Endocrinotoxicit

Facult de mdecine de Constantine

Cours de 1
e
anne rsidanat Toxicologie
2013/2014
Khaoula KOULOUGHLI
20 Mars 2014
1
Avec l'industrialisation, la production de produits chimiques et leur
introduction dans l'environnement a augment massivement.
Certains de ces produits chimiques agissent comme des
perturbateurs endocriniens comme ils perturbent les voies
endognes de signalisation de l'hormone.
Des tudes pidmiologiques suggrent une association entre
l'exposition croissante des produits chimiques et le
dveloppement de certains des principaux maux du monde
industrialis.
Par exemple, des troubles dans la reproduction, les cancers lis
aux hormones, et les troubles mtaboliques comme l'obsit et le
diabte de type 2.
Cependant, cette association est encore dbattue et les
mcanismes molculaires sous-jacents possibles perturbations du
systme endocrinien et le dveloppement de la maladie sont loin
d'tre compris.
2
Dfinition du systme endocrinien :
Ensemble dorganes et de tissus qui librent
des hormones dans le sang.
Une hormone est une substance biologique
hautement active synthtise par des cellules
spciales et directement scrte dans le sang ou
la lymphe.
Rgulent la croissance, le dveloppement et la
fonction de nombreux tissus en plus de
coordonner les processus mtaboliques
lintrieur de lorganisme.
3

4
Classification
classe
chimique:
drives
d'amines
les
catcholamin
es et la
thyroxine.
peptidiques
TRH
l'insuline
Strodes
(chlstrol)
strognes, testostrone
cortisol.
lipides et
phospholipi
des
prostaglandines
mode
daction :
paracrine
fait intervenir des signaux
changs par des cellules
voisines.
autocrine
la substance agit sur la cellule
productrice
Fonction des hormones :
Fonctions Hormones
Reproduction Andrognes, oestrognes,
progestrone, hormones hypophysaires
(LH, FSH, prolactine).
Croissance et dveloppement Hormone de croissance, hormones
thyrodiennes, insuline,
glucocorticodes, andrognes,
oestrognes, progestrone
Maintien de lenvironnement
interne
Vasopressine, aldostrone, hormone
parathyrodienne et prostaglandine
Disponibilit nergitique Insuline, glucagon, hormones
thyrodiennes
5
1. Lhypothalamus :
Rgion centrale du diencphale situe la
base du cerveau, sous les thalamus et au-
dessus de l'hypophyse, qui lui est relie par une
tige, la tige pituitaire.
Assure un double rle de contrle des
scrtions hormonales hypophysaires et de
contrle de l'activit du systme nerveux
vgtatif.
L'hypothalamus scrte deux hormones qui
sont stockes dans l'hypophyse avant d'tre
libres dans le sang : l'hormone
antidiurtique (ADH) et l'ocytocyne.
Scrte aussi dautres hormones qui contrlent
les scretions de lanthypophyse + action sur
le fonctionnement des viscres + sensation de
faim satit, thermorgulation (3).
6
2. Lhypophyse :
Petite glande endocrine relie la partie
antrieure du cerveau.
L'anthypophyse produit 5 hormones appeles
stimulines : la thyrotrophine (TSH), la
corticotrophine (A.C.T.H), les gonadotrophines
(FSH et LH) et la somatotrophine (STH)
(responsable de la croissance chez l'enfant).
Ces scrtions sont elles-mmes commandes par
des hormones de l'hypothalamus.
L'anthypophyse scrte aussi la prolactine
(responsable de la lactation chez la femme).
La posthypophyse sert de lieu de stockage
provisoire deux hormones de l'hypothalamus,
lADH et l'ocytocine (3).
7
+

8
3. La thyrode :
Glande endocrine plaque la face
antrieure de la rgion laryngo-
trachale..
Responsable de la synthse et de la
scrtion des hormones
thyrodiennes, sous le contrle de
l'hypophyse.
La thyrode scrte la calcitonine
(hormone modulant le taux sanguin de
calcium : hypocalcmiante).
tri-iodothyronine, ou T3 (environ
20 %), et de thyroxine, ou T4 (environ
80 %) (3).
9
4. Parathyroide :
4 glandes : 2 suprieures et
2 infrieures face
postrieure de la thyrode.
Scrtion de
parathormone (PTH)
hypercalcmiante.
10
5. Le pancras :
Glande digestive scrtion interne et externe.
La glande pancratique est constitue de deux types de tissu, responsables
de deux fonctions distinctes : une scrtion endocrine et une scrtion
exocrine.
La scrtion endocrine est assure par les cellules endocrines, qui sont
regroupes en lots (lots de Langerhans).
Il en existe trois types : les cellules bta, qui scrtent l'insuline, hormone
hypoglycmiante ; les cellules alpha, qui scrtent le glucagon, hormone
hyperglycmiante, et les cellules delta, qui scrtent la somatostatine,
hormone contrlant localement l'activit des cellules alpha et bta(3).

