ENZIMELE

1. Noiune despre enzime i rolul lor biologic. Asemnrile i deosebirile dintre

aciunea enzimelor i a catalizatorilor nebiologici.
2. Natura chimic a enzimelor. Dovezile naturii proteice a enzimelor. Structura
enzimelor. Centrul activ i centrul alosteric al enzimelor.
3. Enzimele simple i conjugate. Noiune de holoenzim, apoenzim, cofactor,
coenzim i grup prostetic. Funciile de coenzime ale vitaminelor i
microelementelor. Structura vitaminelor B
1
, B
2
, B
6
, PP, acidului pantotenic,
biotinei, acidului folic i rolul lor ca coenzime.
4. Mecanismul de aciune al enzimelor. Centrul activ al enzimelor i rolul lui n
formarea i transformarea complexelor intermediare dintre enzim i substrat.
Rolul modificrilor conformaionale reciproce ale moleculei enzimei i
substratului n procesul de cataliz.
5. Nomenclatura (denumirea) i clasificarea enzimelor. Caracteristica general a
claselor i subclaselor principale de enzime. Numrul de cod al enzimei.
6. Specificitatea enzimelor (tipurile, exemple).


ENZIM de la grecescul
EN ZYME- n drojdii
Enzime biocatalizatori de natur
proteic
Mresc V reaciilor chimice,
termodinamic posibile
E- acioneaz strict ntr-o anumit consecutivitate
i cu o anumit specificitate

Enzimologie-
tiina,
ce se ocup
cu studierea E
Enzimodiagnostica
- este determinarea
activittii E,
care se pot modifica n
diverse patologii cu
scop diagnostic.
Enzimoterapia
- este utilizarea E,
extrase i purificate sau
sintetizate n laborator,
n tratamentul
diferitor patologii.
E- sunt proteine i posed toate proprietile
fizico-chimice specifice acestor molecule
(solubilitate, proprieti osmotice, sarcin
electric net, denaturare termic)
Dovezile experimentale:
1. Sunt alctuite din AA
2. Prezint macromolecule
3. n ap formeaz sol. coloidale cu propriet. sale
specifice
4. Prezint electrolii amfolii
5. Se supun denaturrii
6. Au fost sintetizate n condiii de laborator din AA
(ribonucleaza, lizozima)


1. catalizeaz numai reaciile posibile
din punct de vedere energetic
2. nu modific echilibrul reaciilor
reversibile
3. nu modific direcia reaciei
4. nu se consum n procesul reaciilor.
1. Viteza catalizei enzimatice este cu
mult mai mare dect a celei
nebiologice (1 mg de Fe n
componena catalazei poate nlocui
o ton de Fe metalic).
2. E posed specificitate nalt.
3. E catalizeaz reaciile chimice n
condiii blnde (presiunea obinuit,
temperatura 37C, pH aproape
neutru).
4. E catalizeaz reaciile fr formarea
produselor intermediare
randamentul este de 100%
5. Activitatea E, de aici i reaciile
enzimatice se regleaz.
6. Viteza reaciilor este direct
proporional cu cantitatea E.
Masa molecular a E e de mii de ori mai mare
dect masa molecular a substratului (S)
S sau ligandul, substana asupra creia
acioneaz E
E acioneaz nu cu toat molecula dar cu un
anumit sector denumit centrul activ (CA)
CA - locul care asigur interaciunea E cu S i
transformarea ulterioar a acestuia n P

1. este o structur tridimensional unical,
format din radicali ai aminoacizilor
distanai n catena primar proteic;
2. Posed grupri funcionale active (-OH,
-SH, -NH
2
, -COOH, etc.)

3. Are form de adncitur sau cavitate, cptuit
cu AA hidrofobi,unde nu-i acces de ap (ex.
cnd apa este un reagent al reaciei). CA
conine AA polari.
4. Ocup o parte relativ mic din volumul E i
majoritatea resturilor de AA n molecula E nu
contacteaz cu S
5. S relativ slab se leag cu E
6. CA este alctuit din 2 sectoare:
Sectorul de contact (de legare)
Sectorul catalitic

Centrul alosteric
1. Este centrul reglator
2. Fixeaz modulatorul alosteric
3. Adiionarea modulatorului modific
conformaia enzimei i secundar
activitatea ei
4. Modulatorul pozitiv activator
5. Modulatorul negativ - inhibitor

