Sunteți pe pagina 1din 5

LP 3 - CROMOSOMII UMANI

1. GENERALITI.
n celulele somatice umane (diploide) exist 2n=46 cromosomi, adic 23 de perechi de cromosomi
omologi. Cromosomii omologi sunt cromosomi identici ca morfologie (form i mrime) i coninut genic, dar
diferii ca origine (unul de origine matern, cellalt de origine patern).
Din cele 23 perechi de cromosomi
! 22 perechi sunt identice la femeie i "r"at ! autosomi
! # pereche este diferit la cele dou sexe ($$ la femeie, $% la "r"at) ! gonosomi.
n celulele sexuale mature (haploide) ! gamei ! exist n (23) cromosomi
! &n o'ule 22($
! &n spermato)oi)i 22($ sau 22(%.
n ca)ul accidentelor anafa)ice din mito) sau meio) ('. *+. Di'i)iunea celulei) se pot nate indi'i)i
cu anomalii cromosomice numerice (omogene sau &n mo)aic). Diagnosticul acestor sindroame se face prin
metode citogenetice de la"orator.
2. PRINCIPIILE TENICII !E LA"#RAT#R PENTR$ %T$!I$L CR#&#%#&IL#R LA #&
+entru a putea fi studiai cromosomii tre"uie s ai" un gra' ma(im ') con')nsar) i s fie dispui
*ntr+un singur ,lan .,ceste condiii sunt &ndeplinite &n cursul m)ta-a.)i care este etapa optim de studiu a
cromosomilor. +entru o"inerea de cromosomi tre"uie &ndeplinite urmtoarele condiii s se o"in celule n
diviziune, s se blocheze diviziunea n metafaz i s se reali-e-e un preparat cromosomic care s fie
examinat la microscop.
A. C)lul) *n 'i/i.iun) ,ot -i anali.at)
! direct n cazul esuturilor care se divid activ . mdu' osoas, gonada masculin, tumori
! dup realizarea unei culturi celulare
de scurt durat s/nge periferic, limfocite 0, mdu' osoas roie
de lung durat fi"ro"lati (piele, fascii, em"rioni), celule amniotice, celule din 'ilo)itile coriale,
tumori solide.
t)0nica r)colt1rii s2ng)lui ,)ri-)ric 3i ,un)r)a ac)stuia *n cultur14
constituie cea mai simpl tehnic de o"inere a cromosomilor umani1
se prele' s/nge periferic prin puncie 'enoas ! prele'area tre"uie reali)at &n condiii de asepsie
(similare cu cele necesare pentru recoltarea s/ngelui pentru hemocultur)1
se recoltea) pe heparin, pentru a se &mpiedica coagularea s/ngelui1
&n condiii de asepsie, s/ngele este introdus &ntr!un flacon de cultur ce conine un mediu de cultur
specific ("io 2erieux, #33, 4+25#678),&m"ogit cu ser de 'iel fetal sau ser uman ,9
pentru stimularea di'i)iunilor se utili)ea) fitohemaglutinin;
se incu"ea) la 3:
;
, :2 h..
". "locar)a 'i/i.iunilor *n m)ta-a.1
<e face cu su"stane care inhi" formarea fusului de di'i)iune (statmo=inetice) > colchicin sau
colcemid.
C. R)ali.ar)a ,r),arat)lor 5lam)lor6 ,)ntru stu'iul la microsco, impune urmtoarele etape
1. hipotonizarea celulelor (centrifugare, eliminarea supernatantului i resuspendare &n soluie hipoton de
?Cl) dilat celulele i disperseaz cromosomii1
2. fixarea celulelor (alcool ( acid acetic) ! &ntrerupe acti'itatea 'ital a celulei, pstr/nd morfologia acestora1
3. etalarea celulelor pe o lam microscopic pentru a dispune cromosomii &n acelai plan.
4. colorarea cu soluie @iemsa sau un alt colorant specific pentru cromosomi.
