A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie

18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane

Nanoparticule multifunctionale pe baza de siliciu pentru
tratamentul cancerului
IMT Bucuresti, Laboratorul de Nanobiotehnologii
Adina Bragaru, Irina Kleps, Teodora Ignat, Mihaela Miu, Monica Simion, Mihai Danila, Florea Craciunoiu
INSB Bucuresti
Mirela Diaconu
IOB Bucuresti
Sabin Cinca, Eugenia Tirifon
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
In terapia cancerului o problema importanta o constituie distrugerea celulelor canceroase fara sa fie afectate
tesuturile vecine sanatoase.
- Radioterapia constituie o metoda prin care tumoarea este iradiata, insa sunt afectate si tesuturile invecinate sanatoase.
- Chemoterapia presupune utilizarea medicamentelor puternice insa din pacate sunt afectate si alte tesuturi invecinate
datorita toxicitatii ridicate a acestora, iar in multe cazuri pacientul nu poate tolera dozele de medicamente anticancerigene
datorita toxicitatii ridicate.
Cadrul general al cercetarii
Dezvoltarea de noi tehnici prin care substanta activa sa fie eliberata selectiv, direct la organele
afectate, a devenit o etapa importanta pentru a ajunge la tratarea eficienta a cancerului.
S-a dezvoltat un sistem nanostructurat pe baza de siliciu pentru vectorizarea
si cedarea monitorizata a substantelor active biologic, de interes terapeutic.
Contributia
Nanostructured silicon particles for medical applications, Kleps Irina, Ignat Teodora, Miu Mihaela, Craciunoiu Florea, Trif
Mihaela, Monica Simion, Adina Bragaru, Journal of Nanoscience and Nanotechnology (JNN), Vol.9, 1-7, 2009;
Study of the Micro- and Nanostructured Silicon for Biosensing and Medical Applications, Irina Kleps, Mihaela Miu, Monica
Simion, Teodora Ignat, Adina Bragaru, Florea Craciunoiu, Mihai Danila, J. Biomed. Nanotechnol. 5, 300-309 (2009)
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Siliciu poros modificat cu nanoparticule cu proprietati superparamagnetice (SPION),
acoperit cu strat polimeric biocompatibil si impregnat cu agent terapeutic
Structura sistemului obtinut
Imersie in dextran, 20 h
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Experimente tehnologice de realizare a diferitor tipuri de
microparticulelor de siliciu nanostructurat
S-au incercat mai multe metode de obtinere a siliciului poros:
- Porozificarea selectiva Si n/p prin masca fotolitografica
- Porozificare in mai multi pasi a Si tip p
+
prin masca fotolitografica
- prin masca de Si
3
N
4
deoarece solutia de porozificare este
concentrata in HF, HF:C
2
H
5
OH (3:1) si masca de SiO
2
nu rezista.
Imagine optica a microparticulelor
de Si obtinute prin porozificarea
folosind ca masca Si
3
N
4
, urmat de
un proces ultrasonare
Imagini SEM ale microparticlulelor de Si nanostructurat
(a) n-epi/p+ Si si (b) n-difuzie in p
+
Si
0 50 100 150 200 250 300
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
Curent (A)
Potential (V)
Timp (sec)
C
u
r
e
n
t

