REGLAJUL GENETIC AL ACTIVITII GENELOR

Celula vie conine o cantitate mare de informaie genetic iar procesele metabolice ce au
loc funcioneaz cu o mare eficien, asigurnd economisirea la maximum a energiei.
Cantitatea mare de informaie din celulele procariotelor i eucariotelor permite
funcionarea acestora n cele mai variate condiii de mediu. n timp ce virusurile posed n
programul lor genetic 3-4 gene, bacteriile 2.000-3.000 gene, plantele i animalele superioare au
un program genetic foarte complex, constituit din cteva zeci de mii de gene.
Genele ce alctuiesc programul genetic al vieuitoarelor nu funcioneaz toate deodat,
ci intr n funcie n mod succesiv, n funcie de tipul i cantitatea de enzime i proteine, pe
msura dezvoltrii individului. Mecanismele de reglare a activitii genelor sunt foarte complexe
att la procariote ct i la eucariote.
Funcionarea celulei este dependent de cele dou laturi ale metabolismului:
catabolismul (dezasimilaia), prin care o serie de substane sunt descompuse i se elibereaz i o
anumit cantitate de energie i anabolismul (asimilaia) n urma creia se sintetizeaz substane
complexe din substane simple. Fiecare etap a asimilaiei i dezasimilaiei este catalizat de o
anumit enzim, care la rndul ei este dependent de informaia uneia sau a mai multor gene.

Reglajul activitii genetice la procariote

Teoria reglajului genetic la procariote a fost elaborat de geneticienii francezi Francois
Jacob, Andr Lwoff i Jaques Monod, n anul 1961, realizare pentru care ei au fost distini, n
anul 1965, cu premiul Nobel. n aceast lucrare ei demonstreaz experimental i practic c sinteza
proteinelor i a enzimelor variaz n funcie de necesitile celulei i este controlat genetic. F.
Jacob i J. Monod au descoperit mai multe moduri de reglare genic a sintezei proteice:
- inducia enzimatic;
- represia enzimatic;
- retroinhibiia enzimatic.
Inducia enzimatic este fenomenul prin care celulele produc sistemul enzimatic
necesar pentru metabolizarea substanelor care de obicei nu sunt prezente n mediu.
Proprietile enzimatice ale bacteriilor sunt influenate de mediul n care cresc, fenomen
denumit adaptare enzimatic, ceea ce confer acestor organisme posibilitatea de a crete n
medii diferite. Enzimele ce intervin n catalizarea diferitelor laturi ale metabolismului au fost
mprite n dou categorii: enzime adaptive a cror cantitate i activitate variaz n funcie de
condiiile de mediu i enzime constitutive a cror cantitate nu depinde de mediu i se sintetizeaz
continuu.
J. Monod (1941) a descoperit fenomenul de diauxie prin care o bacterie ce crete pe un
mediu de glucoz i lactoz, crete i se nmulete pn ce glucoza este epuizat, iar dup o
perioad de stagnare, crete din nou i se nmulete folosind ns lactoza.
Un exemplu de inducie enzimatic a fost descoperit la drojdia de bere (Saccharomyces
cerevisiae) care poate s fermenteze lactoza din lapte cu ajutorul enzimei lactaza. Tulpinile de
drojdie de bere, care au fost crescute mai multe generaii pe mediu de lactoz, vor conine n
cantitate mare enzima lactaza, iar n acest caz, fenomenul de fermentaie ncepe foarte repede
(aproximativ o or de la incubaie). n cazul unor tulpini care nu au fost crescute n prealabil pe
mediu de lactoz, fermentaia nu are loc pentru c acestor tulpini le lipsete lactaza. Dac aceste
tulpini sunt inute n continuare n mediu de lactoz, dup aproximativ 14 ore, fermentaia se
declaneaz, fapt ce arat c lactoza induce producerea lactazei de ctre celulele drojdiei. n acest
caz lactoza ce trebuie metabolizat acioneaz ca un inductor.
n concluzie se poate afirma c inducia enzimatic este caracteristic sistemelor de
catabolism (dezasimilaie) fiind declanat de substane denumite inductori.

