Apariia lucrrii Versuche uber Pflanzenhybriden n 1866, a naturalistului i
matematicianului ceh Gregor Johann Mendel (1822-1884), a constituit un moment important n istoria biologiei. Gregor Mendel este considerat unul din fondatorii geneticii, datorit teoriei factorilor ereditari, sintez a celor dou legi ale ereditii: legea segregrii caracterelor (legea puritii gameilor) i legea segregrii independente a perechilor de caractere (legea liberei combinaii a factorilor ereditari). Unui prieten, Gregor Mendel i-a spus: Timpul meu va veni i ntr-adevr a venit, dup redescoperirea legilor ereditii, la nceputul secolului XX de Hugo de Vries (Olanda), Carl Correns (Germania) i Erich Tschermack (Austria). Redescoperirea legilor lui Mendel a dus la retiprirea lucrrii i traducerea ei n mai multe ri. n limba romn, lucrarea lui Mendel a fost tradus n anul 1945 din iniiativa doctorului A. Piescu.
TERMINOLOGIA FOLOSIT N GENETICA MENDELIAN
n cercetrile sale, Gr. Mendel a folosit n mod deosebit mazrea, Pisum sativum, plant autogam, care prezint caractere distincte de la o varietate la alta. Caracterele luate n studiu au fost urmtoarele: talia plantelor (nalt sau pitic), culoarea pstilor nemature (galben sau verde), culoarea cotiledoanelor (verde sau galben), suprafaa seminelor (neted sau zbrcit), culoarea tegumentului boabelor (alb sau cenuie), poziia florilor (axial sau terminal), forma pstilor (dreapt sau gtuit ntre semine). Aceste perechi de caractere au fost numite mai trziu alelomorfe (de W. Bateson i E. R. Saunders, 1902), din care a rezultat termenul de alele. Determinanii ereditari au fost numii i factori ereditari (indicai ulterior prin noiunea de gen). nainte de a analiza mecanismul de transmitere a caracterelor n procesul de hibridare este necesar s fie definite cteva noiuni de baz care vor servi pentru nelegerea lui. Hibridarea este ncruciarea dintre doi indivizi care se deosebesc prin una sau mai multe perechi de caractere. Hibridul este rezultatul hibridrii. Prinii (genitorii) se noteaz cu P (lat. parentes = prini) iar urmaii (descendenii) se noteaz cu F (lat. fillii = copii). n funcie de numrul de perechi de caractere prin care se deosebesc prinii, exist mai multe tipuri de hibridare: monohibridarea (o pereche de caractere), dihibridarea (dou perechi de caractere) etc. n concepia lui Gregor Mendel, determinanii genetici au fost numii factori ereditari, n genetica modern fiind nlocuii prin termenul de gene. Gena este unitatea elementar ce deine informaia genetic a unui caracter ereditar, transmis de prini la urmai. Gena ocup un loc precis n cromozom (locus). n celulele somatice, cromozomii omologi, unul de origine matern, cellalt de origine patern, vor avea i loci omologi, ocupai de gene alele. Dac alelele sunt identice (AA sau aa) indivizii se numesc homozigoi pentru aceast pereche de gene, iar cnd alelele sunt diferite (Aa) indivizii sunt considerai heterozigoi. Ereditatea mendelian presupune, n principal, interaciunea dominan-recesivitate ntre genele alele; alela care se manifest fenotipic la hibrizii F 1 este dominant, iar perechea sa, care nu se exteriorizeaz prin caracterul respectiv, este recesiv. Hibridrile, de orice nivel, ofer posibilitatea unei duble analize: sub aspect genotipic i sub aspect fenotipic. Genotipul reprezint totalitatea genelor unui individ sau constituia genetic a acestuia. Noiunea de genotip se utilizeaz ns i n sens restrns, numai pentru una sau cteva perechi de gene alele (AA, Aa, aa, AABB, AaBb etc.). Fenotipul reprezint totalitatea caracterelor morfologice, fiziologice, biochimice i comportamentale ale individului, care rezult din interaciunea genotipului cu mediul.