11
6. Les glandes surrnales :
Glande endocrine situe au ple suprieur de
chacun des deux reins.
La glande corticosurrnale (partie priphrique
de la surrnale) est forme de trois couches,
chacune spcialise dans la synthse de
certaines hormones strodes.
La zone glomrule fabrique l'aldostrone,
La zone fascicule, le cortisol ;
La zone rticule, des andrognes (delta-4-
androstnedione, dhydropiandrostrone, ou
D.H.A., et testostrone).
La glande mdullosurrnale (partie centrale de
la surrnale) est forme de cellules produisant
des catcholamines (neurotransmetteurs),
principalement l'adrnaline.
La scrtion de la mdullosurrnale dpend du
systme nerveux autonome.
12
7. Les gonades :
Ovaires :
Lovaire a deux fonctions :
endocrine et exocrine.
Exocrine : emission de lovocyte.
Endocrine : assure limprgnation
hormonale de lappareil
reproducteur (oestrogne,
progestrone).
Testicules :
Fonction exocrine :
spermatozoides
Endocrine : scretion et
mtabolisme des andrognes
(testostrone) (4).
13

Toute perturbation du systme endocrinien
induite directement ou indirectement par un
xnobiotique quelque soit sa voie de
pntration.
14
Les perturbateurs endocriniens (PE):
Des agents exogenes qui interferent avec la
production, la liberation, le transport, le
metabolisme, la liaison, laction ou
lelimination des ligands naturels responsables
du maintien de lhomeostasie et de la
regulation du developpement de lorganisme
(dfinition de lagence Amricaine de
lenvironnement)(1).
15
Les perturbateurs endocriniens (PE):

En Europe, un PE a ete defini comme etant
une substance etrangere a lorganisme qui
produit des effets deleteres sur lorganisme ou
sur sa descendance, la suite dune
modification de la fonction hormonale (1).
16
Catgories de PE :
17
Cibles des PE :

=> Membres de la famille des rcepteurs nuclaires, en
particulier les rcepteurs d'oestrogne (ER) et le rcepteur
d'androgne.
=> En outre, les rcepteurs d'hormones thyrodiennes, et
plus rcemment, de rtinode X rcepteur (RXR) et les
rcepteurs peroxisome proliferator-activated (PPAR) sont
prsents comme des cibles pour l'action des PE (5).
18
Cibles des PE :

PE peuvent affecter ces systmes de plusieurs manires
diffrentes, par exemple en interfrant directement avec
la signalisation du rcepteur ou par l'activation d'autres
voies de signalisation, en particulier celle du rcepteur
d'hydrocarbure d'aryle (AhR), un rcepteur impliqu
dans le mtabolisme de nombreuses substances
xnobiotiques (5).
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A. Agoniste de recepteur dhormone;
B. Antagoniste de recepteur dhormone ;
C. Inhibiteur de la synthse dhormone ;
D. Inducteur de la clairance dhormone ;
E. Action sur le transport de lhormone.
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Substances stimulatrices des processus physiologiques hormono-
dpendants en l'absence du ligand endogne du recepteur (hormone).
Les rcepteurs deostrogne sont les plus susceptibles dagonisme
chimique.
Drogues : diethylstilbestrol (DES).
Autres :

21
Beaucoup de rcepteurs nuclaires d'hormone sont susceptibles de
l'antagonisme chimique.
1. Rcepteur dstrognes :
Drogues : raloxifene.
Consquences : dfminisation.
2. Recepteurs dandrogene (+++):
Drogues : flutamide.
Produits chimiques environnementaux: mtabolite de DDT.
Consquence : dmasculinisation : rductions de la taille de prostate et
le poids de la vsicule sminale.
3. Rcepteur glucocorticode :
Drogues : mifepristone.
Action anti corticodique et anti-progestative : perturbation la
croissance, dveloppement, et autre processus rguls par ces
hormones.


22
Cyt P450 : enzyme cls dans la synthse des andrognes et dautres
hormones strodiennes (raction dhydroxylation) :
linhibition de ces enzymes peut avoir comme consquence une
srie d'effets antisterodiques.

