MEDII DE CULTUR De transport: glicerin 30%, soluie salin 3%, soluie tampon-fosfatic De mbogire a bacteriilor patogene: Kauffmann, Muller, bulion selenit, etc Diferenial-diagnostice: I. De izolare (medii lactozate speciile patogene- lactoza -, speciile oportuniste lactoza +/-) ENDO, LEVIN, PLOSKIREV Componena: baz nutritiv, lactoz, indicator Coloniile L+ : colorate Coloniile L- : incolore Mediul Wilson-Blair cu sulfit de Bi (Salmonella reduce sulfitul n sulfur de Bi colonii negre pe mediul verde) II. De acumulare i difereniere primar (medii multitest) - Russel, Kligler (glucoz, lactoz, sruri de Fe) - Olkeniki (glucoz, lactoz, zaharoz, uree, sruri de Fe) III. De identificare primar i secundar
CARACTERE ANTIGENICE Ag O (R), de perete, LPZ, termostabil i rezistent la alcool, sensibil la formol, specificitate de gen, specie, grup Ag H, flagelar, proteic, termolabil i inactivat de alcool, rezistent la formol, specificitate de tip (variant) Ag K, superficial, capsular, termovariabil, specificitate de specie, tip (mascheaz Ag O) Ag F, fimbrial, termolabil, nespecific ECA antigen comun fam. Enterobacteriaceae (interes taxonomic) Ag Kunin
GENUL SHIGELLA. DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL DIZENTERIEI Shigelele strict umane (bolnavi, reconvalesceni, purttori). Cauzeaz infecii intestinale - igeloze, cea mai grav dizenteria bacterian. Clasificarea genului Shigella: A Shigella dysenteriae (12 s/v, 12 b/v) Manitol - B Shigella flexneri (6 s/v, 14 ss/v, 23 b/v) C Shigella boydii (18 s/v) D Shigella sonnei (1 s/v, 7 b/v) CARACTERE MORFOBIOLOGICE Enterobacteriaceea tipice, imobile, lactozo-negative, scindeaz glucoza pana la acizi (testul MR+), celelalte teste primare sunt negative Factori de patogenitate: - Factori de adeziune la mucoasa colonului (fimbrii, LPZ) - Microcapsula (antifagocitar) - Factori de penetrare i multiplicare intracelular - Toxine: 1. Shigatoxina - neurotoxic, enterotoxic, citotoxic elaborat de S.dysenteriae 1 2. Enterotoxine (Shiga-like, verotoxina) 3. Endotoxina
Structura antigenic: Ag O i K cu specificitate de gen, specie, subspecie, variant
Rezistena n mediul extern: S.dysenteriae - foarte sensibil (1-2 ore) S.flexneri persist 1-3 sptmni n ap, 2 luni n lactate S.sonnei persist i se multiplic n lactate PATOGENEZA DIZENTERIEI BACTERIENE Sursa de infecie: bolnav, purttor Transmiterea fecal-oral: - Contact direct (mini murdare) - Alimentar (alimente, ap) - Doza infectant: 10-100 bacterii Bacteriile se multiplic n intestin, colonizeaz epiteliul colonului, penetreaz intracelular (prin fagocitoz dirijat). Bacteriile se propag intra- i entercelular graie actinei depuse pe suprafaa celular (caracter determinat plasmidic). Urmeaz multiplicarea local intracelular cu inflamaie fibrinoas intens a colonului, micro-abcese i ulcere. Perioada de incubaie 2 - 4 zile Semne clinice febr, dureri abdominale, tenesme (spasme rectale), scaune lichide muco-sanguinolente frecvente. Vindecarea n 2-5 zile (clinic, apoi microbiologic) Forme cronice sau portaj sunt posibile DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL DIZENTERIEI Prelevate: probe de scaun (elementele mucopurulente), apa, alimente, lavaje de pe suprafee Metode de diagnostic 1. Examenul microscopic RIF 2. Examenul bacteriologic - Izolarea culturii pure pe medii DD (Endo, Levin, Ploskirev) sau mbogirea igelelor 2. Coloniile L- sunt repicate pe mediile Olkeniki, Kligler pentru acumularea culturii pure i identificare preliminar (lactoza/zaharoza -, glucoza A, ureea -, H 2 S -) 3. Identificarea culturii pure - Caractere morfotinctoriale - Caractere de cultur - Caractere biochimice (teste primare, secundare) - Caractere antigenice (seroidentificarea prin RA pe lam cu seruri imune anti-Shigella poli- i monovalente) - Fagoidentificarea - Virulena - Antibiograma 4. Analiza rezultatelor i formularea rspunsului
