Sunteți pe pagina 1din 50

ULTRASTRUCTURA

BACTERIILOR. ELEMENTELE
PERMANENTE I
NEPERMANENTE DE
STRUCTURA
Amor ? O, ce amar fericire,
Ct dulce chin e n acest cuvnt!
Un zmbet e n zile de mhnire,
Un soare e la-ntunecos avnt.

M. Eminescu Amor? O, ce
amar fericire
ELEMENTELE DE STRUCTUR
ALE CELULEI BACTERIENE
Elementele constante (permanente, obligatorii)
- Peretele celular
- Citoplasma
- Membrana citoplasmatica
- Nucleoidul
- Ribosomii
- Mezosomii
Elementele inconstante (nepermanente, neobligatorii)
- Capsula
- Sporul
- Flagelii
- Pilii/fimbriile
- Plasmidele
- Incluziunile celulare
PERETELE CELULAR
Reprezint un nveli rigid ce nconjoar
protoplastul bacterian. Lipsete la
micoplasme.
Se disting 2 mari grupe de bacterii n
funcie de structura PC:
1. Bacterii gram-negative (G-)
2. Bacterii gram-pozitive (G+)
(1884, savantul danez Christian GRAM).
Elementul comun al ambelor grupe
peptidoglicanul (PG).
PEPTIDOGLICANUL
PG structur particular a celulei bacteriene.
Structura PG:
Heteropolimer macromolecular reticulat, constituit
dintr-un component glicanic i unul peptidic.
Partea glicanic (polizaharidic) este constituit din
catene lineare paralele n care alterneaz N-acetyl-
glucozamina cu acidul N-acetyl-muramic.
Partea peptidic este reprezentat de uniti
tetrapeptidice (izomeri L i D de AA), fixate de acidul
muramic, care pot fi legate intre ele direct (structur
bidimensional, G-) sau prin puni interpeptidice
(structur tridimensional, G+).
Acidul diaminopimelic, izomerii D ai AA,
acidul muramic se ntlnesc doar la celulele
procariote.
PG reprezint inta de atac a unor
substane:
1. Lizozimul, care taie legturile dintre N-AGA
i acidul N-AM (catena glicanic)
2. Antibiotice (beta-lactamine, glicopeptide,
fosfomicina) perturb sinteza punilor
interpeptidice.
Peretele bacteriilor gram-pozitive
- Uniform, cu pori mici
- Grosimea 20-80 nm
- Componentul major (40-80%) reprezint PG
(structur reticulat tridimensional)
- Componente minore:
1. Acizii teichoici (polimeri de glicerol sau ribitol
fosfat), fixai de N-AGA. Traverseaz PG i creaz
sarcin electric negativ la suprafaa bacteriei,
asigur transferul de ioni i fixarea unor proteine,
funcie antigenic.

2. Acizii lipoteichoici: se fixeaz de MCP i
depesc stratul de PG.
Funcii: identic cu AT, intervin n adeziunea
la celule i au un efect toxic slab.
2. La unele bacterii G+(ex.: Mycobacterium)
peretele conine lipide, la altele (ex.:
streptococi) peretele conine glucide.
Peretele bacteriilor gram-negative
- Grosimea 10-12 nm
- Neomogen, format din straturi distincte:
1. PG, stratul intern, constituie 1-10% din
greutatea celulei. Acizii teichoici lipsesc.
Nu exista puni interpeptidice (structur
bidimensional)
2. Membrana extern (ME) dublu strat
lipidic cu proteine ncastrate (proteine
majore 70%, minore 30%).