Represia enzimatic este un fenomen opus induciei enzimatice, prin care este inhibat
sinteza unei proteine datorit unui produs final al unui lan metabolic denumit represor.
Fenomenul de represie enzimatic a fost pus n eviden la bacteria Escherichia coli.
Astfel, s-a demonstrat c sinteza aminoacidului triptofan este inhibat atunci cnd n mediul de
cultur se adaug cantiti mici de triptofan sau analogi ai acestuia. Represia enzimatic este
caracteristic unor sisteme enzimatice ce intervin n anabolismul unor constitueni cu rol esenial
n organism (aminoacizi, nucleotide). Represia enzimatic poate aciona asupra mai multor
proteine ce fac parte din acelai lan metabolic, prin intermediul represorului. Dac un metabolit
acioneaz asupra represorului suprimndu-i activitatea, se deblocheaz sinteza tuturor enzimelor
din acelai lan metabolic. Efectul genetic al represorului const n blocarea uneia sau a mai
multor gene prin aceasta sistarea sintezei uneia sau a mai multor proteine specifice.
Substanele capabile s modifice efectul de represie al represorului se numesc efectori.
Efectorii pot fi inductori, cnd inhib activitatea represorului i corepresori, cnd intensific
activitatea de represie a represorului.
Retroinhibiia enzimatic denumit i inhibiia prin feed-back sau inhibiia prin
produs final este un sistem de reglare a sintezei proteice prin cantitatea de produs final. n cazul
unui lan metabolic, exist mai multe etape, fiecare fiind catalizat de o anumit enzim,
rezultnd un produs final. n cazul retroinhibiiei enzimatice, produsul final, ntr-o cantitate mai
mare dect cea normal, acioneaz asupra enzimei din prima treapt a lanului metabolic i ntreg
lanul metabolic este oprit.
Fenomenul a fost studiat la bacteria Escherichia coli. Aminoacidul L-treonin se
transform ntr-un alt aminoacid, L-izoleucin n cinci etape, fiecare fiind catalizat de ctre o
enzim (figura 3.8.).

















Figura 3.8. - Represia enzimatic i retroinhibiia enzimatic
n cazul cii metabolice ce asigur sinteza izoleucinei.

n acest exemplu, cantitatea de izoleucin poate fi reglat att prin retroinhibiie
enzimatic ct i prin represie enzimatic. Prin retroinhibiie enzimatic, izoleucina n cantitate
prea mare blocheaz activitatea primei enzime din lanul metabolic, treonin deaminaz i ntreg
lanul metabolic este oprit. Prin represie enzimatic, aminoacidul izoleucin blocheaz activitatea
tuturor celor 5 enzime din lanul metabolic. Prin urmare sinteza izoleucinei este controlat printr-
un sistem dublu, cele dou sisteme fiind independente.
n cazurile de mai sus, produii celulari sunt controlai numai de produii finali ai liniei
metabolice respective. Sunt ns i cazuri cnd unii produi celulari sunt controlai de produii
finali ai altei linii metabolice. De exemplu, bazele azotate purinice i pirimidinice ce intr n
alctuirea acizilor nucleici sunt sintetizate de dou linii metabolice paralele, dar cele dou linii se
regleaz reciproc. Acest lucru are o mare importan deoarece cele dou grupe de baze trebuie c
fie ntr-un anumit raport n momentul replicrii acizilor nucleici. Experimental s-a demonstrat c
proporia bazelor pirimidinice este controlat de produii finali pirimidinele, dar i de purine,
astfel: pirimidinele n exces inhib prima enzim din lanul metabolic al pirimidinelor, iar
purinele n exces stimuleaz activitatea aceleiai enzime. Prin acest proces, bazele azotate sunt
sintetizate economic, exact n cantitile necesare replicrii acizilor nucleici.
Modelul Jacob-Monod de reglare a activitii genelor
F. Jacob i J. Monod (1961), pe baza experienelor efectuate la Escherichia coli asupra
locusului lac (lactaz), privind fenomenele de inducie enzimatic i represie enzimatic, au ajuns
la concluzia c reglarea sintezei proteice este de natur genic. n acest proces de reglaj sunt
implicate trei categorii de gene: gene structurale, gene reglatoare i gene operatoare.
Genele structurale sunt segmente din macromolecula de ADN i au rolul de a
determina secvena aminoacizilor n moleculele proteice sintetizate de celul.
Genele reglatoare sunt localizate tot pe ADN i au rolul de a sintetiza represorii
specifici ce controleaz activitatea genelor structurale. Represorul nu interacioneaz direct cu
genele structurale, ci prin intermediul celui de-al treilea tip de gene, genele operatoare sau
operator. Operatorul este o gen adiacent genelor structurale, care are posibilitatea de a se
combina sau nu cu represorul, inducnd sau blocnd funcionarea genelor structurale. Gena
operatoare poate fi considerat un receptor al represorului. Gena operatoare este un fel de
comutator chimic care declaneaz sau nu intrarea n activitate a genelor structurale. naintea
genelor operatoare i structurale este localizat promotorul care iniiaz procesul de transcripie a
informaiei genetice al genelor structurale. Ansamblul format din promotor, gena operatoare i
genele structurale se numete operon, ocup un fragment de cromozom i funcioneaz
coordonat.
Schema modelului Jacob-Monod privind reglarea sintezei proteice prin inducie i
represie enzimatic este dat n figura 3.9.
Interaciunile dintre represor i efector sau dintre represor i operator (gena operatoare)
are loc astfel: n sistemele represibile gena reglatoare determin sinteza represorului R, activ, care
interacioneaz cu gena operatoare i n acest caz, gena operatoare blocheaz activitatea genelor
structurale, fapt ce face ca ARN-polimeraza s nu poat sintetiza ARN
m
i ca atare, nu se vor
sintetiza proteine.















