Sunteți pe pagina 1din 4

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL

INFECIILOR PRODUSE DE GENURILE


CORYNEBACTERIUM, LISTERIA
13.1. Genul Corynebacterium
Genul Corynebacterium cuprinde un grup heterogen de bacterii n cadrul crora se distinge n
primul rnd specia C. diphteriae, specie nalt patogen care produce difteria i o mare varietate de
bacili gram pozitivi, nesporulai, aerobi i facultativ anaerobi, imobili, catalazo-pozitivi i cu dispunere
caracteristica de litere chinezeti !pecii nalt patogene sunt pe lng C. diphteriae i " ulcerans i
C. pseudotuberculosis, deoarece sunt singurele specii care pot secreta to#ina difteric, avnd n comun
i unele caractere biochimice
Semnificaia clinic! $ifteria este o to#iinfecie produs de "orynebacterium diphteriae care se
manifest n forma ei caracteristic printr-o leziune la poarta de intrare, cel mai frecvent la nivelul
amigdalelor, unde produce un e#udat fibros aderent %falsa membran& asociat cu fenomene to#ice
generale, datorit difuzrii n organism pe cale hematogen a to#inei specifice ' form special de
difterie este difteria plgilor (ceasta se observ, rar, la nou-nscui %difteria cordonului ombilical& i
la nivel vaginal sau pe rni %n zonele tropicale& etc
C. ulcerans produce mastite la vite de unde se transmite prin lapte la om, care poate face o boal
asemntoare difteriei
C. pseudotuberculosis este un comensal al animalelor %oi, cai& de unde se transmite fie prin lapte fie
prin contact direct la om )oala are manifestri asemntoare difteriei
*a aceste specii se adaug cor+nebacteriile comensale, care populeaz pielea, mucoasele tractului
respirator superior, gastro-intestinal i uro-genital ca, de pild C. xerosis, C. striatum, grupul JK, %un
grup de cor+nebacterii multirezistente la antibiotice care au fost propuse ca o nou specie a genului
Corynebacterium sub denumirea de C. jeikeium& C. minutissimum, C. genitalium i multe altele
(ceste specii comensale pot produce infecii n anumite condiii n care ele se manifest ca germeni
oportuniti ,n ultimii -. ani incidena infeciilor produse de aceste cor+nebacterii a crescut
considerabil ,n consecin, se recomand identificarea lor ori de cte ori sunt izolate din produse
natural sterile i posibil implicate n etiologia unei infecii
13.". Corynebacterium dyphteriae
Rec#l$a%ea $iagnosticul de laborator urmrete confirmarea diagnosticului clinic de boal i a
strii de purttor prin izolarea i identificarea bacilului difteric din produsele patologice i evidenierea
potenialului to#igen
*ocalizarea cea mai frecvent a falselor membrane o ntlnim la nivelul amigdalelor i a faringelui
$e aici, din straturile profunde ale depozitului se va recolta secreie cu mai multe tampoane farigiene
*a purttori, se va recolta secreia nazal cu tampoane fle#ibile de alginat, cu care s se poat ptrunde
pn pe pereii posteriori ai nazofaringelui /robele se transport pe medii de transport obinuite !tuart
sau (mies $ac prelucrarea se face dup 01 de ore de la recoltare, se nsmneaz tampoanele n
mediu de mbogire cu telurit, ca de pild '"!2 %ou, cistein, ser, telurit&
E&amenul 'i%ec$ 3#amenul microscopic al secreiei faringiene nu are valoare diagnostic, ntruct
bacilul difteric nu poate fi deosebit pe baza caracterelor sale morfologice de cor+nebacteriile
comensale care populeaz mucoasa respiratorie superioar 3l are o valoare orientativ n cazul n care
diagnosticul clinic este evident
I(#la%ea /robele recoltate se nsmneaz pe geloz snge i pe medii selective ce conin telurit,
cum sunt mediul 2indsdale i Gundel -2ietz $ac nu avem medii selective, se aplic pe geloz snge
un microcomprimat de fosfomicin care va inhiba dezvoltarea florei asociate
$ac tampoanele nu au fost ntroduse iniial n mediu de mbogtire '"!2, se nsmneaz i pe
mediul *4ffler %conine ser coagulat de bou& pe care bacilul difteric se dezvolt foarte bine ,n final
tampoanele se introduc ntr-un mediu lichid, ce conine ser i snge, pentru 01h, iar apoi se fac
subculturi pe mediile cu telurit
I'en$ifica%ea Examenul microscopic al coloniilor crescute pe mediul *4ffler arat prezena
cor+nebacteriilor, care sunt bacili gram pozitivi la limit, drepi sau uor ncurbai, cu capetele
mciucate, ntre 0-56 lungime, grupai sau n grmezi cu forme asemntoare literelor chinezeti sau
ma7usculelor 8orfologia poate, ns, s mbrace aspecte diferite, bacili putnd avea capetete ascuite,
dimensiuni mai mici etc
Caractere culturale
9 pe geloz snge bacilul difteric dezvolt colonii albe gri-perlate care uneori sunt ncon7utare de
o zon mic de hemoliz:
9 pe mediul 2insdale C. diphteriae, C. ulcerans i C. pseudotuberculosis apar sub forma unor
colonii mici, cenuii-negre care prezint uneori un halou cafeniu, ce se intensific dup 1; ore
de incubaie la <=>" ?aloul este rezultatul reaciei dintre teluritul de potasiu i ?