Triplete de proteine majore (porine) particip
la formarea porilor, altele (nonporine) au
funcie de receptor pentru bacteriofagi i
pili.
Proteinele minore sunt enzime implicate in
captarea unor substane i transportul
specific transmembranar.
ME este permeabil pentru ioni i mici
molecule hidrofile i impermeabil pentru
molecule hidrofobe sau amfipatice
3. Lipoproteinele asigur legtura dintre ME i PG
4. Lipopolizaharidul (LPZ) stratul extern al peretelui
gram-negativ. Este format din:
- Lipidul A, glicolipid ancorat n ME. Determin efectul
toxic al bacteriilor G-, manifestat n urma lizei
celulare (endotoxin).
- Polizaharide complexe, fixate pe lipidul A. Particip
n procese de penetrare i transport al unor
substane, confer specificitate de gen (Ag R)
- Subuniti oligozaharidice lineare sau ramificate.
Creaz sarcin negativ la suprafaa bacteriei
(mpiedic fagocitoza, accesul moleculelor toxice),
specificitate de specie, tip (antigenul O)
Spaiul periplasmic este regiunea dintre ME i
MCP. Conine PG i proteine-enzime
implicate n transport, digestia nutrienilor,
protecia contra substanelor toxice (ex.:
beta-lactamazele, care distrug antibioticele
beta-lactamice).
La bacteriile G+ aceste enzime sunt secretate
n mediul extern.
Evidenierea peretelui celular: microscopia
electronic, metode speciale de colorare,
plasmoliz

Determinarea tipului peretelui celular
Coloraia Gram (condiionat de structura i
compoziia chimic a peterelui celular)
1. Colorarea frotiului fixat cu violet de genian
(citoplasma se coloreaz n violet)
2. Splarea cu ap apoi tratarea cu soluie Lugol (I
2

+KI) fixeaz colorantul n celulele G+
3. Decolorarea cu alcool 95%. Bacteriile G+ pstreaz
colorantul, cele G- se decoloreaz.
4. Recolorarea bacteriilor G- cu fucsin apoas
Rezultat: bacteriile G+ apar colorate n violet, cele G- n
rou.

Mecanismul: Peretele G- este subire, conine
multe lipide (20%), care sunt solubilizate de
alcool, porii au diametrul mare, pH
citoplasmei este slab acid (se decoloreaz
cu alcool);
Peretele G+ este gros, nu conine lipide sau
foarte puine, alcoolul deshidrateaz
peretele i reduce diametrul porilor, pH acid
(colorantul nu este splat din citoplasm)
Utilizarea practic:
1. Diagnostic
2. Sensibilitate la antibiotice
Acidorezistena bacteriilor
Unele bacterii G+ (Mycobacterium, Nocardia)
conin n componena peretelui lipide i
ceruri (70% din greutatea peretelui).
Aceasta le confer rezisten marcat n
mediul extern i sensibilitate distinct la
antibiotice.
Coloraia Ziehl-Neelsen permite diferenierea
acestor bacterii dup proprietatea lor de
acido-alcoolo-rezisten
Metoda de colorare Ziehl-Neelsen
Principiul: bacteriile acido-rezistente colorate cu
fucsin fenicat nclzit nu pot fi decolorate de
acizi sau alcool.
1. Frotiul se coloreaz cu fucsin fenicat,
nclzind lama pn la apariia vaporilor
2. Se cltete cu ap, apoi se trateaz cu soluie de
acid sulfuric de 5%.
3. Dup splare frotiul se recoloreaz cu albastru
de metilen
Rezultatul: bacteriile acido-rezistente rmn colorate
n rou, cele acido-nerezistente se decoloreaz,
apoi se recoloreaz n albastru
Funciile peretelui celular
1. Confer forma bacteriilor
2. Barier osmotic i mecanic
3. Barier de permeabilitate selectiv
4. Funcie antigenic
5. Particip la procesele de cretere i diviziune
celular
6. Funcie de receptor
7. Determin toxicitatea bacteriilor
8. Reprezint inta de atac al unor enzime i
antibiotice
Sub influenta unor substane (lizozim, antibiotice)
PG poate fi deteriorat, iar bacteria explodeaz
din cauza presiunii osmotice ridicate (5-20 atm).
n mediu echilibrat osmotic (hipertonic) pot fi
obinute forme particulare:
Protoplastul - reprezint o structur sferic
totalmente lipsit de perete celular. El este
obinut din bacterii G+
Sferoplastul este o bacterie G- lipsit de
peptidoglican i nconjurat de ME i MCP
Protoplatii i sferoplatii meninui n mediu
osmotic protector i nutritiv cresc i se divid, fiind
numite forme L (reversibile, ireversibile)
Membrana citoplasmatic - MCP
Prezint o structur membranar clasic: dublu strat
fosfolipidic n care sunt ncastrate proteine i GP.
Lipsesc sterolii. MCP formeaz invaginaii,
mezosomi (septali, laterali), n care se conin
enzime, citocromi i proteine ale sistemului
transportor de electroni.
Proteinele MCP:
1. PFP, implicate n sinteza PG (sunt inactivate de
penicilin i AB beta-lactamice)
2. Componente ale sistemului de transport (permeaze)
3. Proteine - receptori

