Sunteți pe pagina 1din 13
Nanoparticule multifunctionale pe baza de siliciu pentru tratamentul cancerului IMT Bucuresti, Laboratorul de

Nanoparticule multifunctionale pe baza de siliciu pentru

tratamentul cancerului

IMT Bucuresti, Laboratorul de Nanobiotehnologii

Adina Bragaru, Irina Kleps, Teodora Ignat, Mihaela Miu, Monica Simion, Mihai Danila, Florea Craciunoiu

INSB Bucuresti

Mirela Diaconu

IOB Bucuresti

Sabin Cinca, Eugenia Tirifon

Cadrul general al cercetarii
Cadrul general al cercetarii

In terapia cancerului o problema importanta o constituie distrugerea celulelor canceroase fara sa fie afectate

tesuturile vecine sanatoase.

- Radioterapia constituie o metoda prin care tumoarea este iradiata, insa sunt afectate si tesuturile invecinate sanatoase.

- Chemoterapia presupune utilizarea medicamentelor puternice insa din pacate sunt afectate si alte tesuturi invecinate

datorita toxicitatii ridicate a acestora, iar in multe cazuri pacientul nu poate tolera dozele de medicamente anticancerigene

datorita toxicitatii ridicate.

e medicamente anticancerigene datorita toxicitatii ridicate. Dezvoltarea de noi tehnici prin care substanta activ a sa

Dezvoltarea de noi tehnici prin care substanta activa sa fie eliberata selectiv, direct la organele afectate, a devenit o etapa importanta pentru a ajunge la tratarea eficienta a cancerului.

Contributia

Nanostructured silicon particles for medical applications, Kleps Irina, Ignat Teodora, Miu Mihaela, Craciunoiu Florea, Trif Mihaela, Monica Simion, Adina Bragaru, Journal of Nanoscience and Nanotechnology (JNN), Vol.9, 1-7, 2009;

Study of the Micro- and Nanostructured Silicon for Biosensing and Medical Applications, Irina Kleps, Mihaela Miu, Monica Simion, Teodora Ignat, Adina Bragaru, Florea Craciunoiu, Mihai Danila, J. Biomed. Nanotechnol. 5, 300-309 (2009)

S-a dezvoltat un sistem nanostructurat pe baza de siliciu pentru vectorizarea si cedarea monitorizata a substantelor active biologic, de interes terapeutic.

Structura sistemului obtinut
Structura sistemului obtinut

Siliciu poros modificat cu nanoparticule cu proprietati superparamagnetice (SPION), acoperit cu strat polimeric biocompatibil si impregnat cu agent terapeutic

Imersie in dextran, 20 h
Imersie in dextran, 20 h

Potential (V)

Curent (A)

Experimente tehnologice de realizare a diferitor tipuri de microparticulelor de siliciu nanostructurat
Experimente tehnologice de realizare a diferitor tipuri de
microparticulelor de siliciu nanostructurat

S-au incercat mai multe metode de obtinere a siliciului poros:

- Porozificarea selectiva Si n/p prin masca fotolitografica

m a s c a f o t o l i t o g r a
m a s c a f o t o l i t o g r a
m a s c a f o t o l i t o g r a

Imagini SEM ale microparticlulelor de Si nanostructurat (a) n-epi/p+ Si si (b) n-difuzie in p + Si

- Porozificare in mai multi pasi a Si tip p + prin masca fotolitografica

- prin masca de Si 3 N 4 deoarece solutia de porozificare este concentrata in HF, HF:C 2 H 5 OH (3:1) si masca de SiO 2 nu rezista.