(
A
)
0
5
10
15
20
25
30
35
40
P
o
t
e
n
t
i
a
l

(
V
)
Programul de porozificare
multistrat este: 0.570 A
(densitatea de curent
9mA/cm
2
); 10.0 sec si 3.000 A
(densitatea de curent 50
mA/cm
2
); 10.0 sec (30 cicluri)
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Obtinere de microparticule de siliciu poros cu proprietati
superparamagnetice
Pentru micsorarea dimensiunii nanocristalitelor de Fe si pentru obtinerea magnetitei Fe
3
O
4
(forma de Fe care ii confera proprietati
SPION), experimentele de preparare a Fe au fost realizate utilizand Fe
3+
/Fe
2+
(in raport stoichiometric 1:2), coprecipitarea facandu-se cu
NH
4
OH la valori de pH alcalin (11 si 12-13).
F e
2
+
/ F e
3
+
+ N H
4
O H F e
3
O
4
(a)
(b)
Nanoparticule de oxid de fier preparate din saruri Fe3+ si Fe2+ precipitate prin
adaugare de NH
4
OH: pH 11 (a), pH>11 (b).
Probele de PS impregnate cu nanoparticule de oxid de
fier au fost analizate prin SEM si EDAX.
Analizele SEM - particule de oxid de fier de 30 nm,
neuniform distribuite pe suprafata PS.
Nanoparticule de oxid de fier se gasesc si in interiorul
porilor in cazul probelor preparate in prezenta citratului de
sodiu.
Spectru de difractie
de raze X pentru PS
cu particule de oxid
de fier
(b)
Imagine SEM (a) si EDAX (b)
a nanoparticulelor de oxid de
Fe pe suprafata PS
(a)
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Functionalizarea microparticulelor de siliciu in vederea atasarii
substantelor farmacologic active
Functionalizarea microparticulelor de siliciu in vederea atasarii substantelor farmacologic active
Si Si
Si Si
Si
Si
B
A
B
A
Spectrul FTIR inregistrat pentru
nanoparticula de siliciu dupa tratamentul
cu APTES (A) si (B)-nanoparticula de siliciu
functionalizata cu grupari de tip Si-OH
Spectrele FTIR inregistrate pentru A-chitosan; B-nanoparticula
functionalizata cu chitosan
A
B
-1400 cm
-1
- atat in spectrul inregistrat pentru nanoparticula functionalizata cu
chitosan, cat si in spectrul chitosanului se datoreaza vibratiei de intindere din
gruparea C-O a alcoolului primar;
- In cazul spectrului inregistrat pentru nanoparticula functionalizata cu
chitosan se constata o deplasare a benzii de la 1659 cm
-1
, caracteristica
vibratiei de deformare din gruparea N-H si care sugereaza formarea legaturii
de tip C=N, datorita agentului de reticulare, glutaraldehida si gruparea -NH
2
din molecula chitosanului.
- 3430 cm
-1
vibratia gruparii -NH
2
.
-2928 cm
-1
vibratia gruparii CH-.
-1616 cm
-1
si 1509 cm
-1

deformarilor gruparii -NH

2
din
molecula de APTES
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Testarea in vivo a biocompatibilitatii si functionalitii
microparticulelor de siliciu functionalizate cu chitosan
Cerine de biocompatibilitate - mecanismele prin care nanoparticulele de siliciu genereaz sau nu, anumite efecte asupra organismului
gazd:
- dac induce toxicitate asupra esuturilor nconjurtoare;
- dac deterioreaz esutul gazd prin inducerea unui stres mecanic.
Experimentul - pe un numar de 3 loturi sobolani Wistar inoculai intramuscular la nivelul trenului posterior cu 0,2 ml
solutie/animal, urmarindu-se biocompatibilitatea si efectele asocierii dintre chitosan si particulele de siliciu
! nanoparticulele nu sunt hidrosolubile si compatibile cu organismul gazda si raman cantonate la locul de
inoculare
Reactia locala la 48 ore dupa inocularea
nanoparticulelor de siliciu:
-reactie de iritabilitate, prurit;
- leziuni hemoragice
La aproximativ o saptamana de la inoculare, efectul iritativ este
redus, cu eliminarea crustelor si cicatrizarea zonei de inoculare
! reactia organismului de a respinge un corp strain
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Experimente tehnologice de realizare a diferitor tipuri de
microparticulelor de siliciu nanostructurat
Multistraturi de PS obtinute prin corodarea anodica a Si - p
+
0 50 100 150 200 250 300
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
Curent (A)
Potential (V)
Timp (sec)
C
u
r
e
n
t

