Proteinele plasmatice

Plasma conine o varietate de proteine cu funcii diferite.

Proteinele plasmatice sunt constituite din unul sau mai
multe lanuri peptidice care au n compoziia lor
aminoacizi unii ntre ei prin legtura peptidic.

n cadrul laboratorului clinic sunt frecvent investigate
proteinele totale, albuminele, globulinele,
imunoglobulinele, datorit unor metode moderne de
separare electroforetic, imunodifuzie radial Mancini,
electroimunodifuzie Laurell etc.


Locul de sintez
Cea mai mare parte a proteinelor plasmatice cum ar fi
albuminele, globulinele, factorii coagulrii, o serie de
enzime sunt sintetizate n ficat.

Imunoglobulinele sunt sintetizate n plasmocite.

Alte proteine cum sunt unele componente ale
complementului i unii inhibitori de proteaze sunt
sintetizate de ctre macrofage.

Celulele endoteliale produc proteine cu rol n
coagulare, fibrinoliz etc.

La un adult sntos concentraia proteinelor variaz
ntre 6,7-8,4 g/100 ml plasm i 6,5-8 g/100 ml ser.

Reglarea sintezei

-statusul nutritional
-factori genetici-deficite, polimorfism genetic
-inducerea sau represia genica sub actiunea unor hormoni
-existenta unor factori toxici (alcoolul)
-scaderea presiunii coloid-osmotice plasmatice
-citokinele IL-1,IL-6
Distributie
250g proteine in compartimentul vascular
350g proteine-lichidul interstitial/extravascular
<30g/L proteine transudat
-proteine in filtrul glomerular si BHE
<0,15g/24h pot ajunge in
urina(albumina,transferina,cistatina C,etc.
Catabolizarea
Degradate de propriile celule datorita unui turn-over propriu
Proteoliza
Degradare chimica prin dezaminare oxidativa, decarboxilare
Localizare-tractul GI,ficat,tubii contorti proximali renali
Rata de degradare =timpul de injumatatire( important in
analiza markerilor tumorali)
Funcii

menin presiunea coloidosmotic i volumul normal a plasmei
(albuminele furnizeaz peste 80% din presiunea coloidosmotic).

acioneaz ca transportoare de hormoni, vitamine, lipide, diveri
metabolii, medicamente etc.

intervin n reaciile imunologice

furnizeaz diveri factori necesari pentru coagulare

particip la meninerea echilibrului acido-bazic

particip la procesul de aprare specific i nespecific

reprezint o rezerv proteic important
Metode de determinare i separare a proteinelor plasmatice


metoda Gornall - proteinele reacioneaz cu Cu+2 n mediu alcalin i
dau compleci colorai n violet.
- intensitatea culorii se msoar spectrofotometric i
este proporional cu cantitatea de protein din prob.

Electroforeza este metoda cea mai accesibil clinic pentru separarea
macromoleculelor ncrcate electric pe baza mobilitii lor n cmp
electric.

n astfel de cmp, particulele ncrcate pozitiv vor migra spre electrodul
ncrcat negativ (catod), iar cele ncrcate negativ spre anod.

Viteza de migrare este invers proporional cu dimensiunea (greutatea)
particulelor i direct proportional cu sarcina lor electric.

Deci particulele cele mai uoare i mai puternic ncrcate vor migra cel
mai repede.


Utilizarea principal a electroforezei este separarea proteinelor,
posibil datorit gruprilor reziduale -COOH i -NH2 ale
aminoacizilor.

Aceste grupri au caracter amfoter i pot fi ncrcate electric, cu
sarcini pozitive sau negative n funcie de pH-ul tamponului folosit.
La valori acide de pH
gruprile -carboxil (-COOH) sunt doar uor ionizate
-amino vor forma ioni -NH3+, astfel c proteina va cpta
o sarcin pozitiv.

n mediu alcalin
gruprile -amino vor fi uor ionizate
-COOH vor forma ioni -COO-, conferind
macromoleculei o sarcin negativ.


innd cont de multitudinea de grupri reziduale, cu grade diferite
de afinitate pentru ionii H+ i HO-, fiecare protein se va ncrca
diferit n funcie de pH-ul soluiei.