Les consquences toxicologiques de l'abaissement des niveaux
d'hormones strodiennes sont comparables aux effets obtenus par
des antagonistes du rec de l'hormone.
Ex :Le ketoconazole est capable dinhiber les cyt P450 et rduire
la synthse et le taux sanguin de testostrone et d'autres
hormones strodes.

23

Les principaux processus de mtabolisation des
hormones chez les vertbrs sont:
L'hydroxylation, la glucurono et la sulfoconjugaison.

L'exposition aux produits chimiques tels que les dioxines
et les polychlorobiphnyles ( PCBs) => limination
accrue d'hormones thyrodiennes : une hypothyrodie.


24
Les hormones sont distribus grace des liaisons
rversibles aux protines de transport plasmatiques tel
que :
SHBG (sexe hormone binding globulin),
CBG (corticostrod binding globulin),
TBG (thyroxin binding globulin),
Albumine.
La forme lie de lhormone n'est pas active mais sert de
rservoir pour maintenir un tat dquilibre lors de la
diminution du taux de lhormone active ou libre.
Mcanisme : comptition.
25
1. ADH :
Nanopeptide fonction antidiutique (rec V2) + vasoconstrictrice (rec
V1) + rle dans lhmostase (action aggrgante plaquettaire).
Agents augmentant la scrtion de lADH :
ADT, ISRS, nicotine, neuroleptique, carbamazpine (10).
Consquences : augmentation de la rtention deau (oligurie) avec
hyponatrmie de dilution.
Augmentation de losmolarit extracellulaire, hyperhydratation
hypotonique provoquant le gonfflement cellulairedont la
consquence la plus dangeureuse est leodme crbral.
Agents diminuant la scrtion de lADH :
Phnitoine, minralocorticoide, glucocorticoide, thanol.
Consquences: Excrtion de quantits importantes d'urine
faiblement concentre et le dveloppement d'une dshydratation
hypertonique ;
Un diabte insipide par perte du pouvoir de concentration des urines.
26
2. Ocytocine :

La scrtion d'ocytocine est augmente par
stimulation du col utrin, du vagin, du sein, et est
diminue par la prise d'thanol, ce qui explique que
l'alcool ait pu tre utilis autrefois comme tocolytique
en cas de menace d'accouchement prmatur (10).
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3. Prolactine :
Polypeptide impliqu dans le dveloppement des glandes mammaires. Augmente
pendant la grosesse, et initie la lactation.
A. Hyperprolactinmie :
1. Antihypertenseurs : Mthyldopa (inhibition de la synthse de DOPA => dpletion
hypothalamique en dopamine).
2. Phnothiazine : chlorpromazine (action anti-dopaminergique).
3. Antidpresseurs tricycliques : Amitriptyline, imipramine.
4. Stimulants (stimulation du systme srotoninergique): Amphtamine.
5. Opiacs : morphine : pas deffet direct in vitro et il est probable quelle agit comme
les endorphines et les enkphalines en modulant, au niveau hypothalamique, la
scrtion dun prolactin releasing factor (PRF) ou la production de dopamine.
Consquences :
Syndrome amnorhe galactore : caractr chez la femme de strilit +
diminution de la libido et trouble rectile chez l'homme.


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3. Prolactine :
B. Hypoprolactinmie :
Drivs de l'ergot de seigle, les agonistes
dopaminergiques (la dopamine), la
bromocriptine...



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4. Stomatotropine ou hormone de croissance (GH) :

Joue un rle majeur dans la croissance tissulaire.
Augmentation de GH :
Traitement mal contrl par les hormones de croissance.
Utiliss comme dopant.
Consquence :
Acromgalie , HTA ;
Dveloppement de tumeurs.



30
Mcanismes :

1. Effet sur la biosynthse des hormones
thyroidiennes;
2. Effet sur la scretion ;
3. Effet sur le transport ;
4. Effet sur le mtabolisme.

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32
SNC-
ClO4-
Carbimazole
Li+
1. Effet sur la biosynthse des hormones thyroidiennes:
1. Antithyrodiens de synthse
Mdicament : Carbimazole , Benzylthiouracile : inhibent lorganification.
Mcanisme daction :
Le carbimazole en inhibant l'activit de la thyrode-peroxydase empche l'oxydation
des iodures, leur captation par les radicaux tyrosyles et le couplage des iodotyrosines
en iodothyronines (T3 et T4).
Le carbimazole inhiberait galement la deshalognase, enzyme qui permet de
rcuprer l'iode organifi non scrt. Cette action conduit une limination
progressive de l'iode intrathyrodien, et a pour consquence de rendre la thyrode
avide d'iode (9).
Surdosage :
Passage en hypothyrodie avec lvation de la TSH et augmentation du volume du goitre.

