rou.
4. Coloraii pt. cili: metoda Leifson i impregnare argentic Zettnov.
5. Coloraia Neisser pentru evidenierea corpusculilor Babe-Ernst la Corynebacterium
diphteriae.

6. Coloraia Fontana Tribondeau pentru spirochete.
ntrebri de control:
1. Pe un frotiu din sputa colorat Ziehl- Neelsen:
a) bacteriile Gram(+) apar in albastru;
a) bacteriile Gram(-);
b) leucocitele apar rosii;
c) bacteriile acido-alcoolo rezistente apar albastre;
d) Mycobacterium se coloreaza in rosu.

2. Caracterul de acido-alcoolo rezistenta este
prezent la la genul:
a) Staphylococcus;
b) Mycoplasma;
c) Mycobacterium;
d) Bacillus.
e) Streptococcus

LP 5 - Medii de cultur
Definiie
Condiiile pe care trebuie s le ndeplineasc orice mediu de cultur
pentru ca s poat fi utilizat
Cum se obine un mediu de cultur etape
Clasificarea mediilor de cultur:
- Dup consisten: lichide, solide, semisolide
- Dup provenien: naturale, sintetice
- Dup compoziie i scop: simple, complexe i speciale
Clasificarea mediilor de cultur:
- medii complexe
- de utilitate general: uzuale, cu proteine native
- medii speciale, pentru izolarea i identificarea anumitor bacterii
- selective
- de mbogire
- pentru cultivarea bacteriilor anaerobe
- pentru cultivarea fungilor
- pentru teste biochimice
nsmnarea produselor patologice i izolarea n cultur pur
nsmnare = punerea n contact a unei culturi bacteriene sau a unui produs patologic
cu mediile de cultur.
Tehnici de nsmnare
- Tehnica nsmnrii prin epuizare:
Scop: obinerea coloniilor izolate, folosite n continuare pentru obinerea de
cultur pur
- nsmnarea prin nepare (pe medii solide aflate n tuburi)
- nsmnarea n pnz
Caracterele culturilor microbiene
- n mediu lichid
- Pe mediu solid
Colonii S (smooth), exemple
Colonii R (rough), exemple

ntrebri de control:
1. Hemoliza poate fi evidentiata pe:
a) Geloza sange
b) Muller-Hinton
c) Lowenstein-Jensen
d) Levin
e) Drigalski

2. Medii de cultura pentru fungi pot fi:
e) Drigalski
f) Geloza-socolatie
g) Muller-Hinton
h) Sabouraud
i) Lowenstein-Jensen

LP 6 - Teste biochimice utilizate pentru identificarea
bacteriilor
Bacteriile pot fi identificate i prin comportarea lor metabolic, prin produsele care rezult
n urma reaciilor biochimice.

I Teste rezultand din metabolismul energetic bacterian
1. Precizarea tipului de respiraie.
Cultura se nsmaneaz prin ncorporare n geloz Veillon n tuburi Weinberg. Bacteriile
strict aerobe se dezvolt numai la suprafa (B.subtilis),cele anaerobe (Clostridium perfringens)
numai n profunzime,zona de la suprafa unde mai e dizolvat oxigen rmannd fara cultur,iar
bacteriile aerob-anaerob-facultative se dezvolt n toat coloana mediului (Enterobacteriaceae).
2. Proba oxidrii si fermentrii pune n eviden capacitatea unei bacterii de a
degrada un substrat (zahr, polialcool, etc.) pe cale oxidativ fermentativ sau prin ambele
modaliti. Se utilizeaz o geloz semimoale, tamponat cu adaos de glucoz sau alt substrat i un
indicator de pH (albastru de brom-timol) .
Bacteriile care degradeaz oxidativ glucoza (Pseudomonas aeruginosa) vireaz n galben
numai la suprafa. Bacteriile care degradeaz oxidativ i fermentativ glucoza vor vira n galben
toat coloana mediului iar cele care degradeaz numai fermentativ glucoza vireaz culoarea
mediului n galben numai n profunzime (Clostridium).
3. Cercetarea catalazei. Catalaza este o enzim care scindeaz apa oxigenat n
oxigen i ap, fiind prezent la bacteriile cu metabolism oxidativ. Stafilococul este catalazo-
pozitiv, iar streptococul este catalazo-negativ.
4. Reducerea nitratilor n nitriti. Aceast proprietate se pune n evidena prin
cultivarea bacteriei n ap peptonat ce conine 0,1 % nitrat de potasiu.
5. Testul oxidazelor se aplic la identificarea meningococilor i gonococilor.

