Acidul ribonucleic mesager (ARN

m
). A fost descoperit n celulele bacteriene infectate cu
bacteriofagi, apoi n toate celulele organismelor. A. D. Hershey i colab. (1953) au ajuns la concluzia
c sinteza ARN
m
este dependent de ADN. Ei au identificat ntr-o celul bacterian infectat, pe lng
ADN i o mic cantitate de ARN, care era complementar ADN. Acest tip de ARN are rolul de a copia
informaia ereditar de pe o poriune din molecula ADN i de a o transmite n citoplasm la ribozomi,
organite citoplasmatice la nivelul crora are loc sinteza proteinelor. De aceea acest tip de acid
ribonucleic a fost denumit ARN mesager (messenger ARN), prescurtat ARN
m
(F. Jacob i J. Monod,
1961).
Acidul ribonucleic mesager se sintetizeaz n procesul de transcripie a informaiei genetice.
Cercetrile genetice au stabilit c ARN
m
are o durat foarte scurt, fiind foarte repede
sintetizat, dar i foarte repede distrus. Molecula de ARN
m
se asociaz cu ribozomii i formeaz
complexe denumite poliribozomi. Se afirm c n perioada asocierii ARN
m
cu ribozomii, molecula nu
este supus degradrii.
Lungimea catenei de ARN
m
este foarte variabil, deci i masa molecular este variabil, n
funcie de lungimea segmentului de ADN de pe care este copiat informaia genetic.
Acidul ribonucleic solubil sau de transfer (ARN
s
sau ARN
t
). Acest tip de acid ribonucleic
are o structur chimic asemntoare cu a celorlalte tipuri de ARN. Are o greutate molecular mic i
anume 25.000 daltoni, avnd 75-90 nucleotide, este solubil n soluie de NaCl, de aceea i s-a dat
numele de ARN solubil.
Rolul ARN
s
este de a transporta aminoacizii din citoplasm la ribozomi, n procesul de
sintez a proteinelor.
Molecula de ARN
s
are la un capt tripleta citozin-citozin-adenin (CCA), iar la cellalt
capt are un nucleotid ce conine guanina (G). Molecula ARN
s
este monocatenar, dar are i poriuni
bicatenare datorit legturilor de hidrogen dintre A-U i G-C, dndu-i forma caracteristic a unei
frunze de trifoi.
R. W. Holley de la Universitatea Cornell (SUA) a determinat, n anul 1965, ordinea
nucleotidelor unui ARN
s
care transport alanina la ribozomi, la drojdia de bere (Saccharomyces
cerevisiae) (fig. 3.4.):





















Spre deosebire de celelalte tipuri de ARN, acidul ribonucleic solubil are o serie de
particulariti chimice: conine o serie de nucleotide neobinuite, baze ce au gruparea metilic cum ar
fi: 1-metilguanina, N-dimetilguanina, 1-metilhipoxantina, hipoxantina, pseudouracilul i altele.
Macromolecula de ARN
s
are trei regiuni distincte pentru recunoaterea moleculelor sau
structurilor celulare:
a) Regiunea pentru recunoaterea aminoacidului este situat pe braul cu codonul CCA de la
un capt al moleculei. Aminoacidul se fixeaz de aceast regiune cu ajutorul enzimei aminoacil - ARN
s



Fig. 3.4. Structura ARN-s ce transport alanina la ribozomi
la drojdia de bere (Saccharomyces cerevisiae)
- sintetaza, care are o structur foarte variat de la un organism la altul, existnd cte o enzim pentru
fiecare aminoacid.
b) Regiunea anticodonului este format dintr-o triplet de nucleotide complementar unui
codon din ARN
m
. Numrul anticodonilor este egal cu cel al codonilor.
c) Regiunea pentru recunoaterea ribozomului este alctuit dintr-o secven de cinci
nucleotide: G-T-P-C-G (P-pseudouracilul). Aceast regiune realizeaz legtura cu ribozomul n timpul
procesului de sintez a proteinelor.
Sinteza ARN
s
este determinat de genele din cromozomi, gene care se gsesc ntr-un numr
mare de copii. Teoretic ar trebui s existe attea tipuri de ARN
s
cte tipuri de codoni exist, dar n
realitate numrul lor este mai mic deoarece sunt i codoni care servesc pentru punctuaie sau sunt
sinonimi.
Acidul ribonucleic ribozomal (ARN
r
). Acidul ribonucleic ribozomal (ARN
r
) reprezint
aproximativ 85% din cantitatea total a ARN din celul, fiind localizat numai n ribozomi. O
caracteristic important a ARN
r
este aceea c se gsete ntotdeauna asociat cu proteinele. ARN
r
a
fost izolat din ribozomii purificai de Escherichia coli i s-a stabilit c are o greutate molecular de 5 x
10
6
, nefiind purttor al informaiei genetice. Ribozomii sunt structuri submicroscopice celulare, fixate
pe reticulul endoplasmatic, constituind locul sintezei proteice.
Structura ribozomului este foarte complex, fiind alctuit la procariote din dou subuniti: o
subunitate mare de 50 S i o subunitate mic de 30 S. Subunitatea mare este alctuit dintr-o molecul
foarte mare de ARN
r
, format din aproximativ 3200 nucleotide, dintr-o molecul mai mic cu 120
nucleotide i 34 proteine diferite. Subunitatea mic este format dintr-o molecul mare de ARN
r