Figura 3.9. - Modelul Jacob-Monod privind reglarea sintezei proteice


n sistemele inductibile, un efector negativ sau inductor reacionnd cu represorul (R) l
transform ntr-o form inactiv (R') care nu poate reaciona cu gena operatoare (O), fapt ce face
ca ARN-polimeraza s iniieze procesul de transcripie a ARN
m
. n celule se pot forma molecule
cu greutate molecular mic, denumite efectori pozitivi sau corepresori, care poate transforma
represorul inactiv (R') ntr-o form activ (R), care reacionnd cu gena operatoare (O) oprete
transcripia ARN
m
.
n ceea ce privete modul de transmitere a informaiei genetice de ctre genele
structurale dintr-un operon pentru sinteza unei proteine, s-au emis dou ipoteze: una aparine lui
Jacob i Monod (1961) care susine c fiecare gen dintr-un operon i transcrie un ARM
m

propriu (o gen - un mesager) iar a doua ipotez formulat de S. Spiegelman i R. G. Martin
(1963) (citai de C. Panfil, 1974), susine c ntreaga informaie a unui operon este transmis ntr-
o singur molecul de ARN
m
(un operon - un mesager).

Reglajul activitii genelor la eucariote

Structura molecular a cromozomului la eucariote este mult mai complex dect la
procariote. Cromozomii eucariotelor sunt alctuii din: 13-16% ADN, 12-13% ARN i 68-72%
proteine histonice i nehistonice. La eucariote, programul genetic este alctuit dintr-un numr
foarte mare de gene (cteva zeci de mii), gene care nu funcioneaz simultan, chiar mai mult, n
unele celule difereniate, majoritatea genelor sunt inactive. Toate aceste aspecte fac ca reglajul
genetic la eucariote s fie mult mai complex, reglajul sintezei proteice realizndu-se la nivelul
genei i nu la nivelul operonilor. Se poate spune c ARN
m
la eucariote transcrie mesajul genetic
al unei singure gene, deci pentru un singur lan polipepidic. Acest fapt a fost demonstrat prin
compararea mrimii poliribozomilor angajai n sinteza miozinei, hemoglobinei sau
gammaglobinei.
Funcionarea ADN al eucariotelor ca matri pentru sinteza ARN
m
este dependent de
conformaia spaial tridimensional a nucleohistonelor. Superspiralizarea nucleohistonelor face
ca ADN s nu poat funciona ca matri pentru ARN
m
. Ca regul, cromatina condensat nu poate
fi transcris, pe cnd cromatina difuz permite ca ADN s funcioneze ca matri pentru ARN
m
,
sinteza acestuia realizndu-se n interfaz.
La eucariote, reglajul activitii genelor are loc la trei niveluri:
a) Reglajul la nivelul transcripiei, care const n cuplarea proteinelor cromozomice cu
un segment din macromolecula de ADN de pe care trebuie s se transcrie informaia genetic i n
acest caz se blocheaz sinteza ARN
m
.
b) Reglajul la nivelul translaiei, ce const n degradarea ARN
m
format prin transcripie
de ctre enzime denumite nucleaze, localizate de o parte i de alta a membranei nucleare.
c) Reglajul posttranslaional ce se manifest la nivelul catenelor polipeptidice, unde
intervin o serie de factori ce mpiedic agregarea monocatenelor pentru a forma stucturi
cuaternare, tiindu-se c aceast structur este funcional.
n realizarea reglajului genetic la eucariote, un rol deosebit de important l au proteinele
cromozomice, histonele i nehistonele, care mpreun cu catena ADN i ARN cromozomic
formeaz cromatina.
Histonele sunt proteine bazice deoarece sunt bogate n aminoacizii bazici, arginina,
lizina i histidina i complet lipsite de triptofan.
Histonele sunt lipsite de specificitate fiind grupate n cinci clase n funcie de ponderea
celor trei aminoacizi i n funcie de greutatea molecular. Histonele ca i ADN sunt sintetizate
numai n faza S a interfazei, de ctre o serie de gene cromozomice. Histonele se caracterizeaz
printr-o mare stabilitate n cursul evoluiei i o mare uniformitate de o specie la alta. De exemplu,
