Pesq. agropec. bras., Braslia, v.41, n.5, p.

801-809, maio 2006

Tcnicas multivariadas na determinao da diversidade gentica 801
Tcnicas multivariadas na determinao da diversidade gentica
em gergelim usando marcadores RAPD
Nair Helena Castro Arriel
(1)
, Antnio Orlando Di Mauro
(2)
, Snia Marli Zingaretti Di Mauro
(2)
, Olaf Andreas Bakke
(3)
,
Sandra Helena Unda-Trevisoli
(2)
, Marcelo Marchi Costa
(2)
, Andra Capeloto
(2)
e Amanda Roberta Corrado
(2)
(1)
Embrapa Algodo, Rua Osvaldo Cruz, n
o
1143, CEP 58107-720 Campina Grande, PB. E-mail: nair@cnpa.embrapa.br
(2)
Universidade
Estadual Paulista, Fac. de Cincias Agrrias e Veterinrias, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane, s/n
o
, CEP 14884-900 J aboticabal,
SP. E-mail: orlando@fcav.unesp.br, zingara@fcav.unesp.br, mmarchi@hotmail.com, shutrevi@fcav.unesp.br, andcapeloto@aol.com,
acorrado@bol.com.br
(3)
Universidade Federal de Campina Grande, Campus de Patos/CSTR, CEP 58700-970 Patos, PB.
E-mail: obakke@cstr.ufcg.edu.br
Resumo O objetivo deste trabalho foi comparar diferentes tcnicas multivariadas na caracterizao de
35 gentipos de gergelim mediante 769 marcadores RAPD. As distncias genticas foram obtidas pelo comple-
mento aritmtico do coeficiente de J accard e agrupadas pelos mtodos hierrquicos do vizinho mais prximo, do
vizinho mais distante, das mdias aritmticas no ponderadas (UPGMA), do mtodo de otimizao de Tocher e
anlises de coordenadas principais. O agrupamento dos gentipos foi alterado em funo dos diferentes mto-
dos usados. Adotando-se a mesma distncia gentica (0,36) como valor de corte, diferenciaram-se quatro grupos
no mtodo do vizinho mais prximo, 13 para o vizinho mais distante, 11 no UPGMA e quatro no Tocher. Entre os
mtodos hierrquicos, o UPGMA apresentou o melhor ajuste das distncias originais e estimadas (CCC =0,89).
As anlises das coordenadas principais confirmaram a baixa diversidade existente entre os gentipos. A maior
divergncia ocorreu entre as cultivares Serid 1 e Arawaca 4, e a menor, entre os gentipos VCR-101 e GP-3314.
As trs primeiras coordenadas principais contabilizaram 35,13% do total da variabilidade, e 18 autovalores foram
necessrios para explicar 81% da variao gentica. Os mtodos UPGMA, de otimizao de Tocher, e as anlises
de coordenadas principais so complementares na formao dos grupos.
Termos para indexao: Sesamum indicum, anlise de agrupamento, coordenadas principais.
Multivariate techniques for the determination of genetic diversity in sesame
using RAPD markers
Abstract The objective of this work was to compare different multivariate techniques in the characterization of
35 sesame genotypes using 769 RAPD makers. Genetic distances were obtained from the arithmetic complement
of the J accard coefficient, and were evaluated by single linkage, complete linkage and unweighted arithmetic
average (UPGMA) agglomerative methods, Tocher optimization method and principal coordinate analysis. The
clustering structure was altered by the different methods. Adopting the same genetic distance (0.36) as value of
cut, four groups were discriminated in single linkage, 13 in complete linkage and 11 in UPGMA; the Tochers
optimization methods formed four groups. Among the hierarchical clustering methods, UPGMA showed the best
adjust for estimated and originals distances (CCC =0.89). Principal coordinates analyses confirmed the low
diversity among genotypes. The highest divergence occurred between Serid 1 and Arawaca 4 cultivars, and
the minor, between VCR-101 and GP-3314 genotypes. The three first principal coordinates responded for 35.13%
of the variability, and 18 autovalues were necessary to explain 81% of the genetic variation. UPGMA, Tochers
optimization and the principal coordinates analyses are complementary in the clusters formation.
Index terms: Sesamum indicum, clustering analyses, principal coordinates.