Funciile membranei citoplasmice
1. Barier osmotic i de permeabilitate
selectiv
2. Asigur transportul activ prin intermediul
permeazelor
3. Excret enzime hidrolitice
4. Sediul metabolismului energetic
5. Intervine n diviziunea celular (mezosomi)
6. Implicat n sinteza PG i a fosfolipidelor
7. Implicat n chemotaxie prin receptori
specifici
Evidenierea MCP
1. Microscopia electronic
2. Fenomene de plasmoliz (n mediu
hipertonic retracia citoplasmei)
sau plasmoptiz (n mediu hipotonic
liza celulei, desprinderea MCP de
peretele celular)
Citoplasma
- Necompartimentat
- Lipsesc organitele celulare
- Format din ap (80%), conine nucleoidul,
ribosomi, incluziuni, plasmide, ioni, enzime,
deeuri, etc.
- Consistena dens (stare de gel) asigur
permanena mediului intern
- pH acid
Funcii: sediul tuturor proceselor metabolice
Evidenierea: prin orice metod de colorare
Nucleoidul bacterian
- Constituit din ADN bicatenar circular sau linear
plasat liber n citoplasm. ADN este repliat n bucle
i stabilizat prin ARN i proteine. Fiecare bucl este
hiperspiralizat sub aciunea ADN-girazei. Pe ADN
sunt fixate enzime de sintez (ADN-, ARN
polimeraze)
Funcii: dirijeaz activitatea celulei (sintez, creterea,
multiplicarea, diferenierea celulei, replicarea
proprie, etc)
Evidenierea:
- Microscopia electronic
- Metode speciale de colorare (Feulgen, R-G)
Feulgen: HCl.aldehida.react. Shiff.culoare rosie
Plasmidele
- elemente genetice (ADN) extracromozomiale, capabile
de replicare autonom. Confer bacterii caractere
suplimentare. Se transmit celulelor-fiice la
diviziunea bacteriei. Plasmidele conjugative se
transmit prin conjugare. Episom-plasmida integrata
in cromosom
- Tipuri de plasmide:
1. F factor de fertilitate
2. R rezisten la antibiotice
3. Ent producerea enterotoxinei
4. Hly producerea hemolizinei
5. Col producerea de bacteriocine
Utilizarea practic: n tehnologii de ADN-recombinant
Sporii bacterieni - reprezint o difereniere
celular care asigur supravieuirea n
condiii nefavorabile de mediu.
Bacterii sporogene Bacillus, Clostridium.
Aceste mi/o se prezint sau sub form
vegetativ, metabolic activ, sau sub form
inert metabolic sporul.
Procesul de formare a sporului
sporogeneza, sporularea. Este declanat n
special de carene nutritive.
Stadiile sporogenezei (durata 36-72 ore)
Stadiul I se formeaz filamentul axial, compus din
ADN
Stadiul II divizarea asimetric a citoplasmei printr-
un sept, formarea presporului, care conie un
filament de ADN. MCP nglobeaz presporul.
Stadiul III nglobarea complet a presporului, care
este limitat de 2 membrane
Stadiul IV formarea cortexului de PG ntre cele 2
membrane
Stadiile V-VI formarea tunicii proteice la exterior i
maturarea sporului.
Stadiul VII sporul este eliberat iar celula-mam se
dezintegreaz
Proprietile sporului
- Inactiv metabolic
- Coninut sczut de ap liber
- Coninut mare (pn la 10%) n dipicolinat de calciu
- Rezistent la temperaturi i pH extreme, desicare,
radiaii, ageni chimici i fizici
n condiii favorabile sporul germineaz, dezvoltndu-se
forma vegetativ.
Forma sporului (sferic, oval) i poziia n celul
(central, subterminal, terminal) sunt caractere
utile n identificarea bacteriilor.
Evidenierea: colorarea dup AUJESZKY
Glicocalixul - nveliul extern al bacteriilor.
Reprezint polimeri organici sintetizai n mediul
natural de via al bacteriilor (ex.:
macroorganism).
Se disting:
- Capsula adevrat (peste 0,2m), vizibil la
microscopul optic
- Microcapsula, detectat la microscopul electronic
- Capsula flexibil (slime), o reea lax de fibre
polisaharidice, care difuzeaz n mediu. Nu se
evideniaz microscopic

