Sunteți pe pagina 1din 6

APLICATII DE SPECIERE PE PROBE ALIMENTARE

Cercetarile in domeniul alimentar au la baza interesul medical si de sanatate , in special


asupra elementelor toxice ca Pb, Cd, Al, Cr. In literatura, este general acceptata ideea ca
absorbtia elementelor esentiale din alimente este dependenta de specia chimica a compusului in
care elementul este prezent.
In vederea specierii, probele alimentare sunt supuse unor proceduri de digestie cu suc
gastrointestinal simulat sau enzimoliza pentru determinarea specilor chimice ale Cd, Zn, Al si
Pb. Specierea plumbului in vegetale s-a dovedit a fi asociat cu specii macrommoleculare si cu
1-3 compusi minori, in functie de tipul de vin. Specia dominanta care leaga 40%-85% din plumb
a fost identificata ca fiind un complex al plumbului cu dimerul polizaharidei pectice.
Sample Coloana Eluent (debit) Detectie
Metale in ceai SEC: Superdex 75HR
10/30
0.1 M CH
3
COONH
4

pH 5.5
ICP-MS
B in rinichi SEC: YMC-Pack Diol-
120 ( 30 cm *8 mm)
0.2 HCOONH
4
pH 6.5 ICP-MS
Pb, Ba, Sr in plante
comestibile
SEC: Superdex-85 HR
( 30 cm*10 mm)
0.03M tampon formiat,
pH 5.8
ICP-MS
Carne de pui SEC: Pharmacia
Superose-12 HR 10/30
0.12 Tris-HCl, pH 7.3 ICP-MS
Cd in rinichi de porc SEC: Pharmacia
Superrose 12HR
(2 cm * 5 mm)
0.12 Tris-HCl, pH 7.5 ICP-MS
vin SEC: Superdex-75 HR
( 30 cm * 10 mm)
0.03 M tampon
formiat, pH 5.8
ICP-MS

Tabelul 1: Conditii experimentale pentru analiza de speciere in unele probe alimentare

