CODUL GENETIC

Dup descoperirea structurii macromoleculei de ADN i a nsuirii ei de a se replica cu mare

fidelitate, muli geneticieni i-au pus ntrebarea dac informaia genetic nu este codificat ntr-un
anumit fel prin secvena de nucleotide, ce relaii se stabilesc ntre cele patru tipuri de nucleotide i
aminoacizii din lanurile polipeptidice.
Ciberneticianul G. Gamow (1954) este primul care a descoperit legtura dintre secvena de
nucleotide din ADN i ordinea aminoacizilor, emind ipoteza c n macromolecula de ADN se
gsete codificat biochimic informaia genetic, necesar sintezei moleculelor proteice.
n general, prin informaie se nelege un mesaj, mai mult sau mai puin cuprinztor, despre o
serie de fenomene care au avut loc, au loc sau vor avea loc ntr-un sistem biologic sau tehnic. Aceste
informaii sunt nregistrate, stocate i apoi transmise printr-un sistem de codificare. De exemplu, codul
Morse, folosete un sistem de linii i puncte pentru codificarea literelor i cuvintelor.
Proteinele sunt alctuite din lanuri polipeptidice formate din 20 de aminoacizi a cror
succesiune este specific pentru fiecare protein.
Prin schem teoretic a unui cod genetic a fost elaborat de G. Gamow (1954). Potrivit
concepiei acestuia, codificarea celor 20 de aminoacizi nu se poate realiza de un singur nucleotid
(4
1
=4) i nici de grupe formate din cte dou nucleotide (4
2
=16), pentru c n ambele cazuri numrul
total de combinaii este mai mic dect numrul aminoacizilor. Ca urmare, el a considerat c numai
secvene de cte trei nucleotide (4
3
=64) pot realiza codificarea celor 20 de aminoacizi (tabelul 3.1.).
Grupul de trei nucleotide care codific un aminoacid a primit denumirea de codon. n cazul codului de
tip triplet, numrul codonilor este 64, depind de trei ori numrul aminoacizilor, fapt ce confer o
mare eficien i plasticitate n recunoaterea aminoacizilor.
n perioada care a urmat, o serie de geneticieni au adus numeroase dovezi experimentale
privind codificarea informaiei ereditare, deci a relaiei nucleotide-aminoacizi, culminnd cu
descifrarea n totalitate a codului genetic.
Primele dovezi experimentale ale relaiei nucleotide-aminoacizi, au fost aduse prin studiul
unor mutaii, induse cu acid nitros, la virusul mozaicului tutunului (VMT). La acest virus capsida este
format din 2150 catene polipeptidice identice, fiecare coninnd cte 158 aminoacizi. Acidul nitros
induce mutaii de tipul tranziiilor (nlocuirea unei baze purinice cu o baz purinic sau nlocuirea unei
baze pirimidinice cu o baz pirimidinic n catena acizilor nucleici) i anume A G sau C U.
Tabelul 3.1.
Diferite tipuri teoretice de coduri
Codul
monotipic
(4 combinaii)
Codul cu dublete
(16 combinaii)
Codul cu triplete
(64 combinaii)
AA AG AC AU AAA AAG AAC AAU
GA GG GC GU AGA AGG AGC AGU
CA CG CC CU ACA ACG ACC ACU
UA UG UC UU AUA AUG
*
AUC AUU
GAA GAG GAC GAU
GGA GGG GGC GGU
GCA GCG GCC GCU
GUA GUG
*
GUC GUU
CAA CAG CAC CAU
CGA CGG CGC CGU
CCA CCG CCC CCU
CUA CUG CUC CUU
UUA

UAG

UAC UAU
UGA

UGG UGC UGU

UCA UCG UCC UCU
A
G
C
U
UUA UUC UUC UUU
* codoni iniiatori ai sintezei unei catene polipeptidice

codoni nonsens, care nu codific nici un aminoacid reprezentnd codonii terminali ai
sintezei unei catene polipeptidice