Moleculele enzimelor alosterice sunt mai
mari, mai complexe i sunt oligomere
pare
Au cinetica lor viteza reaciilor n
dependen de c% S are form
sigmoidal, dar nu hiperbolic, cauzat
de urmrile interaciunii ntre protomerii ce
leag S n mod cooperativ
Din punct de vedere structural deosebim:
1. E simple alctuite numai din AA
(proteazele, lipazele, ribonucleaza)
2. E conjugate - formate din:
a. partea proteic apoenzim
b. partea neproteic
HOLOENZIM partea neproteic
+apoenzima cu activitate catalitic

A: Cnd componenta neproteic
este un ion metalic este
denumit cofactor
n calitate de cofactori apar
frecvent cationii unor metale
(Fe2+, Mg, Mn sau Zn
2
i, foarte
rar, unii anioni

B: Cnd componenta neproteic
este o molecul organic de mici
dimensiuni este denumit
coenzim

Coenzima strns legat n structura E
grupare prostetic (FMN; FAD,
biotina, acidul lipoic)
Coenzima slab legat, uor disociabil
cosubstrat (NAD; NADP, coenzima
A)

- Sunt componente eseniale ale centrului catalitic
(activ);
- Particip la legarea S i formarea complexului
ES;
- Necesare n meninerea structurii 3D a enzimei;
Particip nemijlocit la cataliz
(n reactii de transfer de
electroni)
Particip la reglarea activitii E
Dup modul de legare i rolul ionului metalic E
sunt:
Metaloenzime care conin n calitate de
cofactori ioni de metale, strns legai de apoE
Exemple:
1. Citocromi, peroxidaza, catalaza (Fe)
2. Citocromoxidaza (Cu)
3. alcoolDH; carboxipeptidaza (Zn)
E metaloactive a cror activitate crete n
prezena ionului metalic, care leag metalul
slab. Metalele sunt fixate de apoenzim prin
legturi electrostatice la care particip resturile
de AA acizi (Asp, Glu) sau bazici (Arg, Lyz, His)

- Fe-enzime: hem (citocromi, catalaze,
peroxidaze);
- Cu-enzime: citocromoxidaza, superoxid-
dismutaza, tiroxin-hidroxilaza;
- Mn-enzime: peptidaza, arginaza, izocitrat-
dehidrogenaza;
- Co-enzime: cobalamin-enzime;
- Se-enzime: glutationperoxidaza
1. Sunt parte component a centrului activ
2. Contribuie la stabilizarea conformaiei
enzimei
3. Contribuie la fixarea substratului
4. Particip nemijlocit la actul catalitic
CoE vitaminice
1. Tiaminice
2. Flavinice
3. Nicotinamidice
4. Piridoxinice
5. Folice
6. Cobamidice
7. Biotinice
8. lipoice
CoE nevitaminice
1. hemurile de divers natur
2. Nucleotidele
3. Fosfaii monozaharidelor
Derivaii vitaminei
B1
TMP, TDP (TPP)-
cocarboxilaza, TTP
Rolul:
1. Decarboxilarea
oxidativ a
piruvatului
2. Decarboxilarea
oxidativ a
cetoglutaratului
3. Reacii de
transcetolare
Vitamin B
1
: Tiamin
Coenzima - Tiamin pirofosfat TPP
Derivai ai vitaminei B2
FMN i FAD
Rolul:
1. Particip n reaciile de oxido-reducere:
2. Dezaminarea AA
3. Degradarea aldehidelor (aldehidDH)
4. Degradarea purinelor (xantinoxidaza)
5. Ciclul Krebs (succinatDH)
6. Oxidarea AG
7. DOP (dihidrolipoilDH)

Vitamina B
2
:
riboflavina
Coenzim -
Flavin adenin dinucleotidul (FAD)
Coenzima -
Flavin mononucleotidul (FMN)
Sunt derivai ai vitaminei
PP niacina, niacinamida,
B5
se include n structura a 2
Co- NAD i NADP
Rolul
Particip n reaciile de
oxido-reducere
(dehidrogenarea S
transferul unui hibrid ion
(H+ i 2 e). Alt proton
rmne n soluie H+

Vitamina PP:
nicotinamida
Coenzimele -
nicotinamid adenin dinudleotidul (NAD
+
)
nicotinamid adenin dinudleotid fosfat (NADP
+
)
Derivai a vitaminei
B6
Co piridoxalfosfat
i piridoxaminfosfat
Rolul:
1. Transaminarea AA
2. Decarboxilarea AA
3. Transsulfurarea