5. examinarea la microscopul optic permite reperarea i anali)a cromosomilor pentru e'idenierea
e'entualelor anomalii de numr (omogene sau n mozaic) sau anomalii de structur1
6. fotografierea i decuparea cromosomilor1
7. identificarea cromosomilor i efectuarea cariotipului.
1
2
MEDICINA
LP. 3
diferite conferine internaionale de standardi)are au sta"ilit criteriile de identificare i &mprire a
celor 23 de perechi de cromosomi umani &n : grupe notate de la , la @.
CARIOTIPUL r),r).int1 'is,un)r)a sist)mati.at1 a cromosomilor ')cu,a7i ai un)i singur)
c)lul)8 ,) 9a.a lungimii8 ,o.i7i)i c)ntrom)rului sau altor crit)rii mor-ologic) 5constric7ii s)cun'ar)8
sat)li7i8 9)n.i6 ,r)cis co'i-icat) ,rin stan'ar') int)rnational).
:. I!ENTI;ICAREA CR#&#%#&IL#R $&ANI
I')nti-icar)a cromosomilor umani const1 *n sta9ilir)a gru,)i 3i ,)r)c0ii 'in car) -ac ,art)
cromosomii stu'ia7i.
+entru identificarea cromosomilor se folosesc criterii morfologice, autoradiografia i marcaAul &n
"en)i.
A. CRITERII &#R;#L#GICE
,ceste criterii sunt singurele aplica"ile la cromosomii colorai uniform (@iemsa).
a. Crit)riil) cantitati/)
I. Lungimea cromosomului
se folosete ! lungimea a"solut a cromosomului exprimat &n microni
! lungimea relati' ! raportul &nmulit cu #88 dintre lungimea cromosomului studiat i
lungimea total a unui set haploid.
dupa lungime cromosomii se clasific &n mari8 mi<locii8 mici.
II. Poziia centromerului
dup po)iia centromerului cromosomii se clasific &n 3 categorii1 pentru aceasta se folosete uni raport
numit in'ic) c)ntrom)ric
indicele centromeric repre)int raportul &nmulit cu #88 dintre lungimea "raului scurt i lungimea total a
cromosomului
Ic = ,=5,>?6 ( 1@@
pe "a)a acestui criteriu cromosomii se clasific &n
m)tac)ntrici 5c . 76 ! 73
su9m)tac)ntrici 5c . 3# ! 7B
acroc)ntrici 5c . #: ! 38
9. Crit)rii calitati/)
I. sateliii
sateliii repre)int mici mase de heterocromatin pre)ente &n continuarea telomerelor "raelor scurte ale
cromosomilor acrocentrici (#3, #7, #B, 2#, 22, cu excepia cromosomului %)
II. constriciile secundare
repre)int segmente cromosomice despirali)ate, sla" colorate.
ele pot fi situate pe orice cromosom, dar sunt mai frec'ent &nt/lnite pe "raul lung a cromosomilor #, 3, #6,
#3 &n apropierea centromerului.
". A$T#RA!I#GRA;IA
Cste o metod de studiu a cromosomilor puin utili)at. Ca const &n marcarea cromosomilor cu
timidin tritiat (0D
3
), care se su"stuituie timinei &n lanurile de ,DE nou create &n cursul fa)ei < a interfa)ei.
,dugarea mar=erului i)otopic &n partea a doua a fa)ei < permite identificarea )onelor de heterocromatin,
care au o replicare tardi'. ,stfel, sunt identificai cromosomii cu replicare tardi' &n cursul fa)ei <,
cromosomi "ogai &n heterocromatin i puin acti'i genetic. ,cetia sunt cromosomii F,#3,#F, 2# i unul din
cromosomii $ la femeie.
C. &ARCAA$L BN "ENCI
4epre)int un grup de tehnici speciale, prin care se e'idenia) pe cromatide alternana de )one
colorate i necolorate, numite 9)n.i. ,cestea au o 'istri9u7i) ,r)cis18 ')t)rminat1 ') structura int)rn1 a
cromosomului.