Apariia acestor mutaii la nivelul nucleotidelor din ARN
v
al virusului, care ndeplinete rolul
de ARN
m
, apar modificri n secvena aminoacizilor din catena polipeptidic. Aceste modificri sunt
de tipul substituiei unor aminoacizi:
Prolin Serin Fenilalanin sau
Prolin Leucin Fenilalanin
S-a dedus c prolina este codificat de un codon, la care cel puin dou nucleotide sunt fie A
fie C. Tranziia A G sau C U a uneia din aceste nucleotide genereaz codonul serinei i respectiv
al leucinei. n codonul fenilalaninei, ambele nucleotide trebuie s fie G sau U.
Studiile efectuate la mutantele induse cu proflavin la bacteriofagul T
4
, n cadrul genei rIIB,
au demonstrat c unitatea care codific un aminoacid este o triplet de nucleotide (codon).
Descifrarea codului genetic a fost posibil i prin folosirea unor ARN
m
sintetizai artificial,
care conineau o secven cunoscut de nucleotide, pe baza crora au fost sintetizate proteine.
Experiene de acest fel au fost realizate de M. W. Nirenberg i J. H. Matthaei (1961). Ei au reuit s
sintetizeze o caten de polifenilalanin, folosind un ARN
m
artificial care coninea numai nucleotide cu
uracil (U), dovedind c tripleta (UUU) codific aminoacidul fenilalanin. S-au folosit apoi ARN
m

artificiali ce conineau o secven de dou nucleotide cunoscute. De exemplu, ARN artificial ce
conine secvena UGUGUG, determin sinteza unui lan polipeptidic n care alterneaz cisteina i
valina, deci cisteina este codificat de codonul UGU iar valina de GUG (figura 3.6.).


A doua nucleotid a codonului
Prima
nucle-
otid a
codo-
nului 5'
U C A G
A treia
nucle-
otid a
codo-
nului 3'
UUU UCU UAU UGU
UUC
Fen
UCC UAC
Tir
UGC
Cis
UUA UCA UAA Non 2 UGA
Non
3
U
UUG
Leu
UCG
Ser
UAG Non 1 UGG Tri
U
C
A
G
CUU CCU CAU CGU
CUC CCC CAC
His
CGC
CUA CCA CAA CGA
C
CUG
Leu
CCG
Pro
CAG
Glu
CGG
Arg
U
C
A
G
AUU ACU AAU AGU
AUC ACC AAC
Asp
AGC
Ser
AUA
Ileu
ACA AAA AGA
A
AUG Met ACG
Tre
AAG
Liz
AGG
Arg
U
C
A
G
GUU GCU GAU GGU
GUC GCC GAC
Ac.asp
GGC
GUA
Val
GCA GAA GGA
G
GUG
f-
Met
GCG
Ala
GAG
Ac.glu
GGG
Gli
U
C
A
G

Fig. 3.6. Codul genetic




Problema cea mai grea ce a trebuit rezolvat a fost precizarea poziiei nucleotidelor n cadrul
codonului, pentru c cele dou nucleotide pot forma trei combinaii: GUU, UGU i UUG. Exist mai
multe ci pentru precizarea ordinii nucleotidelor n cadrul codonului, cea mai folosit fiind studiul
mutaiilor de substituie a unor aminoacizi din unele proteine mai bine cunoscute: hemoglobina,
proteina virusului mozaicului tutunului, triptofan-sintetaza din Escherichia coli .a.