Vitamina B
6

:
Piridoxal fosfat Piridoxamin fosfatul
Piridoxina Piridoxal Piridoxamina
Coenzimele:
1. biosinteza AG
2. biosinteza Col
3. sinteza corpilor cetonici
4. Oxidarea AG
5. Ciclul Krebs
6. Sinteza aminolevulinatului
7. DOP
8. DO a alfa cetoglutaratului
Transferul grupelor acil
Gluconeogenez (I cale piruvatdecarboxilaza)
Sinteza AG (formarea lui malonil CoA)
Transformarea propionil-CoA n succinil CoA
(oxidarea AG cu numr impar)
Intervine n catabolismul Leu
Vitamin antipernicioas pentru om i
factor de cretere pentru microorganisme
n ficat sunt 3 compui cobalaminici:
meti-; hidroxo- i deoxiadenozil-
cobalamin
Rolul:
1. Co pentru unele transmetilaze
(homocistein metionin)
2. Co pentru anumite mutaze (izomeraze)-
metilmalonil Co A---- succinil CoA
Bc-acidul folic
Forma activ- acidul tetrahidrofolic
Rol: transferul gruprilor cu un C: metil
(CH3), metilen(-CH2), formil (COH),
formimino (CH=NH)
Pentru decurgerea unei reacii este
necesar ca molecula de S i E s
contacteze ntre ele, pentru aceasta e
necesar de contientizarea unei noiuni
ca:
Energia de activare este energia
necesar tuturor moleculelor unui mol de
S, care la o anumit t pot s ating starea
de tranziie (corespunztoare apixului
barierii energetice) (KJ/mol; kcal/mol)

E - micoreaz energia de activare ale
reaciilor chimice.
Cu ct mai mult scade energie de
activare, cu att mai eficient acioneaz
catalizatorul, i cu att mai mult se
accelereaz reacia.

S + E E-S

E + P
Enzimele reduc energia de activare fara sa afecteze energia libera a
reactiei (G). Astfel, enzimele cresc viteza de reactie.
Progresul reactiei
S
P
G
Energia de activare a reactiei necatalizate
Energia de activare a reactiei catalizate
E
n
e
r
g
i
e

Enzymes
Lower a
Reactions
Activation
Energy
E + S <> ES <> ES* <> EP <> E + P
I et. III et.

II et.

I et. formarea complexului enzim-substrat (E-S)
II et. cataliza transformarea S n produsul reaciei
(P) de ctre enzim
III et. - eliberarea P de la E


Prima etap:
Difuzia S spre E i legarea cu CA al E -
formarea complexului ES
1. de scurt durat
2. depinde de concentraia substratului i de
viteza lui de difuzie spre centrul activ al
enzimei.
2. Transformarea complexului primar ES n unul
sau cteva complexe activate - ES*, ES** (este
cea mai lent). Are loc dereglarea legturilor S,
ruperea lor sau formarea noilor legturi n urma
interaciunii grupelor catalitice ale E.
3. Desprirea produselor reaciei de CA al E i
difuzia lor n mediul ambiant (complexul EP
disociaz n E i P).

Modelul clasic (Emil Fischer) consider
c potrivirea S cu CA al E este analog cu
potrivirea lact-cheie. Acest model
presupune o rigiditate a structurii enzimei n
zona CA.
modelul Koshland, numit centrul activ
indus- potrivire indus , presupune c
CA nu este rigid, c forma acestuia se
modific n momentul legrii S.

Conceptul clasic "lact-
cheie
E+S-- ES- E+P
Conceptul coencidenei
inductive
coincidena forat
(Kochland)
La nivel molecular aciunea E poate fi lmurit prin
urmtoarele efecte:
1. Efectul de orientare a substratelor (CA al E fixeaz S i le
orienteaz ntr-un mod convenabil pentru aciunea gr.
catalitice)
2. Efectul de deformare a S (dup unirea n CA molecula S se
ntinde, se deformeaz favoriznd scindarea ei)
3. Cataliza acido-bazic (n procesul fixrii S n CA asupra lui
acioneaz grupele electrofile ale sectorului catalitic, are loc
redistribuirea densitii electronice n S i ruperea legturilor
din S
4. Cataliza covalent formarea legturilor covalente ntre CA
i S, complexul ES e foarte instabil, uor disociaz elibernd P
reaciei
Toate E se mpart n ase clase,
clasele n subclase,
subclasele n subsubclase,
numrul su de ordin.
Ex: LDH - 1.1.1.27
Clasa reprezint tipul de reacie, catalizat de
enzime
Subclasa precizeaz aciunea E - indic
gruparea sau legtura chimic interesat n
reacie
Subsubclasa precizeaz natura acceptorului
care particip la reacii
Denumirea E denumirea S +tipul reaciei
catalizate +aza