II Teste rezultnd din tipurile fermentative
1. Testul rou metil evideniaz fermentarea glucozei cu scderea pH-lui sub 5.
2. Testul Voges-Proskauer pune n eviden fermentarea acetoinic a glucozei.
3. Testul beta-galactozidazei. Pentru identificarea multor bacterii, degradarea
lactozei prin beta-galactozidaz are mare importan, dar n aceast degradare alturi de enzim
intervine i sistemul de transport (permeaza) pentru lactoz.
4. Testul fermentrii carbohidrailor se urmrete n ap peptonat la care se
adaug un carbohidrat (glucoza, lactoza, manitol, maltoz, zaharoz, etc.) n proporie de 1% i un
indicator de pH. n urma fermentrii carbohidrailor mediul ce acidific i indicatorul de pH
vireaz n culoarea corespunzatoare zonei acide.

III. Teste rezultate din metabolizarea compusilor azotai
1.Testul indol. La unele bacterii (E.coli) exist triptofanaz, enzim ce scindeaz
triptofanul n indol, acid piruvic i amoniac.

2. Decarboxilazele aminoacizilor (lizina, arginina, ornitina) se cerceteaz n ap
peptonat cu adaos de aminoacid i un indicator de pH.
3. Producerea de hidrogen sulfurat pune n eviden descompunerea
aminoacizilor cu sulf n special sub aciunea cistein-desulfhidrazei.
4. Evidenierea L- i D-fenilalanindezaminazei. Aceste enzime scindeaz L
respectiv D-fenilalanina cu formare de acid fenilpiruvic, care cu clorura feric da o culoare verde.
5. Testul ureazei. Ureaza este o enzim care descompune ureea n amoniac i dioxid de
carbon.

IV. Teste rezultate din necesiti nutritive minimale
1. ntrebuinarea citratului pe mediul Simmons. Bacteriile din genul Klebsiella i
Salmonella cresc pe acest mediu utilizand citratul ca unic surs de carbon. Escherichia coli neavnd sistem
de transport pentru citrat nu se dezvolt pe acest mediu.
2. Dezvoltarea pe mediul cu acetat. E.coli folosete acetatul ca unic surs de carbon
(prin ciclul glioxilic) i se dezvolta pe un mediu minimal ce conine acetat de sodiu ca unic sursa de carbon i
un indicator de pH. Prin acest test fi diferentiat genul Escherichia de genul Shigella, care nu poate utiliza
acetatul ca unica sursa de carbon.
ntrebri de control:
1. Testele biochimice :
a) Permit identificarea bacteriilor
b) Ne ajuta la stabilirea tratamentului ce trebuie utilizat intr-o anumita infectie
c) Au la baza fenomenul de degradare a unor substraturi de catre bacterii
d) Sunt necesare in vederea identificarii bacteriilor din Genul Staphylococcus
e) Sunt necesare doar pentru identificarea bacteriilor acido-alcoolo rezistente

2. Studierea proprietatilor biochimice:
a) Reprezinta o etapa a diagnosticului de laborator intr-o boala infectioasa
b) Reprezinta o etapa a diagnosticului clinic al unei boli infectioase
c) Este importanta pentru stabilirea genului bacterian
d) Este importanta pentru stabilirea speciei bacteriene
e) Este neimportanta in microbiologie
LP 7 - Reacii antigen-anticorp. Generaliti. Reacia de
aglutinare. Reacia de precipitare

Aglutinarea bacterian
Definiie
- este o reactie antigen-anticorp de agregare, n care antigenul este reprezentat de celule
bacteriene sau fragmente de celule bacteriene n suspensie (antigen particulat). Sub aciunea
anticorpilor specifici, complexele imune antigen-anticorp formeaz reele tridimensionale n
prezenta unor electrolii din mediu i n anumite condiii de temperatura i pH, constituind agregate
vizibile. Reactia de aglutinare se foloseste n identificarea unor bacterii pe baza proprietilor
antigenice, ct i pentru evidenierea anticorpilor aglutinani din serul de bolnav.