Introduo
O gergelim (Sesamum indicum L.) a oleaginosa de
uso mais antigo, originria dos continentes africano e
asitico, e no Brasil vem sendo explorado h mais de
60 anos. Suas sementes apresentam considervel teor
de protenas e sais minerais e fornecem um leo rico
em cidos graxos de elevada estabilidade qumica. Em
razo de sua facilidade de cultivo e adaptabilidade s
zonas ridas e semi-ridas do Nordeste, desde 1986 a
Embrapa Algodo, com outras instituies de pesquisa,
vem desenvolvendo trabalhos de melhoramento genti-
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N.H.C. Arriel et al. 802
co que tm contribudo para o estudo da adaptabilidade
e da estabilidade de gentipos, pela obteno de cultiva-
res altamente produtivas e adaptadas.
A caracterizao da diversidade gentica do gergelim
tem sido feita com base em marcadores morfolgicos e
agronmicos. Manivannan & Nadarajan (1996) consta-
taram que a altura da planta, nmero de ramificaes,
rendimento de sementes e cpsulas por planta foram as
caractersticas que mais contriburam para a caracteri-
zao de 52 acessos.
Singh et al. (1997) observaram, tambm, que a altura
da planta, o rendimento de sementes e o contedo de
leo foram os que mais contriburam para variabilidade
entre 33 gentipos.
Swain & Dikshit (1997) identificaram o contedo de
leo, massa de mil sementes, comprimento da cpsula e
incio de florao como as caractersticas que mais con-
triburam para explicao da variabilidade entre
40 gentipos de gergelim.
Apesar de ser descrito como planta autgama, o
gergelim apresenta alta manifestao hetertica em com-
binaes hbridas, tanto para os caracteres de produo
quanto para caracteres vegetativos (Arriel et al., 2001).
Nesse sentido, o conhecimento da diversidade, baseado
em informaes mais precisas, como as geradas pelos
marcadores moleculares, alm de direcionar as estrat-
gias de cruzamentos especficos, maximizando os gan-
hos genticos nos ciclos de seleo, permite otimizar
procedimentos para a conservao de recursos genti-
cos, pela avaliao de redundncias e deficincias da
base gentica disponvel (Dias, 1998).
Dentro da classe de marcadores moleculares, basea-
dos na tcnica de reao em cadeia da polimerase
(PCR), destaca-se o polimorfismo de DNA amplificado
ao acaso (RAPD). Nos ltimos anos, vrios estudos tm
demonstrado a eficincia dos marcadores RAPD na
caracterizao da variabilidade gentica (Pereira &
Kerr, 2001; Bered et al., 2002; Emygdio et al., 2003; Sera
et al., 2003). Estudos dessa natureza com o gergelim
so restritos; padres enzimticos foram usados por
Isshiki & Umezaki (1997), em 68 acessos provenientes
de diferentes pases, e os autores constataram a estrei-
ta base gentica do gergelim cultivado.
Bhat et al. (1999) constataram uma alta divergncia
gentica em germoplasma de gergelim indiano e
extico, a partir de marcadores RAPD.
Na anlise de dados moleculares, mtodos
multivariados so empregados, como os de agrupamen-
to (hierarquizao e otimizao) e os de ordenao
(componentes principais e coordenadas principais).
A anlise de agrupamento procura discriminar geneti-
camente os indivduos, e permite separ-los em grupos
pela anlise de um conjunto de caractersticas inerentes
a cada indivduo, agrupando-os por algum critrio de clas-
sificao, de forma que exista homogeneidade dentro
do grupo e heterogeneidade entre grupos (Cruz &
Carneiro, 2003). Basicamente, os mtodos hierrquicos
so utilizados na caracterizao da diversidade genti-
ca, por meio de marcadores RAPD (Pereira & Kerr,
2001; Sanz-Corts et al., 2001; Oliveira et al., 2002;
Costa et al., 2003; Emygdio et al., 2003).
De maneira geral, ao se fazer o agrupamento, as in-
formaes individuais so perdidas, restando apenas
aquelas referentes mdia dos grupos. Porm, quando
se trabalha com muitos indivduos, o nmero de estima-
tivas de similaridade/dissimilaridade obtidas relativa-
mente grande, o que dificulta o reconhecimento de gru-
pos homogneos. A opo recai sobre o agrupamento
dos indivduos com base nas disperses, em relao a
eixos cartesianos obtidos por componentes, por coorde-
nadas principais ou variveis cannicas. A representao
no espao por um menor nmero de dimenses mostra-
se til, por projetar em um grfico uma configurao de
itens, num espao de baixa dimenso, pois isto facilita a
identificao dos grupos de gentipos relacionados
(Cruz, 1990; Dias, 1998). Diversos trabalhos com coor-
denadas principais mostraram quanto de variao entre
os gentipos revelada por meio de dados RAPD
(Colombo et al., 2000; Chowdhury et al., 2002; Sera
et al., 2003).