compus din 1600 nucleotide i 21 proteine diferite.
La eucariote, ribozomul este mai mare i anume 80 S, subunitatea mic (40 S) are o
molecul de ARN
r
i 30 de proteine diferite, iar subunitatea mare (60 S) are dou fracii de ARN
r
i 37
proteine.
Acidul ribonucleic ribozomal are o structur bicatenar n proporie de 60-70% iar restul are
o structur monocatenar.
Sinteza ARN
r
se realizeaz prin genele din ADN specializate n acest sens i a cror numr
este foarte mare datorit necesitii de a se sintetiza o cantitate mare de ARN
r
ntr-un timp scurt.
Astfel, la Drosophila melanogaster exist 130 de gene ce rspund de sinteza ARN
r
, la Xenopus laevis
450, la Zea mays 5200, la Triticum aestivum 12700, la Hyacinthus orientalis 32000 gene.
Numrul de ribozomi din celulele procariotelor este de aproape 15000 iar la eucariote chiar
mai mare, explicndu-se astfel necesitatea unui numr mare de gene ce rspund de sinteza unor fracii
de ARN
r
.

Denaturarea i renaturarea ADN

nclzirea unei soluii de ADN la temperaturi de peste 65C, determin ruperea legturilor de
hidrogen dintre bazele azotate, cele dou catene se separ rezultnd un ADN monocatenar, iar
fenomenul se numete denaturare.
Temperatura la denaturare variaz de la o specie la alta, de exemplu la Drosophila
melanogaster este de 86C, la Escherichia coli 90C, Mycobacterium phlei 97C. Dac soluia
respectiv este rcit brusc, ADN rmne monocatenar, fiind numit ADN denaturat. Dac soluia se
rcete treptat, legturile de hidrogen se refac, rezultnd un ADN renaturat, iar fenomenul se numete
renaturare.
Aceste dou fenomene au o importan deosebit pentru realizarea de hibrizi moleculari
ADN-ADN sau ADN-ARN.
Hibrizii moleculari ADN-ADN, dar de la specii diferite, ne dau informaii despre gradul de
nrudire al speciilor respective. Hibridarea ADN-ARN permite localizarea pe cromozomi a genelor ce
intervin n sinteza diferitelor tipuri de ARN.







Specificitatea ADN

n urma determinrii cantitii de ADN din nucleul procariotelor i eucariotelor s-a putut
observa c acesta variaz foarte mult de la o specie la alta. n general, procariotele au o cantitate mai
mic de ADN fa de eucariote, deoarece organismele superioare au nevoie de o cantitate mai mare de
informaie genetic pentru cretere, dezvoltare i reproducere.
n molecula de ADN raportul dintre bazele azotate purinice i bazele azotate pirimidinice
A/T i G/C este constant i egal cu 1 (E. Chargaff, 1951). Deosebirile ce exist ntre ADN de la
diferite specii const n faptul c raportul dintre A+T/G+C este foarte variabil. La plantele i animalele
superioare acest raport este n favoarea bazelor A+T. La speciile nrudite i raportul A+T/G+C este
apropiat, ceea ce arat c la acestea succesiunea nucleotidelor este asemntoare. Diferenele privind
secvena de nucleotide asigur deosebirile genetice dintre specii.