1. Oxidoreductaze, catalizeaz reaciii de oxido-reducere;
2. Transferaze, catalizeaz transferuri grupelor
funcionale de la un S la altul (metil, amino, acil,);
3. Hidrolaze catalizeaz scindri de legturi covalente cu
adiionarea apei ;
4. Liaze, catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr
adiionarea apei, adiia la legturi duble i reaciile
inverse.
5. Izomeraze, catalizeaz toate tipurile de transformri n
cadrul uneia i aceleai molecul ;
6. Ligaze (sintetaze), catalizeaz formarea de legturi
ntre carbon i O, S, N, cuplate cu hidroliza legturilor
macroergice (utilizarea ATP).

Clasificarea enzimelor.
- catalizeaz formarea de legturi
ntre carbon i O, S, N, cuplate cu
hidroliza legturilor macroergice
(utilizarea ATP).
- catalizeaz reaciii de oxido-
reducere;
-catalizeaz transferuri
grupelor funcionale de la un S
la altul (metil, amino, acil,);
-catalizeaz scindri de
legturi covalente cu
adiionarea apei ;
-catalizeaz ruperea leg. C-C,
C-S i C-N; fr adiionarea
apei, adiia la legturi duble
i reaciile inverse.
-catalizeaz toate tipurile de
transformri n cadrul uneia
i aceleai molecul ;
1. Oxidoreductaze
catalizeaz reaciii de oxido-reducere
- oxidaze -
peroxidaze -
dehidrogenaze
1. catalizeaz transferuri grupelor funcionale
de la un S la altul (metil, amino, acil)

catalizeaz scindri de legturi covalente cu
adiionarea apei
- esteraze
- peptidaze
- glicozidaze
catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr
adiionarea apei, adiia la legturi duble i reaciile
inverse.
4. Liaze
catalizeaz toate tipurile de transformri n
cadrul uneia i aceleai molecul
5. Izomeraze
5. Izomeraze
catalizeaz formarea de legturi ntre carbon i O,
S, N, cuplate cu hidroliza legturilor
macroergice (utilizarea ATP).
E
S2
S4
-este condiionat de complimentaritatea
conformaional i electrostatic ntre CA
al E i S.
- este capacitatea unei enzime de a
selecta dintr-un numr mare de S
unul particular,
1. Specificitatea de reacie:
enzimele catalizeaz un anumit tip de
reacie ce st la baza clasificrii lor: o
reacie redox, un transfer a unei grupe
funcionale, formarea unei legturi, etc.

I. Specificitatea absolut de substrat
enzima catalizeaz transformarea
doar a unui singur substrat
II. Specificitatea relativ de substrat
enzima catalizeaz transformarea
unei grup numeros de substane cu
diferit structur chimic n acelai
mod
Ex. citocromul P
450
hidrolizeaz
cteva mii de substane
specificitate relativa de substrat
- asigura transformarea unui grup de
substante inrudite chimic i se
intlnete n diferite ipostaze:

III. Specificitatea absolut de grup
E catalizeaz transformarea unui grup de
substrate analogice structural (ADH - unui
grup de alcooli monohidroxilici, recunoscind
gruparea OH
IV. Specificitatea relativ de grup
enzima catalizeaz transformarea unei
anumite grupe sau legturi chimice din
diverse substane chimice
Ex. pepsina hidrolizeaz legturile peptidice
formate de gruprile carboxilice ale
aminoacizilor aromatici Phe, Tir i Trp
- E catalizeaz transformarea numai a
unuia din stereoizomerii posibili (D sau L;
sau numai a izomerului cis- sau trans-).
- Ex: Amilaza scindeaz legturile 1-4
glucozidice din amidon sau glicogen i nu
influeneaz asupra legturilor din
celuloz.