A fost efectuata speciere zincului in produce alimentare pentru estimarea
biodisponibilitatii acestuia; a fost efectuata o extractie cu fluide digestive simulate, iar compusii
extrasi in vitro au fost separati prin proceduri cromatografice cu schimbatori de ioni, iar apoi au
fost analizati cantitativ prin AAS si DPASV pentru a determina speciile de zinc si continutul
total al elementului din aceste matrici. Rezultatele acestei analize au aratat ca biodiponibilitatea
scazuta a zincului in faina coreleaza cu concentratii crescute ale elementelor competitive: Fe si
Cu.
In Bangladesh s-a efectuat un studiu ce a vizat determinarea concentratiei de As si a
speciilor de As in produsele de subzistenta , in special in orez, vegetale, cereale si condimente; in
urma acestui studiu s-a determinat ca marea majoritate a alimentelor ingerate in Bangladesh
contin As anorganic. Specia predominanta in orez este arsenitul As(III) sau arsenatul As(V), iar
acidul dimetil arsenic este un component minor.
Fructele si legumele sunt surse importante de elemente prezente in urme din dieta umana;
pentru separarea si determinarea specilor elementelor Pb, Ba, Sr, Ce cu fractiuni polizaharide s-a
utilizat HPLC cu excluziune sterica cu detectie ICP-MS.
S-a investigat distributie metalelor intre fractiile celulare solubile si insolubile ale unor
probe alimentare vegetale, utilizand o procedura analitica multielement. Pentru fractionarea
celulara, probele au fost mai intai uscate prin congelare, apoi extrase cu o solutie tampon.
Supenatantul si fractia solida au fost supuse centrifugarii; s-a obtinut un nou supernatant
( citosolul) si faza solida. Continutul de zinc din cele doua faze a fost determinat prin
spectrometrie de fluorescenta cu raze X cu reflexie totala, dupa digestia acida a acestora. Astfel,
s-a determinat distributia elementelor intre citosol si faza insolubila a celulelor plantelor vegetale
analizate. Fractiunile de citosol ale plantelor pot fi supuse investigatilor urmatoare de separare i
determinare a speciilor, folosind o tehnica combinata de cromatografie si o metoda de detectie a
elementului de interes.
Cantitati mici de Zn ( 1- 34% ) sunt legate sub forma de specii cu masa moleculara mai
mare de 30.000 Da, in aproape toate produsele vegetale anlizate. In banane, varza castraveti,
ardei 100% din speciile deZn eluate au mase moleculare mai mici de 5000 Da.
Pentru specierea complecsilor de Cd cu oligopeptide biosintetizate de plantele expuse la
poluare cu metale s-a utilizat metoda cuplata SEC-ICP-MS. Metoda s-a aplicat si pentru
investigarea specierii Cd in citosolul celulelor plantelor, la nivel de urme si ultraurme. Prepararea
probelor consta in: spalarea plantelor, inghetarea lor in azot lichid pentru a distruge peretele
celular, omogenizarea in mojar cu pistul si extragerea cu apa sau cu tampon 10 mm Tris-HCl de
pH=8 , apoi centrifugare ( 30 min. 10.000g , 4C) filtrare si liofilizare. Probele au fost supuse
apoi cromatografierii SEC ( coloana Peptide HR 10/30) si detectiei ICP-MS. In plus fata de
complecsi Cd cu fitochelatinele cunoscute , care au eluat la timpii corespunzatori standardelor,
au mai fost eluate doua specii cu Cd, necunoascute. Unul din acesti compusi a fost identificat,
fiind un amestec complex al Cd cu diferiti liganzi de fitochelatine.
S-a efectuat speciere fractiunilor proteinice si neproteice ale mai multor elemente ( Se,
As, Cu, Cd, Zn) prezente la nivel d eurme in diferite extracte de organe ale speciei de peste
comestibil Micropterus salmoides , utilizand tehnica suplata SEC-ICP MS. Pentru cromatografia
lichida s-a utilizat coloana Biosil SEC cu domeniu de separare de 100-7 Kda. Studiul a
concluzionat ca elementele Cu, Zn, Cd sunt legate de metalotioneina in ficat si branhii. Seleniul
este predominant legat de specii cu masa moleculara mica in ficat , muschi si branhii. Probele au
fost supuse si tehnici cuplate IC-ICP MS, cu o coloana cromatografica As 7, cu elutie in gradient
HNO
3
. Cromatograma a indicat ca speciile de As si Se in extractele de ficat si branhii au timpi de
retentie similari, dar acesti timpi de retentie nu corespund celor caracteristici specilor As(III) ,
As(V), dimetilarsenat, arsobetaina, Se(IV), Se(VI), seleno-metionina sau seleno-cistina.
Compusii anorganici si cei cu masa moleculara mica ai As si Se nu pot fi separati prin SEC.
Multe specii ale acestor elemente se gasesc sub forma de anioni , acestea pot fi separate prin
cromatografie cu schimbatori de anioni. Cromatografia cu schimbatori de anioni s-a efectuat
folosind extract de tesut in amestec etanol: cloroform, iar volumul injectat a fost de 100 l.
Prepararea probelor: dupa pescuire, pestii au fost disecati si portionati pe organe: ficat,
muschi, branhii, care au fost apoi inghetate in azot lichid, iar apoi pastrate la -70 C. S-au cantarit
aproximativ 300 mg tesut care a fost omogenizat cu amestecul format din 3 ml acetat de amoniu
100mN, 10 mM Tris-HCl pH 7.2, la care s-a adaugat 15 l inhibitor de proteaza. Amestecul a
fost centrifugat la 16000 rotatii/minut, timp de 20 minute. Proteinele cu masa moleculara mare
au precipitat prin adaugarea unui amestec de etanol: cloroform care a fost racit anterior la - 20
C; precipitatul a fost apoi indepartat prin centrifugare la 16000 rotatii/minut, timp de 20 minute.


Seleniul este prezent in apa sub forma de selenat sau selenit, distributia specilor depinde
de pH si Eh-ul apei. Selenatul este solubil, in timp ce Se(IV) este mai puternic legat de faza
minerala in sediment. Seleniul poate exista intr-o varietate de compusi organici in stare de
oxidare. De fapt Se este un element esential pentru plante si animale si un numar mare de
proteine utilizeaza Se-cisteina in locurile active. Un mecanism propus pentru toxicitatea Se este
acela al substitutiei nediscriminatorii a Se-metioninei si a metioninei in timpul sintezei
proteinelor, ceea ce afecteaza structura si functia proteinelor.



















Universitatea Tehnica Cluj Napoca
Centrul Universitar Nord Baia Mare
Metode de analiza a calitatii mediului si produselor
Master, anul 2




METODE INSTRUMENTALE DE
SPECIERE












Titular curs:
Conf. Dr.Ing. Vatca Gheorghe
Masterand:
Turciac Adriana Iulia

S-ar putea să vă placă și