2. Inhibition de la captation de liode: Thiocyanates SNC- et perchlorate ClO4-.

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2. Effet sur la scrtion des HT :
Lithium
Le lithium a des effets puissants sur la glande thyrode. Il est
concentr dans le tissu thyrodien environ trois fois plus que
dans le plasma.
Peut affecter plusieurs tapes de la fonction thyrodienne.
Mcanisme principal : diminution de la scrtion des hormones
thyrodiennes.
Mais aussi diminution de leur synthse, par blocage du
couplage des iodotyrosines.
Le lithium entrane l'apparition de goitre (7 50 %),
d'hypothyrodie (8 19 %).
C'est la raison pour laquelle, chez tous les patients traits par le
lithium, la fonction thyroidienne doit tre rgulirement
contrle (3).
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3. Effets sur le transport des HT :


Aspirine, furosmide, hparine, pesticides
organochlors (DDT), phtalate se lient comptitivement
ces protines et inhibent ainsi leur fonction.



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4. Effets sur le mtabolisme des HT :
Amiodarone : inhibent la dsiodation de la thyroxine en
triiodothyronine par inhibition de la la monodsiodase de type 1.
Phnobarbital, Carbamazpine, Rifampicine: inhibent la
glucuronoconjugaison ( - UGT) de la T4 et diminuent ainsi son
limination.
NB : Lvothyroxine :
Hormone thyrodienne, chimiquement dfinie sous sa forme
naturelle L plus active que la forme D.

La lvothyroxine augmente essentiellement la consommation
tissulaire d'oxygne, le mtabolisme de base, le rythme
cardiaque (9).




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Consquences :
Hypothyroidie : Goitre, dpression et trouble de
mmoire, Intolrance au froid, Prise de poids, Peau
sche et pale, Chute de cheveux, Constipation,
Bradycardie, Rigidit musculaire.
Hyperthyroidie : Goitre ou nodule, Excitation et
agressivit, Intolrance la chaleur, Perte de poids,
Peau chaude et molle, cheveux cassants, diarrhe,
Tachycardie, Faiblesse musculaire, Exophtalmie
Tremblements.



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Destruction des glandes parathyrodes :secondaire
une irradiation cervicale externe /traitement par iode
radioactif => Altration de la glande => diminution de
la PTH.

Une hypoparathyrodie transitoire :intoxication
alcoolique aigu, secondaire aux effets de la dpltion
intracellulaire en magnsium sur la fonction
parathyrodienne.


38
Consquences:
Osseux : diminution du remodelage osseux et
augmentation de la minralisation osseuse ;
Neuromusculaires :
Ttanie, paresthsies.
Cardiaques : arythmie, troubles de la
conduction.
39
1. Corticosurrnale :
A. Mtyrapone :
Au niveau de la corticosurrnale : La mtyrapone inhibe de faon rversible la
biosynthse du cortisol, de la corticostrone et de l'aldostrone dans la
corticosurrnale en bloquant l'hydroxylation enzymatique en 11-bta du noyau
strode.
La suppression du rtro contrle inhibiteur du cortisol sur l'hypophyse a pour
consquence l'augmentation de la libration de corticotrophine (ACTH) dans le
plasma.
L'inhibition prolonge de la biosynthse de cortisol et de la corticostrone est
marque par une augmentation de leurs prcurseurs immdiats : 11-dsoxycortisol
et dsoxycorticostrone, qui sont de faibles inhibiteurs de la scrtion d'ACTH.
Utilis pour lexploration de la fonction hypophysaire (9).
Surdosage:
Symptmes gastro-intestinaux + des signes d'insuffisance corticosurrnalienne aigu.
En cas d'intoxication, outre les mesures gnrales, il convient de donner de fortes
doses de glucocorticodes, de compenser les pertes hydro-lectriques et
d'administrer du glucose.


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1. Corticosurrnale :
B. Hydrocortisone :
Hormone physiologique du cortex surrnal (9).
Le surdosage entraine des troubles :
Hydrolectrolytiques :
Hypokalimie ; alcalose hypokalimique ; rtention hydrosode avec
HTA.
Endocriniens et mtaboliques : Gonflement du visage ; parfois
irrgularits menstruelles.
Cutans : atrophie cutane ; retard de cicatrisation ; ecchymoses.
Neuropsychiques : surexcitation avec euphorie et troubles du sommeil.