Programul de porozificare multistrat este: 0.570 A (densitatea de curent 9mA/cm 2 ); 10.0 sec si 3.000 A (densitatea de curent 50 mA/cm 2 ); 10.0 sec (30 cicluri)

Imagine optica a microparticulelor de Si obtinute prin porozificarea folosind ca masca Si 3 N 4 , urmat de un proces ultrasonare

 

Curent (A)

 

Potential (V)

   

40

3.0

35

2.5

30

25

2.0

1.5

20

15

1.0

10

5

0.5

0

0.0

0

50

100

150

200

250

300

Timp (sec)

0.0 0 50 100 150 200 250 300 Timp (sec) A 10-a editie a Seminarului National
Obtinere de microparticule de siliciu poros cu proprietati superparamagnetice
Obtinere de microparticule de siliciu poros cu proprietati
superparamagnetice

Pentru micsorarea dimensiunii nanocristalitelor de Fe si pentru obtinerea magnetitei Fe 3 O 4 (forma de Fe care ii confera proprietati SPION), experimentele de preparare a Fe au fost realizate utilizand Fe 3+ /Fe 2+ (in raport stoichiometric 1:2), coprecipitarea facandu-se cu NH 4 OH la valori de pH alcalin (11 si 12-13).

Probele de PS impregnate cu nanoparticule de oxid de fier au fost analizate prin SEM si EDAX. • Analizele SEM - particule de oxid de fier de 30 nm, neuniform distribuite pe suprafata PS. • Nanoparticule de oxid de fier se gasesc si in interiorul porilor in cazul probelor preparate in prezenta citratului de sodiu.

F e 2 + / F e 3 +

+

N H 4 O H

de sodiu. F e 2 + / F e 3 + + N H 4 O

F e 3 O 4

(a)
(a)
(b)
(b)
(a)
(a)

Nanoparticule de oxid de fier preparate din saruri Fe3+ si Fe2+ precipitate prin adaugare de NH 4 OH: pH 11 (a), pH>11 (b).

(b) Spectru de difractie de raze X pentru PS cu particule de oxid de fier
(b)
Spectru de difractie
de raze X pentru PS
cu particule de oxid
de fier
Imagine SEM (a) si EDAX (b)
a nanoparticulelor de oxid de
Fe pe suprafata PS
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Functionalizarea microparticulelor de siliciu in vederea atasarii substantelor farmacologic active
Functionalizarea microparticulelor de siliciu in vederea atasarii
substantelor farmacologic active

Functionalizarea microparticulelor de siliciu in vederea atasarii substantelor farmacologic active

Spectrul FTIR inregistrat pentru nanoparticula de siliciu dupa tratamentul cu APTES (A) si (B)-nanoparticula de
Spectrul FTIR inregistrat pentru
nanoparticula de siliciu dupa tratamentul
cu APTES (A) si (B)-nanoparticula de siliciu
functionalizata cu grupari de tip Si-OH
A A
Si
Si
B B
Si
Si
- 3430 cm -1 –vibratia gruparii -NH 2 .
-2928 cm -1 –vibratia gruparii –CH-.
-1616 cm -1 si 1509 cm -1 –
deformarilor gruparii -NH 2 din
molecula de APTES
Si
Si
B
Spectrele FTIR inregistrate pentru A-chitosan; B-nanoparticula
functionalizata cu chitosan
A
-1400 cm -1 - atat in spectrul inregistrat pentru nanoparticula functionalizata cu
chitosan, cat si in spectrul chitosanului se datoreaza vibratiei de intindere din
gruparea –C-O a alcoolului primar;
- In cazul spectrului inregistrat pentru nanoparticula functionalizata cu
chitosan se constata o deplasare a benzii de la 1659 cm -1 , caracteristica
vibratiei de deformare din gruparea N-H si care sugereaza formarea legaturii
de tip C=N, datorita agentului de reticulare, glutaraldehida si gruparea -NH 2
din molecula chitosanului.
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Testarea in vivo a biocompatibilitatii si functionalităţii microparticulelor de siliciu functionalizate cu
Testarea
in
vivo
a
biocompatibilitatii
si
functionalităţii
microparticulelor de siliciu functionalizate cu chitosan

Cerinţe de biocompatibilitate - mecanismele prin care nanoparticulele de siliciu generează sau nu, anumite efecte asupra organismului gazdă:

- dacă induce toxicitate asupra ţesuturilor înconjurătoare;

- dacă deteriorează ţesutul gazdă prin inducerea unui stres mecanic.