histona H
1
de la mazre difer numai prin doi aminoacizi fa de aceeai histon de la taurine.
Histonele asigur stabilitatea structurii cromozomului i sunt implicate n transcripia
mesajului genetic, n mod nespecific.
Nehistonele sunt proteine cromozomice foarte variate ca structur i funcie, cu o
greutate molecular cuprins ntre 10.000 i 15.000 daltoni. Din grupul proteinelor nehistonice
fac parte: ADN i ARN polimerazele, enzimele ce intervin n sinteza i degradarea proteinelor,
proteinele cu rol structural i reglator din cromozom.
Proteinele nehistonice reacioneaz n mod specific cu molecula de ADN, determinnd
transcripia difereniat a genelor n funcie de esut i de celule, determinnd ce gene vor fi
transcrise, avnd un caracter reglator specific.
Modelul de reglaj genetic la eucariote este prezentat n figura 3.11. Conform acestui
model, proteinele nehistonice se ataeaz n mod specific la nivelul unei gene, care n mod
obinuit este represat de proteinele histonice. ntre cele dou tipuri de proteine are loc o reacie
de fosforilare, prin care se elibereaz un radical fosforic, n urma creia complexul histon-
nehiston rmne ncrcat negativ. Acest complex este respins de molecula de ADN a crei
sarcini electrice sunt tot negative, n aceast zon, ADN eliberat de histone, putndu-se realiza
transcripia ARN
m
. n momentul n care gena respectiv nceteaz s mai funcioneze, se refac
moleculele de histone pe segmentul respectiv de ADN.
La organismele eucariote reglajul genetic se realizeaz nu numai la nivelul genelor
individuale ci la nivelul segmentelor cromozomice, a cromozomilor sau chiar a genomului.
Astfel, reglajul genetic se poate realiza i prin heterocromatinizare. Heterocromatina
este de obicei localizat n jurul centromerului i n zona satelitului cromozomului. n zona
heterocromatic, cromatina este puternic spiralizat iar ADN are o funcionalitate redus.





























Fig. 3.11. - Reglajul genetic la eucariote cu ajutorul proteinelor histonice
i nehistonice

Heterocromatina este de dou tipuri: constitutiv i facultativ. Heterocromatina
constitutiv conine o cantitate mare de ADN repetitiv (redundant) formnd de obicei gene
nefuncionale. Heterocromatina facultativ rezult din heterocromatinizarea unor regiuni
eucromatice. Prin transferul unui segment eucromatic n apropierea heterocromatinei constitutive,
acesta se heterocromatinizeaz i invers.
Un alt fenomen este heterocromatinizarea unuia din cei doi cromozomi X de la sexul
femel al mamiferelor, formnd cromatina sexual, astfel nct, la ambele sexe funcioneaz numai
cte un cromozom X din perechea de cromozomi ai sexului. Acest fapt a fost demonstrat la multe
organisme la care sexul femel este homogametic.
La Drosophila melanogaster genele ce determin culoarea galben deschis a ochilor este
localizat pe cromozomul X, dar s-a constatat c ambele sexe produc aceeai cantitate de
pigment. La om, gena ce determin sinteza enzimei glucoz-6-fosfat dehidrogenaza (G-6-PD)
este plasat pe cromozomul X, ns ambele sexe produc aceeai cantitate de enzim.
Heterocromatinizarea unui cromozom X se realizeaz numai n celulele somatice, n celulele
sexuale ambii cromozomi X sunt funcionali.
Se poate constata c, n cazul acesta, reglajul genetic se realizeaz la nivelul ntregului
cromozom, deoarece toate genele de pe cromozomul X sunt inactive.
Reglajul genetic se poate realiza la unele organisme prin inactivitatea ntregului genom
sau cu ajutorul unor hormoni.
n ultim instan diferenierea celular la eucariote este tot un proces de reglaj genetic
celular, deoarece n unele celule sunt activate numai anumite gene i anume n celulele
specializate.