1

STRUCTURA MOLECULAR A ACIDULUI DEZOXIRIBONUCLEIC

(ADN)

Studii detaliate asupra structurii moleculare a acizilor nucleici au fost efectuate mai ales
dup descoperirea rolului genetic, prin experienele de transformare genetic efectuate la
organismele procariote i eucariote.
Structura molecular a acidului dezoxiribonucleic (ADN) a fost descoperit n anul
1953 de cercettorii J. D. Watson i F. H. C. Crick care au studiat structura ADN prin difracie n
raze X. Cei doi cercettori au studiat ADN "in vitro" netiindu-se dac structura lui corespunde cu
cea existent n materia vie. Tot n anul 1953, M. Wilkins i colab. au efectuat cercetri asupra
ADN "in vivo" confirmnd structura stabilit de Watson i Crick.
n anul 1962, cei trei cercettori Watson, Crick i Wilkins au fost distini cu premiul
Nobel pentru medicin i biologie, pentru contribuiile aduse la elucidarea structurii moleculare a
materialului purttor al informaiei genetice.
Structura chimic a moleculei de ADN
Molecula de ADN este format din uniti simple denumite nucleotide. n componena
unei nucleotide intr urmtoarele tipuri de molecule: o baz azotat, un zahar i un radical
fosforic (figura 3.2.).



















Fig. 3.2. Bazele azotate, zaharurile i radicalul fosforic din acizii nucleici

Bazele azotate ce intr n alctuirea de ADN sunt de dou tipuri: baze purinice i
pirimidinice.
Purina este o baz azotat alctuit dintr-un heterociclu ce cuprinde cinci atomi de C i
patru atomi de N, iar pirimidina este o baz ce deriv din inelul benzenic, cuprinznd patru atomi
de C i doi atomi de N.
Bazele azotate purinice care intr n constituia moleculei de ADN sunt adenina (A) i
guanina (G), iar bazele pirimidinice sunt citozina (C) i timina (T).
Zaharul component al dezoxiribonucleotidului se numete dezoxiriboz ( - D - 2
dezoxiribofuranoz), fiind o pentoz.
Radicalul fosforic are trei hidroxili liberi care pot fi esterificai. n cazul acizilor
nucleici se esterific doi hidroxili, deci acizii nucleici sunt fosfodiesteri:

2
OH OH
O = P OH O = P OR
2

OH OR
1

Radical fosforic Fosfodiester

Prin unirea unei baze azotate purinice sau pirimidinice cu un zahar rezult un
dezoxiribonucleosid iar prin ataarea la acesta a unui radical fosforic rezult un
dezoxiribonucleotid. Ataarea radicalului fosforic se face n mod obinuit prin intermediul
carbonului 5' al dezoxiribozei, prin pierderea unei molecule de ap.
Radicalul fosforic al unui nucleotid, prin gruprile acide libere, poate s se lege fie cu
ali radicali fosforici, fie cu alte nucleotide prin carbonul 3' al dezoxiribonucleotidului. Dac
gruprile libere ale radicalului fosforic se leag de ali radicali fosforici, dezoxiribonucleotidele
pot apare sub form de monofosfat, difosfat sau trifosfat, purtnd urmtoarele denumiri: adenozin
5'-fosfat (AMP), guanozin 5'-fosfat (GMP), citidin 5'-fosfat (CMP), timidin 5'-fosfat (TMP),
ADP, GDP, CDP, TDP, ATP, GTP, CTP, TTP.
Cnd nucleotidele (dezoxiribonucleotidele) se leag unele de altele, aceast legtur se
realizeaz astfel: un nucleotid se leag de nucleotidul vecin inferior prin C 3', iar de nucleotidul
vecin superior prin C 5'. Se realizeaz un lan polidezoxiribonucleic, cu o form de zig-zag, ce
constituie structura primar sau monocatenar a moleculei de ADN.
La majoritatea organismelor molecula de ADN este constituit din dou lanuri (catene)
polinucleotidice complementare, aceasta fiind structura secundar a ADN stabilit de ctre J. D.
Watson i F. H. C. Crick. Una din premisele importante pentru stabilirea structurii secundare a
ADN a fost deducerea experimental a regulii lui E. Chargaff (1951), conform creia pot fi
definite urmtoarele reguli cantitative: A+G = T+C; A+C = T+G; A = T i C = G sau exprimat
altfel, A/T = G/C = 1. Aceste relaii dintre nucleotide a dus la concluzia c ADN este alctuit din
2 catene. Rsucirile pe care le sufer o caten sau molecula bicatenar alctuiesc structura teriar
iar interaciunea dintre dou sau mai multe molecule bicatenare alctuiesc structura cuaternar a
acizilor nucleici.
Watson i Crick au stabilit c macromolecula de ADN este alctuit din dou catene
polinucleotidice, paralele, nfurate elicoidal n jurul unui ax comun imaginar, o caten avnd un
sens ascendent (3' 5') iar cealalt un sens descendent (5' 3').
Distana dintre dou nucleotide succesive este de 3,4 iar pasul elicei este de 34 ,
ceea ce corespunde la 10 nucleotide. Diametrul macromoleculei de ADN este de 20 (figura
3.3.).
Molecula de ADN are dimensiuni foarte mari
fiind cea mai mare molecul biologic, cu o mas
molecular ce poate ajunge la 12-16 x 10
6
daltoni
(1 dalton = 1/12 din masa atomului de C).
Cele dou catene din molecula de ADN se
leag ntre ele prin puni de hidrogen ce se
realizeaz ntre o baz azotat purinic de pe un
lan i o baz azotat pirimidinic de pe cellalt
lan.
Prin urmare, n macromolecula de ADN exist
urmtoarele tipuri de legturi: adenin-timin (A-
T), timin-adenin (T-A), guanin-citozin (G-C)
i citozin-guanin (C-G).