Replicaia ADN

Una dintre nsuirile de baz ale macromoleculei de ADN este cea de replicaie sau
autoreplicaie, constituind funcia autocatalic a materialului genetic. La eucariote, replicarea ADN i
deci a genelor care nu sunt dect segmente de ADN, are loc n timpul diviziunii mitotice, asigurndu-
se transmiterea exact de la o generaie la alta a caracterelor ereditare.
Studiul ciclului mitotic a relevat existena unei variaii regulate a cantitii de ADN iar pe
aceast baz ciclul celular a fost mprit n urmtoarele etape: M - mitoza, G
1
- perioada anterioar
sintezei de ADN (gol sintetic), S - perioada sintezei de ADN i G
2
- perioada de postsintez. Dup
telofaz n G
1
cantitatea de ADN rmne constant i egal cu 2C (dou catene).
Biosinteza proteic ce are loc n aceast perioad determin creterea celulei, are loc sinteza
de ADN i deci a unor proteine specifice ce declaneaz mitoza. n perioada S se produce replicarea
ADN, care se ncheie prin dublarea cantitii de ADN, egal cu 4 C (patru catene). n timpul profazei
i metafazei mitotice, cantitatea de ADN rmne constant iar n anafaz, cnd cromozomii migreaz
spre cei doi poli, se mparte n dou, fiecare celul avnd o cantitate de ADN egal cu cea din celula
mam.
Diviziunea meiotic determin o reducere la jumtate a cantitii de ADN n gamei.
Cantitatea dubl de ADN se reface n momentul fecundrii gameilor, cnd rezult zigotul diploid.
J. D. Watson i F. H. Crick (1953) n urma elaborrii modelului structural al moleculei de
ADN au emis i ipoteza replicrii acestuia dup tipul semiconservativ. Acest tip de sintez const n
ruperea punilor de hidrogen dintre cele dou catene complementare. Fiecare caten servete ca matri
pentru sinteza unei catene noi. n final, dintr-o molecul veche de ADN vor rezulta dou molecule, dar
care sunt noi numai pe jumtate.
Au mai fost emise i alte ipoteze de replicare a macromoleculei de ADN. Un asemenea tip ar
fi cel conservativ conform cruia molecula veche de ADN servete ca model pentru sinteza unei
molecule complet noi.
O alt ipotez consider c replicarea ADN se realizeaz dup tipul dispersiv. Conform
acestui model, molecula de ADN se desface n prile componente i mpreun cu nucleotidele din
celul particip la formarea a dou molecule de ADN, care vor conine att nucleotide vechi ct i
nucleotide noi.
Modelul replicrii dup tipul semiconservativ propus de Watson i Crick, asigur o mare
fidelitate n sinteza noilor molecule de ADN. Termenul de replicaie deriv de la faptul c n acest
proces fiecare caten servete ca matri pentru catenele noi sintetizate, informaia genetic fiind
transmis fidel noilor molecule.
Sinteza ADN dup tipul semiconservativ se realizeaz astfel: la o extremitate sau ntr-un
punct oarecare al macromoleculei de ADN, punile de hidrogen se rup, fenomen ce continu pe toat
lungimea moleculei, asemntor desfacerii unui fermoar. Fiecare caten se rsucete n spaiu cu 180,
prin rotirea nucleotidelor n planul exterior, n jurul radicalului fosforic. n citoplasm se gsesc
sintetizate cele patru tipuri de nucleotide care conin bazele azotate purinice i pirimidinice: adenin,
guanin, citozin i timin.



Pe baza fenomenului de complementaritate dintre bazele azotate
purinice i pirimidinice, o nucleotid care conine adenin se va lega
prin puni de hidrogen de una ce conine timin, iar una ce conine
guanin se va lega de una ce conine citozin. n final, paralel cu
catenele vechi s-au sintetizat dou catene noi, rezultnd dou
molecule fiice, identice cu molecula mam (fig. 3.5.). Replicarea
macromoleculei de ADN se realizeaz n trei etape: n prima etap
are loc sinteza precursorilor nucleotidelor ce intr n alctuirea ADN
de tipul acidului uridilic i acidului inosinic; n etapa a doua are loc
sinteza nucleotidelor propriu-zise ce intr n structura ADN:
dezoxiadenozintrifosfat, dezoxiguanozintrifosfat,
dezoxicitidintrifosfat i dezoxitimidintrifosfat; n etapa a treia are loc
polimerizarea nucleotidelor sub controlul enzimei ADN-polimeraza.
Enzima are un diametru de circa 65 , mult mai mare dect a moleculei de ADN (20 ) i
este format din circa 1000 aminoacizi. Enzima ADN-polimeraza determin esterificarea oxidrilului
de la carbonul 3' al catenei polinucleotidice de ctre fosfatul ce esterific oxidrilul de la carbonul 5' al
nucleotidei, aa nct dac catena veche are polaritatea 5 3', catena nou sintetizat va avea
polaritatea invers 3' 5'.
S-au descoperit mai multe tipuri de polimeraze (I, II, III), unele din ele intervenind n
procesul de reparare a macromoleculei de ADN, atunci cnd unele nucleotide au fost ncatenate n
mod eronat.
Pentru desfurarea procesului de replicaie este necesar o anumit cantitate de energie.
Aceast energie provine din hidroliza acidului adenozintrifosforic (ATP) n acidul adenozindifosforic
(ADP) i un radical fosforic (P). O parte din energia rezultat se pierde sub form de cldur.
Pentru ca pierderile s fie ct mai mici, n celul exist un grup de enzime denumite
transferaze, care au rolul de a transfera grupe funcionale de la o molecul la alta. Astfel ATP
transfer energia sa ctre GTP care este un precursor n sinteza acizilor nucleici, devenind o molecul
activat.
n celule exist o enzim puternic denumit pirofosfataz, care rupe legtura de nalt
energie dintre radicalii de fosfor (P P) elibernd-o (P P P + P + 7 kcal/mol). Pentru unirea a
dou nucleotide se consum 0,5 kcal/mol, restul de 6,5 kcal/mol rmne ca energie liber ce pstreaz
echilibrul termodinamic al macromoleculei de ADN.