41
Consquences :
Insuffisance surrnale : suite a un hypocorticisme
Symptmes : lthargie, anorexie, douleurs
abdominales, perte de poids
Signes de gravit : hypotension orthostatique,
vomissements, nauses, dshydratation.
Syndrome de cushing : suite un hypercorticisme :
Symptmes acn, facis lunaire, ostoporose, obsit
abdominale, vergetures abdominales, alopcie, bosse
de bison, hypertension, amincissement de la peau
42
1. Corticosurrnale :

La rglisse :

Substance active : lacide glycyrrhizique, qui inhibe la 11 bta
Hydroxy Stroide Dhydrognase type 2 ce qui reproduit
lhyperaldostronisme.


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2. Mdullosurrnale :

Les catcholamines augmentent la scrtion de rnine, de
vasopressine et de parathormone.
Inhiber la libration dinsuline et daugmenter celle de glucagon.
Ladrnaline et le glucagon constituent les deux facteurs majeurs
de contre-rgulation en cas dhypoglycmie.


44
1. Cyclosporine et tacrolimus :
Diminution de la synthse et la scrtion de linsuline.
Diminution du volume des cellules bta avec vacuolisation
cytoplasmique, dgranulation et dilatation du rticulum
endoplasmique.
2. Diurtiques thiazidiques et diurtiiques de lanse : diminution
de la scrtion de linsuline (chu.jussieu).
3. Contraceptifs oraux : Diminution de la sensibilit des tissus
priphriques linsuline.
4. Glucocorticodes : augmentation de la production hpatique du
glucose et une rsistance priphrique linsuline.




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DES :
Dithylstilbestrol (DES) est un strogne puissant qui a t utilis
principalement partir des annes 1940 aux annes 1970 dans
l'espoir de prvenir une fausse couche chez les femmes enceintes.
Des dcennies plus tard, DES est connu pour augmenter le risque de
cancer du sein chez les femmes exposes, et causer une varit
d'effets indsirables congnitales (7).
DES estrogne synthtique 5 fois plus puissant que leostrogne
naturel (7).
Le premier strogne de synthse, prescrite aux femmes enceintes,
permettrait d'viter les fausses couches :
Les filles DES rencontrent des problmes : fausses couches au premier
trimestre et grossesses extra-utrines, fausses couches tardives (4e et
5e mois), accouchements prmaturs ; Les examens gyncologiques
rvlent alors des anomalies de l'appareil gnital : anomalies du col de
l'utrus, des trompes, du corps utrin.
Chez les garons des malformations de l'appareil gnital (hypotrophies
des testicules, cryptorchidies).


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2. BPA :
Il sagit dun produit industriel utilise comme monomere dans la synthese des
matieres plastiques et des resines epoxy. Il est present dans les revetements de
boites de conserve, certains biberons, les resines dobturation utilisees en
dentisterie.
Le bisphenol A est un oestrogeno-mimetique capable de se lier au recepteur
des oestrogenes et son action est environ 1 000 fois inferieure a celle de
loestradiol (1).
L'exposition : essentiellement par l'alimentation.
Chez la femelle, les tudes montrent que le BPA peut induire une pubert
prcoce, des altrations de lutrus, du vagin et de lovaire.
Chez le mle, certaines tudes rvlent des effets du BPA sur lappareil gnital
(diminution de la production de spermatozodes, hypotrophie testiculaire,
hypertrophie prostatique...).
47
3. Phyto-oestrognes
Les aliments a base de soja peuvent contenir des teneurs
importantes en phyto-oestrogenes (PO), principalement de la
daidzeine et de la genisteine.

Des travaux exprimentaux ont montr une augmentation du taux
de cancers mammaires chez des rats exposes in utero a la
genisteine , linduction dadenocarcinomes de luterus chez des
souris traitees pendant les cinq premiers jours de la vie par 50 mg
de genisteine/kg/j , un lien entre regime riche en PO au cours de
lenfance et apparition dun diabete insulino-dependant, et le
nombre apparemment plus eleve denfants atteints dhypospadias
chez les meres vegetariennes (1).
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4. Phtalates :
Les phtalates sont des derives diesters de lacide phtalique.
Utilisation : fabrication et composition dun grand nombre de materiaux
et produits tels que chlorure de polyvinyle (PVC), polyethylene
teraphtalate (PET), jouets, peintures industrielles.
Le phtalate de di-n-butyle, le phtalate de butylbenzyle et le phtalate de di-
(2-ethylhexyle) peuvent provoquer une atteinte de lappareil reproducteur
male (au cours du developpement et au stade adulte) et une toxicite
embryo-foetale pouvant conduire a une augmentation de la mortalite
intra-uterine ou a une diminution du taux de survie postnatale.
Mcanisme : au recepteur des androgenes, les phtalates bloquent le
fonctionnement normal de ces hormones, sans pour autant activer ces
recepteurs (effet antagoniste).
49
PESTICIDES : Organochlors DDT :