0
! produs de
aceste cor+nebacterii din *-cistina din mediu i este constituit dintr-un precipitat de sulfur de
telur $ifterimorfii, dac nu sunt inhibai de mediu, dau colonii mari negre, lipsite de halou:
@ pe mediul Gundel 2ietz - bacilii difterici apar sub form de colonii friabile de culoare neagr
intens %datorit metabolizrii teluritului de potasiu din mediu, n telur metalic& (spectul
coloniilor de pe mediul Gundel-2ietz, e#aminate la lup, permite orientarea cu privire la biotipul
de bacil difteric 2ipul gravis produce colonii negre, plate, cu suprafaa rugoas, ombilicate, cu
striuri radiare i margini crenelate %aspect de floare de margaret& 2ipul intermedius d colonii
negre, plate, cu centrul acuminat i mai nchis la culoare, cu margini regulate 2ipul mitis are
colonii negre, rotunde, cu margini regulate, suprafaa neted i lucioas:
@ pe mediul *4ffler bacilii difterici produc colonii albe cremoase
"oloniile suspecte se trec obligatoriu pe mediu *4ffler, identificarea efectundu-se pe germenii
crescui numai pe acest mediu
*a e#amenul microscopic pe preparate colorate $el-Aecchio sau Beisser se evideniaz granulele
metacromatice sau corpusculii )abe 3rnst ,n coloraia $el Aecchio, corpul bacterian apare colorat
galben deschis iar granulele de volutin n brun-verzui )acilii au o dispoziie caracteristic de litere
chinezeti sau ma7uscule, C, *, A etc "ele trei biotipuri au aspect diferit la e#amenul microscopic
2ipului mitis i corespunde descrierea de mai sus 2ipul intermedius este foarte pleomorf, bacilii fiind
lungi 2ipul gravis prezint de obicei bacili scuri, cocoizi sau piriformi ce seamn mai degrab cu
difterimorfii dect cu bacilii difterici
Ddentificarea de precizie se face prin teste biochimice, dintre care cele mai importante sunt
fermentrile de zaharuri !e mai cerceteaz prezena cistinazei, care este pozitiv la baciul difteric i a
ureazei care lipsete
testul cistinazei proba !isu". 8etoda se bazeaz pe proprietatea bacilului difteric de a
descompune cistina cu producere de ?
0
! i pe calitatea acestuia de a se nnegri n prezena acetatului
de plumb din mediu, prin producerea de sulfur de plumb 8ediul de cultur folosit conine geloz, ser
de bou, cistin i acetat de plumb !e nsmmeaz tulpina de cercetat prin nepare cu ansa dreapt
pe mediu %care este repartizat n eprubete de hemoliz& i se incubeaz la termostat -; ore )acilii
difterici se dezvolt n profunzime, producnd o nnegrire pe traiectul nepturii i un halou cafeniu n
7ur datorit eliberrii ?
