Spectromicroscopie UV-VIS

II.5.
SPECTROMICROSCOPIA
MOLECULAR N DOMENIUL
VIZIBIL
II.5.1. Definiie i cl!ific"e
Spectromicroscopia este o tehnic combinat care valorific concomitent
informaiile spectrale i microscopice din radiaia electromagnetic ce
trece printr-o proba de analizat transparent sau care se reflect de pe
materie opac. Avantajele spectromicroscopiei faa de analiza
spectrometric i microscopic, practicate fiecare separat, snt legate de
faptul ca odat cu eaminarea imaginii microscopice a unei zone se
poate efectua concomitent i analiza spectrometric a acelei zone
determinndu-se compoziia chimic calitativ i cantitativ a acesteia. !e
asemenea, spectromicroscopia face posibil urmrirea unor cinetici
chimice i biochimice din punct de vedere al compoziiei chimice a
reactanilor i produilor de reacie n strns corelare cu evoluia imaginii
microscopice a speciilor participante. "ot ca vantaj trebuie privit i
44
Spectromicroscopie UV-VIS
productivitatea dubla fa de cea realizat la analiza spectrometric i
eaminarea microscopic practicate fiecare separat. #ste evident c
analiza combinat spectromicroscopic n cazul lichidelor se poate face
numai in situa iile n care specia urmrit se gsete sub form de
particule microscopice distribuite n lichid. $a corpuri solide sau
pulverulente eaminarea concomitent se efectueaz fr probleme
deosebite pe principiul analizei radiaiei reflectate
$a ora actual, eist pe pia urmtoarele tipuri de
spectromicroscoape%
- Spectromicroscoape n domeniul spectral vizibil
- Spectromicroscoape n domeniul spectral infrarou
- Spectromicroscoape &aman
- Spectromicroscoape &'ntgen
- Spectromicroscoape de rezonan magnetic
II.5.#. S$ec%"&'ic"&!c&$e (e l)&"%&" $en%"*
(&'eni*l +i,i)il
Aceste echipamente au la baz constatarea c o radiaie
electromagnetic n domeniul vizibil care a traversat un mediu
transparent sau s-a reflectat de pe un material opac conine informaii
spectrale i imagistice care pot fi analizate fiecare separat dup ce
radiaia luminoas este scindat cu un sistem optic n dou canale optice
independente. &adiaia luminoas din fiecare din cele dou canale optice
formate are acelai coninut spectral i imagistic ca i acela din canalul
optic nedivizat, n schimb intensitatea radiaiei luminoas n canalele nou
formate reprezint jumtate din intensitatea radiaiei luminoase din
canalul optic nedivizat ceea ce se rsfrnge asupra sensibilitii
msurtorilor, cu efect negativ asupra limitei de detecie la analiza
spectral. (rin plasarea unui spectrometru pe unul din canalele rezultate
i a unui sistem video de analiz optoelectronic de imagine pe cellalt
canal optic este posibil obinerea concomitent att a spectrului ct i a
45
Spectromicroscopie UV-VIS
structurii microscopice a materiei analizate situat n punctul focal al
microscopului. )n figura **.+., este prezentat schema de principiu privind
scindarea unei radiaii luminose n dou radiaii independente ce pot fi
valorificate separat prin analiza spectral, respectiv prin eaminare
microscopic, cea din urm putnd fi efectuat vizual sau cu ajutorul unui
sistem optoelectronic de analiza de imagine echipat cu o camera video
sau aparat foto digital performant.

-i..II.5.1. Scindarea unei radiaii luminoase cu un sistem optic n dou radiaii
independente ce pot fi valorificate concomitent prin analiza spectral i eaminare
microscopic optoelectronic de imagine. ,-sistem optic de divizare, --spectrometru, .-
spectrogram, /-camera video, +-imagine microscopic, r,-radiaia luminoas iniial, r-,r- 0
radiaiile luminoase scindate.