Tehnici de efectuare a reaciei de aglutinare

1. Aglutinarea pe lama. Se folosete preponderent n diagnosticul direct bacteriologic ,
pentru identificarea rapid pe baza proprietilor antigenice a unor tulpini izolate din produsul
patologic (n primul rnd bacterii gram-negative) i mai puin n diagnosticul indirect serologic.
Aglutinarea pe lama d relaii de ordin calitativ, evideniind o coresponden ntre serul
imun folosit i antigenul de identificat. Este o reacie de orientare i se continu cu o reacie de
aglutinare n tuburi pentru confirmare.


2. Aglutinarea n tuburi se efectueaz de obicei n 6 eprubete n care se realizeaz diluii
crescnde din serul imun standard sau din serul de cercetat.
n aglutinarea bacterian, dup natura i localizarea antigenului care particip la reacie,
exist dou tipuri principale de aglutinare: somatic sau aglutinare O i ciliar sau aglutinare H.
Reacia de aglutinare n tuburi se folosete n dou scopuri principale : pentru identificarea
unui microorganism (antigen) izolat dintr-o infecie i n diagnosticul serologic al unei infecii
pentru evidenierea anticorpilor din serul de bolnav fa de un antigen standard.
Cele mai importante reacii de aglutinare folosite n diagnosticul serologic al bolilor infecioase sunt:
reacia Widal, n febra tifoid i febrele paratifoide, reacia Wright n bruceloz i reacia Weil-Felix n tifosul
exantematic i alte rickettsioze.

3. Reacia de aglutinare pasiv sau aglutinarea pe suport se utilizeaz atunci cnd antigenul este o
soluie molecular. n urma fixrii pe un suport particulat acesta devine aglutinabil n prezena serului imun.
Reaciile

se pot folosi att la identificarea unui antigen, ct i la cercetarea anticorpilor corespunztori folosind
un antigen cunoscut.
- latex aglutinare
- hemaglutinare (ex: TPHA test de confirmare n diagnosticul sifilisului)

REACIA DE PRECIPITARE
Definiie
- este o reacie antigen-anticorp de agregare, n care antigenul este reprezentat de macromomolocule
n soluie coloidal. Punerea n contact a antigenului cu anticorpul corespunztor duce la formarea unor
complexe antigen-anticorp care precipit atunci cand elementele ce particip n reacie se gsesc n proporie
optim.
Tipuri de reacii de precipitare
1. Reacia de precipitare inelar
- se folosete n diagnosticul bolilor infecioase - reacia Vincent-Bellot i Ascoli
- n industria alimentar pentru a diferenia originea crnii sau a produselor de carne date n comer
- n medicina legal pentru a identifica originea petelor de snge (specia de la care provin)|
2. Reacia de floculare
- este o reacie n care precipitarea apare prin amestecul antigenului cu serul imun (n toat
masa amestecului) sub form de flocoane. Aceast reacie se utilizeaz n principal pentru
titrarea toxinelor microbiene i a serurilor antitoxice pornindu-se de la observaia c
flocularea apare prima dat n eprubeta n care exist proporie optim de antigen i
anticorp (reacia de floculare Ramon).
- VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) n diagnosticul sifilisului

3. Precipitarea n gel utilizeaz gel de agar sau agaroz ca mediu n care unul sau ambele elemente
care intr n reacie (antigen i anticorp) difuzeaz.
- difuzia simpl (difuzeaz numai unul din reactani, cellalt gsindu-se nglobat n mediul
de difuzie)
- difuzia dubl n care ambii reactani difuzeaz i formeaz linii de precipitare la locul de
ntalnire
- difuzia n camp electric
- imunoelectroforeza (IEF) este o metod care asociaz principiul
electroforezei (EF) cu principiul difuziunii n gel
- contraimunelectroforeza
ntrebri de control:
1. Tipuri de aglutinare in tuburi:
a) Reactia Weil-Felix
b) Reactia Widal
c) Reactia Wright
d) Reactia de aglutinare somatica
e) Reactia de aglutinare flagelara


