PROPRIETILE

FIZICO-CHIMICE ALE
PROTEINELOR
Obiectivele:
Masa molecular a proteinelor. Noiuni generale referitor la
metodele de determinare a masei moleculare a proteinelor.
Proprietile amfotere ale proteinelor. Sarcina electric a
proteinelor. Factorii ce determin sarcina proteinei. Punctul i
starea izoelectric.
Solubilitatea proteinelor. Proprietile hidrofile ale proteinelor n
funcie de componena aminoacizilor i de particularitile
structurale. Factorii de stabilizare n soluie a substanelor
coloidale. Starea soluiilor coloidale: sol, gel, xerogel. Exemple.
Denaturarea proteinelor, agenii ce provoac denaturarea.
Modificrile structurale ale proteinei la denaturare.
Metodele de studiere a componenei calitative i cantitative a
proteinelor:
a)hidroliza; b) cromatografia; c) electroforeza; d) salifierea; e)
dializa.
6. Importana biomedical a metodelor de evaluare calitativ i
cantitativ a proteinelor.


Proprieti fizico-chimice

Masa molecular
Solubilitatea proteinelor
Proprietile amfotere
Sarcina electric a proteinei
Denaturarea

Masa molecular
a proteinelor
intre 10.000 i 40.000.000 Daltoni.

Masa molecular
a proteinelor
se determin prin urmtoarele metode:
1. prin calcul cu ajutorul compoziiei chimice
cunoscute: Ex: Masa mol. a Hb (Fe)=56x100 /
0,34=16470Da
2. mrimea presiunii osmotice, constanta
ultracentrifugrii (pr. sedimenteaz n raport cu
m i mrimea lor)
3. Metoda difuziunii luminii (intensitatea ei e
dependent de nr. particulelor i de m ei)
4. Mrimea difraciei razelor Roentgen
5. Microscopia electronic
Proprietile
electrochimice ale
proteinelor
Sarcina electric a
proteinelor
Proteinele prezint
polielectrolii amfoteri
Sarcina electric a
proteinelor
Sarcina electric a proteinelor
este determinat de 2 factori:
I. de componena AA
II. de pH mediului
Sarcina electric este
determinat:
1. de componena AA:

dac predomin AA acizi (Glu,Asp) sarcina
sumar a proteinei va fi negativ
Sarcina electric este
determinat:
1. de componena AA:

b. dac predomin AA bazici (Lys,Arg)
sarcina sumar a proteinei va fi pozitiv
Sarcina electric este
influenat
II. de pH mediului:
Sarcina electric este
influenat
II. de pH mediului:

CONCLUZIE:
A. Proteina neutr
n mediu acid sarcina sumar va fi
pozitiv
n mediu bazic sarcina sumar va fi
negativ
Datorit acestui fapt la trecerea unui curent
electric n soluie, AA vor migra n mediu
acid spre catod(-), iar n mediu alcalin
spre anod(+).

Punct izoelectric
-
Este o valoare a pH-ului la care suma sarcinilor
pozitive este egal cu suma sarcinilor negative
(migrarea proteinelor sau a AA ntr-un cmp electric
este nul)
- se noteaz pHi i este diferit pentru fiecare
aminoacid sau protein.
n aceast form se exercit fore de atracie
reciproce ntre gruprile COO- i - NH3+; are
loc o aglomerare a moleculelor din soluie i
solubilitatea devine minim.


Sarcina electric este
influenat
II. de pH mediului:
Sarcina electric este
influenat
II. de pH mediului:
Sarcina electric este
influenat
II. de pH mediului:
Sarcina electric este
influenat
II. de pH mediului:
CONCLUZIE:
pHi
Pentrui AA neutri se afl ntre pH 5-6
Pentrui AA bazici se afl n mediu bazic
Pentrui AA acizi se afl n mediu acid

CONCLUZIE:
Sarcina proteinei
La un pH mai acid ca valoarea pHi
proteina capt o sarcin pozitiv
(cation) i migreaz spre catod(-);
la PH mai mare ca pHi proteina
capt o sarcin negativ i migreaz
spre anod(+)
Solubilitatea proteinelor
Proteinele - substane cu proprieti
hidrofile
Solubilitatea variaz n limite mari:
- Proteinele globulare prezint
grade diferite de solubilitate,
- cele fibrilare sunt insolubile n
ap
Solubilitatea este deteminat
de:
1. Componena aminoacidic
2. Forma moleculei
3. Sarcina proteinei
4. Natura solventului
5. Temperatura solventului
6. pH-ul solventului

Solubilitatea
este influienat de:

Prezena srurilor metalelor
uoare NaCl, MgCl2, Na2SO4,
care:
1. la concentraii mici mresc
solubilitatea proteinelor
2. la concentraii mari scad
solubilitatea proteinelor i ele
precipit. Acest proces se
numete salifiere.
Stabilitatea soluiei proteice
e determinat de 2 factori:

sarcina electric determin
respingerea moleculelor proteice
ncrcate pozitiv sau negativ.
membrana apoas care ndeprteaz
moleculele proteice una fa de alta
impiedicnd agregarea i precipitarea
lor.
Membrana apoas (apa
fixat)
Se formeaz la interaciunea grupelor
ionogene ce fixeaz dipolii de ap:
Grupa COO fixeaz 4 mol de H2O,
NH2- -3;
OH i NH cte 2.
Apa ce intr n componena
membranei apoase e numit ap
legat
Membrana hidric
Proprietile apei fixate
1. moleculele ei au o dispunere mai
compact, ce o apropie de un corp
solid
2. proprietile ei de solvent sunt reduse
3. nghea la temperaturi joase( -40C)
4. constanta dielectric (fora de atracie
dintre ionii ncrcai opus) este de 2,8,
pe cnd la H2O obinuit este de 8
Proprietile coloidale
i osmotice ale
proteinelor
Proteinele sunt substane
macromoleculare,solubile, la dizolvarea
crora se formeaz soluii coloidale
proteice.
Spre deosebire de soluiile coloidale
obinuite, soluiile proteice nu necesit
prezena stabilizatorului. Soluiile
proteice sunt stabile i cu timpul nu se
precipit.
Soluiile proteice posed
proprieti caracteristice
soluiilor coloidale:

Proprietile optice (efectul Tindal)
Vitez de difuzie mic.
Viscozitate mare
Proprieti osmotice
Proprietatea de a forma geluri

Proprietile optice

efectul Tindal - la iluminarea lateral a soluiei
proteice raza de lumin n ea devine vizibil,
formnd conul de lumin.
Acest efect de dispersie a luminii se explic prin
difracia razelor de lumin de ctre particulele n
soluie.
Capacitatea proteinelor de a dispersa lumina
este folosit:
1. la determinarea cantitativ a proteinelor prin
metoda nefelometric
2. la studierea microscopic a structurilor celulare.
Vitez de difuzie mic
Difuzie deplasarea spontan a moleculelor
substanei dizolvate datorit gradientului de
concentraie (de la zone cu concentraii mai
mare spre cele cu concentraie sczut).
Viteza de difuzie a proteinelor depinde
mai mult de forma moleculei, dect de
masa ei.
Repartizarea intracelular a proteinelor din locul de
sintez (ribosomi) are loc prin difuzie.
Deoarece viteza de difuzie e mic are loc limitarea
vitezei proceselor dependente de funciile
proteinelor difuzabile n sectorul respectiv.
Viscozitate mare
e dependent de masa i forma
moleculelor.
Mrirea c% proteinei conduce i la mrirea
viscozitii soluiei (se mresc forele de
coeziune ntre moleculele proteice).
Proteinele fibrilare sunt mai vscoase
comparativ cu cele globulare.
Viscozitatea e dependent de:
1. temperatur- t0 viscozitatea scade
2. prezena electroliilor (ex. srurile de Ca2+
mresc viscozitatea prin formarea punilor de
Ca2+)

Proprieti osmotice

proteine fiind macromolecule nu
difundeaz prin membrane
semipermiabile, pe cnd
micromoleculele trec prin
asemenea membrane. Acest
proces e numit dializ.
Proprieti osmotice

Incapacitatea de a difuza prin membranele
semipermiabile are ca urmare apariia
fenomenului de osmoz (deplasarea mol.
de H2O prin membran n soluia proteic).
Deplasarea apei este limitat de presiunea
hidrostatic (presiunea coloanei de ap).
Presiunea vare trebuie aplicat pentru a
opri curentul osmotic se numete presiune
osmotic.
Presiunea osmotic determinat de
proteine presiune oncotic.
Proprietatea de a forma
geluri

Proteinele prezint coloizi liofili, i deci pot forma
geluri.
Moleculele proteinei interacioneaz ntre ele
formnd reele structurale n interiorul crora se
imobilizeaz apa.
Gelatinizarea are loc mai uor n sol. pr. fibrilare
Formarea de gel se observ la coagularea
sngelui (formarea reelei de fibrin).
La nvechirea gelurilor are loc sinerezisa
expulzarea apei, datoprit contraciei mol din
reea i eliminarea apei.

Formarea gelului
depinde de :

concentraia soluiei (odat cu
creterea concentraiei);
temperatur (la scderea
temperaturii);
concentraia ionilor de hidrogen (n
punctul izoelectric se observ o vitez
maxim de formare a gelului);
prezena electroliilor (Ionul SO42-
contribuie n mod preferat la
transformarea solului n gel).
Xerogel
este gelul secat (uscat) - lipsit de ap.
se capt prin secare liofil a soluiilor
coloidale
Secarea liofil const n ndeprtarea apei
n vid din soluia coloidal ngheat.
se pstreaz un timp mai ndelungat ceea
ce prezint importan practic n industria
de preparare a medicamentelor de origine
proteic.
Ex: deferite proteine (albumina, gama-
globulinele i altele).