0
! n prezena acetatului de plumb din mediu 2estul este negativ pentru
difterimorfi
testul ureazei se bazeaz pe eliberarea de amoniac de ctre ureaza bacterian, care acioneaz
asupra unui mediu cu uree Eeacia este pozitiv pentru difterimorfi i negativ pentru difterici
#erment$rile de zaharuri se efectueaz pe mediu ?iss %ap peptonat, ser de bou, indicator
(ndrade-fu#in acid i soluii de zaharuri& sau prin cor+netest n care substratul este reprezentat de
microdiscuri impregnate cu zaharuri, avnd ca indicator albastru de bromth+mol 2estul se e#ecut n
plci de plastic cu godeuri, fiind rapid %se citete dup 1 ore la <=>"& i recomandat ca o alternativ la
testul pe mediul ?iss, care dureaz -; ore
T#&i)ene(a !tabilirea potenialului to#igen este obligatorie la toate tulpinile de ". diphteriae, C.
ulcerans i C. pseudotuberculosis 2estarea se face cel puin din -F colonii, deoarece la acelai pacient
pot fi prezente i tulpini neto#igene 2o#igeneza se poate evidenia in vivo prin inoculare la cobai,
precum i in vitro prin testul 3leG
%estul de toxigenez$ &in vivo' %boala e#perimental& se realizeaz pe cobai Dnoculul utilizat se
prepar fie prin suspendarea unei culturi de pe mediul *4ffler n bulion, fie dintr-o cultur bogat de
01 de ore n bulion !e in7ecteaz intraperitoneal unui cobai -FFF HD de antito#in difteric *a < ore
dup in7ectare se noculeaz acestui cobai i unui cobai neimunizat 0-< ml de suspensie bacterian
$ac tulpina este to#igen cobaiul neimunizat va muri n 01-=0 de ore cu semne specifice de
into#icaie diftericI edem gelatinos la locul de inoculare, lichid seros n pleur, congestia capsulelor
suprarenale (nimalul imunizat va supravieui $ac tulpina to#igen este C. ulcerans sau C.
pseudotuberculosis, se poate ntmpla ca ambele animale s moar, deoarece aceste dou specii pot
produce i alte to#ine n afar de to#ina difteric
%estul de toxigenez$ &in vitro'%3leG& 2estul se efectueaz n plci petri cu mediu 3leG %geloz cu
ser de bou& !e decupeaz pe diametrul plcii un an n care se introduc F,. ml ser antidifteric
nefenolat %antito#in difteric& $up absorbia serului, anul se plombeaz cu geloz !e face
nsmnarea cu cultur microbian de pe mediul *4ffler, perpendicular pe anul cu antito#in
difteric "oncomitent se nsmneaz i o tulpin martor, sigur to#igen !e incubeaz 01 ore la
temperatura de <=>" 2ulpina de cercetat este to#igen dac n unghiul format de linia de cultur i
an apare o linie de precipitare %imunodifuzie radial dubl&, linie obligatorie i la tulpina martor
*iniile de precipitare se intensific prin pstrare la frigider !pre deosebire de testul in vivo, care
deosebete to#inele secretate de cele < specii, n testul 3leG nu e#ist interferen
2o#igeneza se poate cerceta i pe culturi de celule, n care to#ina difteric produce un efect
citoto#ic la 01 de ore
Sen*i+ili$a$ea la an$i+i#$ice C. diphteriae este sensibil la toate antibioticele active fa de
bacteriile gram pozitive %penicilin, vancomicin, eritromicin etc& 2ratamentul difteriei este, ns,
imunologic, cu antito#in care s neutralizeze to#ina secretat de germen 2otui, antibioticele se
administreaz att bolnavilor precum i contacilor, n scopul limitrii transmiterii infeciei
13.3. Genul Listeria
Germenii din genul (isteria sunt bacili gram pozitivi, aerobi, nesporulai, cu dimensiuni cuprinse
ntre F,1-F,. 6m diametru i F,.-0 6m lungime, cu capetele rotun7ite, neramificai, dispui n palisade,
sub forma literei A, sau n lanuri /rezint flageli peritrichi n numr de --., care le asigur o
mobilitate caracteristic n piruet
Genul (isteria cuprinde = specii mprite n dou mari grupuri 8ai importante din punctul de
vedere al patogeniei la om suntI (. monocytogenes, (. seeligeri i (. ivanovii
Semnificaia clinic! Dnfeciile cu germeni din genul (isteria pot apare sub forma unor cazuri
sporadice sau focare epidemice Hltimele focare epidemice sugereaz faptul c listerioza este de fapt o
to#iinfecie alimentar, cea mai frecvent cale de transmitere a bolii fiind n prezent cea alimentar
(limentele cel mai frecvent implicate n focarele epidemice sunt varza, laptele, brnzeturile, puii,