1ele mai multe spectromicroscoape de tip modular snt formate dintr-un
microscop pe care, prin adaptari minimale, se monteaz un spectrometru
miniatural cu detector !iode-Arra2, informa iile optice de natur imagistic
i spectral fiind prelucrate prin intermediul unui calculator i a unui soft
specializat. )n afar de camera video i spectrometru, un spectromicroscop
trebuie s dispun de un sistem optic de divizare a radiaiei luminoase ce
conine informaia spectral i cea microscopic. )n figura **.+.- snt redate
diferitele modalitile de divizare folosite la ora actual n construcia
spectromicroscoapelor. !in variantele prezentate, cele mai utilizate soluii
46
Spectromicroscopie UV-VIS
snt cele cu prisma optic, figura **.+.-.a sau cu fibr optic, figura
**.+.-b.
-i..II.5.#. 3odaliti tehnice de scindare a radiaiei luminoase pentru analiza
spectromicroscopic n domeniul vizibil folosind diferite sisteme optice% a-cu prisma optic,
b-cu fibr optic, c-cu oglind semitransparent, d-cu un orificiu circular plasat pe o oglind
cu refleie total. ,-spectrometru miniatural cu detecor !iode-Arra2, --camera video, .-
prisma optic4 /-divizor pentru fibre optice, +-oglind semitransparent4 5- oglind cu refeie
total, cu orificiu circular central, 6-colimator optic, r,-fibr optic nedivizat, r-,r.-fibre optice
divizate
7n spectromicroscop se poate prezenta sub forma unui aparat unitar care
realizeaz ambele funcii concomitent sau poate fi realizat de utilizator n
cteva minute folosind o structur modular format dintr-un microscop
ce dispune de analiz optoelectronic de imagine, un spectrometru portabil
cu reea de difracie fi i detector !iode-Arra2 i unul din sistemele de
scindare a radiaiei luminose reprezentate n figura **.+.-. Astzi
majoritatea microscoapelor biologice i metalografice dispun de analiz
optoelectronic de imagine care presupune un sistem trinocular cu prism
de divizare, fig.**.+.-.a. 7n canal optic este destinat vizualizrii imaginii
prin dou oculare optice, iar unul din canale destinat montrii unei camere
video sau a unui aparat foto digital. 7na din cele mai comode i totodata
47
Spectromicroscopie UV-VIS
avantajoase soluii pentru obinerea i a unui canal spectrometric, pe
lng canalul videomicroscopic specific studiului microscopic, const n
nlocuirea unui ocular din sistemul binocular cu un dispozitiv cu fibr
optic la fel cu cel din 8ig.**.+.,- i 8ig. **.+.,.. (entru scindarea radiaiei
luminose sn folosite n practic i solu iile prezentate n 8ig.**.+.-.b,c,d,
II.5.#.1 S$ec%"&'ic"&!c&$e (e!%in%e nli,ei !&l* iil&"
Acest tip de spectromicroscoape se bazeaz pe analiza radiaiei
transmise. )n figura **.+... este prezentat schema de principiu a unui
asemenea spectromicroscop
48
Spectromicroscopie UV-VIS
-i.. II.5./. Schema de principiu a unui spectromicroscop modular cu transmisie destinat
analizei soluiilor transparente. ,-sursa de radiaie, -,.-oglinzi cu reflectie total, /,9-
colimatori optici, +-masa microscopului, 5-prisma optic, 6-camera video, :-reea de
difracie, ,;-detector !iode-Arra2, ,,-amplificator electronic, ,/-calculator electronic, ,+-
imprimant, 31-modul cuve, 1,,1--cuve cu soluie de analizat 3-microscop, S-
spectrometru, "-tehnica de calcul
modular destinat analizei soluiilor transparente, a unor structuri biologice
transparente sau a unor materiale polimerice transparente. )n acest scop
este folosit un microscop optic biologic <3=, ce dispune de cap trinocular
cu prisma 6 i analiz optoelectronic de imagine printr-o camera video 7,
pe care se monteaz prin operaii simple un spectrometru <S= miniatural,
49
Spectromicroscopie UV-VIS
echipat cu un detector !iode0Arra2 10. (rin scindarea informaiei optice n
prisma 6 se obin dou canale optice independente, pe unul realizndu-
se analiza spectrometric cu spectrometrul <S= i calculatorul 14 electronic,
iar pe celalalt structura microscopic a probei cu ajutorul structurii
microscopice, a camerei video 7 i a calculatorul 14 electronic
II.5.#.#. Mic"&!c&$e f&%&'e%"ice (e!%in%e nli,ei !&l* iil&"
3icroscoapele fotometrice snt structuri mite specializate pe analiza
unui numr limitat de specii spectrometrice dintr-o soluie, din materiale
solide sau pulverulente. (reul de cost al acestor structuri de analiz este
mai mic dect cel al spectromicroscoapelor. 7n microscop fotometric
folosete in locul unui spectrometru cu reea de difracie fi i detector
!iode- Ara2 folosete un simplu detector tip fotodiod.