Como o emprego de tcnicas multivariadas no reco-
nhecimento da diversidade gentica impe certo grau
de estrutura nos dados, importante que diferentes cri-
trios de agrupamento sejam utilizados, e que se consi-
dere como correta a estrutura resultante da maior parte
deles, para se assegurar que o resultado obtido no seja
um artefato da tcnica utilizada.
O objetivo deste trabalho foi comparar diferentes tc-
nicas de agrupamento (hierrquica e de otimizao) e
anlise de coordenadas principais, no estudo da diver-
gncia gentica de gentipos de gergelim, mediante uso
de marcadores RAPD.
Material e Mtodos
Foram utilizados 35 acessos de gergelim, pertencentes
ao Banco Ativo de Germoplasma da Embrapa Algodo
(Tabela 1), os quais foram cultivados em rea experi-
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mental do Departamento de Produo Vegetal da Unesp,
Campus de J aboticabal, SP.
Vinte dias depois da semeadura, duas folhas jovens
foram coletadas em cada dez plantas, por gentipo.
O processamento do tecido foliar e a extrao de DNA
para o marcador RAPD foram efetuados pelo protocolo
CTAB, com modificaes (Arriel et al., 2002).
No processo de otimizao das reaes de amplificao
de RAPD foram testados 76 iniciadores em sete
cultivares de gergelim, e aqueles que mostraram
reprodutibilidade de bandas, num total de cinco repeties
por iniciador, foram selecionados, tendo-se adotado os
critrios de repetibilidade, na qualidade e quantidade de
bandas amplificadas.
O volume da reao de PCR foi de 25 L, com tam-
po Tris-HCL 10 mM, pH 8 e 50 mM KCl, 2,5 mM
MgCl
2
, 1 unidade de Taq DNA Polimerase, 0,2 mM de
dNTPs, 30 ng do iniciador, 40 ng de DNA genmico e
gua Milli-Q. As condies de amplificao envolveram
uma etapa inicial de desnaturao a 94C por trs minu-
tos, seguida de 42 ciclos de desnaturao a 94C por
um minuto; anelamento do iniciador a 37C por um mi-
nuto; e extenso a 72C por trs minutos. Ao trmino
das reaes, as amostras foram mantidas a 4C.
Os fragmentos de RAPD foram fracionados em gel
de agarose 1,5% em tampo TBE 1X (Tris base 1 M,
cido brico e EDTA 500 mM), corados com 3 L de
brometo de etdio (10 mg mL
-1
) e, em seguida,
visualizados sob luz ultravioleta. Os tamanhos dos frag-
mentos amplificados foram estimados, por comparao,
com marcador de peso molecular 100 pb, DNA Ladder.
Os 55 iniciadores da Operon Technologies (Tabela 2)
foram utilizados para gerar uma matriz binria, a partir
da codificao 1 para presena e 0 para ausncia
da banda. As estimativas de similaridade entre todos
os pares de acessos (ii') foram convertidas em
dissimilaridade por meio do complemento aritmtico
(D) do coeficiente de similaridade de J accard
(Cruz & Carneiro, 2003): S
ii'
J accard =a/(a +b +c),
em que a o nmero de concordncias do tipo 1 1; b
o nmero de discordncias do tipo 1 0; e c o nmero
de discordncias do tipo 0 1, sendo D
ii'
=1 - S
ii'
.
Esse coeficiente foi escolhido por suas propriedades
matemticas, que desconsideram a ausncia de bandas
como sinnimo de similaridade gentica e atribuem di-
ferentes pesos presena conjunta de bandas (Dias,
1998; Cruz & Carneiro, 2003).
O programa NTSYS-pc (Rohlf, 1992) foi empregado
para a aplicao das tcnicas de aglomerao hierr-
quica do vizinho mais prximo, vizinho mais distante da
mdia aritmtica entre pares no ponderados (UPGMA)
e da anlise das coordenadas principais. Foram usados
o mtodo aglomerativo de otimizao de Tocher (Cruz,
2001) e o das coordenadas principais (Rohlf, 1992).