1. Cinetica enzimatic. Influena concentraiei enzimei i a substratului, a pH-
ului i a temperaturii asupra activitii enzimatice.
2. Principiul determinrii activitii enzimelor. Unitile de activitate a
enzimelor.
3. Inhibiia activitii enzimelor (specific i nespecific, reversibil i
ireversibil, competitiv, necompetitiv i noncompetitiv).
4. Reglarea activitii enzimelor (proteoliz parial, reglarea alosteric,
autostructurarea cuaternar, reglarea covalent).
5. Organizarea enzimelor n celul (ansamblurile enzimatice,
compartimentalizarea). Reglarea activitii enzimelor n celul. Importana
principiului de retroinhibiie.
6. Izoenzimele particularitile structurale i funcionale, valoarea lor
biomedical.
7. Deosebirile n componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele
organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni
(enzimodiagnosticul).
8. Metodele de obinere i purificare a enzimelor. Cromatografia de afinitate.
9. Utilizarea enzimelor n practica medical. ntrebuinarea enzimelor
imobilizate n medicin.
10.

Temperatura
pH
Concentraia S
Concentraia E
electroliii
E sunt termolabile
t optim a E din organism
- 35 - 40 C
odat cu creterea t cu
10C (dac lum punctul
de plecare 0 ) - V
reaciei enzimatice
sporete de 1,5 ori,
atingnd max la t 40C.
Majorarea de mai departe
duce la micorarea
activitii enzimatice -
denaturarea proteinei.
Unele E a
microorganismelor
termofile sunt active la t
de 80C
La t joase E se
inactiveaz (excepii:
catalaza: activitate max la
t=0 C)
v reaciei odat cu
t este nterpretat prin
prisma "energiei de
activare".
Pentru fiecare E se
poate stabili o t
optim la care V atinge
valoarea max, mai
departe V scade din
cauza denaturrii.
Fiecare E are pH
optim propriu
(manifest activitate
max).
Majoritatea E celulare
au pH-ul optim- 6-8
(7,4)
excepii: hidrolazele
acide lizozomale pH=
5;
MAO din membrana
MC externa pH= 10.
La E digestive pH
optim este cel al
sediului lor de
aciune:
1. Pepsina pH 1,5
2,
2. Amilaza
pancreatic - pH
7,2,
3. Tripsina - pH 7,8-
8,0

pH optim e dependent
de:
1. gradul de ionizare a
grupelor funcionale,
2. afinitii E fa de S,
3. stabilitii E.
In CA al E se afl grupri
ionizabile, acide sau bazice.
Acestea interacioneaz
direct cu ionii H+ si OH-,
rezultatul fiind creterea
sau scderea gradului lor
de disociere, acionnd ca
adevrai inhibitori ai E
(amilaza n sucul gastric).
Ionii H+ si OH- au un efect
denaturant asupra E - rup
legturile, ce determin
structura teriar.

Deci mrind sau
micornd pH-ul
mediului, se poate
regla activitatea
catalitic a E.
Dependena activitii
E de variaia pH-ului -
curb n forma de
clopot.


n condiii standard 2 mol de E ntr-o anumit
perioad de timp vor transforma de 2 ori mai
multe molecule de S dect 1 mol de E (relaie
direct proporional).

Grafic se reprezint sub
form de o curb de tip
hiperbolic.
n perioada iniial a
reaciei V crete pe
msur ce crete [S]. La
un moment dat cnd CA
al E se ocup de S V
nu mai crete. Ea rmne
constant i corespunde
V max a reaciei.
n cazul E alosterice
curba reprezint un
aspect sigmoid
Analiza curbei
hiperbolice arat c ea
reprezint 3 zone:
a. V de reacie crete
proporional cu c% S
b. Creterea este mai
ncet
c. V de reacie nu mai
crete

Aceast curb este numit curba lui Michaelis-
Menten i se exprim prin ecuaia:
[S]
V=Vmax x _________
Km +[S]

unde: V-V reaciei la un moment dat
Vmax- viteza max
Km-constanta lui Michaelis Menten
[S] C% molar a S
Km- este acea concentraie de S pentru
care v de reacie este jumtate din Vmax.
Km reflect afinitatea E pentru S i anume
cu ct Km este mai mic cu att afinitatea
este mai mare i invers.