Cele dou catene polinucleotidice din molecula de ADN sunt complementare, n sensul
c ordinea nucleotidelor de pe o caten determin ordinea nucleotidelor de pe cealalt caten.

Fig. 3.3. Modelul structurii bicatenare a
moleculei de ADN
3
Legturile de hidrogen dintre bazele azotate, duble, ntre adenin i timin (A = T) i triple ntre
guanin i citozin (G C), dei sunt legturi slabe, sunt destul de numeroase de-a lungul
macromoleculei de ADN pentru a-i asigura stabilitatea i coeziunea. Legturile chimice slabe,
cum sunt cele de hidrogen, sunt eficiente numai n cazul moleculelor complementare, cum este
ADN i anume cnd o protuberan a unei molecule intr ntr-o cavitate a altei molecule.
Luate separat, moleculele pirimidinice sunt mai mici dect cele purinice ns cuplurile
purin-pirimidin sunt de aceeai dimensiune, conferind macromoleculei de ADN regularitate i
stabilitate. Macromolecula de ADN este stabil la temperaturile fiziologice, datorit numrului
mare de legturi chimice i faptului c moleculele de baze azotate se gsesc n interiorul
moleculei contactul lor cu apa fiind limitat.


Alte tipuri de ADN

Arhitectura molecular a ADN stabilit de Watson i Crick a fost confirmat printr-un
mare numr de msurtori fizice. Modelul propus de cei doi autori presupune mperecherea A-T,
C-G i o rsucire a celor dou catene n sensul acelor de ceasornic, deci o dubl elice de dreapta
(dextrors) (ADN - D).
Cercetrile recente bazate pe perfecionarea metodelor de analiz (difracia n raze X) i
a celor de sintez "in vitro" a unor fragmente scurte de ADN, au dus la descoperirea mai multor
tipuri conformaionale de ADN, determinate de mperecheri "nelegitime" dintre bazele azotate
(C-C, A-G), nlocuirea bazelor azotate cu analogi ai acestora sau schimbarea modului de rsucire
a dublei elice. Tipurile de ADN ce au la baz dubla elice de dreapta, dar se deosebesc prin unele
proprieti fizice au fost notate cu A, B, C i D, iar tipul de ADN ce posed dou catene cu
rsucire spre stnga s-a notat cu Z.
ADN de tip A se apropie mult de structura ADN originar, bazele azotate avnd ns o
nclinaie ntr-un unghi de 20 fa de axul moleculei, ceea ce determin modificarea pasului
elicei (2,8 n loc de 3,4 ) i a numrului de baze pe tur de elice (11 baze n loc 10).
ADN de tip B este aproape identic cu modelul originar. Cea mai mare parte din ADN
celular este de tipul B.
ADN de tip C este tot o dubl elice de dreapta n care forele de "mperechere" a
bazelor azotate sunt mult mai slabe, ceea ce modific conformaia moleculei de ADN n lungime.
Este ntlnit n unele genomuri virale.
ADN de tip D mai puin cunoscut, este o dubl elice dextrors cu un unghi mare de
rsucire (45).
ADN-Z a fost descris de Rich i Itakura n 1980 (Zarnea, G., 1986). Acest ADN posed
dou catene care afecteaz o rsucire elicoidal spre stnga, datorit att unor legturi
ntmpltoare ntre G-C, ct unei frecvene mai mari n molecul a acestui cuplu de baze.
Diferenele dintre ADN-B i ADN- Z nu sunt fixe, fiind posibil transformarea
reversibil a celor dou tipuri.
Forma Z a ADN bicatenar a fost descris la un numr mic de specii: n cromozomii
gigantici de la Drosophila melanogaster, Chironomidae i n cromozomii umani.
Analizndu-se fragmente de ADN s-a putut constata c ntr-un ADN-Z pot exista scurte
fragmente de ADN-B, diferenele dintre fragmente fiind uor de depistat prin mijloace adecvate,
de nalt rezoluie, datorit modificrii pasului elicei, nclinrii bazelor azotate i a ordinii de
succesiune a acestora. Aceasta face posibil recunoaterea acestor zone de ctre sistemele
enzimatice implicate n reglajul activitii genelor: schimbarea direciei de rsucire a ADN la
nceputul unei gene ar determina ncetarea activitii genei respective, controlul activitii genelor
fiind foarte riguros.
4
Exist i ipoteza c n aceste zone de tranziie se pot ataa cu o mai mare frecven
substanele mutagene i cancerigene, fapt ce ar putea explica baza molecular a mutagenezei cu o
frecven mai mare.
n celulele eucariote, pe lng ADN nuclear, exist n organitele citoplasmatice ADN
specific acestora: ADN mitocondrial (ADN-mt) i ADN cloroplastic (ADN-cl).
ADN - mitocondrial (ADN - mt) este bicatenar i de form circular, asemntor ntr-o