3. Diagnosticul serologic (din a 5-7 zi de boal) - RA, RHAI (aduli 1:400 (S.flexneri) 1:200 (S.sonnei) copii 1:100 coproanticorpi (Ig A 1:80) - ELISA - RIFI Imunitate: specific de tip, 1-2 ani, umoral (IgA) Profilaxie: vaccinuri ribosomale, inactivate, atenuate (imunitate de scurt durat) Tratament: antibiotice, eubiotice, bacteriofagi, vaccin inactivat (dizenteria cronic)
Genul Escherichia. Diagnosticul de laborator al escherichiozelor. Genul Escherichia Spp.: E.coli, E.blattae, E.fergusonii, E.vulneris, E.hermanii Habitat: intestinul omului i animalelor (80% din flora aerob intestinal), 10 7 -10 9
bacterii/gram fecale. Contamineaz solul i apele de suprafa. Prezena E.coli - indicator de poluare fecal CARACTERE MORFOBIOLOGICE E.coli enterobacterie tipic, mobil, lactoza+, fermenteaz glucidele AG (teste primare MR+, mobilitate+) Structura antigenic - Ag O 180 tipuri (O1, O2, O3......O180) - Ag H 60 tipuri (H1, H2, etc) - Ag K 100 tipuri (K1 prezent la sue virulente). Din combinaii rezult serovariante: ex.: O55:H2:K1 Factori de patogenitate - Capsula (antifagocitar, K1 camuflaj imunologic datorit epitopilor comuni cu poliosialozilglicopeptide cerebrale la nou-nscui) - proteine din ME i LPZ (anti-complement, protecie de factorii bactericizi ai sngelui) - Adezine (fimbrii) - Toxine (endotoxina, enterotoxine TS i TL, citotoxine (SLT-1, SLT-2) - Hemolizina - Siderofori (sisteme de captare a Fe) - Bacteriocine (colicine) FENOTIPURI DIAREIGENE - Tulpini enteropatogene: EPEC (O26, O55, O111, O125, O142, etc). Responsabile de gastro-enterite infantile (infecii salmoneliforme). Ader la mucoasa int. subire fr a penetra intracelular. - Tulpini enteroinvazive: EIEC (O28, O124, O143, etc). Responsabile de sindrom dezinteric cu invazia mucoasei colonului, penetrare intracelular, ulceraii. - Tulpini enterotoxigene: ETEC (O6, O8, O20, O25, O115, etc). Responsabile de diareea cltorului, sindrom holeriform - Tulpini enterohemoragice: EHEC (O157:H7; O26, O111). Responsabile de colite hemoragice cu sindrom uremic-hemolitic (anemie hemolitic+trombocitopenie+insuficien renal) - Tulpini enteroagregative: EAggEC (O111:H12). Posed adezine i SLT. Provoac diaree persistent (peste 14 zile) la copii. - Tulpini enteroadezive: EAEC. Ader difuz la celulele intestinale. Provoac diaree. FENOTIPURI UROPATOGENE (O1, O2,O4,O6). Posed afinitate pentru mucoasa uro-genital (adezine) FENOTIPURI BACTERIEMICE Alte forme clinice provocate de E.coli: - oc endotoxinic - Meningite la nou-nscui (preponderent tulpini cu Ag K1) - Infecii ale plgilor (frecvent de origine nozocomial) - Toxiinfecii alimentare DIAGNOSTIC DE LABORATOR Prelevate n funcie de forma clinic: mase fecale, urin, snge, LCR, puroi, etc Metode de diagnostic 1. Examenul microscopic de orientare (frotiu Gram n infecii extraintestinale, RIF) 2. Examenul bacteriologic (de baz, cantitativ) 3. Examenul serologic (retrospectiv). - RA cu autotulpini (titru diag. 1:200) Tratamentul escherichiozelor - Antibiotice (conform antibiogramei) - Eubiotice Profilaxia escherichiozelor - nespecific