Din curba lui
Michaelis Menten nu
poate fi determinat V
max (deoarece nu se
pot atinge c% infinite
ale substratului).
Se procedeaz la
linearizarea ecuaiei,
obinndu-se ecuaia
lui Lineweawer-
Burk:
Sunt : 1. nespecifice: temperatura , iradierea
2. specifice
- Se activeaz la:
1. majorarea concentraiei S cnd este
insuficient
2. majorarea cantitii E
3. introducerea Co cnd sunt insuficiente
4. Introducerea ionilor metalelor Fe, Cu
- Deosebim urmtoarele tipuri de reglare a
activitii enzimatice:
1. Reglare covalent - proteoliza limitata
2. Reglare covalent fosforilare/
defosforilare
3. Autostructurarea cuaternar
4. Alosteric
5. Reactivare

Unele enzime (proteine) se sintetizeaz n forma
neactiv de precursor proenzime (zimogeni)
Exemplu:
1) enzimele digestiei: pepsinogenul,
chimotripsinogenul, tripsinogenul, proelastaza,
procarboxipeptidaza - scindeaza proteinele in
stomac i duoden.
2) coagularea singelui e determinat de cascada de
reacii cu activitate proteolitic;
3) hormonii proteici (insulina);
4) proteinele fibrilare (colagenul).
-este scindarea unui sector al
catenei n rezultatul creia E se
restructureaz i se formeaz CA.
H+
Pepsinogen ------pepsin
-42AA

Zimogenii sunt produse la locurile de sintez
(mucoasa gastric pentru pepsinogen,
pancreasul pentru toate celelalte), activrile se
produc la locul de aciune (stomac, intestin
subire)
1. Protejaz de proteoliz proteinele celulelor
productoare de E.
2. Este o forma de rezerv a E, care rapid pot fi
activate i intervin n reacie.

unele E sunt active n forma fosforilat, iar
altele n forma defosforilat.
Ex.:
glicogen fosforilaza activ n forma
fosforilat;
glicogen sintaza este activ n forma
defosforilat

Reaciile de fosforilare sunt catalizate de kinaze
specifice.
E-OH + ATP -------- E-O-P +ADP
Defosforilarea are loc sub aciunea fosfotazei
specifice
E-OP +H2O------- E-OH +H3PO4

Este caracteristic E ce posed structur
cuaternar
Fiecare protomer n parte nu e activ
La asamblarea lor se modific conformaia
fiecrui protomer i corespunztor se modific i
conformaia CA, devenind astfel favorabil pentru
fixarea i transformarea S
E
CA
S
CA
Deosebim:
1. inhibiie nespecific (T, pH, agenii
denaturrii )
2. inhibiie specific
Inhibiia poate fi reversibil i ireversibil.
La o inhibiiie reversibil - inhibitori se
fixeaza slab, necovalent de E
I covalent se fixeaz de E cu formarea EI
nedisociabil.
Exemple: Diizopropilfluorfosfatul (toxina
neuroparalitica) se fixeaz de OH-serinei n CA
a acetilholinesterazei (scindeaz acetilcolina) cu
formarea E neactive.
n rezultat se menine efectul acetilcolinei n
permanen ce duce la paralici muscular i
moarte.
- ionii metalelor grele (Hg, Pb) inhib gruparea
SH a multor E; acidul iodacetic- inhib
ribonucleaza

Deosebim:
1. Inhibiie competitiv
2. Inhibiie necompetitiv
3. Inhibiie prin exces de S
4. Inhibiie alosteric

I se aseamn dup structur cu S.
Apare o competiie dintre I i S pentru CA.
Nu e posibil simultan fixarea S i a I.
E va fixa pe acel competitor care se afl intr-
o concentraie mai mare.
E+I ---- E
Este o inhibiie reversibil- I poate fi nlturat
cu adugarea n exes a S.

Inhibiia
competitiv
diminueaz v
catalizei:
nu modific V max,
dar crete mult
Km, micornd
afinitatea E pentru
S.


Exemplu: inhibiia SDH cu malonat (SDH -
oxideaza succinatul in fumarat).
Malonatul inhib aceasta E datorit
asemnrii cu S.
Sulfamidele substituie acidul p-amino-
benzoic din a. folic, indispensabil pentru
creterea microorganismelor, mpedicnd
dezvoltarea lor (antibacterian)
inhibiia enzimei (SDH)cu malonat. SDH oxideaza succinatul in
fumarat)
Malonatul inhiba aceasta E datorita asemanarii cu S.
Particularitatea principal a acestui tip de inhibiie este c
poate fi nlturat cu adugarea n exes a S(succinat).
inhibitorul nu se aseamn ca structur cu S
I i S se leag simultan cu E dar locusurile
sint diferite (I nu se leag n CA)
E+S+I--------- ESI
Acest tip de inhibiie nu se nltur prin exces
de substrat.
I necompetitivi scad V max dar nu afecteaz
Km
Ex: cianurile, CO se fixeaz cu Fe 3+
din citocromoxidaz ---se ntrerupe
LR
I poate fi nlturat de substane care l
leag numite reactivatori