50
Spectromicroscopie UV-VIS
-i..II.5.0. Schema de principiu a unui microscop fotometric modular cu transmisie
destinat analizei fotometrice cantitative a unei singure specii chimice sau biologice
concomitent cu urmrirea microscopic. ,-sursa de radiaie, .-oglinda cu refleie total,
/,9-colimatori optici, +-masa microscopului, 5-prisma optic , 6-camera video, ,,-amplificator
electronic, ,--filtru optic, ,.-fotocelul, ,/-calculator electronic, ,+-imprimant, 31-modul
cuve, 1,,1-- cuve cu soluie de analizat, 3-microscop, 8-fotometru, "-tehnica de calcul.
)n figura **.+./. este redat schema optic a unei aplicaii fotometrice
destinat analizei cantitative a unei singure specii chimice sau biologice
concomitent cu urmrirea microscopic. Se observ c n aceast
51
Spectromicroscopie UV-VIS
structur de analiz spectrofotometrul miniatural S din 8ig.**.+... este
nlocuit cu o fotocelul 13.
II.5.#./. S$ec%"&'ic"&!c&$e (e!%in%e nli,ei '%e"iei
ne%"n!$"en%e
Spectromicroscopia poate fi practicat i pentru materie
netransparent de natur solid sau pulverulent. !in punct de vedere a
diversitii problematicii de rezolvat aceasta situaie este chiar dominant
fa de analiza lichidelor. )n figura **.+.+ este prezentat schema de
principiu a unui spectromicroscop de refleie la care radiaia luminoas
incident cade pe prob, preia de pe suprafaa acesteia informaii de
imagistic i informaii spectrale i este

52
Spectromicroscopie UV-VIS
-i..II.5.5 Schema de principiu a unui spectromicroscop modular cu refleie destinat
analizei materiei netransparente. ,-surs de radiaie, -,:-colimatori optici, .-oglind
semitransparent, proba opac de analizat, +-masa microscopului, 5-prism optic, 6-
camer video, 9-oglind cu refleie total, ,;-retea de difracie, ,,-detector !iode-Arra2, ,--
amplificator electronic, ,.-calculator electronic, ,/-imprimant, 3-microscop, S-
spectrometru, "-tehnica de calcul.
reflectat ctre un sistem de microscopie optic unde radiaia este
scindat n dou canale optice pe unul realizndu-se urmrirea i
nregistrarea imaginii microscopice, iar pe cellalt canal fiind efectuat
analiza spectrometric a materiei solide analizate. Schema de principiu
este foarte asemntoare cu schema de principiu pentru
spectromicroscoapele optice cu transmisie, diferenele constnd n
sistemul de iluminare i n lipsa cuvelor cu soluie la spectromicroscopul cu
refleie, n locul acestora fiind folosite chiar materialele solide de cercetat
sau n cazul cercetrii materialelor pulverulente, cuve netransparente i
nereflectorizante n care este depus materialul urmrit.
II.5.#.0. S$ec%"&'ic"&!c&$e (e fl*&"e!cen1
Att spectromicroscoapele cu transmisie ct i cele cu refleie pot fi
folosite i pentru studiul fotometric de fluorescen concomitent cu
eaminarea microscopic a probei. "rebuie specificat c materialele ce
prezint fluorescen se pot gsi n stare lichid, solid, pulverulent sau
gazoas, ca atare, n funcie de starea de agregare trebuie aleas o
structur specific de analiz spectromicroscopic. $a studiul n
53
Spectromicroscopie UV-VIS

-i.. II.5.2. Schema de principiu a unui spectromicroscop modular cu refleie destinat
analizei materiei fluorescente pulverulente sau solide% ,-surs de radiaie monocromatic,
-,:-colimatori optici, .-filtru dicroic, /-proba fluorescent de analizat, +- filtru optic cu
lungimea de und specific speciei de analizat, 5-prism optic, 6-camer video, 9-oglind
cu refleie total, ,;-reea de difracie, ,,-detector !iode-Arra2,,--amplificator electronic,,.-
calculator electronic, ,/-imprimant, 3-microscop, S-spectrometru, "-tehnic de calcul.