2. Tipuri de reactii de precipitare pot fi :
a) Precipitarea inelara
b) Reactia de floculare
c) Reactia Ascoli
d) Reactia de fixare a complementului
e) Reactia Vincent-Bellot
LP 8 - Reacia de fixare a complementului (RFC). Reacii
antigen-anticorp cu reactani marcai: IF; ELISA
Reacia de fixare a complementului (RFC)
Definiie - este o reacie antigen-anticorp cu participarea complementului. Evidenierea
reaciei se face utiliznd sistemul hemolitic.
Tehnici
1. Bordet - Wassermann: era utilizat n diagnosticul serologic al sifilisului (reacia Bordet-Wassermann
n bruceloz, tuse convulsiv, etc
2. Ida Bengston : folosit n diagnosticul leptospirozelor, rickettsiozelor, a infeciilor cu chlamydii, etc.
3. Kolmer. sau fixarea complementului la rece
4. Breadstreet i Taylor, larg aplicat n ultimul timp n infeciile virale, infecii cu mycoplasme
,
febr Q
Teste care utilizeaz vizulalizarea complexelor antigen-anticorp prin artificii
tehnice
Sensibilitatea reaciilor antigen-anticorp poate fi mrit legnd de anticorp (mai rar de antigen) un
marker care poate fi:
a. o substan fluorescent (izotiocianat de fluorescein

rodamin), n tehnica imunofluorescenei (IF)
b. izotopi radioactivi (de obicei I
125
), n metoda radio-imunotestrii (RIA)
c. o enzim (peroxidaz, beta-galactozidaz, fosfataza alcalina etc.), n testele imunoenzimatice
(ELISA).
ntrebri de control:
1. Tehnici ce au la baza reactia de fixare a complementului:
a) tehnica Wassermann
b) tehnica Ida-Bengston
c) tehnica Breadstreet si Taylor
d) Ascoli
e) Widal
LP 9 - Antibiograma metoda difuzimetric
Antibiotice: efect bacteriostatic i efect bactericid
Definiia antibiogramei
- metod de laborator folosit pentru testarea sensibilitii unei tulpini bacteriene izolate
dintr-un produs patologic fa de diverse antibiotice.
Metode folosite pentru testarea sensibilitatii in vitro la antibiotice
1. metode calitative
a. metoda difuzimetric Kirby Bauer - clasic
b. metoda cu antibiotic incorporat in mediu semisolid kit-ul comercial ATB
Biomerieux, Franta modern

2. metode cantitative
a. metoda diluiilor n mediu lichid - clasic
b. metoda Etest AB BIODISK , Suedia modern

1.a Metoda difuzimetric (Kirby-Bauer)
Principiul metodei:
- antibioticul difuzeaz n mediu i inhib multiplicarea bacteriilor n funcie de
gradientul de concentraie
Tehnica de lucru
Interpretare (sistemul SIR sensibil, intermediar sensibil, rezistent)

1.b Metoda cu antibiotic incorporat in mediu semisolid kit-ul comercial ATB
Biomerieux, Franta
Principiu
Galeria ATB permite determinarea sensibilitii microbiene la un set de agenti antibacterieni /
antifungici , incorporate ntr-un mediu semisolid. Este alctuit din 16 perechi de godeuri, din
care 4 nu conin antibiotice i sunt martori de cretere.
Celelalte perechi de godeuri conin diferite antibiotice n cite dou concentraii (c =
concentratie mai mica i C = concentratie mai mare) pentru a putea eticheta fiecare tulpin
testat ca fiind sensibil, intermediar sau rezistent.
Citire si Interpretare
- Dac nu exist cretere la nici o concentraie nseamn tulpin sensibil, daca exista
cretere numai n godeul cu concentraia mai mic c nseamn sensibilitate
intermediar, daca exista cretere n ambele godeuri (c i C) semnific rezisten la
respectivul agent antimicrobian.
ntrebri de control:

1. Antibiograma prin metoda difuzimetrica poate preciza:
a) Concentratia minima inhibitorie a unui antibiotic
b) Antibioticul la care bacteria este sensibila
c) Antibioticul la care bacteria este rezistenta
d) Antibioticul la care bacteria este intermediar-sensibila
e) Nu poate preciza concentratia minima inhibitorie a unui antibiotic
- 73 -
11

Referine bibliografice:
http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-
diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10

http://www.abbiodisk.com/bd_company.html

LP10 Antibiograma metoda E-test, metoda diluiilor
(CMI)

2.a Metoda dilutiilor in medii lichide:
Se folosete pentru determinarea concentraiei minime inhibitorii (CMI).
Tehnica de lucru
La diluii crescnde de antibiotic n mediu de cultur se adaug aceeai cantitate din tulpina de
testat.
Interpretare
Ultimul tub limpede indica limita sensibilitatii germenului, fata de substante sau concentraia
minima inhibitorie activa ( CMI).