Nos mtodos de agrupamentos hierrquicos, os
gentipos foram agrupados de forma sucessiva, com base
em suas distncias mnimas, mximas ou pela mdia
aritmtica no ponderada entre os pares de gentipos,
em que para cada grupo formado foi necessrio recons-
truir uma nova matriz de dissimilaridade, at a forma-
o de um nico grupo. Os passos dos agrupamentos
foram representados na forma de dendrogramas e a
comparao dos mtodos de agrupamento foi realizada
a partir do coeficiente de correlao cofentica (CCC),
que traduz a relao momento-produto, calculado entre
Tabela 1. Identificao dos gentipos de gergelim, com suas
respectivas denominaes e procedncias.
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de agrupamento, depois da construo do dendrograma.
Valores de CCC superiores a 0,8 indicam boa
representatividade entre as distncias (Bussab et al.,
1990).
Resultados e Discusso
Dos 76 iniciadores utilizados, 55 foram selecionados
(Tabela 2) por apresentarem quantidade, qualidade e
reprodutibilidade de bandas amplificadas. Um total de
769 bandas foi gerado, das quais 48,64% (374) foram
polimrficas. O nmero de bandas produzidas, por
iniciador, variou de 7 (OPQ06) a 21 (OPM06), com
mdia de 14 bandas por iniciador. A taxa de polimorfismo
por iniciador foi de aproximadamente sete bandas, com
uma variao de 2 (OPM-01) a 12 bandas polimrficas
(OPN-03). O tamanho dos fragmentos amplificados
variou de 300 a aproximadamente 2.000 pb. Ressalta-
se que as diferenas entre os gentipos foram determi-
nadas em funo da freqncia de bandas e no da pre-
sena ou ausncia de bandas especficas. Porm, deve-
se considerar que algumas bandas especficas observa-
das em certos acessos, a partir de determinado inicia-
dor, podem ser teis, futuramente, na caracterizao de
cultivares.
Uma anlise estatstica descritiva das matrizes de dis-
tncias geradas pelo coeficiente de dissimilaridade mos-
trou que, em mdia, a distncia entre os pares de
gentipos foi de 0,28. Destacaram-se como os pares
mais divergentes os gentipos 2 (Serid 1) e 12
(Arawaca 4), e os mais similares os gentipos 30 (VCR-
101) e 31 (GP 3314). O coeficiente de variao mdio
foi de 10,6%, que indica uma boa preciso das estimati-
vas. As medidas de distncias genticas, obtidas para a
formao do agrupamento, variaram de 0,10 a 0,46, su-
gerindo que o germoplasma utilizado apresenta uma es-
treita base gentica, diferentemente da variao da si-
milaridade gentica observada por Bhat et al. (1999),
entre 0,19 e 0,89, com marcadores RAPD em 58 aces-
sos de gergelim indiano e extico, a partir de medidas
de distncias obtidas por meio do mesmo coeficiente.
importante ressaltar que o alto grau de diversidade
gentica, aliado s informaes de caracterizao
morfolgica, possibilitou ratificar a hiptese de que, pro-
vavelmente, a regio indiana o local de origem do
gergelim cultivado.
O resultado da hierarquizao dos gentipos pelos
mtodos do UPGMA, vizinho mais prximo e vizinho
Tabela 2. Relao de iniciadores selecionados, com respecti-
vos nomes comerciais, seqncia de bases nitrogenadas,
nmero total de fragmentos (NTF), nmero de fragmentos
polimrficos (NFP) e porcentagem de polimorfismo (P%) obti-
dos nas reaes RAPD, em 35 gentipos de gergelim.
os elementos da matriz original e os da matriz cofentica,
resultante da simplificao proporcionada pelo mtodo
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Tcnicas multivariadas na determinao da diversidade gentica 805
mais distante (Figura 1) mostra as diferenas no posto
dos gentipos. Nos agrupamentos hierrquicos, a deli-
mitao dos grupos feita de maneira subjetiva, obser-
vando-se pontos de alta mudana de nvel no
dendrograma e, por isso, diferentes padres de agrupa-
mento podem ocorrer.
Quando no se tem informao sobre a relao ge-
ntica entre a maioria dos gentipos, no se pode deter-
minar que mtodo de agrupamento mais acurado.