mare msur cu ADN bacterian. ADN-mt nu este complexat cu histone, n electronografii
aprnd ca nite fibrile cu un diametru de 25-30 . ADN-mt al metazoarelor este de tip A-T,
coninutul n G-C fiind variabil. Dublul helix de ADN-mt are o caten grea, bogat n resturi de A
i o caten uoar bogat n resturi de T. ADN-mt este singurul tip de ADN circular ce are n
secvena sa ribonucleotide covalent integrate, ceea ce-l face sensibil la uree i ribonucleaz,
modificnd forma moleculei i oferind locuri speciale de recunoatere pentru polimeraze.
Mrimea moleculei de ADN-mt variaz n funcie de specie la organismele inferioare
avnd n medie o greutate molecular de 10
7
daltoni, ceea ce corespunde la 15.000-17.000
perechi de baze.
La plantele superioare ADN-mt are o greutate molecular mult mai mare 60-140 x 10
6

daltoni, iar coninutul n G-C este uniform (45-47%). Informaia genetic din ADN-mt este foarte
compact, neexistnd secvene repetitive (introni). Se pare c pe parcursul evoluiei intronii au
fost eliminai din ADN-mt.
ADN - cloroplastic (ADN-cl). Fiecare cloroplast conine cel puin o molecul de ADN-
cl localizat n stroma cloroplastului (zona genofor).
Pot exista mai multe molecule de ADN-cl separate spaial, formnd zone genofore
separate, ataate de un loc (situs) specific al membranei interne a cloroplastului.
Cercetrile efectuate la plantele superioare i inferioare au artat c plastomul acestora
este format din molecule de ADN-cl, dublu catenare, circulare, cu un perimetru de 40-50
corespunznd unei greuti moleculare de 92 x 10
6
daltoni, respectiv 130 Kilobaze. Un cloroplast
are n medie aproximativ 10
-14
g ADN, ceea ce nseamn aproximativ 50 copii ale plastomului
(Sitte P. i colab., 1991, dup Toma N. i Anghel I., 1985). Prin studii de denaturare i renaturare
sau analiz biochimic direct, s-a constatat c la plantele inferioare coninutul n G+C este
inferior celui de A+T, n timp ce la plantele superioare coninutul de G+C poate fi egal sau puin
mai ridicat fa de cel de A+T. Experienele de hibridare molecular ADN-ADN au demonstrat c
ntre ADN nuclear i cel cloroplastic exist un anumit grad de omologie.
n ceea ce privete replicarea ADN-cl, are loc dup modelul semiconservativ,
bidirecional, independent de replicarea ADN nuclear. ADN-cl se replic o singur dat, att n
timpul gametogenezei, n gametul femel, n timp ce ADN-cl coninut de gametul mascul nu se
replic. n dezvoltarea ontogenetic, ADN-cl provenit de la genitorul matern se replic i este
deci meninut, n timp ce ADN-cl de provenien patern (n cantiti foarte mici) este degradat
enzimatic; n acest fel se explic transmiterea pe linie matern a genelor din ADN-cl.
ADN-cl cuprinde cteva sute de gene, genomul cloroplastic fiind mult mai mare dect
cel mitocondrial, avnd i un rol mult mai complex n formarea i metabolismul cloroplastului i
a celulei, existnd i o cooperare complex ntre acesta i nucleu.
ADN-satelitic (ADN-S). Acest tip de ADN formeaz blocuri de uniti repetitive
(cteva milioane) n zona centromerului i a satelitului. Numrul de secvene repetitive variaz de
la o specie la alta de la 1% pn la 5% per genom. ADN-satelitic deine funcia de reglare a
replicrii ADN cromozomic, replicare ce presupune participarea proteinelor histonice.
ADN-bicatenar-circular este caracteristic cromozomului bacterian i unor plasmide
prezente n celulele procariote, cum ar fi plasmidele F, R sau Col. Dimensiunile acestui ADN sunt
variabile de la o specie la alta. Avantajele structurii circulare nu sunt cunoscute. Se presupune c
aceast structur asigur protecia moleculei de ADN fa de degradarea enzimatic prin
exonucleaze care acioneaz asupra extremitilor libere ale moleculei.
5
ADN monocatenar. Exist unele virusuri a cror material genetic este reprezentat de un
ADN monocatenar. Astfel, la virusul x174, molecula de ADN monocatenar are o greutate
molecular de 3 x 10
6
daltoni, are o form circular i nu liniar. Ulterior s-au descoperit i ali
bacteriofagi a cror material genetic este reprezentat de un ADN monocatenar: bacteriofagul S13
i bacteriofagul F1.
Structura monocatenar a ADN de la aceste virusuri constituie o excepie reprezentnd
o adaptare la viaa specific parazitar a acestora.