2.b E-Test
Tehnica de lucru
Pe suprafata unei placi cu mediu agarizat prensmnat cu tulpina testat n condiii
standardizate sunt depuse radiar bandeletele pe care este fixat un gradient exponenial de
antibiotic .
Interpretare
Dupa incubare corespunzatoare, CMI este indicat de intersecia dintre zona eliptic de
inhibiie a culturii i scala de gradiente a langhetei.

Referine bibliografice:
http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-
diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10

http://www.abbiodisk.com/bd_company.html
ntrebri de control:

1. Concentratia minima inhibitorie poate fi precizata prin:
a) Metoda dilutiilor
b) Metoda difuzimetrica
c) E-test
d) Prin orice tehnica de efectuare a antibiogramei
e) Teste serologice

- 73 -
12
LP 11 - Schema de diagnostic etiologic n bolile infecioase
Metodele folosite n diagnosticul etiologic sunt grupate n :

A.) Metode de diagnostic direct sau bacteriologic
B.) Metode de diagnostic indirect :
- diagnostic serologic
- diagnostic biologic prin intradermoreacii
A.) Diagnosticul bacteriologic urmrete evidenierea agentului patogen din produsul
patologic, de obicei prin izolarea i identificarea lui. Se poate efectua din primele zile de
boal. Principalele etape sunt:
I. Recoltarea produselor patologice (vezi recoltarea produselor patologice).
II. Examenul microscopic direct din produsul patologic (vezi preparate
microscopice)
III. Izolarea agentului patogen prin nsmnarea produselor patologice pe medii
de cultur pentru obinerea de cultur pur care se folosete la:
IV. Identificarea agentului patogen prin:
1. Cercetarea proprietilor morfotinctoriale
2. Caracterizarea proprietilor de cultura
3. Cercetarea proprietilor biochimice
4. Stabilirea structurii antigenice
5. Cercetarea proprietilor de patogenitate in vivo sau in vitro prin reproducerea
infeciei experimentale pe animale de laborator, evidenierea eliberrii de toxine
sau produi extracelulari netoxici (coagulaza, fibrinolizina, hialuronidaza, etc.).
V. Determinarea sensibilitii la antibiotice( antibiograma) este o etap
obigatorie dupa identificare, constituind baza aplicrii unei terapii
raionale.
Stabilirea tipului fagic (lizotipia) pentru multe specii bacteriene este o metoda complementar
pentru clasificarea unei tulpini bacteriene n cadrul unui gen sau specie, utilizat n
investigaii epidemiologice.
B.) Diagnosticul indirect evideniaz instalarea imunitii n urma trecerii prin infecie. Se
efectueaz prin:
I. Metode de diagnostic serologic, care se bazeaz pe apariia anticorpilor specifici n
serul bolnavilor. Se recolteaz cel puin dou probe de ser, una la nceputul bolii i
- 73 -
13
alta la interval de 10-14 zile, pentru a urmri creterea n dinamic a titrului de
anticorpi (vezi reacii antigen-anticorp).
II. Metode de diagnostic biologic care folosesc o intradermoreacie (IDR) care
evideniaz fie:
- imunitatea umoral (IDR Shick n difterie sau IDR Dick n scarlatin)
- starea de hipersensibilitate tardiv, aspect al imunitii mediate celular (IDR la
tuberculin)
Schema de prelucrare a produselor patologice





























Produs patologic
Preparat nativ
(urina, lcr,
secretia vaginala,
secretia uretrala )
Preparat colorat
(Frotiu)
( Sputa,lcr,urina )


Cultura

1. Identificarea
bacteriilor
2. Antibiograma

- 73 -
14
LP 12 Diagnostic de laborator n infeciile produse de Enterobacterii
Familia Enterobacteriaceae. Esenial:
Caractere generale:
- enterobacterium = bacterie intestinal
- habitat: tractul intestinal om/animale
Util:
Caractere morfo-tinctoriale:
- Bacili Gram-negativ
- Mobili/imobili
- Unii au capsul , ex. Klebsiella pneumoniae
Caractere de cultur:
- Aerob-anaerob facultative
- Tulbur uniform mediul de cultur lichid
- Au necesiti nutriionale reduse se dezvolt i pe geloz nutritiv
- Colonii tip S
- Uneori colonii mucoase, ex. Klebsiella pneumoniae
- Medii selective, majoritatea au lactoz: Drigalski, Levin, Leifson, Istrate-Meitert,
MacConkey
Caractere biochimice:
- ncadrarea n familie pe baza a trei teste biochimice:
- Fermentez oxidativ si fermentativ glucoza
- Oxidazo-negativi
- Reduc nitraii la nitrii
Pe baza testelor biochimice i a caracterelor antigenice genuri specii