Assim, ao se comparar os resultados de diferentes m-
todos, pode-se evitar inferncias errneas. Verifica-se
que, apesar da estrutura final mostrar-se parecida, prin-
cipalmente entre os mtodos UPGMA e vizinho mais
prximo, ocorreram alteraes nos nveis em que os
gentipos so agrupados.
Ao se adotar um porcentual de divergncia gentica
em torno de 36% (Figura 1), constata-se a formao de
diferentes agrupamentos heterticos dos gentipos des-
critos na Tabela 1. Para o mtodo UPGMA, foram for-
mados 11 grupos, dos quais nove so unitrios, constitu-
dos pelos gentipos 2, 12, 7, 9, 8, 6, 10, 5 e 1; um dci-
mo grupo foi formado pelos acessos 3 e 4, e um grande
grupo formado pelos demais gentipos.
No mtodo do vizinho mais prximo, podem ser ob-
servados quatro grupos, sendo que em trs deles h gru-
pos nicos dos gentipos 2, 7 e 9, e o quarto grupo foi
constitudo pelos demais. Para o mtodo do vizinho mais
distante, 15 grupos foram formados, dos quais 11 se
constituram de grupos unitrios dos gentipos 2, 12, 9,
8, 7, 13, 21, 10, 6, 5 e 1, um grupo de dois acessos,
constitudo pelos gentipos 3 e 4, outro grupo formado
pelos gentipos 35, 34, 33 e 32, um grupo com os
gentipos 22, 20, 17, 25, 19, 18 e 11 e o ltimo formado
pelos gentipos 31, 30, 29, 26, 24, 23, 16, 28, 15, 27 e 14.
Entre os gentipos avaliados, os que se posicionam
nos pontos extremos do dendrograma, com exceo do
gentipo 12, so as cultivares de gergelim mais utiliza-
das comercialmente; 1, 3, 4, 5 e 6 so variedades origi-
nadas de outros pases; e os gentipos 2, 7, 8, e 9 so
cultivares nacionais, lanadas pela Embrapa Algodo.
Isto sugere que, apesar da modesta diversidade imposta
aos materiais, pela presso da seleo adotada nos pro-
gramas de melhoramento de cada pas, no mbito
molecular esses materiais apresentam-se relativamente
dissimilares. Note-se que, em todos os procedimentos
de agrupamento utilizados, o gentipo 2, representado
pela cultivar Serid 1, formou um grupo nico, em rela-
o aos outros gentipos. Entre todos os gentipos, esta
cultivar se diferenciou por apresentar o menor nmero
de bandas.
Para se avaliar o grau de ajuste entre as matrizes de
dissimilaridade e as matrizes resultantes dos
agrupamentos, para formao dos dendrogramas dos
trs mtodos, compararam-se as estimativas dos
coeficientes de correlao cofentica (CCC). Quanto
maior o valor do coeficiente, menor a distoro
provocada ao se agrupar os gentipos (Bussab et al.,
1990). O mtodo UPGMA proporcionou excelente
representao das distncias na forma de dendrogramas
(CCC =0,89), seguido pelo mtodo do vizinho mais
prximo (CCC =0,85) e pelo mtodo do vizinho mais
distante, que apresentou CCC =0,79. A superioridade
do UPGMA j foi relatada por Dias (1998).
No agrupamento pelo mtodo de otimizao de
Tocher, ocorreu a formao de quatro grupos, trs de-
les constitudos por apenas um gentipo (2, 12 ou 7).
O gentipo 2 representa a cultivar Serid 1, de hbito
de crescimento ramificado, ciclo tardio, uma cpsula por
axila foliar, sementes de colorao creme e
suscetibilidade s principais doenas da cultura; o
gentipo 7 a CNPA G2, que tem por caractersticas a
presena de trs frutos por axila foliar, ciclo mdio e
tolerncia mancha angular. O gentipo 12 representa
a cultivar Arawaca 4, de porte mdio, cpsulas peque-
nas e sementes de colorao marrom e apresentou to-
lerncia s infestaes de doenas e praga.