Denaturarea
proteinelor
Sub aciunea agenilor denaturani are
loc distrugerea nivelurilor superioare
de organizare ale moleculei proteice
(secundar, teriar, cuaternar) n afar
de structura primar cu pierderea
proprietile fizico-chimice i biologice
ale proteinei.
Agenii denaturani
se mpart n fizici i chimici.
1. factorii fizici: temperatura, presiunea,
radiaiile ultraviolete, radiaii X.
2. factorii chimici : acizi, bazele,
solvenii organici (eter, cloroform),
ureea, detergenii, metale grele (Pb,
Hg), amidele.
Trsturile proteinei
denaturate:

pierderea activitii biologice
micorarea solubilitii
schimbarea formei i mrimii
moleculelor
creterea reactibilitii unor grupe
pierderea capacitii de a se
cristaliza
Substanele ce pot
mpedica denaturarea

soluii de glucide
glicerina
a. grai
Pentru a evita denaturarea proteina se
pstreaz la rece, n soluii
concentrate de sruri la un pH anumit
Renaturare (renativare).

- este restabilirea structurii i
activitii biologice a proteinei
la nlturarea agentului
denaturant.
FOLFING I REFOLDING
FOLDING aranjarea
spaial corect de
novo a catenei:
Metodele de studiere a
componenei calitative i
cantitative a proteinelor
a) hidroliza (ruperea unei legturin ordinare
cu adiia unei molecule de ap)
b) cromatografie
c) electroforeza
d) salifiere
e) dializa
f) gel-filtrare

Cromatografie

- este identificarea i separarea
aminoacizilor.
Principiul: Metoda este bazat pe diferena
coeficientului de repartiie a aminoacizilor n
ap i solvent organic (butanol), care nu se
amestec cu apa.
Apa se absoarbe pe hrtia cromatografic,
constituind faza staionar, iar solventul
organic, migreaz pe ea. Concomitent cu
ultimul se mic i aminoacizii.
Viteza migrrii aminoacizilor pe banda
cromatografic este direct proporional cu
gradul de solubilitate n butanol.
Electroforeza
-
este metoda de separare
a particulelor ce posed
sarcin (proteine) ntr-un
cmp electric

Direcia migrrii Pr
depinde de pH-ul
mediului; Pr fiind
electrolii amfoteri n
mediul acid ele posed
sarcin + i se mic
spre C, n mediul bazic
posed sarcin -
migreaz spre A.
.
Electroforeza
-
Separarea Pr din serul
sanguin
La pH-ul 8,6 -8,9 n
cmpul electric continuu
Pr serului posed
sarcina negativ i vor
migra spre A cu o vitez
care depinde n aceeai
msur de mrimea
sarcinii electrice i de
masa molecular a
particulelor. n rezultat
se separ Albumine
(care agung
primele),apoi 1, 2;
i n final -globulinele.
Electroforeza
Salifierea
-
este metoda de precipitare a
P din soluie la aciunea c %
mari de sruri neutre
(sulfatul de amoniu, clorura
de sodiu i al.)
este un proces reversibil.
Mecanismul salifierii se
reduce la dehidratare
macromoleculelor proteice i
nlturarea sarcinii electrice.

SALIFIEREA
Salifierea
-
Asupra vitezei de precipitare
a proteinelor prin salifiere
acioneaz un ir de factori
ca: hidrofilitatea proteinei,
masa molecular, sarcina
electric; de aceea salifiere
diferitelor proteine are loc n
concentraii diferite de sruri.
De exemplu, albuminele se
precipit n soluie saturat
de sulfat de amoniu, pe cnd
globulinele - n soluie
semisaturat

SALIFIEREA

Dializa proteinelor
Dializa metoda de separare
i purificare a substanelor
macromoleculare de
substane micromoleculare
cu ajutorul membranelor
semipermeabile (celofan,
pergament etc.).
Prin porii acestor membrane
pot trece numai substanele
micromoleculare, ce au mas
molecular i dimensiuni
mici.
Membrana nu poate fi
traversat de proteine i alte
macromolecule.
Dializa proteinelor
Gel filtrare
Sitele moleculare sunt
formate din granule de
gel polizaharidic inert
hidratat. Granulele
posed pori de diferit
diametru.
Micromoleculele cu
dimensiuni mici ptrund
prin aceti pori,
macromoleculele- nu.

Gel filtrare
V migrrii micromol. prin
coloan este mai mic
dect a macromol. - fapt
ce permite purificarea
proteinelor de substane
micromoleculare.
Viteza migrrii
proteinelor prin coloan
este n funcie de masa
i dimensiunile lor se
mic mai repede cele
ce au m i d mai mari.