I i S se leag simultan cu E n locusuri diferite
Mrirea concentraiei de S nu micoreaza inhibiia.
Cei mai de vaz inhibitori de acest tip n celulele vii sint produsele
intermediare
ale metabolismului, care reversibil se fixeaz la unele E reglatoare i
modific activitatea lor.
Inhibiia
uncompetetiv
I se leag la
complexul ES,
inhib activitatea
E
E+S----ES +I-----
ESI
Micoreaz i Km
i Vmax



inhibiia prin modificarea covalent a
moleculei E - prin fosforilare pe baza
ATP-ului. Unele E fosforilate pierd
activitatea de exemplu enzima
glicogensintaza
Inhibiia prin exces de S n CA se
fixeaz simultan surplus de S ce nu
poate fi transformat. Este o inhibiie
reversibil nlturarea S
E
CA CA S
Inhibiie alosteric - inhibitorul (efectorul) se leag n centrul
alosteric al enzimei, modificnd conformaia moleculei (structura teriar)
ce are ca consecin deformarea centrului activ.
forme moleculare multiple ale E, ce catalizeaz
aceeai reacie chimic, dar difer prin structur,
proprieti fizice, chimice i cinetice
Diferite forme de izoE se pot gsi:
1. mpreun (LDH din ficat);
2. n esuturi diferite (fosfotaza acid n prostat i
hematii);
3. sau n diferite compartimente ale aceleiai celule
(MDH MC i Cit)

1. sarcina electric (ce permite separarea
lor prin electroforez);
2. V max de cataliz,
3. sensibilitatea fa de modulatorii allos;
4. pH-optim de aciune;
5. termolabilitate, au afinitate diferit fa de
S.

Sunt E oligomere, cu structur cuaternar,
alctuite din cel puin 2 protomeri diferii
Ex. LDH (lactat piruvat)
Prezint un tetramer, alctuit din 2 tipuri
de subuniti (H inim; M- muchi) n
diferite raporturi; codificate de gene
diferite.
HHHH inim; HHHM;HHMM; HMMM;
MMMM muchi

LDH-1 (4H) - in inima
LDH-2 (3H1M) - in sistemul reticuloendotelial
LDH-3 (2H2M) - in plamani
LDH-4 (1H3M) - in rinichi
LDH-5 (4M) - in ficat si muschiul striat

(H este tipul de monomer intalnit in inima, iar M este monomerul caracteristic
izoenzimei hepatice si musculare)
Rol in diagnosticul medical
indicand distrugeri celulare



1. n controlul metabolic ( faciliteaza adaptarea
metabolismului in diferite esuturi.)
Ex: in miocard predomina H4 (inhibat de piruvat) -
orienteaz oxidarea piruvatului pe cale aeroba.
M4 este activat de catre piruvat i orienteaz
transformarea piruvatului pe cale anaerob spre
lactat.
2. n diagnosticul unelor stri patologice (variaia diferitor
forme de izoE)

Norma- 100-190U/L
Creterea de LDH 1 i LDH2:
1. infarctul miocardic
2. anemia hemolitic/ megaloblastic
LDH5 crescut - afeciuni hepatice,
necroza hepatic

1. Creatinfosfokinaza -2 tipuri de monomeri:
M-Muscle i B brain
2. LDH
3. MDH
4. Aldolaza
5. Fosfataza alcalin
6. Fosfataza acid

CPK M
2

Muchi
scheltic
Miodistrofii
CPK MB
Muchi
cardiac
Miocardiop
atii
CPK B
2
Creier
Ischemii
cerebrale
Fiecare celul a organismului conine
setul su specific de E.
Unele se gsesc n toate celulele, altele
sunt prezente doar n anumite celule
sau anumite compartimente celulare.
Funcia fiecrei E, nu este izolat, ci
strins legat de funcia altor enzime.
Astiel din E aparte se formeaza sisteme
polienzimatice sau conveiere.
Se cunosc urmatoarele tipuri de
organizare a sistemelor
polienzimatice:
1. - funcional,
2. - structural-funcional
3. - mixt.
enzimele sunt asociate n sistemul polienzimatic
cu ajutorul metaboliilor, care difuzeaz de la o
enzim la alta.
produsul reaciei primei E servete drept S
pentru E urmtoare etc.
Ex.: glicoliza. Toate enzimele participante la
glicoliza sunt n stare solubil, legtura se face
doar prin intermediarii metabolici.
E1 E2 E3 E4
A---------------- B------------- C---------- D---------- P
E sunt fixate prin legturi slabe pe o protein
central, care poate fi chiar una din E.
Proteina central dispune de un bra care
fixeaz S i l duce la E1, care l transform n
P1;
P1devine S2 , braul l preia i l duce la E2, care
l transform n P2.
Avantajul este c braul duce de fiecare dat S la
E corespunztoare, potrivindu-l cu mare
exactitate pe CA, ceea ce asigur n ansamblu o
vitez mai mare dect cea corespunztoare
aciunii E neasociate.