Caracteristicile codului genetic

Informaia genetic este codificat n acidul dezoxiribonucleic (ADN) sau n acidul
ribonucleic viral (ARN
v
) la unele virusuri, sub forma unor secvene de trei nucleotide (codoni).
Informaia genetic este copiat prin procesul de transcripie de ctre ARN
m
iar apoi tradus, prin
procesul de translaie, ntr-o secven de aminoacizi, n catena polipeptidic.
n prezent sunt cunoscui toi codonii din ARN
m
, care codific diferii aminoacizi (fig. 3.6).
Codul genetic cuprinde 64 de codoni. Doi codoni marcheaz nceputul sintezei unei catene
polipeptidice i anume AUG i GUG iar trei codoni sunt nonsens: UAA (ocru), UAG (ambr) i UGA
(azur). Aceti codoni au rolul de a marca terminarea sintezei unei catene polipeptidice (codoni stop).
Codul genetic are urmtoarele caracteristici: este universal, degenerat, lipsit de ambiguitate,
neacoperit i fr virgule.
Prin universalitatea codului genetic se nelege faptul c un anumit codon, codific acelai
aminoacid la orice organism, indiferent de gradul su de evoluie. Dovada cea mai evident a
universalitii codului genetic a fost urmtoarea: s-a izolat ARN
m
ce rspunde de sinteza hemoglobinei
la iepure i s-a injectat n ovocitele de broasc. S-a constatat c n ovocitele de broasc se sintetizeaz
hemoglobina, dei n mod normal, ovocitele nu sintetizeaz niciodat hemoglobin.
Codul genetic este degenerat, n sensul c mai muli codoni codific acelai aminoacid. De
exemplu, arginina este codificat de urmtoarele triplete: GGU, GGC, GGA, AGA i AGG.
n ceea ce privete importana nucleotidelor din codon s-a constatat c primele dou sunt
cele mai semnificative, n timp ce a treia poate fi uor nlocuit. Dac cea de a treia nucleotid este o
baz purinic ea poate fi nlocuit tot cu o baz purinic sau dac este o baz pirimidinic, poate fi
nlocuit tot printr-o baz pirimidinic. Diferii codoni, care au primele dou nucleotide identice, pot
codifica acelai aminoacid. Numai metionina i triptofanul sunt codificai de cte un singur codon
(AUG i respectiv UGG). Caracteristica de degenerare a codului genetic, prin care mai muli codoni
diferii codific acelai aminoacid, poart numele de redundan, termen preluat din informatic.
Redundana const ntr-un exces de informaie, ntr-un sistem, pentru a asigura transmiterea corect a
informaiei, chiar n cazul unor perturbri (Hartl D. L. i colab., 1989).
n mod obinuit fiecare codon (triplet) codific un singur aminoacid. S-a constatat, n unele
cazuri, c un codon poate codifica mai muli aminoacizi. Aa este cazul codonilor GCG care codific
alanina i arginina; CGG-prolina i arginina; GGA-glicerina i acidul glutamic; AGG-glicina i
fenilalanina. Se afirm c aceast nsuire reprezint un avantaj evolutiv, deoarece nlocuirea unui
aminoacid cu altul printr-o mutaie, ntr-o caten polipeptidic este mai puin duntoare, dac cei doi
aminoacizi au proprieti asemntoare.
Codul genetic este neacoperit n sensul c doi codoni vecini nu au nucleotide comune i este
fr virgule, ntre doi codoni nu exist spaii sau ali codoni care s joace rolul unor semne de
punctuaie.
S-a demonstrat c citirea mesajului genetic ncepe dintr-un punct fix, se realizeaz ntr-un
singur sens, astfel c, absena unui nucleotid (deleie) sau adugarea altuia (adiie), schimb sensul
mesajului.
Universalitatea codului genetic n lumea vie demonstreaz pe de o parte vechimea sa i,
totodat, constana sa n timp.

BIOSINTEZA PROTEINELOR

Proteinele au un rol esenial n metabolismul celular, nsi funciile materialului genetic sunt
condiionate de o serie de enzime sau proteine cu rol structural.
Enzimele particip la replicarea ADN i ARN, la transcripia informaiei genetice i la
sinteza proteinelor.
Proteinele structurale intr n alctuirea cromozomului, a membranelor celulare, a
componentelor celulare, particip la asamblarea ribozomilor.
Procesul de biosintez a proteinelor este mult mai complex dect cel de sintez a acizilor
nucleici i cuprinde dou etape importante: transcripia informaiei genetice i translaia informaiei
genetice.