LEGILE MENDELIENE ALE EREDITII
n lucrrile i manualele care s-au ocupat de opera lui Mendel, rezultatele la care a ajuns el au fost prezentate de diferii autori n mod diferit. n legtur cu legile lui Mendel sunt menionate diferite formulri: legea uniformitii hibrizilor n prima generaie, legea dominanei, legea puritii gameilor, legea segregrii caracterelor, legea liberei combinri a caracterelor numit i legea independenei caracterelor. Dup prerea noastr din lectura lucrrii lui Mendel Experiene asupra hibrizilor de plante, se desprind dou legi: 1. Legea segregrii sau a disjunciei caracterelor n generaia a doua hibrid (F 2 ) (datorit separrii sau segregrii n meioza hibridului F 1 a alelelor dominante i recesive i unirii ntmpltoare a gameilor pentru formarea generaiei F 2 ). 2. Legea combinrii libere a caracterelor sau a segregrii independente a acestora (apariia la ncruciarea polihibrid, n urma segregrii i combinrii libere a caracterelor, a unor noi combinaii la descendeni).
Legea segregrii caracterelor (legea puritii gameilor)
Gregor Mendel a efectuat un numr impresionant de mono, di i trihibridri la mazre (Pisum sativum L.) i la alte specii din genurile: Phaseolus, Mirabilis, Cirsium, Melandrium, Zea, Antirrhinum, Hieracium etc. Segregarea caracterelor ereditare a fost formulat, n urma analizei fenotipice i genotipice a unor monohibridri, dar poate fi demonstrat i-n cazul celorlalte tipuri de hibridare. Gregor Mendel a ncruciat o varietate de mazre cu semine galbene, cu o varietate cu semine verzi, ambele homozigote (pure din punct de vedere genetic). n generaia F 1 , au rezultat numai plante cu semine galbene. Caracterul culoare galben a fost numit dominant, iar perechea sa, culoare verde, recesiv (lat. recessere = ascuns). n urma autofecundrii plantelor din generaia F 1 a rezultat generaia F 2 , n care s-au obinut dou grupe fenotipice: (75 %) semine galbene i (25%) semine verzi, prin urmare un raport de segregare fenotipic de 3:1. Notnd caracterul culoare galben cu A, iar verde cu a, n figura 5.1. se pot analiza sub aspect fenotipic i genotipic, prinii, generaiile F 1 , F 2 i F 3 .
Fig. 5.1. Structura genotipurilor i a fenotipurilor n cazul monohibridrii Gregor Mendel a explicat segregarea factorilor ereditari astfel: n celulele somatice, factorii ereditari se gsesc sub form de pereche (AA, Aa, aa). n urma meiozei, factorii ereditari segreg, astfel c gameii vor avea numai cte un singur reprezentant din fiecare pereche (A sau a), deci sunt puri din punct de vedere genetic. Prinii sunt homozigoi (AA i aa) i vor produce cte un singur tip de gamei (A sau a). n generaia F 1 toi indivizii sunt identici fenotipic (semine galbene) i genotipic (Aa). Indivizii
generaiei F 1 , heterozigoi, vor forma dou tipuri de gamei pentru fiecare sex: 50% A i 50% a. Combinarea probabilistic a gameilor de sex diferit face ca n F 2 s rezulte trei combinaii genotipice, 1/4 (25%) AA, 2/4 (50%) Aa i 1/4 (25%) aa (raportul de segregare genotipic 1:2:1) i dou grupe fenotipice (75%) semine galbene i (25%) semine verzi (raportul de segregare fenotipic 3:1). R. C. Punnett imagineaz un ah de combinaii a gameilor celor dou sexe, dnd posibilitatea identificrii rapide a tuturor genotipurilor i fenotipurilor din generaia F 2 :
Gamei Gamei 50% A 50% a 50% A 25% AA 25%Aa 50% a 25% Aa 25% aa