Ex.- complexul polienzimatic
piruvatdehidrogenazic, constituit din 3 E
i 5 Co
sintetaza acizilor grai constituit din 7
E legate structural de PPA, care n
ansamblu ndeplinesc funcia de sinteza a
AG.
E se pot aranja n lan, fixndu-se de MB.
Ex.enzimele LR, care particip la
transferul de H+ i e.

reprezint o mbinare a ambelor tipuri de
organizare, adic o parte din sistemul
polienzimatic are organizare structurala,
iar cealalta parte - organizare funcional.
Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime
sunt asociate n complex structural
(complexul 2-oxoglutaratdehidrogenazic),
ar alt parte se leag funcional prin
metaboliii de legtur.

1. 1 UI cantitatea de E care catalizeaz
transformarea unui mol de S ntr-un minut n
condiii standard
2. 1 Cat (catal) cantitatea de E care catalizeaz
transformarea unui mol de S ntr-o secund n
condiii standard(1U.I.=16,67 nkat)
Condiiile standard - pHul ~ 7,0; t = 25C;
p = 1 atm;
C substratelor 1 M.
1 cat = 6 107 UI
1 UI = 16.67 10-9 cat
Activitatea specific reprezint
numrul de uniti enzimatice per mg
de protein-enzim
AS= Nr UI/mg protein
Este expresia puritii unei enzime
1. Dializ
2. Salifiere
3. Cromatografie
4. Gel-filtrare
5. Electroforez
Cea mai eficient
cromatografia de afinitate
Viteza reaciei este proporional
cu
1. Viteza consumului substratului
2. Viteza formrii produsului
3. Viteza transformrii coenzimei
Cantitatea substanei respective
se determin colorimetric.
Enzimele indicatorii sunt localizate intracelular:
n citoplasm (LDH, aldolaza),
n MC * glutamatdehidrogenaza),
n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza alcalin).
Acestea E n norm n plasm se gsesc n c% foarte
mici.
La afeciunile celulare activitatea acestor E n plasm
este brusc mrit.
Preparatele farmaceutice contemporane
sunt asociate i conin ca regul urmtoarele
enzime:
tripsin,
chimotripsin,
lipaz,
amilaz,
pancreatin,
bromelain,
papain,
rutin (vit. P).

Efectele
exercitate de preparatele enzimatice
1. De substituie (E digestive)
2. Fibrinolitic i trombolitic
3. Antiedematic
4. Analgezic
5. Antiinflamatoare
6. Imunomodulatoare

Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc
efecte importante i specifice.
Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor
ca medicaie e:
- distribuie redus n organism, dependena de
dimensiuni, sarcina i de fenomenele de glicozilare
(prin glicozilare proteinele sunt recunoscute de
receptori i fixate n anumite locuri
- posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul
avnd tendin de a capta i reine proteinele strine;
- inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive
n cazul administrarii orale, iar proteazele tisulare le
scurteaza de asemeni actiunea;
- potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot
genera reacii de hipersensibilizare adesea grave i
pot inactiva enzima.
- prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei,
folosit n leucemie
- metode de obinere a enzimelor imobilizate.
De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate
insolubile, prin adsorbie pe polimeri sintetici ori prin
ataare covalent, sau prin incorporare ntr-un gel in
cursul polimerizarii.
Aceste preparate catiga rezistena la enzimele
proteolitice i sunt mai putin imunoactive dar pot fi
alterate proprietile farmacocinetice.
Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu
polietilenglicol (PEG) ai arginazei, ai
glutaminasparaginazei sau ribonucleaza, enzime cu
efect antitumoral.
- incapsularea enzimelor in lipozomi -
microsfere cu membrana bistratificat
lipido- proteic, in hematii umane sau in
alti transportori celulari.
- Noile forme obinute prezint un potenial
de ntire tisular.
- De ex. in cazul unor boli genetice cauzate
de deficitul unor enzime lizozomale se
impune o terape de substituie, enzima
trebuind intit direct in lizozomi.