Punctul izoelectric corespunde unei valori de pH, caracteristic
fiecrei proteine cnd sarcina electric global este zero.

Pentru proteinele plasmatice, se folosete o valoare pH de 8,5,
pstrat constant prin tamponul respectiv.

Mai pot fi separate electroforetic
lipoproteine
imunoglobuline,
izoenzime
hemoglobine.


Principalele proteine plasmatice


Albumina

este proteina cu cea mai mare concentraie plasmatic 3,5-5,5g/100 ml
este sintetizat i secretat de ficat.
reprezint 50% din producia de proteine totale hepatice.
timp de njumtire n plasm de 20 zile.
funcie - meninerea presiunii coloidosmotic a plasmei
- transport
-proteina de rezerva
intervine n reglarea schimburilor dintre plasm i lichidul interstiial.

Scderea concentraiei de albumin determin apariia edemelor.
Hipoalbuminemie
Exist trei principale cauze care conduc la scderea concentraiei de
albumin:

1.Scderea sintezei poate fi datorit unui aport sczut de aminoacizi n
malnutriie i malabsorbie sau de cauz hepatic.

2.Modificri de distribuie sau diluie.

Hipoalbuminemia poate s apar n condiii de permeabilitate capilar
crescut, situaie ntlnit n septicemie.

3.Pierderea sau degradarea anormal. Cauzele includ sindromul
nefrotic sau enteropatia exudativ, arsuri, hemoragii etc.

Hiperalbuminemia sunt rar ntlnite n patologie.

Analbuminemia -o boal genetic transmis autozomal recesiv.

-la electroforeza proteinelor plasmatice albumina
lipsete.
Globulinele

Reprezint 2,5-3,5 g/100ml i 35-45% din totalul proteinelor
plasmatice.

La elecroforeza clasic se separ 4 fraciuni globulinice principale
alfa1, alfa2, beta i gama.

Aceast separarea este orientativ deoarece prin metode moderne
de electroforez s-au pus n eviden mai multe proteine plasmatice
aflate n fiecare din cele cinci fraciuni electroforetice (Figura de mai
jos).
Electroforez aspect normal

Alfa globulinele

sunt sintetizate n ficat.
Prin electroforez se separ cele dou fraciuni
electroforetice alfa1 4% i alfa2 7% (Figura de mai sus).

Alfa1 globuline

Alfa1 antitripsina (1-protease inhibitor)
Este sintetizat n ficat
Se separ din fraciunea alfa1 prin imunelectroforez.
Protejeaz esuturile fa de activitatea distructiv a
proteazelor.
Deficitul innascut de 1-antitripsin duce la emfizemul
pulmonar,hepatita neonatala si ciroza in copilarie
Reactant de faza acuta

Glicoproteina 1 acid

este o protein de faz acut, avnd valoarea normal de
44-140 mg/dl plasm.
Se formeaza in hepatocite in cantitati reduse sub actiunea
IL-6
Crete de peste patru ori n cursul reaciilor inflamatorii.
Scderi s-au semnalat n malnutriie i ciroz hepatic.

Alfa1 fetoproteina

este sintetizat n ficat, dar numai n cursul vieii
embrionare, dup natere dispare.

Este considerat un marker tumoral important.

Alfa2 globuline
Prin imunelectroforez din fraciunea alfa2 s-au izolat mai multe
haptoglobine
proteina transportoare
a tiroxinei
ceruloplasmina
kininogenul
Antitrombina
III
alfa2
globulina
subfraciuni
Haptoglobinele sunt sintetizate n ficat.

Ele sunt capabile s lege hemoglobina complexul
rezultat fiind apoi rapid captat din circulaie de
macrofage, prevenindu-se astfel o eventual pierdere de
fier pe cale urinar.
Sunt de asemenea proteine de faz acut.
valori crescute n- infecii microbiene
-arsuri
-neoplasme


Ceruloplasmina este o protein sintetizat n ficat,
care conine cupru .
Mai are rol de ferooxidaz cataliznd transformarea
fierului bivalent n fier trivalent.