Gregor Mendel a efectuat monohibridri i cu alte perechi de caractere, constatnd acelai lucru: n generaia F 1 au rezultat indivizi asemntori unui printe, iar n generaia F 2 , segregarea s-a realizat ntr-un raport foarte apropiat de 3:1 (tabelul 5.1.). Tabelul 5.1. Rezultatele monohibridrilor la mazre (obinute de Gregor Mendel) nsuiri Caracterul Dominante (D) Recesive (r) Dominante Recesive Raportul D/r Forma seminelor Neted Zbrcit 5.474 1.850 2,98:1,01 Culoarea cotiledoanelor Galben Verde 6.022 2.001 3,01:0,99 Culoarea tegumentului Colorat Alb 705 224 3,03:0,96 Consistena pstilor Tare Moale 862 299 2,98:1,02 Culoarea pstilor Verde Galben 428 152 2,95:1,05 Dispoziia florilor Axilar Terminal 651 207 3,03:0,96 Forma plantei nalt Pitic 187 277 2,95:1,04 Total - - 14.949 5010 2,99:1,01 Monohibridrile efectuate de Gregor Mendel au fost denumite mai trziu monohibridri de tip Pisum. Dup redescoperirea legilor mendeliene, imediat dup anul 1900, s-au realizat monohibridri i la diferite specii de animale. Obinndu-se rezultate asemntoare celor de la plante, s-a demonstrat universalitatea legilor mendeliene. n anul 1901, W. Bateson a ncruciat diferite rase de gini, care se deosebeau prin forma crestei: mazre, trandafir i simpl. Formele de creast mazre i trandafir sunt dominante fa de forma simpl, iar n generaia F 2 segregarea s-a produs n raportul de 3:1 (Raicu P., 1980). Zoologul francez L. Cuenot (1902) a ncruciat oareci cu blan de culoare gri cu oareci de culoare alb, obinnd n generaia F 1 oareci gri, iar n generaia F 2 segregarea s-a produs n raportul de 3:1. Experiene similare s-au fcut apoi la foarte multe specii de animale, ntrind ideea de universalitate a legilor mendeliene.
Legea segregrii independente a perechilor de caractere
Cea mai simpl form de polihibridare este dihibridarea, termen introdus n genetic de ctre Hugo de Vries (1900). n acest caz sunt urmrite dou perechi de caractere. La ncruciarea a dou soiuri de mazre: plante cu semine galbene i netede cu plante cu semine verzi i zbrcite, n F 1 , G. Mendel a obinut plante cu semine galbene i netede. n F 2
perechile de caractere analizate separat au segregat dup raportul 3:1 i anume: 75% semine galbene i 25% semine verzi, i 75% semine netede i 25% semine zbrcite. Analiznd ns modul cum apar mpreun cele dou perechi de caractere, G. Mendel a constatat c raportul dintre ele este:
56,25% semine galbene i netede; 18,75% semine galbene i zbrcite; 18,75% semine verzi i netede; 6,25% semine verzi i zbrcite. Din aceast analiz, ajunge la concluzia c pentru fiecare pereche de caractere segregarea se produce independent, iar raportul fenotipic pentru ambele caractere este de 9:3:3:1. Caracterele s-au separat n timpul formrii gameilor i s-au combinat n timpul fecundrii n toate modurile posibile, formnd cele patru grupe fenotipice. Aceste rezultate i-au permis lui Mendel s emit legea independenei caracterelor sau a liberei combinri a factorilor ereditari. Dup prerea lui, cei doi gamei care particip la fecundare nu-i contopesc caracterele n hibrid, ci ele stau alturate unele de altele, pentru ca apoi s se despart din nou n meioz, producnd prin fecundare, generaia a doua (F 2 ). Pe baza celor artate la monohibridare se poate alctui, n mod analog, un ah de combinaii lund n considerare de data aceasta, dou perechi de caractere care se pot nota dup cum urmeaz: A = neted B = galben a = zbrcit b = verde Mecanismul ahului devine simplu dac se are n vedere faptul c n gamei numrul de cromozomi, respectiv de caractere alele, este pe jumtate dect n celulele somatice. Pentru ncruciarea mazrii cu semine netede i galbene cu mazre cu semine zbrcite i verzi, avnd n vedere c individul este rezultatul fecundrii a doi gamei, formula prinilor va fi: AABB x aabb. Gameii prinilor formai prin reducerea cromatic vor avea formula AB i ab. Din combinarea lor se va nate generaia F 1 , cu formula AaBb. Hibridul F 1 formeaz patru tipuri de gamei: AB, Ab, aB, ab, din combinarea crora, rezult generaia F 2 . Gameii se formeaz n numr egal att pentru sexul femel, ct i pentru sexul mascul. Din combinarea ntmpltoare a celor patru tipuri de gamei apar 16 combinaii genotipice, 9 genotipuri i 4 fenotipuri (fig. 5.2.). Fenotipurile apar n raportul de 9:3:3:1: 9/16 indivizi neted - galben (AABB, AABb, AaBb, AABb, AaBb, AaBB, AaBb, AaaBb); 3/16 indivizi neted verde - (AAbb, Aabb, Aabb); 3/16 indivizi zbrcit - galben (aaBB, aaBb, aaBb); 1/16 