(
A
)
0
5
10
15
20
25
30
35
40
P
o
t
e
n
t
i
a
l

(
V
)
Diagrama curent-potential-timp pentru 30 cicluri
(0.570 A: 10.0 sec si 3.000 A: 10.0 sec)
Solutie electrolit - 30% HF
Densitate de curent: > 10 mA/cm
2
- 10 sec;
> 100 mA/cm
2
- 4 sec
150 cicluri
~ 50 nm dimensiunea porilor
Solutie electrolit - 30% HF
Densitate de curent: > 9 mA/cm
2
- 10 sec;
> 50 mA/cm
2
- 10 sec
30 cicluri
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Impregnarea microparticulelor de siliciu cu substante biologic active
in vederea studierii procesului de difuzie a microparticulelor
Realizarea si caracterizarea sistemului hibrid
microparticulelor de siliciu / dacarbazina
1000 1500 2000 2500 3000 3500
0,4
0,6
0,8
1,0
800
3319
2964
2869
1921
1662
1499
1269
1384
1327
1192
1030
1039
781
876
T
r
a
n
s
m
i
t
a
n
c
e

(
%
)
Wavenumber (cm
-1
)
--SiNP-dacarbazine
-- dacarbazine
Spectrele IR ale SiNP impregnate cu
medicament comparative cu cel al
medicamentului
- maximele corespunzatoare benzilor specifice legaturii Si-O-Si din particulele de
siliciuin intervalul 1030 - 1039 cm
-1
.
- vibratia simetrica a gruparii Si-O-Si la 800 si 876 cm
-1
, precum si prezenta
maximelor de la 1269 si 1384 cm-1 caracteristice dacarbazinei, fapt care indica
impregnarea microparticulelor de siliciu cu medicament.
Realizarea si caracterizarea sistemului hibrid polimer
(dextran)- microparticule de Si medicament
(dacarbazina)
1000 1500 2000 2500 3000 3500
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1087
3355
1647
T
r
a
n
s
m
i
t
a
n
c
e

(
%
)
Wavenumber (cm
-1
)
--SiNP-dacarbazina-dextran
--SiNP-dacarbazina-APTES-dextran
Spectre IR corespunzatoare microparticulelor de siliciu
impregnate cu medicament si inglobate in polimer, cu si fara
functionalizare cu APTES
eficacitatea functionalizarii cu APTES a
microarticulelor de siliciu impregnate cu
medicament.
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Studiul difuziei de medicament (dacarbazina) in SBF prin
metoda FTIR
a
a, b- spectrul IR in cazul
microparticulelor de Si
difuzate in SBF;
c- variatia transmitantei
in functie de timpul de
diuzie
1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0
T
r
a
n
s
m
i
t
a
n
c
e

(
%
)
Wavenumber (cm
-1
)
--SiNP-SBF 20h
--SiNP-SBF 25H
--SBF
0 5 10 15 20 25
0,00
0,01
0,02
0,03
T
r
a
n
s
m
i
t
a
n
t
a

(
%
)
Timpul pentru difuzie (ore)
Rata difuziei microparticulelor in SBF
Domeniul 1
Domeniul 2
950 1000 1050 1100 1150 1200
0,88
0,90
0,92
0,94
1066
1066
T
r
a
n
s
m
i
t
a
n
c
e

(
%
)
Wavenumber (cm
-1
)
--SiNP-SBF 20h
--SiNP-SBF 25H
--SBF
Domeniul 1 - difuzia de Si prin membrana polimerica,
Domeniul 2- degradarea microparticulei de Si fara membrana polimerica
protectoare.
Initial procesul de difuzie al medicamentului este lent datorita protejarii
microparticulei de Si cu polimer, dar dupa 20 ore rata de difuzie creste
datorita biodegradarii polimerului
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
a
Experimente de obtinere a sistemului hibrid de tip SPION
folosind microparticule de siliciu nanostructurat impregnate cu
nanoparticule de oxizi de fier cu proprietati superparamagnetice-
medicament- polimer
Prepararea nanoparticulelor magnetice de oxid de fier
Imagine SEM ale
nanoparticulelor
magnetice de oxid
de fier
Prepararea microparticulelor de siliciu nanostructurat cu
nanoparticule de oxizi de fier cu proprietati
superparamagnetice
20 40 60 80
14000
21000
28000
Fe
3
O
4
(400)
Fe
3
O
4
(311)
Fe
3
O
4
(220)
Fe
3
O
4
(511)
Fe
3
O
4
(440)
F
e
3
O
4
(
1
1
1
)
Si(311)
Si(220)