Creteri se constat n staza hepatic, n cursul reaciei
de faz acut.

n boala Wilson se constat o scdere accentuat a
ceruloplasminei.
transferina,
hemopexina,
plasminogenul,
factorul V,
factorul VIII etc.

Transferina
este o glicoprotein
are capacitatea de a lega i transporta fierul.
concentraia plasmatic este de 200-400 mg/dl.
are rol de protecie fa de infecii sau fa de proliferrile tumorale.
Conin fraciuni proteice ca:



Beta globulinele

Beta globulinele n ser au o concentraie de 0,9 g/100 ml sau 12%.

Sunt sintetizate n ficat, dar i splin, intestin.

Gama globulinele


concentraie seric de 1,45 g/100 ml.

Ele conin proteina C reactiv, imunoglobulinele.

Imunoglobulinele sunt heterogene datorit numrului
mare de antigene care solicit un rspuns imunologic
din partea organismului.

Imunoglobulinele sunt alctuite din patru lanuri
polipeptidice: -2 lanuri uoare L (Light)
-2 lanuri grele H (Heavy) legate prin puni
disulfidice.

Lanurile uoare sunt comune diverselor tipuri de
imunoglobuline.

Ele corespund proteinelor Bence-Jones eliminate n urina
bolnavilor cu mielom multiplu.

Lanurile grele dau specificitate antigenic diferitelor
tipuri de imunoglobuline.

Imunoglobulinele din circulaie sunt sintetizate de
plasmocite.


Se clasific n cinci clase: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE.
antigenic care depinde de lanurile grele din structura
lor.
n condiii patologice pot apare proteine coninnd fie
numai lanuri uoare (proteine Bence-Jones) sau numai
lanuri grele (proteine din boala lanurilor grele).

IgD au o concentraie plasmatic mic i au efecte
antitoxice, antivirale.
Traverseaz placenta fiind prezente la nou-nscut.

IgA au o concentraie de 145 UI/ml sunt prezente n
colostru asigurnd protecia nou-nscutului fa de
infeciile gastro-intestinale.
Trec n secreiile lacrimale, salivare, gastro-intestinale,
avnd o activitate antiviral.

IgM au o concentraie de 180 UI/ml.
Este prima imunoglobulin caracteristic rspunsului
imun umoral local.

IgG au o concentraie de 150 UI/ml sunt anticorpii
predominani ai rspunsului imun secundar.

IgE concentraia plasmatic este joas.
Se fixeaz rapid pe membranele mastocitelor i a
bazofilelor reprezentnd suportul molecular al anafilaxiei.

Modificri patologice ale concentraiei proteinelor
plasmatice


Hiperproteinemiile creterea proteinelor plamatice
-pot fi reale -aprnd ca urmare a unui catabolism exagerat
-ca urmare a apariiei n exces a unor proteine
patologice
-pot fi aparente ca urmare a hemoconcentraiei (deshidratrii).

Hipoproteinemiile caracterizeaz sindroamele biologice
care au la baz scderea proteinelor totale cu pstrarea
raportului dintre diversele fraciuni.

Hipoalbuminemiile apar n toate disproteinemiile, fiind
accentuate n caz de deficit de :

aport (subnutriii),

malabsorbii (pancreatite, enterite),

deficit de sintez (hepatite cronice, ciroze),

pierderi masive (sindrom nefrotic, diaree, steatoree,
fistule intestinale, tumori, infecii i intoxicaii cronice).

Disproteinemiile sunt modificrile de ordin cantitativ
sau/i calitativ ale proteinelor plasmatice, nsoite de
modificarea raportului dintre fraciuni.


Hiperglobulinemiile sunt sindroame care se ntlnesc
frecvent, interesnd una sau mai multe din subfraciile
sale.

Hiperglobulinemia global cuprinde creterea , i
globulinelor, cu scderea albuminelor, fapt ce duce la
diminuarea raportului A/G.

Este prezent n diverse boli inflamatorii cronice i tumori
maligne.

Hiperalfaglobulinemia se instaleaz cu deosebire n
cursul proceselor inflamatorii sau distructive ale esutului
conjunctiv i se nsoete cu o cretere a fibrinogenului, a
glicoproteinelor i de accelerarea VSH-ului.