Experimentul - pe un numar de 3 loturi sobolani Wistar inoculaţi intramuscular la nivelul trenului posterior cu 0,2 ml solutie/animal, urmarindu-se biocompatibilitatea si efectele asocierii dintre chitosan si particulele de siliciu

efectele asocierii dintre chitosan si particulele de siliciu Reactia locala la 48 ore dupa inocularea nanoparticulelor

Reactia locala la 48 ore dupa inocularea nanoparticulelor de siliciu:

-reactie de iritabilitate, prurit; - leziuni hemoragice

-reactie de iritabilitate, prurit ; - leziuni hemoragice La aproximativ o saptamana de la inoculare, efectul

La aproximativ o saptamana de la inoculare, efectul iritativ este redus, cu eliminarea crustelor si cicatrizarea zonei de inoculare

! reactia organismului de a respinge un corp strain

! nanoparticulele nu sunt hidrosolubile si compatibile cu organismul gazda si raman cantonate la locul de inoculare

Curent (A)

Experimente tehnologice de realizare a diferitor tipuri de microparticulelor de siliciu nanostructurat
Experimente tehnologice de realizare a diferitor tipuri de
microparticulelor de siliciu nanostructurat

Multistraturi de PS obtinute prin corodarea anodica a Si - p +

de PS obtinute prin corodarea anodica a Si - p + Solutie electrolit - 30% HF

Solutie electrolit - 30% HF

Densitate de curent: > 9 mA/cm 2 - 10 sec;

> 50 mA/cm 2 - 10 sec

3.0

2.5

2.0

1.5

1.0

0.5

0.0

Curent (A) Potential (V) Potential (V) 40 35 30 25 20 15 10 5 0
Curent (A)
Potential (V)
Potential (V)
40
35
30
25
20
15
10
5
0
0
50
100
150
200
250
300

Timp (sec)

Diagrama curent-potential-timp pentru 30 cicluri (0.570 A: 10.0 sec si 3.000 A: 10.0 sec)

pentru 30 cicluri (0.570 A: 10.0 sec si 3.000 A: 10.0 sec) Solutie electrolit - 30%

Solutie electrolit - 30% HF

Densitate de curent: > 10 mA/cm 2 - 10 sec;

30 cicluri
30 cicluri

> 100 mA/cm 2 - 4 sec

~ 50 nm dimensiunea porilor

c m 2 - 4 s e c ~ 50 nm dimensiunea porilor 150 cicluri A
c m 2 - 4 s e c ~ 50 nm dimensiunea porilor 150 cicluri A

150 cicluri

A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie 18 mai 2011, Biblioteca Academiei
A 10-a editie a Seminarului National de nanostiinta si nanotehnologie
18 mai 2011, Biblioteca Academiei Romane
Impregnarea microparticulelor de siliciu cu substante biologic active in vederea studierii procesului de difuzie a
Impregnarea microparticulelor de siliciu cu substante biologic active
in vederea studierii procesului de difuzie a microparticulelor

Realizarea

si

caracterizarea

sistemului

hibrid

microparticulelor de siliciu / dacarbazina

1269 800 1,0 1921 1384 2869 0,8 3319 2964 1499 781 1662 876 1192 0,6
1269
800
1,0
1921
1384
2869
0,8
3319
2964
1499
781
1662
876
1192
0,6
1327
1030
1039
--SiNP-dacarbazine
0,4
-- dacarbazine
1000
1500
2000
2500
3000
3500
Transmitance (%)

Wavenumber (cm -1 )

Spectrele IR

medicament comparative cu cel al

SiNP impregnate cu

ale

medicamentului

cu cel al SiNP impregnate cu ale medicamentului - maximele corespunzatoare benzilor specifice legaturii

- maximele corespunzatoare benzilor specifice legaturii Si-O-Si din particulele de siliciuin intervalul 1030 - 1039 cm -1 .