Activiti practice
- Coloraia Gram examinarea i interpretarea unui preparat microscopic
- Observarea i descrierea coloniilor de E.coli, Samonella, Shigella, Klebsiella, Proteus
pe medii de cultur adecvate
- Reacia de aglutinare pe lam
- Testarea sensibilitii la antibiotice
LP 13 Infecii produse de Enterobacterii cu patogenitate cert
Genul Shigella
Esenial:
- patogen intestinal
- determin dizenterie bacilar: scaune muco-sanguinolente nsoite de colici
abdominale, febr, uneori tenesme
- sunt bacterii entero-invazive
Important:
Specii
S.dysenteriae
S.flexneri
S.boydii
S.sonnei
Diagnosticul de laborator
Recoltarea produselor patologice: materii fecale recipiente cu mediu de transport
Caractere morfo-tinctoriale: bacili Gram-negativi, imobili
- 73 -
15
Caractere de cultur: colonii tip S lactozo-negative
Teste de patogenitate: Testul Srny

ntrebri de control:
Reprezentanii genului Shigella sunt:
a) bacilli Gram negativi
b) bacilli Gram pozitivi
c) se izoleaza pe mediu cu lactoza
d) cauzeaza toxiinfectii alimentare
e) produc dizenteria bacilara
Genul Salmonella
Esenial:
- peste 2000 serotipuri
Caractere generale:
- bacili Gram-negativ
- mobili (flageli peritrichi)
- lactozo-negativi
- identificarea antigenelor O, H Vi reacii de aglutinare
Important
Infecii (salmoneloze):
Febra tifoid S.typhi
Febra paratifoid S.paratyphi A, B
Toxiinfecii alimentare i enterite (copii)
- S.typhymurium
- S.enteritidis
- S.paratyphi B
- S.panama
Stri septico-piemice
- S.paratyphi C
- S.choleraesuis
Diagnosticul de laborator
I.Diagnostic direct, bacteriologic
Recoltarea produselor patologice : snge i urin n prima saptaman, din a doua saptaman
fecale. Pentru toxiinfeciile alimentare se recolteaz probe din alimentele consumate, vom,
fecale, snge
Examinarea microscopic- irelevant
Izolarea: medii pentru enterobacterii cu lactoz
Identificarea agentului patogen izolat prin studiul:
- Proprietatilor morfo-tinctoriale : bacili Gram negativ , mobili
- Proprietatilor de cultura : colonii S lactozo(-)
- Proprietati biochimice : H
2
S(+),Citrat(+),rosu-metil(+)
- Proprietati antigenice : caracterizarea antigenic Kauffman-White pe baza
antigenul O, antigenul H, antigenul Vi
II.Diagnostic indirect identificarea serologica se face prin reacia de aglutinare : Widal

ntrebri de control:
Ce salmoneloze cunoastei (i specia care produce afeciunea) i pentru care din acestea se
face diagnostic serologic ?
- 73 -
16
LP 14 Diagnosticul de laborator in infectiile de Enterobacterii oportuniste
Escherichia coli
Esenial:
- face parte din flora normal a colonului
- bacili Gram-negativ
- lactozo-pozitivi
- luciu metalic mediul Levin
Important:
Tipuri de mbolnviri:
- boli diareice
- infecii urinare
- infecii ale plgilor
- septicemii
Tulpini care produc boli diareice:
- ETEC (E.coli enterotoxigen) sindrom diareic tip holeriform
- EIEC (E.coli enteroinvaziv) sindrom diareic tip dizenteriform
- EPEC (E.coli enteropatogen) sindrom diareic la copii sub 2 ani
- EHEC (E.coli enterohemoragic)
- VTEC (E.coli produce toxin Shiga-like) O157:H7 sindrom hemolitic uremic
Klebsiella pneumoniae
Esenial:
- cantiti moderate n intestinul omului /animalelor
- infecii respiratorii, urinare, otite
- bacili Gram-negativi
- capsul polizaharidic
- colonii mari mucoase , fenomen de cameleonaj