I

[
c
p
s
]
2 [
o
]
Magnetite
SiO2/Magnetite
Glass holder
SiO
2
, low
Crystobalite,
Si(111)
Analiza prin
difractometrie cu
raze X a sistemului
SPION
Modificarea microparticulelor de siliciu de tip
SPION cu APTS
600 900 1200 1500 1800 2100 2400 2700 3000 3300 3600
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
T
r
a
n
s
m
i
t
a
n
c
e

T

%
Wavenumber cm
-1
PSNP-Fe3O4
PSNP-Fe3O4-APTS
586
598
2961
1549
1341
793
Comparatie intre
spectrul IR al
particulelor de tip
SPION simple si
modificate cu APTS
Obtinerea sistemului hibrid de tip SPION
a
500 1000 1500 2000 2500 3000 3500
0,75
0,80
0,85
0,90
0,95
1,00
T
r
a
n
s
m
i
t
a
n
c
e

T
%
Wavenumber cm
-1
SPION-Dcz-Dextran
Dextran
1085
1002
1171
3440
793
1650
2925
1451
1365
Comparatie intre
spectrele IR ale
dextranului si cel al
sistemului SPION-Dcz-
dextran
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Testarea in vivo a biocompatibilitatii agentului terapeutic
Studiile in vivo au fost realizate pe sobolani Wistar. Experimentele au fost realizate att pe animele
sntoase, ct i pe animale cu tumori experimentale induse hepatom RS1.
In cazul nanoparticulelor acoperite cu Dacarbazin, s-au realizat dou suspensii iniiale, de concentraii 16 mg/ml, respectiv 8
mg/ml; din aceste suspensii s-au administrat cte 0,2 ml/animal
S-au administrat 6 doze, cte 2 doze / saptmn, durata de administrare fiind astfel de 3 sptmni. Animalele uu fost inoculate
intramuscular la nivelul trenului posterior, cu 0,2 ml suspensie nanoparticule/ animal, corespunztor diluiilor menionate.
Pentru urmrirea efectelor imediate, din fiecare lot de studiu a fost sacrificat cte un animal la 48 h de la prima administrare, apoi
sacrificarea animalelor s-a efectuat la intervale sptmnale, cu prelevarea de probe biologice.
Sunt prezente imaginile a dou
animale - unul din lotul ND2
(animale sntoase tratate cu
nanoparticule acoperite) i unul din
lotul TD animale cu tumori
experimentale. Pentru ambele
animale nu se observ afectri ale
organelor interne.
Aspect organe interne la animal din lotul TD1 Aspect organe interne la animal din lotul ND2
! Uoara iritaie local, datorat stresului mecanic de inoculare prezent numai la 2/36 animale la
concentraie maxim dispare la maxim 48 h. Examinarea organelor interne ale animalelor sacrificate nu a
relevat prezena de afeciuni, produsele administrate fiind bine acceptate.
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
! Se poate aprecia c sistemul ce contine microparticulele de siliciu
nanostructurat de tipul SPION, impreuna cu medicamentul si polimerul
biodegradabil pot aciona ca vectori de transport ai unor produi antitumorali,
rezultat ce sugereaz continuarea acestui studiu pentru testarea altor compui
medicamentoi legai de nanoparticule, precum i a altor forme de tumori
experimentale.
Concluzii
Va multumesc pentru atentie!
www.imt.ro/nanosic
Multumiri:
Dr. Adrian Dinescu, IMT Bucuresti
Chim. Veronica Schiopu, IMT Bucuresti