indivizi zbrcit - verde (aabb). Din analiza celor 16 combinaii de caractere rezult c acestea reprezint 9 genotipuri care segreg n raportul: 1/16 AABB : 2/16 AABb : 2/16 AaBB : 4/16 AaBb : 1/16 AAbb : 2/16 Aabb : 1/16 aaBB : 2/16 aaBb : 1/16 aabb (sau 1:2:2:4:1:2:1:2:1). Ceea ce i atrage atenia lui G. Mendel n mod deosebit n aceast experien este apariia combinaiilor noi de caractere AAbb si Aabb (semine netede i verzi), precum i aaBB i aaBb (semine zbrcite i galbene). Acesta este motivul care l conduce la formularea celei de a doua legi, cu privire la independena caracterelor sau combinarea liber a caracterelor. Aceleai constatri se pot face analiznd o trihibridare. Dac se consider c prinii au genotipurile AABBCC i aabbcc, hibridul din F 1 cu genotipul AaBbCc va forma 8 tipuri de gamei: ABC, ABc, AbC, Abc, aBC, aBc, abC, abc. Grupnd combinaiile hibride n F 2 se constat c cele 64 de combinaii genotipice segreg n opt grupe fenotipice, dup cum urmeaz: 27 posed trei caractere dominante (A, B, C) 9 posed dou caractere dominante i unul recesiv (A, B, c) 9 posed dou caractere dominante i unul recesiv (A, b, C) 9 posed dou caractere dominante i unul recesiv (a, B, C) 3 posed un caracter dominant i dou recesive (A, b, c) 3 posed un caracter dominant i dou recesive (a, B, c) 3 posed un caracter dominant i dou recesive (a, b, C) 1 posed trei caractere recesive (a, b, c). Rezult deci opt fenotipuri, repartizate n raportul 27:9:9:9:3:3:3:1. Rezultatele obinute n urma trihibridrii de tip Pisum confirm legea segregrii independente a caracterelor.
Fig. 5.2. Dihibridare ntre un soi de mazre cu bobul galben-rotund i unul cu bobul verde-zbrcit
PROBABILITATEA I RAPORTURILE MENDELIENE DE SEGREGARE
Pe baza legilor ereditii descoperite de Gregor Mendel se pot indica rezultatele care se obin ntr-o hibridare. Raporturile mendeliene de segregare depind de numrul perechilor de caractere. Astfel, la monohibridare, raportul fenotipic n F 2 este de 3:1; la dihibridare de 9:3:3:1; la trihibridare de 27:9:9:9:3:3:3:1 .a.m.d. ncepnd cu generaia F 3 , aceste raporturi se calculeaz inndu-se seama de homozigoia i heterozigoia indivizilor, heterozigoii fiind singurii care segreg n descenden. Dac se analizeaz termenii care alctuiesc raporturile de segregare se observ c ei se obin prin ridicarea binomului 3:1 la puterea numrului perechilor de caractere: (3+1) 1 , (3+1) 2 , (3+1) 3 . Pentru n perechi de caractere, binomul se ridic la puterea n, (3+1) n . Rezultatele obinute n diferite tipuri de hibridri pot fi anticipate, dac se aplic o regul simpl de calcul a probabilitilor: ansa apariiei concomitente a dou fenomene este egal cu produsul probabilitilor lor separate [P(A i B) = P(A) x P(B)]. Dac n mai multe monohibridri raporturile mendeliene sunt 3:1, 3/4 (A) x 3/4 (B), deci 9/16 (AB). Calculul poate fi realizat pentru orice combinaie de caractere ce segreg independent. n exemplele analizate s-a urmrit cum se comport n hibridri un numr mic de factori alelomorfi. De exemplu, pentru o pereche de factori, numrul de combinaii n F 2 , a fost de (2 1 ) 2 =4, pentru dou perechi de factori de (2 2 ) 2 =16, pentru trei perechi de factori de (2 3 ) 2 =64, .a.m.d. Este uor de neles c n cazul n care se analizeaz un numr mare de perechi de caractere, numrul acestor combinaii este enorm. De exemplu, pentru 10 perechi de factori, numrul combinaiilor hibride se ridic la peste un milion. Cu att mai complicat apare i analiza genetic privind formarea i gruparea combinaiilor la un ir de generaii. Tabelul 5.2. d posibilitatea de a calcula numrul combinaiilor obinute, n funcie de numrul perechilor de factori pe care i urmrim. De asemenea, permite a se deduce i numrul tipurilor de gamei i a genotipurilor ce se vor obine. Numrul mare de forme pe care l ntlnim la vieuitoare asigur ntr-o mare msur diversificarea speciilor i procesul de evoluie a acestora.