Compoziia chimic: ap i substane organice
(polisaharide, mucopolizaharide, peptide)
Funciile:
- Impiedic desicarea
- Barier de permeabilitate pentru substane toxice
(AB, ioni metalici)
- Barier protectoare faa de factori antiinfecioi
(complement, fagocite), bacteriofagi, protozoare
- Rezerv nutritiv
- Asigur aderarea bacteriei la substrate
- Specificitate antigenic de specie sau tip (Ag K)


Evidenierea capsulei
Coloraia Burri-Hinss
- Pe lam se amestec suspensia bacterian
cu tu de China, se etaleaz, se usuc
- Frotiul se fixeaz cu alcool
- Se coloreaz frotiul cu fucsin
Rezultatul: capsula apare ca un halou incolor
pe fondul negru. Citoplasma se coloreaz n
rou.

Granulaiile de volutin
Reprezint polimeri de metafosfat. Servesc ca
rezerv de fosfai i pot interveni n metabolismul
energetic.
Interesul medical: la agenii difteriei,
Corynebacterium diphtheriae, granulele de
volutin se localizeaz la capetele celulei, iar la
mi/o nepatogene sunt repartizate de-a lungul
citoplasmei.
La tratarea cu unii colorani, granulele de volutin se
coloreaz n alt culoare, de ex.: n rou-violet cu
albastru de metilen fenomenul metacromaziei,
granule metacromatice.
Evidenierea: metoda Loeffler, metoda Neisser
Flagelii structuri filamentoase proteice,
ntlnite la bacterii, bacili, spirili i spirochete.
Funcii: intervin n mobilitatea bacterian,
reprezint Ag H al bacteriilor.
Structura flagelului:
- Filamentul axial, constituit din flagelin
- Crligul de articulaie
- Corpul bazal, constituit dintr-un ax rigid i mai
multe inele ce servesc la fixarea flagelului (la
MCP i PC).
Mobilitatea bacteriei este asigurat de rotaia
flagelului (30 70 micrometri/s).
Tipurile de bacterii dup dispoziia flagelilor
Bacterii monotriche
Bacterii amfitriche (cte un flagel sau un
mnunchi la fiecare extremitate)
Bacterii lofotriche (un mnunchi de flageli
la o extremitate)
Bacterii peritriche (flageli pe toat
suprafaa celulei)
La spirochete flagelii se plaseaz n spaiul
periplasmic flageli interni, periplasmatici.
Evidenierea flagelilor
I - metode directe
- Microscopia electronic
- Coloraia special Loeffler (mordansarea cu
tanin, sruri de aluminiu, fer, apoi colorarea
cu fucsin sau albastru de metilen)
II metode indirecte (studierea mobilitii)
- Preparate native pictur suspendat sau
ntre lam i lamel (microscopia cu
contrast de faz sau pe fond negru)
- nsemnarea mediilor semisolide (turbiditate)
- Creterea n vl pe suprafaa mediului solid
Pilii comuni (fimbriile) elemente proteice
fine, rigide, scurte repartizate pe suprafaa
celulei bacteriene G - n special. Sunt
formate din subuniti proteice identice
(pilina), implantate n ME.
Numrul fimbriilor per celul 1 sute
Funcii: asigur adeziunea bacteriilor la
suprafee inerte, la celule sau alte bacterii,
antigenul F
Pilii conjugativi structuri capiliforme de
natur proteic, prezeni n numr de 1-10
per celul (numai la bacteriile ce gzduiesc
plasmide conjugative F).
Funcii: transferul de ADN prin conjugare,
receptori pentru unii bacteriofagi
Evidenierea pililor: microscopie electronic