3
MEDICINA
LP. 3
2etodele de marcaA &n "en)i au aprut relati' recent, &n anii G:8 i au determinat o re'oluie &n
citogenetic, deoarece au o mar) /aloar) ,ractic14
2arcaAul &n "en)i reflect structura discontinu a cromosomilor, respecti' alternana de
eucromatin i heterocromatin, de ,DE i proteine.
2odelul "en)ilor este identic n toate celulele unui organism i la toi indi'i)ii aceleiai specii, de
aceea efectuarea marcaAului &n "en)i permite identificarea precis a unei specii.
2arcaAul &n "en)i permite identificarea precis a perechilor de cromosomi omologi, deoarece
acetia sunt identici din punct de 'edere genetic i au acelai model de "en)i.
2arcaAul &n "en)i permite identificarea precis a fiecrui cromosom, deoarece cromosomii,
aparin/nd unor perechi diferite, au alte gene i deci alt model al "en)ilor.
2etodele de marcaA &n "en)i permit un diagnostic citogenetic foarte precis &n multe anomalii de
structur (deleii, in'ersii) care nu se e'idenia) sau se e'idenia) foarte greu &n coloraia
o"inuit.
Denumirea "en)ilor se face &n raport cu metoda folosit sau locali)area "en)ilor
9)n.i D . Huinacrin (fluorescente) &n lumin IJ1
9)n.i G . colorare @iemsa, dup tratament cu alcali, en)ime proteolitice sau soluii saline
concentrate1 "en)ile K fluorescente au aceeai dispo)iie cu "en)ile @ colorate1
9)n.i R . Lre'erseL, o"inute prin denaturare termic a ,DE sau prin colorare cu acridin orange >
dispo)iie in'ers "en)ilor K i @1
9)n.i C . centromerice ! e'ideniate &n )ona centromerului1
9)n.i T . telomerice. ! e'ideniate &n )ona telomerelor1
P) -i)car) cromosom s) ,ot o9s)r/a o s)ri) ') r),)r)8 )l)m)nt) im,ortant) ,)ntru i')nti-icar)a unui
cromosom 59)n.i n)t conturat)8 c)ntrom)rul8 t)lom)r)l)6. R),)r)l) ')limit)a.1 r)giuni. ;i)car)
r)giun) ar) mai mult) 9)n.i8 iar 9)n.il) ,ot a/)a su99)n.i.
Nomenclatura benzilor regiunile i "en)ile se numerotea) de la centromer spre telomere pentru
fiecare din "rae1 ex #H2#.# ! cromosomul (#), "raul lung (H), regiunea (2), "anda (#), su""anda (#).
Cromosomii metafa)ici pre)int 788 ! B88 "en)i, &n timp ce cromosomii aflai &n profa)a timpurie pre)int
#F88!2888 "en)i (metode de &nalt re)oluie).