Os demais gentipos formaram o quarto grupo, que
compreendeu aproxi madamente 91% do
germoplasma avaliado, confirmando a baixa amplitu-
de de variabilidade gentica. No mtodo Tocher, um
indivduo ainda no agrupado s includo em deter-
minado grupo em formao se sua distncia mdia
em relao a esse grupo no ultrapassar determina-
do valor preestabelecido. Tal valor geralmente to-
mado como a maior amplitude do conjunto das me-
nores estimativas de distncia que envolvem cada um
dos indivduos em agrupamento. Por isso, a grande
divergncia dos gentipos 2, 7 e 12 confirma sua se-
parao em grupos distintos. Um ponto a ser consi-
derado a relao da procedncia geogrfica como
indicador de diversidade gentica, pois, em muitos
casos, a separao geogrfica geralmente no resul-
ta em maior distncia gentica (Cruz & Carneiro,
2003), o que foi constatado, neste trabalho, pela pre-
sena de gentipos de diferentes pases que compu-
seram o grupo quatro, onde se encontra a maioria do
germoplasma.
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Figura 1. Dendrogramas dos diferentes mtodos de agrupamentos construdos a partir do complemento
aritmtico do coeficiente de J accard entre 35 gentipos de gergelim, considerando os marcadores
moleculares RAPD. A numerao dos gentipos est de acordo com a Tabela 1.
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Ao comparar os grupos formados pelo mtodo de
otimizao de Tocher com os dendrogramas, verifica-
se que o mtodo UPGMA o que mais se assemelha
na diferenciao dos gentipos e, dependendo do ponto
de corte escolhido, podem ser formados basicamente
quatro grupos, enquanto que nos demais, constatam-se
diferenas na hierarquizao inicial dos gentipos.
Para averiguar se o agrupamento de gentipos apre-
sentaria melhor resoluo, empregou-se a tcnica de
coordenada principal (PCA), para anlises de dados
RAPD. Por meio das anlises, constatou-se que a por-
centagem da variabilidade acumulada nos primeiros ei-
xos (autovalores) gerados no grande, o que ratifica a
pequena diversidade gentica do germoplasma em es-
tudo. Mesmo com esta limitao, foram gerados grfi-
cos bidimensionais e tridimensionais, que relacionam os
novos escores para os gentipos, em funo dos dois
primeiros eixos definidos na anlise (Figura 2).
A representao grfica da associao dos gentipos,
a partir da projeo num plano espacial, procura reduzir
a dimensionalidade dos espaos interpontos. Entretan-
to, a PCA no persegue a maximizao da variao,
nas projees dos pontos no espao considerado, e re-
quer apenas uma relao monotnica entre as distnci-
as originais e distncias interpontos. Em razo disso, os
primeiros trs componentes da anlise das coordenadas
principais explicaram 35,13% de variao entre as amos-
tras, com 18,59, 8,64 e 7,90% para o primeiro, segundo
e terceiro componentes, respectivamente. Para expli-
cao de mais de 81% de variao entre os gentipos,
foram necessrios 18 autovalores. A contribuio dos
componentes restantes, individualmente, foi menos
de 1,5% cada.
Na avaliao de 58 acessos de gergelim, Bhat et al.
(1999) observaram que os dois primeiros componentes
principais responderam por 21% da variao total, e para
explicar 75% da variabilidade, seriam necessrios
18 autovalores. Por sua vez, Colombo et al. (2000), ao
avaliar 126 gentipos de mandioca, verificaram que os
dois primeiros eixos das coordenadas principais foram
responsveis por apenas 14% da variao existente,
porm foi possvel separar os gentipos em
quatro grupos. Chowdhury et al. (2002) constataram que,
em 48 cultivares de soja, os dois primeiros componen-
tes principais foram responsveis por 45,95% da varia-
o total. Sera et al. (2003) avaliaram 14 gentipos eli-
tes de caf e observaram que as trs primeiras coorde-
nadas principais foram responsveis por 53,8% da vari-
ao dos dados. De acordo com os resultados pode-se
concluir que, independentemente da variabilidade encon-
trada, a projeo dos pontos nos espaos bidimensional
e tridimensional permitiu representar toda a variabilida-
de existente.
A projeo das coordenadas principais (Figura 2),
alm de reforar o posicionamento dos gentipos mais
distintos (2, 7 e 12), revelou que o gentipo 13 tambm
divergente dos demais. possvel, tambm, identificar
um grupo isolado constitudo dos acessos 25, 20, 19 e
17, e dois grupos independentes, formados pelos
gentipos 18 e 22, 8 e 9. O gentipo 4, nos mtodos de
hierarquizao do vizinho mais distante e UPGMA, re-
velava-se muito prximo ao 3, enquanto no mtodo
do vizinho mais prximo, comportou-se como mais in-
dependente, conforme evidenciado na projeo no pla-
no.
