PROTOCOLO DE TRABAJO PARA MUESTRAS CRUDAS, LAVADO DE CARCASA Y

MUESTRA DE SUPERFICIE.
METODO ASSURANCE EIA SALMONELLA
AOAC oficial Method 992.11
“FSIS, Procedure for the Use of Salmonella Rapid Screening Immunoassay Kits”

1 .- MEDIOS DE CULTIVOS y Reactivos

(Ver Appendic 1.02 de Medio and Reagents del USDA)
• Buffered Peptone Water (pág. 10)
• TT Broth (HAJNA) (Pág. 35)
• Modified Rappaport Vassiliadis (mRV) broth (R10 o RVS) (Pág. 28)
• M Broth (Pág. 19)
• Iodine Solución (Pág. 35)

2 .- PROCEDIMIENTO

PREPARACION DE LA MUESTRA Y PRE-ENRIQUECIMIENTO

MUESTRA CRUDA
Pesar 25 gr de muestra y adicionar 225 ml de Agua Peptonada (Buffered Peptone Water ó BPW), Incubar a
35-37 °C por 20 a 24 horas.

AGUA DE CARCASA
30 ml de agua de enjuague de carcasa más 30 ml de Agua Peptonada (BPW), Volumen total 60 ml, Incubar a
35-37 °C por 20 a 24 horas.

MUESTRA ESPONJA
La esponja hidratada en 10 ml de Agua Peptonada (BPW) adicionar 50 ml de BPW, Volumen total 60 ml,
Incubar a 35-37 °C por 20 a 24 horas.

ENREQUECIMIENTO SELECTIVO

Transferir 0.5 +/- 0.05 ml de BP del pre-enriquecimiento a un tubo con 10 ml de TT Broth (Hajna).
Transferir 0.1 +/- 0.02 ml de BPW del pre-enriquecimiento a un tubo con 10 ml de Caldo Rappaport
Vassiliadis modificado (mRV, R10 o RVS). Incubar 42 +/- 0.5 °C por 22-24 horas en una estufa de
incubación o, 42+/- 0.5 °C por 18-24 horas en un baño termorregulado.

POST ENREQUECIMIENTO

Transferir 0.5 +/- 0.05 ml de Caldo tetrationato (Hajna) a un tubo con 10 ml de Caldo M. Transferir 0.5 +/-
0.05 ml de modified Rappaport Vassiliadis (mRV) al mismo tubo de M broth. ( Retener el enriquecimiento
selectivo original y mantener a 2-8°C para confirmar las muestras positivas presuntivas).
Incubar el M-Broth en un baño termorregulado a 42°C +/- 0.5°C por 5-8 horas.

INACTIVACION

Del tubo de Post Enriquecimiento de M Broth usar el vortex para mezclar el contenido y transferir 1 ml a un
tubo. Inactivar el microorganismo calentado el tubo en un baño a 100°C por 20 min. Enfriar los tubos a 25-
37 °C antes de realizar el test ELISA. Las muestras que han sido inactivadas pueden ser refrigeradas 2-8°C
por 4 días antes de ser testeada.

PROCEDIMIENTO TEST.

Seguir instrucciones del kit Assurance EIA Salmonella