Acidul ribonucleic (ARN)

Structura chimic a moleculei de ARN. Acidul ribonucleic (ARN) are o structur
chimic asemntoare cu cea a acidului dezoxiribonucleic (ADN). n structura chimic a ARN
intr trei componente: bazele azotate, zaharul i radicalul fosforic. Bazele azotate sunt: purinice,
adenina (A) i guanina (G) i pirimidinice, citozina (C) i uracilul (U). Deci o prim deosebire
structural ntre ADN i ARN este prezena uracilului n locul timinei. Uracilul are o structur
destul de apropiat de cea a timinei.
Zaharul care intr n structura moleculei de ARN este riboza, care are o form ciclic.
Combinarea unei baze azotate cu zaharul d natere unui ribonucleosid, iar prin adugarea unui
radical fosfat rezult un ribonucleotid.
O alt deosebire important ntre ADN i ARN este faptul c macromolecula de ARN
este monocatenar, fiind format dintr-un singur lan poliribonucleotidic. Acest fapt face ca
bazele azotate purinice s nu fie n cantitate egal cu cele piridimice.
innd seama de rolul pe care l ndeplinete ARN se apreciaz c sunt dou categorii:
acidul ribonucleic viral (ARN
v
) i acidul ribonucleic celular, implicat n sinteza proteinelor.
Acidul ribonucleic celular este de trei tipuri: acidul ribonucleic mesager (ARN
m
),
acidul ribonucleic de transport sau solubil (ARN
t
) i acidul ribonucleic ribozomal (ARN
r
).
Acidul ribonucleic viral (ARN
v
) constituie materialul genetic al unor ribovirusuri cum
ar fi: virusul mozaicului tutunului (VMT), virusul gripal, virusul poliomielitei, virusul stomatitei
veziculare, bacteriofagii F
2
, R17, QB i altele.
Studiindu-se molecula de ARN
v
de la virusul mozaicului tutunului s-a determinat c
este alctuit din aproximativ 6.000 ribonucleotide, ntr-o anumit ordine, determinnd coninutul
mesajului genetic. La mai multe virusuri molecula de ARN
v
este format din dou catene
complementare nfurate elicoidal n jurul unui ax imaginar. Molecula de ARN
v
este n general
liniar, cu excepia virusului encefalomielitei oarecilor, la care molecula de ARN
v
este circular.
Aa cum s-a artat ntr-o experien anterioar, n momentul infeciei virale, n
interiorul celulei infectate ptrunde numai molecula de ARN
v
, care are capacitatea de a se
multiplica, avnd rolul de matri pentru formarea unor molecule noi, deinnd i informaia
genetic necesar sintezei proteinei virale.