Les analogues du DDT, dont lutilisation est interdite en occident
depuis 1970, mais dont la rmanence est longue, sont des
inducteurs puissants de lactivit mono-oxygnase microsomale
hpatique et acclrent la dgradation des andrognes
endognes.
Le mtabolite du DDT, le pp-DDE qui a une action
antiandrognique.
Ces organochlors analogues du DDT peuvent tre responsables
deffets sur la reproduction masculine , en particulier
doligospermie.

50

1. Exprimentale : in vivo, in vitro.
2. Clinique.
51
In vivo :

1- OCDE ligne directrice N 440 : Bio-essai
utrotrophique : Essai de dpistage court
terme des proprits oestrogniques.

52
In vivo : 440 :
Le bio-essai utrotrophique est un essai de dpistage court terme qui
remonte aux annes 30 et qui a t normalis pour la premire fois en 1962.
Essai internationnalement valid dans 21 laboratoires/9 pays (13).
Lutrus des rongeurs est un organe cible appropri pour le dpistage in vivo
des agonistes et antagonistes des oestrognes. Cet essai se fonde sur
laugmentation du poids utrin, encore appele rponse utrotrophique.
Il value la capacit dun produit chimique provoquer une activit
biologique analogue celle des agonistes ou antagonistes des oestrognes
naturels (17-estradiol par exemple),
Beaucoups plus utilis dans la dtection des agonistes que dans la dtection
des antagoniste.
A lheure actuelle deux mthodes sont disponibles, lune utilisant des
femelles adultes ovariectomises (mthode adulte-ovx) et lautre des
animaux immatures, non ovariectomiss (mthode immature).
53
In vivo : 440 :
Principe de lessai :
La sensibilit du bio-essai utrotrophique exige un dispositif
dessai dans lequel laxe hypothalamo-pituito-ovarien nest pas
fonctionnel, do de faibles niveaux doestrognes endognes en
circulation. Cela assurera des poids utrins de rfrence peu
levs et un ventail le plus large possible de rponses aux
oestrognes administrs. Les rongeurs femelles remplissent ces
conditions dans deux cas :
i) Femelles immatures, aprs sevrage et avant la pubert
ii) Jeunes femelles adultes ovariectomises, pass le dlai
ncessaire la rgression des tissus utrins.
54

55

56

57
In vivo :

2- OCDE ligne directrice N 441: Bio-essai de
Hershberger sur le rat Essai de dpistage court
terme de proprits (anti)androgniques.

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Le bio-essai de Hershberger est un essai de dpistage in vivo court terme
qui emploie des tissus accessoires de lappareil reproducteur mle. Lessai
date des annes 30 et il a t modifi dans les annes 40 par linclusion de
muscles de lappareil reproducteur mle qui rpondent aux andrognes.
Lessai biologique actuel est fond sur les variations de poids de cinq tissus
dpendant des andrognes chez le rat mle pripubertaire castr.
Il value la capacit dun produit chimique induire des activits
biologiques analogues celles induites par des agonistes (augmentation
du poinds de ces organes) et des antagonistes dandrognes ou des
inhibiteurs de 5-rductase (diminution).
Les cinq tissus cibles dpendant des andrognes inclus dans cette Ligne
directrice pour les essais sont la prostate ventrale (PV), la vsicule
sminale (VS) (plus les fluides et les glandes coagulantes), les muscles
lvateur de lanus et bulbocaverneux (EABC), la paire de glandes de
Cowper (COW) et le gland (G).
59
Animaux OCDE LD 441 : Essai de Hershberger
Souche Rat.
Nombre 6 animaux par groupe de dose.
Nombre de
groupe
2 groupes dessai au minimum et T (+) et T (-).
Groupe tmoin (+) Test dun agoniste : TP.
Test dun antagoniste ou dun inhibiteur de la alph
5 rductase : TP + co-administration de FT.
Groupe tmoin (-) Test dun agoniste : vehicule.
Test dun antagoniste ou inhibiteur de la 5 alpha
rductase : TP.
60
Protocole OCDE LD 441 : Essai de Hershberger
Mthode Rats males pripubertaires, castrs.
Age de castration Avant le 42
e
jours.
Age de trt aprs castration 49
e
jours, jamais aprs 60jrs.
Poids Variation doit tre minimale.
Voie dadministration Gavage gastrique (TP), S/C (FT).
Dure de lessai 10 jours.
Date de sacrifice 24H aprs la dernire dose.
Rponse positive Augmentation statistiquement significative du poids
dau moins 2 organes cibles ou plus.
Substance androgne de rfrence TP (propionate de testostrone).
Substance anti-androgne FT (flutamide).
61