curcanii, laptele, pateul, limba de porc, ciupercile etc
"ea mai grav form de listerioz este ns cea materno-fetal, nu att pentru mam, ct pentru ft
sau nou-nscut (cesta poate face o form precoce de infecie %la <-1 zile de la natere, mai ales la
prematuri&, care se manifest sub forma unei septicemii generalizate cu cca 1F-.FJ cazuri mortale, fie
sub forma unui sindrom tardiv %la =--. zile de la natere&, caracterizat printr-un sindrom meningeal,
manifestri digestive i rareori con7unctivit (lte forme clinice semnalate la aduli i copilul mare %n
special la cei cu imunodepresieI leucemii, infecii cu virus ?DA& sunt reprezentate de meningite,
encefalite, sau chiar septicemii, cu o rat mare a mortalitii, sau cu sechele neurologice printre
supravieuitori (u mai fost raportate listerioze cutanate primare, artrite, osteomielite, abcese
intraabdominale, peritonite, infecii pulmonare n special la veterinari i lucrtorii din abatoare %lund
caracter de boal profesional&, care au venit n contact cu esuturile infectate ale animalelor bolnave
$iagnosticul de laborator este bacteriologic i serologic
Rec#l$a%ea ,%#'u*el#% ,a$#l#)ice /rodusele patologice sunt recoltate n funcie de forma i
localizarea infecieiI *"E, snge, lichid amniotic, fragmente tisulare, secreii vaginale, respiratorii,
probe tegumentare, probe alimentare, probe de salubritate etc, i nu necesit condiii speciale de
transport ,n cazul transportului prelungit produsele patologice se vor pstra la <.>" n incubator %dar
nu peste 1; de ore&, iar pentru testri care dz, deseori vizibil doar dup desprinderea coloniei
?emoliza poate fi pus n eviden prin inocularea n geloz snge a unei colonii despinse cu un ac de
pe mediu, cu incubare 1; de ore la <.>" $oar cele trei specii menionate %(. monocytogenes, (.
seeligeri, (. ivanovii& sunt beta hemolitice /rimele dou prezint o zon discret de hemoliz bine
delimitat, iar cea de-a treia o zon larg
/e mediul */8, sau pe alte medii selective fr snge coloniile cresc n --0 zile, iar e#aminarea
trebuie fcut la microscop prin transiluminare oblic i oglind concav poziionat la un unghi de
1.>%tehnica ?enr+& *isteriile apar de culoare albastr %coloniile mici, tinere& spre alb %cele cele
mature, mari&, n timp ce coloniile non-listeria apar n general de culoare portocalie
/e mediile '#ford, coloniile de listeria apar negre cu halou negru dup o incubare de 01-1; de ore
la <.-<=>" %datorit hidrolizei esculinei i formrii compuilor de fier de culoare neagr& /e mediile
/(*"(8 coloniile sunt de culoare gri-verzui, cu halou negru
Caractere biochimice Hn test util cu rol n diferenierea speciilor de listeria este testul "(8/ /e o
plac cu geloz snge se nsmneaz n striuri paralele dou tulpini microbiene de ).aureus i
*hodococcus e+ui, iar perpendicular pe direcia de nsmnare a celor dou tulpini se nsmneaz
tulpinile de (isteria de diferite specii /lcile se incubeaz 01-1; de ore la <.>", iar apoi se
e#amineaz $oar n cazul (. monocytogenes, la confluena sa cu cea de ).aureus va apare o zon
e#acerbat de hemoliz, comparativ cu celelalte specii nevirulente la care acest fenomen nu se
constat %acelai fenomen fiind observat i n cazul (. ivanovii la confluena cu tulpina de *. e+ui&
!rotocolul rapid de identi#icare presupuneI
- caracterul morfologic de cocobacili gram pozitivi,
0 caracterul catalazo-pozitiv,
< creterea de tip umbrel sau brad cu vrful n 7os pe mediile semisolide, la 0.-<F>",
1 beta hemoliza pe geloza-snge de berbec,
. testul "(8/ pentru (. monocytogenes %pe plac cu ).aureus&,
5 hidroliza esculinei,
= producere de acid prin fermentarea ramnozei i #ilozei
Sen*i+ili$a$ea la an$i+i#$ice *isteriile sunt sensibile in vitro la penicilin, ampicilin, gentamicin,
eritomicin, tetraciclin, rifampicin, cloramfenicol !-a constatat ns c numeroase din aceste
antibiotice au doar efect bacteriostatic, de aceea se prefer asociaia penicilinKampicilin sau
aminoglicozide %e#perimental s-a constatat o amplificare a activitii antimicrobiene a penicilinei n
infecii cu (. monocytogenes& "efalosporinele s-au dovedit a fi ineficiente n aceste infecii
Dia)n#*$icul *e%#l#)ic nu are valoare deosebit