- vibratia simetrica a gruparii Si-O-Si la 800 si 876 cm -1 , precum si prezenta

maximelor de la 1269 si 1384 cm-1 caracteristice dacarbazinei, fapt care indica impregnarea microparticulelor de siliciu cu medicament.

Realizarea si caracterizarea sistemului hibrid polimer (dextran)- microparticule de Si – medicament (dacarbazina)

1,2 1,0 0,8 1087 1647 0,6 3355 0,4 --SiNP-dacarbazina-dextran --SiNP-dacarbazina-APTES-dextran 0,2 1000 1500
1,2
1,0
0,8
1087
1647
0,6
3355
0,4
--SiNP-dacarbazina-dextran
--SiNP-dacarbazina-APTES-dextran
0,2
1000
1500
2000
2500
3000
3500
Transmitance (%)

Wavenumber (cm -1 )

Spectre IR corespunzatoare microparticulelor de siliciu impregnate cu medicament si inglobate in polimer, cu si fara functionalizare cu APTES

eficacitatea functionalizarii cu APTES a microarticulelor de siliciu impregnate cu medicament.

Studiul difuziei de medicament (dacarbazina) in SBF prin metoda FTIR
Studiul difuziei de medicament (dacarbazina) in SBF prin
metoda FTIR

Transmitance (%)

0,94

0,92

1066

1066

0,90

 

--SiNP-SBF 20h

--SiNP-SBF 25H

--SBF

0,88

950

1000

1050

1100

Wavenumber (cm -1 )

1150

1200

a, b- spectrul IR in cazul microparticulelor de Si difuzate in SBF; c- variatia transmitantei

a

in functie de timpul de diuzie

0,03 Rata difuziei microparticulelor in SBF 0,02 Domeniul 2 0,01 Domeniul 1 0,00 0 5
0,03
Rata difuziei microparticulelor in SBF
0,02
Domeniul 2
0,01
Domeniul 1
0,00
0
5
10
15
20
25
Transmitanta (%)

Timpul pentru difuzie (ore)

1,0 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 --SiNP-SBF 20h 0,4 --SiNP-SBF 25H --SBF 0,3 1000 1500
1,0
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
--SiNP-SBF 20h
0,4
--SiNP-SBF 25H
--SBF
0,3
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
Wavenumber (cm -1 )
Transmitance (%)

Domeniul 1 - difuzia de Si prin membrana polimerica, Domeniul 2- degradarea microparticulei de Si fara membrana polimerica

protectoare. Initial procesul de difuzie al medicamentului este lent datorita protejarii microparticulei de Si cu polimer, dar dupa 20 ore rata de difuzie creste datorita biodegradarii polimerului

Transmitance T %

Experimente de obtinere a sistemului hibrid de tip SPION folosind microparticule de siliciu nanostructurat impregnate
Experimente de obtinere a sistemului hibrid de tip SPION
folosind microparticule de siliciu nanostructurat impregnate cu
nanoparticule de oxizi de fier cu proprietati superparamagnetice-
medicament- polimer

Prepararea nanoparticulelor magnetice de oxid de fier

Prepararea nanoparticulelor magnetice de oxid de fier Imagine SEM ale nanoparticulelor magnetice de oxid de fier

Imagine SEM ale nanoparticulelor magnetice de oxid de fier

Modificarea microparticulelor de siliciu de tip SPION cu APTS

Prepararea microparticulelor de siliciu nanostructurat cu nanoparticule de oxizi de fier cu proprietati superparamagnetice

Analiza prin difractometrie cu raze X a sistemului SPION

Fe 3 O 4 (311) Magnetite Si(111) SiO2/Magnetite Si(220) 28000 SiO 2 , low Crystobalite,
Fe 3 O 4 (311)
Magnetite
Si(111)
SiO2/Magnetite
Si(220)
28000
SiO 2 , low
Crystobalite,
21000
Glass holder
Si(311)
Fe 3 O 4 (400)
Fe 3 O 4 (440)
Fe 3 O 4 (220)
Fe 3 O 4 (511)
14000
20
40
60
80
I [cps]
Fe 3 O 4 (111)