62
In vivo :

3- OCDE ligne directrice N 407: tude de toxicit aprs
administration ritre :

Permet didentifier des produits chimiques potentiellement
neurotoxiques, pouvant justifier des tudes plus approfondies
de cet aspect, et des produits chimiques qui interfrent avec
la physiologie de la thyrode.
Elle pourrait galement fournir des donnes sur les produits
chimiques qui affectent les organes reproducteurs mles
et/ou femelles des jeunes animaux adultes et donner des
indications sur leurs effets immunologiques.

63
In vivo :
La substance tester est administre quotidiennement par voie
orale diffrents niveaux de dose plusieurs groupes
d'animaux, raison d'un niveau de dose par groupe, pendant
une priode de 28 jours.

Chaque jour au cours de cette priode, les animaux sont
examins soigneusement afin de dceler tout signe de toxicit.

Les animaux qui meurent ou qui sont euthanasis au cours de
lessai sont autopsis et, au terme de lessai, les animaux
survivants sont galement euthanasis et autopsis.


64

65
Animaux OCDE LD 407
Souche Rat.
Nombre 10 animaux ( 5 + 5 ).
Nombre de
groupe
3 groupes dessai au minimum + 1
groupe Tmoin.
Administration Quotidiennement 7jrs/7 pendant 28
jours par voie orale.

66
In vitro :

1- Test de dpistage : HTS: high thoughput screening

Test automatis :dtecte les liaisons entre substances chimiques et R
endocriniens.
Tmoin indirect du dplacement possible de lhormone naturelle.

Avantage : dpistage haut dbit (environ 1000 produits
/semaine).
inconvnients : ne permet pas de reconnaitre les molcules qui
agissent autrement que/ liaison avec le rcepteur .
67
2- Analyse structure-activit: QSAR:
modlisation informatique:
Le nbr d'anneaux aromatiques dans les HAP, ou
le nbr Cl dans les HAPC, a t utilis pour tablir
la puissance relative de certains produits
chimiques.
La structure seule ne suffit pas prvoir le
degrs potentiel de PE.

68
3-Dosages par liaison comptitive:

Dterminer linterfrence entre le xnobiotique et lhormone
envers le rec.
La Cte de liaison (Kb): l'affinit du ligand pour le R comparer
la puissance d'un compos par un autre.

Limites:
-la solubilit du xnobiotique dans le milieu de culture.
-l'incapacit de faire la distinction entre ( agonistes /
antagonistes)
-risque de dgradation du rcepteur.
69
4-Dosage du gne rapporteur:

Dceler l'activit transcriptionnelle provoque/la liaison xnobiotique-
R hormonal :
A ltat N:
L-R transcriptiontraductionprotine.
Il est difficile de dtecter la transcription endogne
estrogno dpendante.
Pour cela: transfecter 1 gne " rapporteur " dans le gnome
de la cellulePdts : lucifrase et B galactosidase
identifiable grce la luminescence par coloration.
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5-Test de prolifration des cellules MCF-7:
MCF 7 : Michigan Cancer Foundation. 7 car elle fut tablie au 7
e
essai.
Se sont des cellules tumorales mammaires.

Principe : dceler la prsence de produits chimiques action
strognique :
- culture+ sub prsume action oestrognique.
-Evaluation nbr/forme cellule aprs 6j.

Aprs TRT: cellules arrondies, se chevauchent et n'adhrent plus au
plastique de la bote de culture. contours non dlimits et nombreuses
microvillosits.

MCF7 : Contiennent plusieurs gnes rguls par strognes Bon
rpondeur.
71
6- Dosages fonctionnels:

Plus utiles pour prvoir le degr de perturbation
endocrinienne que la structure chimique.

Visent identifier et caractriser les effets qui
intensifient, imitent ou inhibent les processus
hormonaux de type strognique ou
andrognique.