Tabelul 5.2. Segregarea la hibridrile de tip Pisum n funcie de numrul perechilor de alele
Numrul perechilor de caractere Numrul tipurilor de gamei produi n F 1 Numrul combinaiilor de gene n F 2 Numrul genotipurilor n F 2 Numrul genotipurilor homozigote n F 2 Numrul grupelor fenotipice i raporturi de segregare n F2 1 2 1 =2 4 1 =4 3 1 =3 2 1 =2 3:1 2 2 2 =4 4 2 =16 3 2 =9 2 2 =4 9:3: 3:1 3 2 3 =8 4 3 =64 3 3 =27 2 3 =8 27:9:9:9:3:3:3:1 4 2 4 =16 4 4 =256 3 4 =81 2 4 =16 (3+1) 4
5 2 5 =32 4 5 =1024 3 5 =243 2 5 =32 (3+1) 5
n 2 n 4 n 3 n 2 n (3+1) n
MECANISMUL CITOLOGIC AL SEGREGRII CARACTERELOR
Gregor Mendel a cercetat comportarea caracterelor n descendena hibrid, considernd factorii ereditari drept uniti materiale. n celulele somatice, ei se gsesc sub form de perechi, n timp ce n celulele sexuale sub form simpl. Segregarea caracterelor era condiionat de segregarea factorilor, odat cu formarea celulelor sexuale, iar combinarea lor n diferite moduri se baza pe ntlnirea ntmpltoare a gameilor n procesul de fecundare. Cercettorii care urmeaz dup Gregor Mendel caut s explice independena i segregarea caracterelor fcnd uz de cunotinele citologice. Din momentul n care s-a descoperit c factorii ereditari sunt localizai n cromozomi, s-a neles c segregarea caracterelor este determinat de segregarea cromozomilor n meioz i recombinarea lor n procesul de fecundare. W. S. Sutton (1902) a stabilit c o specie conine n fiecare cromozom cte un grup de factori ereditari i c fiecare factor dintr-un grup se comport independent fa de factorii situai n celelalte grupe. Numrul grupelor de caractere corespunde cu numrul perechilor de cromozomi omologi. Se tie c celulele sexuale, nainte de a suferi reducerea cromozomal, au un numr de 2n cromozomi (fiecare cromozom cu omologul su). n urma diviziunii meiotice, cromozomii se despart i se formeaz celule haploide (gameii). n procesul de fecundare se reface numrul normal de cromozomi pereche, aa fel nct n fiecare pereche se repartizeaz un cromozom de la mam i unul de la tat. n cazul cnd mama i tata prezint acelai caracter, n aceti cromozomi exist factori identici (n doz dubl), iar individul este homozigot; n cazul n care prinii prezint caractere diferite, individul rezultat este heterozigot. Cnd individul heterozigot va forma celule sexuale, acestea vor diferi ntre ele, cci ntr-un gamet va trece un cromozom, iar n cellalt, perechea lui, care difer. n acest fel, gametul lund cu sine numai jumtate din cromozomii omologi, pierde caracterul hibrid pe care l avea zigotul i devine pur. Factorul ereditar, care sttea alturi de omologul su, devine independent, iar ntr-o nou fecundare se va ntlni fie cu unul identic, fie cu altul diferit, producnd n cel de-al doilea caz segregarea caracterelor. n mod schematic, mecanismul cromozomic al disjunciei se poate vedea n figura 5.3. n cele de mai sus s-a dat o explicaie mecanismului segregrii caracterelor mendeliene. n natur ns, nu ntotdeauna asemenea procese se desfoar exact conform celor artate, iar cercettorii au obinut date care nu se ncadreaz n raporturile stabilite de Gregor Mendel. Explicaia dat mai sus este valabil n cazul n care caracterele cercetate sunt produse de un singur locus (caractere monofactoriale), iar locii implicai sunt situai n cromozomi diferii.