4. CLA%I;ICAREA CR#&#%#&IL#R $&ANI
+e "a)a criteriilor morfologice cantitative (lungimea i po)iia centromerului) i calitative (satelii i
constricii secundare) cromosomii se grupea) &n perechi de omologi i se clasific &n : grupe, notate de la , la
@ carioti,4
gru,a A (cromosomi mari, metacentrici) ! perechile #!3 ! sunt cei mai mari cromosomi,
cromosomul # poate pre)enta constricie secundar, cromosomul 2 este usor su"metacentric
gru,a " (mari, su"metacentrici) ! perechile 7!B
gru,a C (miAlocii, su"metacentrici) ! perechile 6!#2 i cromosomul $1 sunt #6 la femeie i #B la
"r"at1 cromosomii F, 3, #8 i #2 sunt mai su"metacentrici1 cromosomii 6, :, ## i $ sunt mai puin
su"metacentrici1 cromosomul 3 pre)int constricie secundar pe "raul lung (3Hh()
gru,a ! (miAlocii, acrocentrici) ! perechile #3!#B1 pot pre)enta satelii
gru,a E ! cromosomul C #6 este metacentric miAlociu1 cromosomii C #:!#F sunt su"metacentrici
mici
gru,a ; (mici, metacentrici) ! perechile #3!28
gru,a G (mici, acrocentrici) ! perechile 2#!22 i %1 cromosomii 2# i 22 pot pre)enta satelii1
cromosomul % nu pre)int satelii1 cromosomii grupei @ aAut la ')t)rminar)a s)(ului + &n ca)uri
normale la femei sunt 7 acrocentrici mici (2 crs 2# ( 2 crs 22) M la "r"ai sunt B acrocentrici mici
(2 crs 2#( 2 crs 22 ( %)
4
MEDICINA
LP. 3
L$NGI&EA
CR#&#+
%#&IL#R &ETACENTRICI %$"&ETACENTRICI ACR#CENTRICI
2,45 , #!3 9 7!B !
25N*OC55 C #6 C 6!#2, $ D #3!#B
25C5 P #3!28 C #:!#F @ 2#!22, %
E. N#&ENCLAT$RA CR#&#%#&IL#R $&ANI
,re la "a) un sistem internaional de standardi)are, care permite formularea cariotipului normal sau
anormal cu aAutorul unor sim"oluri i semne, care redau numrul de cromosomi i eventualele anomalii de
structur ! deficit, surplus sau rearanAamente ale materialului cromosomic.
1. CARI#TIP$L N#R&AL ! se scrie numrul total de cromosomi urmat de o 'irgul, dup care se
scrie structura gonosomilor -)m)ia normal1 + 468FF sau 91r9atul normal + 468FG.
2. CARI#TIP$RI AN#R&ALE
a. anomalii num)ric)
! ale autosomilor se scriu numrul total al cromosomilor, gonosomii, iar dup o alt 'irgul, precedat
de ( (cromosomul &n exces) sau ! (pierderea unui cromosom) se scrie numrul cromosomului implicat1
! ale gonosomilor se scrie numrul total de cromosomi, urmat dup 'irgul, de gonosomii respecti'i.
9. anomalii structural) ! exist 2 sisteme pentru desemnarea anomaliilor structurale
! prescurtat ! natura rearanAamentului i punctele de ruptur sunt identificate prin "anda sau regiunea
&n care se produc1
! detaliat ! se definete fiecare cromosom anormal dup structura sa &n "en)i. Cxemple
76,$$,del(#)(H2#H3#) sau 76,$$,del(#)(pter!QH2#H3#!QHter) Deleie a "en)ii 2 a "raului
lung al crs.#.
76,$%,r(2)(p2#H3#) sau 76,$%,r(2)(p2#!QH3#) Cromosom 2 inelar1 punctele de ruptur sunt
pe "raul scurt &n "anda p2# i pe "raul lung &n "anda H3#.
76,$$,in'(2)(p2#H3#) sau 76,$$,in'(2)(pter!Qp2#H3#!Qp2#H3#!QHter) 5n'ersie
pericentric a segmentului cuprins &ntre "anda p2# i "anda H3# ale cromosomului 2.
76,$%,t(21B)(H2#1H3#) sau 76,$%,t(21B)(2pter!Q2H2#BH3#!QBHter1 Bpter!QBH3#2H2#!
Q2Hter) 0ranslocaia reciproc a segmentelor distale de "anda H2#, respecti' H3# ale
cromosomilor 2, respecti' B.
76,$,i($H) sau 76,$,i($)(Hter!Qcen!QHter) 5socromosom de "rae lungi al cromosomului $.
6. HARIAII ALE CARI#TIP$L$I LA PER%#ANE C$ ;EN#TIP
N#R&AL. P#LI&#R;I%&$L CR#&#%#&IC.