72
Surtout exploration de laxe hypothalamo-
hypophysaire :
A. Dosage statique ;
B. Epreuve de stimulation ;
C. Epreuve de freinage ;
D. Exploration morphologique.
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A. Dosage statique :

Dosage des hormone : FSH, LH, TSH...
Technique : IRA, ELISA...
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B. Epreuve de stimulation :
Fonction gonadotrope test la GnRH :
Apprcier la rserve hypophysaire en
gonadotrophines.
Aprs linjection IV de 100 g de LH-RH, on
tudie les variations de la FSH et de la LH
plasmatiques t- 15, t0, t15, t30, t60, t90,
t120.

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B. Epreuve de stimulation :
Prolactine stimulation par TRH :
Elvation du taux de prolactine paralllement
celui de la TSH (taux de base de prolactine
multiplier par 2, et de TSH par 2,5).
Fonction thyrotrope par TRH :
Aprs injection de 200 ug de TRH on mesure TSH
aprs 30 minutes.


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B. Epreuve de stimulation :
Fonction corticotrope test de lACTH :
L injection de 0,25 mg ttracosactide entrane
aprs 1 heure lascension du cortisol
plasmatique un taux atteignant au moins 20
ug/dl.


77
B. Epreuve de stimulation :
Fonction stomatotrope hGH :

Injection IV de 0,10 U/kg dinsuline afin dobtenir
une hypoglycmie dau moins 50 % du taux de
base.
LhGH slve de 30 90 aprs linjection.






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C. Epreuve de freinage :

Fonction corticotrope :Epreuves de freinage la
dexamtasone.

Fonction somatotrope : Hyperglycmie provoque :
Ladministration de glucose (75g) provoque dans
lheure qui suit un abaissement du taux de lhGH
un niveau < 1 ng/ml chez un sujet normal)






79
D. Exploration morphologique :

IRM : le plus performant pour visualiser les diffrentes
glandes.
Le scanner.

Une fois lorigine centrale est exclue, dautres investigations
peuvent tres menes pour explorer chaque glande:

Une exploration morphologique :
TDM, scintigraphie, chographie,


80
Le fait que le systeme endocrinien soit indispensable au
maintien des equilibres biologiques necessaires a la vie
explique que lon sinterroge beaucoup aujourdhui sur les
consequences dune eventuelle rupture de cet equilibre par les
contaminants de lenvironnement.

Hormis le cas du DES, des pesticides comme le DDT ou le
chlordecone, connus depuis longtemps comme facteurs
dinfertilite chez lhomme, et dont le mode daction releve bien
(DES) ou probablement (pesticides ci-dessus) dune
perturbation endocrinienne, il existe peu de donnees fiables
etablissant un lien entre PE et sante humaine.

Il est donc necessaire de raliser de nombreux travaux pour
identifier les PE, leur mcanisme, et leurs doses admissibles.
81
Bibliographie
(1) Jean-Pierre Cravedi, Daniel Zalko, Jean-Franois Savouret, Arnaud Menuet, Bernard Jgou. Le
concept de perturbation endocrinienne et la sant humaine. MEDECINE/SCIENCES 2007 ; 23 : 198-
204.
(2) Universit Catholique de Louvain, Bruxelles, Service d'Endocrinologie et Nutrition, Cliniques
Universitaires St Luc, 1200 Bruxelles, BELGIQUE Revue Franaise dendocrinologie
clinique. 1997, vol. 38, n
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(3) Larousse mdicale.
(4) Ader JL et al. Abrg de physiologie. 2
e
dition. Issy-les-moulineaux. Masson. 2006.
(5) Elin Swedenborg et al. Endocrine disruptive chemicals: mechanisms of action and involvement
in metabolic disorders. Journal of Molecular Endocrinology (2009) 43, 110.
(7) Casey E. Reeda and Suzanne E. Fentona. Exposure to Diethylstilbestrol during Sensitive Life
Stages: A legacy of heritable health effects. Birth Defects Res C Embryo Today, 4-17.
(9) www.Theriaque.org.
(10) www.pharmacorama.com.
(11) PREZ-MARTIN A. Facult de Mdecine Montpellier-Nmes. PCEM2 MI6 Rgulation
hormonale et Chronobiologie Physiologie des hormones Physiologie de la glande thyrode
Anne 2006-2007.
(12) OCDE LD 407, 440, 441.
(13) Olivier Foulon. Perturbateur endocriniens, modle en toxicologie. Congrs SFT Biomarqueurs
de Toxicit. 23/24 novembre 2004, Paris.
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