NCRUCIAREA ANALIZATOARE
n experienele pe care le-a executat Gregor Mendel la ncruciarea mazrei cu semine de culoare galben cu mazrea cu semine de culoare verde s-au obinut n F 2 , aa cum s-a artat, semine de culoare galben i semine de culoare verde n raportul 3:1. Seminele de culoare galben din F 1 au produs, deci, n F 2 plante cu semine att de culoare galben, ct i de culoare verde. Aceasta dovedete c ele aveau structur genetic heterozigot.
Pentru a analiza structura genetic a descendenilor hibrizi cu fenotip dominant se folosete retroncruciarea sau backcrossarea cu printele recesiv sau cu un tester recesiv, metod care poart numele de testcross. n fond, testcross-ul ajut la descoperirea tipurilor de gamei formai de un individ dominant, precum i dac el este homozigot sau heterozigot pentru anumite caractere. Homozigoii dominani produc o descenden cu fenotipul parental, n timp ce heterozigoii dominani n descendena testcross segreg.
Fig. 5.3. Schema mecanismului cromozomic al disjunciei pentru o pereche de caractere
n figura 5.4. sunt prezentate schematic rezultatele obinute n urma aplicrii testcross-ului n funcie de genotipul individului dominant testat. n cazul retroncrucirii indivizilor homozigoi dominani (AA) cu printele homozigot recesiv (aa) se obine un singur tip de indivizi cu acelai genotip (Aa) i cu acelai fenotip (culoare galben). Prin retroncruciarea indivizilor heterozigoi (Aa) cu printele homozigot recesiv (aa) rezult dou tipuri de indivizi n proporii egale, 50% cu genotipul Aa de culoare galben i 50% cu genotipul aa de culoare verde. Deci, la retroncruciare se pot obine dou tipuri de rezultate: 1) dac raportul de segregare ntre cele dou caractere este de 1:1, nseamn c ascendentul dominant testat a fost heterozigot, deoarece a produs dou tipuri de gamei; 2) dac toi urmaii sunt la fel, nseamn c ascendentul dominant testat a fost homozigot, deoarece a format un singur tip de gamei.
Fig. 5.4. Schema segregrii n cazul testcross-ului unor descendeni hibrizi cu fenotip dominant (AA sau aa)
Testcross-ul unui hibrid const n ncruciarea descendenilor dominani F 1 cu un printe dublu recesiv. Dac hibridul F 1 este heterozigot, AaBb, va da natere la patru tipuri de gamei i n consecin prin testare rezult genotipurile AaBb, Aabb, aaBb, aabb, care segreg fenotipic n raport de 1:1:1:1. Testcross-ul este folosit i n lucrrile de ameliorare, atunci cnd se urmrete relevarea alelelor recesive. Prin retroncruciri (backcrossuri) repetate se pot restabili n hibrid caracterele printelui care a fost folosit la ncruciare. Cu fiecare generaie de retroncruciare se reduc heterozigoii i crete numrul homozigoilor pentru caracterele printelui cu care s-a ncruciat.
* * *
Aa cum a reieit, mendelismul a constituit o important etap n dezvoltarea geneticii. Cercetrile ulterioare, la nivelul celular i molecular, au confirmat deplina valabilitate a rezultatelor i concluziilor lui Gregor Mendel. Legile ereditii descoperite de el constituie fundamentul geneticii clasice, fr de care nu se pot nelege cele mai noi probleme legate de studiul ereditii din punct de vedere teoretic ct i practic. Meritele deosebite pe care le are Mendel n fundamentarea geneticii ca tiin l situeaz, pe drept cuvnt, la rangul de fondator al geneticii.