Replicaia acizilor nucleici la bacterii i virusuri

Celula bacterian conine un singur cromozom circular format dintr-o macromolecul de
ADN cu o lungime de aproape 1000 . n timpul replicaiei la bacterii macromolecula de ADN i
pstreaz forma circular. Geneticienii M. Meselsohn i F. W. Stahl (1958) au elucidat mecanismul de
replicaie al ADN de la bacterii prin marcarea acestuia cu izotopi radioactivi. Eu au folosit izotopul
stabil al azotului N
15
, care se poate izola destul de uor de azotul obinuit N
14
, prin ultracentrifugare.
Bacteria Escherichia coli a fost cultivat pe un mediu ce coninea clorur de amoniu marcat
cu N
15
. Dup prima diviziune a bacteriilor, au fost trecute pe mediu ce coninea N
14
i au fost lsate s
se divid de 1-3 ori. Dup numrul de bacterii din cultur se poate determina numrul de diviziuni.
Dup aceea bacteriile au fost lizate i introduse ntr-o ultracentrifug. S-a constatat c
bacteriile crescute pe mediu cu N
15
aveau ADN marcat numai cu N
15
, iar dup ce au fost trecute pe
mediu cu N
14
, dup prima diviziune exista o fracie de ADN hibrid, avnd o greutate molecular
intermediar. Dup cea de a doua diviziune celular, 50% din ADN conine N
14
i 50% N
15
, iar dup
cea de a treia diviziune 75% coninea N
14
i 25% hibrid. Aceste rezultate au demonstrat c replicarea
cromozomului bacterian se realizeaz dup modelul semiconservativ.
Procesul de replicaie a cromozomului bacterian ncepe ntr-un punct al acestuia denumit
replicator, care este ataat de membrana celular ntr-o regiune denumit mezozom.
La bacterii, fiecare diviziune a bacteriei este precedat de o singur derulare complet a
cromozomului circular.
La virusuri s-a constatat c acest proces de derulare a cromozomului se repet de mai multe
ori, rezultnd mai nti o formaiune liniar, lung, care apoi se fragmenteaz i rezult cromozomi
circulari.
Unele virusuri au ca material genetic o molecul de ADN monocatenar (x174, S 13, F
etc.). La aceste virusuri, procesul de replicaie decurge astfel: n momentul n care ADN monocatenar

Modelul replicrii
i i
notat cu (+) ptrunde n celula bacterian infectat, servete ca matri pentru sinteza unei catene
complementare notat cu (-). n interiorul bacteriei infectate a rezultat un ADN dublu catenar, dar
numai catena (-) servete ca matri pentru sinteza catenelor (+) ale virusului.
Exist virusuri a cror material genetic este reprezentat de ARN
v
, care are o structur
monocatenar. Replicaia acestui ARN n cazul ribovirusurilor este asemntoare cu replicaia ADN
monocatenar de la virusul phi x 174.
Studiindu-se, de exemplu, ciclul de via al ribovirusului F
2
, s-a constatat c dup
ptrunderea ARN
v
monocatenar notat cu (+) n celula bacterian, se ataeaz de ribozomi, pentru a
declana sinteza enzimei necesare desfurrii procesului de replicaie, ARN-polimeraza. Pe matria
catenei (+) se formeaz o caten complementar notat cu (-), iar pe matria acesteia se formeaz un
numr mare de molecule de ARN
v
(+). O parte din aceste molecule de ARN
v
(+) se ataeaz de
ribozomi, sintetizndu-se proteinele virale dup care are loc unirea ARN
v
cu acestea rezultnd un
numr foarte mare de fagi ce distrug celula gazd (liza bacteriei).