Produccin de antraquinonas y flavomannin por Penicillium sp .

LL- WF159 en fermentacin

lquida.
Los primeros experimentos de fermentacin lquida examinaron la influencia de un soporte de
polister - celulosa ( KenAG papel leche - filtro ) sobre el metabolismo secundario con Penicillium
sp . LL- WF159 de acuerdo con dos matraz de diferente protocolos de agitacion ( Tabla 3 ) . En el
primer procedimiento, el organismo se preincub sin agitacin durante 3 das , favorecer la unin
de micelio a un humedecida cilindro y la inmovilizacin , y luego se agit durante 4 das . En el
segundo procedimiento , una fermentacin paralela que carecen de un soporte tal polister -
celulosa se agit sin interrupcin durante 7 das .
Despus de 7 das de la fermentacin , todo el crecimiento del micelio se asoci
con el cilindro celulsico y el fluido de cultivo Estaba claro , mientras que el caldo de fermentacin
convencional contena micelios dispersos . Todos los caldos de fermentacin (incluyendo soportes
cuando est presente ) se liofilizaron , se extrajo con metanol , se concentr diez veces , y luego se
analizaron para la actividad antimicrobiana . Extractos de LL- WF159 cultiva en presencia de un
polister - soporte de celulosa fueron ms activos en los antimicrobianos ensayos ( Tabla 3 ) . Las
zonas de inhibicin contra resistente a la meticilina S. aureus SA310 methicillinsusceptible S.
aureus SA375 , y resistente a la vancomicina E. faecium EC379 eran ms grandes que las zonas
obtenidas con estndar cultivos agitados ( sin discos ) . micelial adhesin de Penicillium sp . LL-
WF159 a la slida apoyo tuvo un efecto aparente sobre la produccin de compuestos bioactivos .
Agitacin en frasco de fermentacin de Penicillium sp. LLWF159 en el APP se extrajeron con
metanol , analizada , y se someti a fraccionamiento guiado por bioensayo . Toda la
fermentacincaldos eran tpicamente un amarillo intenso . cuatro Se aislaron los poliqutidos
aromticos , y una espectroscpico anlisis condujo a la determinacin de las estructuras de estos
compuestos . Penicillium sp . LL- WF159 se encontr para producir rugulosin y skyrin [ 18 ] , dos
antraquinonas sabe que poseen actividad antimicrobiana , as como
flavomannin y nueva WF159 - Un bisanthracene ( fig. 4 ) , en fermentaciones con y sin un polister
celulosa apoyo . Las preparaciones purificadas de los cuatro compuestos inhibieron al menos
uno de los tres enzimas Mur, (UDP-Nacetylglucosamine
transferasa enolpiruvil), MurB (UDP-N-glucosamina acetylenolpyruvoyl reductasa), o
MURC (UDP-N-acetylmuramate:-L-alanina ligasa), tres citoplsmicos pasos implicados en la
biosntesis de peptidoglicano precursor de [23].
A continuacin, el crecimiento de la cepa LL- WF159 se investig
en matraces de agitacin que contienen un disco polimrico que
era libre para agitar en el recipiente de crecimiento. El organismo
se cultiv en AP con y sin discos compuestos por
de poliuretano , polipropileno ( dos tipos ) , polipropileno
de celulosa , o polister - celulosa . Dos de fermentacin diferente
Se emplearon los protocolos y los rendimientos relativos
de los cuatro antibiticos se determinaron . Todos los matraces de agitacin
fueron agitados ya sea durante 2 semanas , o se mantuvieron
esttica por 1 semana seguido de un perodo de agitacin
durante 1 semana. Las matrices de soporte , todos los cuales permiten
fijacin y el crecimiento micelial , no slo la influencia
morfologa de la cultura y permiti la inmovilizacin celular
( Tabla 4 ) , sino tambin los rendimientos de metabolitos relativos elevados como
determinado mediante anlisis por HPLC ( Tabla 5 ) . Produccin de
todos los cuatro compuestos en fermentaciones sin un aadido
apoyo se mejor por un periodo de preincubacin esttica
de 1 semana y que permiti una estera micelial para formar en la
superficie del medio , seguido por otro perodo de una semana
de agitacin . El agregado de micelio blanco y fino era todava
intacta despus de 2 semanas, aunque el medio era turbia con
cierto crecimiento disperso . Los niveles de las cuatro antibiticos
podra ser elevado adicionalmente por la adicin de un disco polimrico y la formacin de una
capa micelial artificial '' ''
que estaba libre para agitar en el recipiente de crecimiento ( fig. 6 ) . la
naturaleza fsica del sistema de apoyo influy en la
rendimientos relativos de los dos bisanthraquinones y flavomannin
en diversos grados ( Tabla 5 ) . En general , la
rendimientos relativos se incrementaron , aunque en algunos casos , la
disco polimrico rebajado la produccin de metabolitos debido a
la posible interferencia con la mezcla y la aireacin .
Teniendo en cuenta los dos protocolos de fermentacin diferentes
( Tabla 5 ) , la produccin flavomannin fue significativamente mayor
por la preincubacin estacionaria que permitiera
formacin de la alfombrilla del micelio sobre la superficie del medio o
un perodo comparable de crecimiento durante el cual el molde
infiltrado en el disco suplementado . Por ejemplo , la
produccin de flavomannin se mejor diez veces por
preincubacin esttica de la estera micelial antes de la agitacin ,
y an ms cuando se emple un disco para micelial
inmovilizacin . La medida de la mejora estaba relacionada
a la composicin del disco . Un disco de poliuretano
empleado en una esttica de fermentacin de 14 das / sacudida fue
especialmente eficaz en la elevacin de la produccin flavomannin ,
y el nivel de este compuesto era 22 veces mayor que
la alcanzada despus de una fermentacin estndar de 14 das
carente de cualquier suplemento . La fermentacin sacudido 14 - da
con disco de niveles elevados flavomannin nueve veces . la
dos protocolos de fermentacin que incorporan un polmero
apoyo tpicamente result en rendimientos relativos similares de
rugulosin , skyrin , y el nuevo compuesto bisanthracene .
Sin embargo , ambos tipos de fermentaciones ( sacudidas o estticas /
sacudido ) que incorpora un soporte de disco consistentemente
fermentaciones sacudida matraz aforado superado a que
carecido de cualquier disco polimrica , lo que resulta en una mayor relacin
rendimientos de estos tres compuestos (Tabla 5 ).
Los cambios morfolgicos y fisiolgicos han sido
observado con un nmero de otros hongos filamentosos crecido
mediante fermentacin en matraz agitado con un soporte PUF en
nuestro laboratorio . Apego micelial al soporte es
comn en culturas tan agitados , y cambios en los patrones de desarrollo y el metabolismo
secundario ,
la produccin de pigmentos , por ejemplo , son a veces evidente
(R. Bigelis y H. l , observaciones no publicadas ) .