Sunteți pe pagina 1din 4

CITOMETRIA IN FLUX

LP
Citometrie n flux
cito = celul
metrie = msurare
flux > flux de particule n suspensie
=tehnic ce permite msurarea propriet ilor unor particule biologice aflate n suspensie i rulnd
printr-un sistem n flux.
FACS= Fluorescence Activte! Cell Sortin"= separarea prin citometrie in flux a celulelor (si nu
numai). Desi nu toate citometrele in flux au si capacitatea de separare !"#$ a de%enit sinonim cu
citometria in flux. &x !"#$#anto '' este un citometru cu ( lasere.
#itometrul )D!"#$#anto'' ( lasere-* culori
Lser +ight "mplification b, $timulated &mission of -adiation = dispo.iti% care emite un fascicul
intens de lumin amplificat i coerent cu o singur frec%en de und (monocrom).
Fenoti# $ suma caracteristicilor structurale/ fi.ice i func ionale ale unui organism determinate
genetic i modificate de ctre mediu. -> Fenoti# celulr = suma caracteristicilor structurale/ fi.ice i
func ionale ale unei celule determinate genetic i influen ate de micromediul tisular.
Anticor#i monoclonli
o anticorpi monospecifici (recunosc aceea i structur antigenic)
o produ i n celule denumite hibridoame ob inute prin fu.iunea celulelor de mielom cu celule
spelnice de la oareci imuni.a i cu antigenul de interes
0 1ot fi cuplati cu fluorocromi si folositi pentru identificarea tipurilor celulare din suspensii sau tesuturi
(imunocitochimie)
Anti"en mem%rnr
o "rhitectura membranar a unei celule poate fi caracteri.at prin identificarea moleculelor
numite #D. 2n func ie de fenotip popula ii celulare distincte sunt definite ca fiind po.iti%e (3)
sau negati%e (-) pentru fiecare mar4er membranar a crei expresie este e%aluat
o #D = cluster of differentiation/ cluster of designation denumire unitar adoptat n 56*7 pentru
a desemna proteine pre.ente la suprafa a membranei leucocitelor
5
o #D urmat de un numr (de la 5 pn la peste (88 n ordinea descoperirii i caracteri.rii) -
termen utili.at pentru o gam larg de molecule membranare (receptori ligan.i)
Fluorocrom
o component a unei molecule care i confer acesteia proprietatea de a fi fluorescent
o grup func ional n cadrul unei molecule capabil s absoarb energie din spectrul %i.ibil
(lumin) cu o anumit lungime de und i s emit energie din spectrul %i.ibil cu o lungime de
und diferit.
Imunofenoti#re
o 9na din cele mai rspndite aplica ii ale citometriei n flux
o :ehnic de e%aluare a proteinelor exprimate de celule (fenotip celular) folosind anticorpi
monoclonali fluorocromati
o !rec%ent utili.at n diagnosticul bolilor hematologice maligne sau imunodeficien elor
Princi#iu
9n fascicul de lumin (de regul pro%enind dintr-o surs laser) este direc ionat perpendicular spre o
suspensie de particule focali.at hidrodinamic ntr-un curent fluidic. ;rice particul cu dimensiuni
ntre 87 i 5<8 =m aflat n suspensie n momentul n care trece printr-un fascicul laser are
capacitatea pe de o parte s mpr tie lumina incident i pe de alt parte dac are ata a i fluorocromi
s emit fluorescen . "ceast combina ie de lumin mpr tiat i lumin fluorescent este preluat i
7
anali.at de detectori care furni.ea. informa ii despre fenotipul/ structura chimic i fi.ic a a fiecrei
particule indi%iduale.
In!ic ii
#ombin ntr-o tehnic unitar a%anta>ele microsco#iei cu cele ale investi" iilor %ioc&imice'
1arametrii celulari de diagnostic diferen ial msurabili prin citometrie n flux pot fi selecta i dintr-o
gam %ast?
@ ciclul celular
@ fenotipul celular
@ "popto.a-moarte celulara programata
@ influxul de calciu
@ proliferarea celular
@ ni%elul de fosforilare
@ cito4ine intracelulare sau in lichid etc.
(eterminre vi%ilittii celulre folosin! io!ur !e #ro#i!ium
'odura de propidium- produs fluorescent cu afinitate pentru aci.ii nucleici prin care se face distincAia
ntre celulele %ii si cele moarte (1' patrunde doar in celulele moarte ce %or fi astfel 1' po.iti%e).
Bistograma
(
C

S-ar putea să vă placă și