Cxist uneori o serie de a"ateri de la regulile generale sta"ilite la punctul 3, care determin unele
'ariante ('ariaii) particulare rare, dar care nu repre)int anomalii cromosomice.
A. HARIAII N$&ERICE
I. la femeie ! dup '/rsta de 68 ani, p/n la :R din celulele organismului pot pierde unul din cromosomii $,
de'enind 7B,$1
II. la brbat ! dupa '/rsta de :8 ani, p/n la 2R din celule pot pierde cromosomul % i de'in 7B,$.
5
MEDICINA
LP. 3
". HARIAII %TR$CT$RALE
I. lungimea !i forma ! cromosomii omologi nu sunt &ntotdeauna egali ca lungime1 'ariaiile &n lungime
interesea) &n special "raele scurte ale cromosomilor D, @ (mai ales partea heterocromatinian) de exemplu
% metacentric.
II. sateliii ! mare 'aria"ilitate &n numr, form i mrime1 se gsesc o"inuit pe cromosomii acrocentrici, cu
excepia cromosomului %, dar pot fi o"ser'ai i pe ali crs. ! ex. #:, #F1
III. constriciile secundare ! )one decondensate, situate &n regiunile proximale ale "raelor lungi ale
cromosomilor #, 3, #6 i %1 uneori poate apare o mrire exagerat a constriciilor secundare.
C. I&P#RTANA PRACTIC A P#LI&#R;I%&$L$I CR#&#%#&IC
Polimorfismele de bandare ("en)ile K, @ i C) sunt repre)entate de diferene &n ceea ce pri'ete
mrimea i aspectul )onelor cromosomice1 cel mai frec'ent, polimorfismele implic regiunile centromerice,
"raele scurte i sateliii cromosomilor D i @, )ona de constricie secundar de pe "raul lung al cromosomului
%.
"emnificaia #olimorfismului nu este "ine cunoscut1 polimorfismul se transmite dominant dup
modelul mendelian, nu mo'i-ic1 )(,r)sia -)noti,ic1 ')oar)c) ,ar) limitat numai la r)giunil)
0)t)rocromatini)n)8 inacti/) g)n)tic (produce modificri cantitati'e ale !"# repetitiv).
+olimorfismul cromosomic este folosit
#. ! ca mar=er pentru e'idenierea transmiterii unor caractere de la prini la copii (ex. cercetarea paternitii)1
2. ! pentru determinarea originii parentale a nedisAunciei &n aneuploidii (ex. originea crs. suplimentari &n
trisomii)1
3. ! pentru identificarea cromosomilor care conin gene mar=er1
7. ! sta"ilirea unor grupe de &nlnuire (lin=age) genic1
B. ! creterea frec'enei unor 'ariante &n unele forme de leucemii i la copiii cu anomalii congenitale.
I. APLICAII PRACTICE
! Cxaminai etapele de o"inere a cariotipului uman (plana).
! Cxaminai la microscop un preparat cromosomic.
! 4ecunoatei tipurile de cromosomi metafa)ici (fotografii).
! +e o metafa) cu marcaA &n "en)i recunoatei reperele cromosomice, fiecare cromosom, perechile de
omologi.
! 4eali)ai un cariotip i sta"ilii diagnosticul de sex.
! 5dentificai extracromosomii sau cromosomii lips M anomaliile de structur de pe cariotipuri cu marcaA.
J. HERI;ICAREA C$N#KTINEL#R
1. !)-ini7i urm1torii t)rm)ni
C,45O05+ 9CES5 @ COE<045CT55 <CCIED,4C
9CES5 4 <0,02O?5EC05C 9CES5 K
<,0C*5T5 @OEO<O2 ,I0O<O2
2. Bntr)91ri
! Care sunt etapele o"inerii unui cariotipU
! De ce este utili)at marcaAul &n "en)iU
! Ce se &nelege prin polimorfism de "andareU
! Ce 'ariaii numerice ale cromosomilor se pot &nt/lni la persoane cu fenotip normalU