Figura 2. Representao bidimensional (A) e tridimensional
(B) da anlise de coordenadas principais dos 35 gentipos de
gergelim, baseada na distncia gentica calculada com dados
de marcadores RAPD.
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Por meio da utilizao dos diferentes critrios de agru-
pamento, pode-se identificar a existncia de agrupamento
natural dos gentipos, em funo da similaridade gen-
tica do germoplasma avaliado. Entretanto, o emprego
de mais de um mtodo de agrupamento, em razo das
diferenas na hierarquizao, otimizao e ordenao
dos grupos, permite que a classificao deles se
complemente em funo dos critrios que cada tcnica
utiliza, e impede que inferncias errneas sejam adotadas
na alocao de materiais, dentro de um determinado
subgrupo de gentipos. Pode-se concluir que os mto-
dos de hierarquizao UPGMA e otimizao de Tocher
devem ser empregados em conjunto, para complemen-
tar os resultados e, caso haja um nmero elevado de
gentipos, a disperso grfica dos escores originados
pelas coordenadas principais auxiliar numa melhor dis-
tino dos agrupamentos formados.
A baixa diversidade entre esses gentipos pode ser
atribuda ao fato de o gergelim ser uma cultura
introduzida, diferentemente da coleo de gergelim do
continente indiano, centro de domesticao da espcie,
onde Bhat et al. (1999) estimaram uma maior diversi-
dade. Essa observao pode ser reforada pelos resul-
tados obtidos por Isshiki & Umezaki (1997) em que, dos
11 marcadores bioqumicos usados para avaliao de
41 acessos de gergelim cultivado, originrios do J apo,
Coria e Tailndia, a variao foi reportada somente
em um nico sistema enzimtico.
De modo geral, os resultados dos mtodos de agru-
pamentos e da anlise de coordenadas principais evi-
denciaram que os marcadores RAPD foram eficientes
na caracterizao da diversidade gentica entre os
gentipos de gergelim, e que, posteriormente, podero
ser utilizados na caracterizao da coleo de
germoplasma disponvel na Embrapa Algodo, com vis-
tas simplificao do banco de germoplasma e forma-
o de Core Collection, uma vez que, pelos resulta-
dos obtidos, apesar do pequeno nmero de acessos ava-
liados, percebe-se a existncia de duplicatas na cole-
o.
Os grupos nicos, representados pelas cultivares co-
merciais, poderiam ser usados como teste para capaci-
dade de combinao, pois gentipos divergentes podem
ser potenciais genitores, em termos de valor gentico
(efeito mdio dos seus genes) a ser passado para os
seus descendentes, possibilitando que novas combina-
es allicas possam ser obtidas e selecionadas, medi-
ante retrocuzamentos e selees recorrentes.
Outro aspecto a ser abordado o polimorfismo en-
contrado em alguns iniciadores como OPM09, OPN03,
OPN18 e OPP08, que podero ser teis na averigua-
o de fragmentos moleculares especficos por gentipo,
aps sua converso em regies de seqncias
especficas (SCARs).
importante ampliar a base gentica do gergelim, a
fim de se explorar a mxima variabilidade na seleo de
populaes segregantes que pode ser alcanada pelo
uso de gentipos mais divergentes. O conhecimento da
relao gentica ser de grande valor nas diretrizes de
explorao do gergelim, pois possibilitar a otimizao
do uso do germoplasma disponvel.
Concluses
1. As cultivares Serid 1 e Arawaca 4 so as mais
divergentes geneticamente, e VCR-101 e GP-3314 so
as mais similares.
2. A hierarquizao dos gentipos alterada em fun-
o dos diferentes mtodos usados.
3. Entre os mtodos de agrupamento hierrquicos, o
UPGMA apresenta o melhor ajuste para as distncias
originais e estimadas.
4. As anlises das coordenadas principais confirmam
a baixa diversidade entre os gentipos avaliados.
5. O mtodo UPGMA, o mtodo de otimizao de
Tocher e as anlises de coordenadas principais so com-
plementares na formao dos agrupamentos.
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Recebido em 23 de setembro de 2004 e aprovado em 10 de janeiro de 2006