Transcripia informaiei genetice

Transcripia constituie fenomenul prin care informaia genetic de pe o poriune din catena
de ADN este transcris (copiat) ntr-o molecul de ARN
m
. Transcripia mesajului genetic din
molecula de ADN pe cea din ARN
m
se face ntr-o form care servete ca matri pentru sinteza
proteinelor. Sinteza ARN
m
este catalizat de enzima ARN-polimeraza, enzim universal ce a fost
identificat n celulele bacteriene, vegetale i animale.
Mecanismul propriu-zis al transcripiei informaiei genetice din ADN n molecula de ARN
m

se realizeaz astfel: enzima ARN-polimeraza se leag specific ntr-o poziie a moleculei de ADN, ce
corespunde cu nceputul unei gene. Legturile de hidrogen se rup pe poriunea genei respective,
segmentul respectiv de caten se rotete cu 180 n spaiu, servind ca matri pentru sinteza catenei de
ARN
m
. ARN-polimeraza asigur ncatenarea corect a ribonucleotidelor existente n nucleu. Odat cu
naintarea ARN-polimerazei de-a lungul matriei ADN, se elibereaz treptat noua caten n citoplasm,
unde se asociaz cu ribozomii formnd complexe denumite poliribozomi.
Dup ce s-a realizat transcripia, se refac legturile de hidrogen ntre catenele moleculei de
ADN.
De o foarte mare importan este descoperirea c procesul de transcripie la nivelul unei gene
se realizeaz pe o singur caten de ADN. Aa se explic faptul c o gen deine informaia genetic
necesar sintezei unei singure proteine.
n ceea ce privete locul de pe catena de ADN unde se iniiaz procesul de transcripie, J. D.
Watson (1974) arat c ARN-polimeraza este cea care recunoate codonii de iniiere.
Spre deosebire de ADN-polimeraza care este format dintr-un singur lan polipeptidic, ARN-
polimeraza este alctuit din cinci lanuri polipeptidice notate cu ', , ,
2
i W, fiecare cu o mas
molecular diferit. Enzima poate s catalizeze formarea legturilor dintre nucleotide, chiar dac
lipsete lanul , deci acest lan nu are rol catalitic, ci acela de a recunoate catena matri i secvena
de dezoxiribonucleotide, de unde se iniiaz transcripia. Poziia din molecula ADN unde se leag
ARN-polimeraza pentru a iniia transcripia se numete promotor. ncheierea transcripiei ARN
m
este
controlat de o protein specific numit factor .
n sens mai larg, transcripia se refer i la sinteza celorlalte dou tipuri de ARN implicate n
procesul de biosintez a proteinelor.
Acidul ribonucleic solubil sau de transfer (ARN
s
) se sintetizeaz tot pe o matri de ADN.
Fiecare tip de ARN
s
este codificat de cte o singur secven de nucleotide din ADN, deci de cte o
gen. Acidul ribonucleic ribozomal (ARN
r
) este produsul direct al mai multor gene. Detalii despre
ARN
s
i ARN
r
au fost precizate ntr-un paragraf anterior.

Translaia informaiei genetice

Translaia este mecanismul prin care secvena codonilor din ARN
m
este tradus ntr-o
anumit succesiune de aminoacizi ce intr n constituia unui lan polipeptidic. Realizarea procesului
de translaie implic participarea mai multor componente celulare ce alctuiesc un aparat de translaie.
Aparatul de translaie cuprinde urmtoarele elemente: diferite tipuri de ARN
s
corespunztoare tipurilor
de aminoacizi, aminoacizii, ribozomii, enzimele activatoare ale aminoacizilor, cofactorii energetici,
ATP i GTP, factori de iniiere, alungire i terminare a sintezei lanului polipeptidic.
Pentru sinteza celular a proteinelor este necesar o anumit cantitate de energie, formarea
unei singure legturi peptidice necesitnd 0,5 kcal/mol. Aceast energie este asigurat de acidul
adenozintrifosforic (ATP) care, prin hidroliz, pune n libertate unul sau doi radicali fosforici elibernd
energia corespunztoare:

ATP + H
2
O AMP + P P + 8 kcal/mol

Sinteza proteic se desfoar concomitent cu hidroliza ATP n AMP i doi radicali fosforici,
rezultnd 8 kcal/mol, din care 0,5 kcal/mol sunt folosite pentru realizarea legturii peptidice iar restul
de 7,5 kcal/mol pentru meninerea echilibrului reaciei n favoarea sintezei proteice i nu a hidrolizei.
O prim etap n sinteza proteinelor o constituie activarea aminoacizilor i formarea
complexului aminoacil-ARN
s
. Activarea aminoacizilor se realizeaz cu ajutorul energiei rezultate din
hidroliza ATP i n prezena enzimei aminoacilsintetaza (E). Reacia de activare a aminoacizilor poate
fi redat astfel:

AA
1
+ ATP + E AA
1
AMP E + P P

Aminoacizii, dup ce au fost activai, se pot ataa de molecula unui ARN
s
specific:

AA
1
AMP E + ARNs
1
AA
1
- ARNs
1
+

+ AMP + E

Cele dou reacii au loc succesiv, sunt catalizate de aceeai enzim (aminoacilsintetaza) i ca
atare se poate scrie reacia general:

aminoacilsintetaza
AA
1
+ ATP + ARNs
1
AA
1
- ARNs
1
+

+ AMP + P P

n urmtoarea faz complexul aminoacil-ARN
s
se ataeaz de poliribozomi, la nivelul crora
are loc iniierea sintezei lanului proteic. Ribozomul asigur de aa manier asocierea acestor elemente
nct zona anticodon a ARN
s
s poat recunoate codonul corespunztor din ARN
m
, ducnd astfel la o
descifrare corect a mesajului genetic. Dup fixarea aminoacidului, ARN
s
devine liber putnd
transporta alte molecule de aminoacid la nivelul ribozomului. ncatenarea aminoacizilor se realizeaz
de ctre enzima peptidiltransferaza i const n realizarea legturilor peptidice ntre gruparea carboxil a
unui aminoacid i gruparea aminic a celuilalt (figura 3.7.).
Reacia de ncatenare a aminoacizilor poate fi redat astfel:

peptidiltransferaza
AA
1
- ARNs
1
+ AA
2
- ARNs
2
+ AA
3
- ARNs
3
+
AA
1
- AA
2
- AA
3
+ ARNs
1
+ ARNs
2
+ ARNs
3
+











Fig. 3.7. Reprezentarea schematic a procesului de translaie
(dup Kimball, 1978)
ncheierea sintezei catenei polipeptidice se realizeaz cu ajutorul a doi factori proteici care
sunt activai n prezena codonilor de ncheiere UAA, UAG i UGA. Ca urmare, catena polipeptidic
se detaeaz de ribozomi i de ARN
s
care a adus ultimul aminoacid.
n ceea ce privete viteza cu care se realizeaz biosinteza proteic, exist o serie de date att
la procariote ct i la eucariote. Transcripia genei ce determin sinteza enzimei ce intervine n
producerea triptofanului la Escherichia coli are loc cu o vitez de 28 nucleotide/sec., iar translaia cu
viteza de 7 aminoacizi/sec. O molecul complet de hemoglobin uman este sintetizat n 35 secunde
(gena ce determin hemoglobina conine 670 nucleotide).
n prezent s-a reuit sinteza unor substane proteice ntr-un sistem celular liber (populaii de
celule la care s-a distrus membrana celular), folosind ARN
m
artificial (M. W. Niremberg, 1961).