Reacciones del colesterol

salkowsky: cuando las soluciones cloroformicas de colesterol se les adiciona

un volumen igual de cido sulfrico concentrado y se mezclan suavemente, se -
mecanismo exacto de la reaccin y la naturaleza del producto no se ha precisado,
se propone que el color resulta de la formacin de dobles enlaces adicionales o
bien a partir de la condensacin de 2 molculas de colesterol para formar
biesfenoides.
lieberman-rkhard: el colesterol sufre una oxidacin gradual, formndose una
molcula de colestapolieno que posee un doble enlace adicional al colesterol, la
etapa inicial consiste en la protonacion del oh del colesterol,
desprendindose agua, obtenindose el ion carbonio 3,5-colestadieno que
constituye el primer paso de la reaccin de color. la oxidacin del ion carbonio por
el so2 produce un acido colesta-hexano-sulfonico cromoforo, produciendo la
tonalidad verdosa. Se utilizan reactivos especficos para la coloracin de los
derivados del colesterol. se usa un cido fuerte para que el colesterol acte como
un alcoho y as pueda ocurrir la deshidratacin con la formacin de un conjugado
pi. El medio debe ser anhdrido al fin de evital que las molculas de agua no
interfieran en la reaccin de colesterol a colesterileno.
El colesterol es una sustancia no coloreada, por lo que resulta difcil poder realizar
su caracterizacin. Para este esperimento usamos tcnicas colorimtricas, con la
finalidad de poder agregar grupos cromforos y poder adquirir una coloracin
especfica para su analisis.
*Mtodo de Lieberman-Schultz (modificado por Lewis y Lobban, 1961): El
colesterol es oxidado con alumbre de hierro, seguido con una mezcla en partes
iguales de cido sulfrico y cido actico, dando un color azul-verde con el
colesterol libre y sus steres. Esta tcnica es especfica para colesterol, pero poco
sensible, adems es poco estable, y debe ser observada inmediatamente o por lo
menos antes de 60 min., la marca o tincin es algo borrosa, de difcil localizacin y
suelen quedar burbujas en los preparados.
*Mtodo cido perclrico-naftoquinona (PAN): Es un mtodo preferido por su
sensibilidad. Los cortes son calentados en una solucin de cido perclrico, 1,2-
naftoquinona-4-cido sulfnico, formaldehdo y etanol. Se piensa que en una
primera etapa, el cido perclrico convierte el colesterol en un conjugado diana:
En la prxima fase del mtodo, el reactivo diana reacciona con 1,2-naftoquinona-
4-cido sulfnico para formar un compuesto azul. La qumica de la segunda
reaccin y la naturaleza del compuesto formado son aun desconocidas, al igual
que el rol que juegan el etanol y el formaldehdo contenidos en la solucin.
Se debe hacer hincapi en que el mencionado mtodo es ineficaz a menos que el
colesterol sea oxidado con agentes qumicos como el alumbre de fierro, o por
exposicin prolongada al oxgeno atmosfrico (aire).
*Mtodo Digitonina-PAN para colesterol libre: El colesterol libre podra ser
distinguido de los esteres por un tratamiento previo de precipitacin con digitonina.
La digitonina es un esteroide glicosilado, proveniente de una planta, forma con el
colesterol un producto que es insoluble en acetona fra. Los esteres de colesterol
permanecen solubles en acetona fra, al igual que otros lpidos hidrofbicos. En
resumen, este mtodo consiste en una precipitacin del colesterol libre con
digitonina, seguida de una extraccin de los esteres de colesterol y otros lpidos
hidrofbicos con acetona fra, y finalmente, la realizacin del mtodo de PAN
descrito anteriormente.
Una innovacin interesante en la histoqumica del colesterol involucra la utilizacin
de enzimas. Estos mtodos constan de dos etapas: primero los esteres de
colesterol son hidrolizados por una colesterol esterasa en esterol libre, para que
luego, en una segunda etapa, el colesterol sea oxidado por una colesterol
oxidasa,liberando peroxido de hidrgeno, el que reacciona simultneamente con
diaminobenzidina (DAB), para general un precipitado pardo e insoluble en el sitio
del colesterol.