2θ [ o ]

Obtinerea sistemului hibrid de tip SPION

1,0

0,8

0,6

0,4

0,2

1341 2961 793 1549 598 PSNP-Fe3O4 586 PSNP-Fe3O4-APTS 600 900 1200 1500 1800 2100 2400
1341
2961
793 1549
598
PSNP-Fe3O4
586
PSNP-Fe3O4-APTS
600
900
1200 1500 1800 2100 2400 2700 3000 3300 3600
Wavenumber cm -1

a a

Comparatie

intre

Comparatie

intre

spectrul

IR

al

spectrele

IR

ale

particulelor de SPION simple modificate cu APTS

tip

dextranului

si

cel

al

si

sistemului

SPION-Dcz-

dextran

1,00 793 0,95 1650 0,90 1451 1365 2925 0,85 1171 3440 SPION-Dcz-Dextran 0,80 1085 Dextran
1,00
793
0,95
1650
0,90
1451
1365
2925
0,85
1171
3440
SPION-Dcz-Dextran
0,80
1085
Dextran
1002
0,75
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
Transmitance T%
Testarea “in vivo” a biocompatibilitatii agentului terapeutic
Testarea “in vivo” a biocompatibilitatii agentului terapeutic

Studiile in vivo au fost realizate pe sobolani Wistar. Experimentele au fost realizate atât pe animele sănătoase, cât şi pe animale cu tumori experimentale induse – hepatom RS1.

In cazul nanoparticulelor acoperite cu Dacarbazină, s-au realizat două suspensii iniţiale, de concentraţii 16 mg/ml, respectiv 8 mg/ml; din aceste suspensii s-au administrat câte 0,2 ml/animal

S-au administrat 6 doze, câte 2 doze / saptămână, durata de administrare fiind astfel de 3 săptămâni. Animalele uu fost inoculate intramuscular la nivelul trenului posterior, cu 0,2 ml suspensie nanoparticule/ animal, corespunzător diluţiilor menţionate. Pentru urmărirea efectelor imediate, din fiecare lot de studiu a fost sacrificat câte un animal la 48 h de la prima administrare, apoi sacrificarea animalelor s-a efectuat la intervale sptămânale, cu prelevarea de probe biologice.

intervale spt ă mânale, cu prelevarea de probe biologice. Sunt prezente imaginile a dou ă animale

Sunt prezente imaginile a două animale - unul din lotul ND2 (animale sănătoase tratate cu nanoparticule acoperite) şi unul din lotul TD – animale cu tumori experimentale. Pentru ambele animale nu se observă afectări ale organelor interne.

Aspect organe interne la animal din lotul ND2

interne. Aspect organe interne la animal din lotul ND2 Aspect organe interne la animal din lotul

Aspect organe interne la animal din lotul TD1

! Uşoara iritaţie locală, datorată stresului mecanic de inoculare – prezentă numai la 2/36 animale la concentraţie maximă dispare la maxim 48 h. Examinarea organelor interne ale animalelor sacrificate nu a relevat prezenţa de afecţiuni, produsele administrate fiind bine acceptate.

Concluzii
Concluzii

! Se poate aprecia că sistemul ce contine microparticulele de siliciu nanostructurat de tipul SPION, impreuna cu medicamentul si polimerul biodegradabil pot acţiona ca vectori de transport ai unor produşi antitumorali, rezultat ce sugerează continuarea acestui studiu pentru testarea altor compuşi medicamentoşi legaţi de nanoparticule, precum şi a altor forme de tumori experimentale.

Multumiri:

Va multumesc pentru atentie! www.imt.ro/nanosic

• Dr. Adrian Dinescu, IMT Bucuresti • Chim. Veronica Schiopu, IMT Bucuresti