Sindromul este ntlnit n:

inflamaii acute (boli infecioase acute, reumatism
poliarticular acut, pneumonii, febr tifoid),
infarct miocardic,
neoplasme,
sindrom nefrotic - cresc masiv n special 2 globulinele
-scderea moderat a -globulinelor i
accentuat a albuminelor.

Analiza difereniat prin metode imunologice relev n
reacia de faz acut creterea
1- antitripsinei(crestere mai lenta 24-48ore)
1 -glicoproteinei (crestere mai lenta 24-48ore)
Haptoglobinei (crestere mai lenta 24-48ore)
ceruloplasmina (crestere lenta 2-3 zile)
proteina C reactiv(crestere rapida 1-2 ore)
scad
albuminele
lipoproteinele.

Hiperbetaglobulinenia se ntlnete n hepatite
toxice, ciroze, sindroame nefrotice, cancere, boala
Cushing, etc i nsoete frecvent alte forme de
disproteinemie.

Hipergamaglobulinemia este sindromul cel mai
frecvent ntlnit i care explic un numr mare
disproteinemii.
Fraciunea gamaglobulinic crete n
majoritatea infeciilor bacteriene, virale, parazitare
n bolile de colagen (poliartrit reumatismal,
sclerodermii, lupus eritematos)
hepatite cronice
ciroze
obstrucii ale cilor biliare
nefrite
artrite
leucemii
mielom multiplu.


De multe ori se constat o cretere asociat a unora dintre
fraciunile globulinelor.

Majoritatea bolilor inflamatorii cronice i a tumorilor maligne
se nsoesc de hiper- i hiper- globulinemii, iar n cirozele
hepatice sunt asociate hiper- cu hiper- globulinemii.

Hipoglobulinemiile intereseaz de fapt gamaglobulinele
apar dup radioterapie
secundar unor infecii cronice prelungite
la malnutrii,
dup tratament cu citostatice
arsuri grave sau ca o boal genetic transmis recesiv, a
gamaglobulinemie
Hiperfibrinogemiile nsoesc bolile:
cardiace (coronare, infarct, boli renale, boli de colagen, bolile
hepatice, neoplasamele sau o serie de coagulopatii).

Hipofibrinogenemiile sunt urmarea unei sinteze insuficiente
a fibrinogenului de ctre ficat i apar n:
hepatite,
ciroze,
intoxicaii,
scorbut,
cancere ale tubului digestiv,
boli careniale precum i n defecte genetice de sintez
(afibrinogenemia congenital).
Tipuri de disproteinemie
1. Disproteinemia din inflamaia acut se
caracterizeaz prin
creterea 1i 2 = reactani de faz acut
concentraiei plasmatice de albumine

Cresc de asemenea i proteinele de faz acut
n schimb scad- albumina seric
-colinesteraza seric
-transferina
Paralel cu creterea fibrinogenului se constat i o
accelerare a VSH-ului.


2. Disproteinemia din inflamaia cronic
este caracterizat de creterea reactiv a gamaglobulinelor.
concentraiei plasmatice de albumine
1, 2 i mai ales a -globulinelor
Acesta se datoreaz proliferrii reactive a plasmocitelor i
limforeticulocitelor n sistemul reticuloendotelial, declanat
de o infecie subacut sau cronic.
Gamaglobulinele cresc n
endocardita bacterian
tuberculoz
limfogranulomatoza inghinal etc.
VSH-ul este accelerat n msura n care coexist o cretere
a fibrinogenemiei.

3. Pierderea de proteine pe cale renal se ntlnete n
sindromul nefrotic.
Sindromul nefrotic prezint o scdere a proteinelor totale
concentraiei plasmatice de albumine i a
globulinelor
2 i -globulinelor
-n formele grave se constat o scdere a gamaglobulinelor.
-Colesterolul i lipidele serice cresc, la fel i fibrinogenul.
- Acestea pot fi explicate prin creterea permeabilitii
filtrului glomerular fa de proteine.



4. Pierderea enteral de proteine se ntlnete n
enteropatia exudativ
- se caracterizeaz printr-o cretere a permeabilitii
tractului digestiv pentru proteinele plasmatice.

-Proteinele ajunse n lumenul digestiv sunt supuse
atacului enzimelor proteolitice din sucurile digestive i
determin la om hiperaminoacidemie i
hiperaminoacidurie.

- Se ajunge astfel la hipoproteinemie.

Disproteinemia din afeciunile hepatice.

n hepatita acut modificrile proteinogramei sunt puin
exprimate i necaracteristice, cu valoare diagnostic
redus.
Creterea aminotrasferazelor este marcant.
n sindromul posthepatitic, nivelul crescut al
gamaglobulinelor atrage atenia asupra evoluiei spre
cronicizare.
Hepatita cronic, se caracterizeaz prin creterea
gamaglobulinelor, pentru ca n ciroza hepatic aceast
cretere s se accentueze.

.

n stadiile de debut ale neoplaziilor, valoarea
diagnostic a proteinogramei este redus.

Adenocarcinomul hepatic cu ciroz se caracterizeaz
prin scderea albuminelor i creterea gamaglobulinelor,
asociat cu creterea 1.

La bolnavii cu hepatom se evideniaz alfa-fetoproteina


Hiperimunoglobulinemii policlonale i monoclonale

Fiecare tip de imunoglobuline este produs de o anumit
spi sau clon de plasmocite (IgM sunt sintetizate de
celulele reticulare limfoide).

Stimularea antigenic provoac de regul un rspuns din
partea mai multor clone de celule imunocompetente i n
consecin sunt elaborate mai multe tipuri de
imunoglobuline.

Viteza de migrare electroforetic a acestor
imunoglobuline este diferit, aspectul fraciunii
electroforetice gama va avea un caracter difuz.
La fotometrare va da aspectul de clopot turtit cu baza n
jos.
Astfel de imunoglobulinemii reactive se numesc i
hiperimunoglobulinemii policlonale.
Apar n inflamaii cronice, ciroze, colagenoze.

n cazul unei proliferri tumorale se nmulete doar o
anumit clon de celule care produc doar un tip de
imunoglobuline inerte imunologic.
Acestea au aceeai vitez de migrare electroforetic i
realizeaz o band ngust omogen n proteinogram,
iar prin spectrofotometrie se obine un aspect n pisc nalt.

Paraproteinele conin de regul att componente H, ct
i L i au caracter antigenic comun cu imunoglobulinele
normale.
Elecroforeza proteinelor serice . a)Aspect normal;
b)+c) Aspectul patologic al proteinogramei in paraproteinemii

Mielom multiplu
1. Mielomul multiplu proliferare generalizat a
plasmocitelor din mduva osoas
mai rar n esuturile moi (ganglioni limfatici, splin, ficat,
amigdale).

Aceste celule produc n marea majoritate paraproteine.

Proteinele Bence-Jones
au o greutate molecular mic
se elimin prin glomeruli
precipit la nivelul tubilor renali producnd leziuni i chiar
insuficien renal.
migreaz electroforetic ntre fraciunile beta i
gamaglobuline.

Clinic
-dureri osoase,fracturi
-anemie ,sngerri
infecii recurente
tulburri ale funciei renale
sindrom de hipervscozitate

Laborator
Hiperproteinemie ( datorit paraproteinelor)
Proteinurie
Scderea concentraiei de Ig M
Uremie
Hipercalcemie

2. Macroglobulinemia Waldenstrom se caracterizeaz
printr-o cantitate mare de IgM.

Apariia acestor macroglobuline se datoreaz proliferrii
celulelor reticulare limfoide.

Paraproteinele cauzeaz uneori tulburri ale circulaiei,
mai ales cerebrale datorit creterii vscozitii sngelui.
Din punct de vedere clinic
predomin anemia
sindromul hemoragipar
infecii recurente
limfoadenopatie
hepatoslenomegalie.

3. Boala lanurilor grele este mai rar.
Manifestrile clinice difer n funcie de isotipul de lan
greu.

Se caracterizeaz printr-o hiperimunoglobulinemie n care
proteinele sunt alctuite doar din componenta H,
fragment al lanurilor IgG.

Pacienii cu boala lanurilor grele prezint o rezisten
sczut fa de infecii.