fluorescen sursa de radiaie policromatic este nlocuit de o surs de
ecitaie monocromatic de tip led sau diod laser, iar pentru analiza de
concentraie se seteaz prin programul de calcul lungimea de und
corespunztoare radiaiei de fluorescen. )n traseul luminos spre
dispozitivul optic de scindare se intercaleaz un filtru optic specific speciei
chimice sau biologice analizate, scopul acestui filtru este cel de separare a
radiaiei specifice utile pe care o las s treac, de alte lungimi de und
nespecifice. )n figura **.+.5. este prezentat schema de principiu a unui
spectromicroscop modular cu refleie destinat analizei materiei
fluorescente pulverulente sau solide. Afar de prezena filtrului dicroic 3, a
filtrului specific 5 i a soft-ului specific, structura de analiz
54
Spectromicroscopie UV-VIS
spectromicroscopic a speciilor fluorescente solide sau pulverulente este
identic cu structura de analiz a materialelor netransparente prezentat n
capitolul precedent, vezi i fig.**.+.+. (entru analiza materialelor
fluorescente lichide sau solide transparente structura de analiza din
fig.**.+.5 difer doar prin modul de iradiere de jos n sus astfel nct,
radiaia monocromatic s treac prin proba analizat.
II.5.#.5. C*+e i cel*le (e c*".e"e $en%"* !$ec%"&'ic"&!c&$e
Att spectromicroscoapele cu transmisie ct i cele cu refleie pot fi
folosite i pentru studiul spectrofotometric de fuorescen concomitent cu
eaminarea microscopic a probei. )n acest scop, sursa de radiaie
policromatic clasic este nlocuit de o surs de ecitaie monocromatic
de tip $#! sau diod laser, iar pentru analiza de concentraie se seteaz
prin programul de calcul lungimea de und a radiaiei de fluorescen
specific pentru specia de analizat.
$a analiza probelor lichide pe structuri spectromicroscopice trebuie avut n
vedere faptul c iradierea cuvelor cu soluie se face prin peretele de jos al
cuvei i nu prin peretele lateral aa cum este cazul la spectrofotometrele
sau fotometrele clasice. Aa cum este cunoscut, legea $ambert 0 >eer%
c b a A = <**.+.,=
unde % A - absorbana optic
A - coeficient molar de absorbie
> - grosimea de strat a lichidului analizat
1 - concentraia speciei chimice analizate

reclam o grosime de strat absolut constant de la o prob la alta, lucru
care este uor de realizat la cuvele clasice cu perei plani paraleli i
iluminare orizontal i greu de realizat pentru cuvele cu iluminare vertical
55
Spectromicroscopie UV-VIS
aezate pe masa microscopului. $a aceste cuve grosimea de strat este
influenat de precizia de dozare volumetric a soluiei din cauza
impreciziei dozrii volumetrice a lichidului. !in acest motiv s-au dezvoltat
module de cuve speciale de tipul celor din figura **.+.6 i figura **.+.9
destinate aplicaiilor spectromicroscopice de transmisie. Aceste module
conin cel putin doua cuve C1,C2, <fig.**.+.6 =, corpul lor

-i..II.5.3. 3odul cu dou cuve folosit la spectromicroscoapele modulare cu transmisie,
destinat analizei soluiilor transparente% ,5-corpul modulului, ,6-lamela subire din sticl
pentru ndeprtarea ecesului de solutie, 1,-cuva pentru solvent, 1--cuva pentru soluia de
analizat, c,-canal pentru preluarea ecesului de solvent i de soluie de analizat, b-grosimea
de strat lichid
16 fiind confecionat din metacrilat de metil transparent prin injecie n
matri. !up umplerea n eces a celor dou cuve cu solvent, respectiv
cu soluie de analizat, astfel
56
Spectromicroscopie UV-VIS
-i..II.5.4 3odul cu opt cuve, folosit la spectromicroscoapele modulare cu transmisie,
destinat determinrii grosimii optime de strat i a concentraiei limit de liniaritate la analiza
soluiilor transparente, ,:-lamel subire din sticl pentru ndeprtarea ecesului de soluie,
1,.....19-cuve pentru soluie de analizat, c.-canal pentru preluarea ecesului de solvent i
de soluie de analizat, b-grosimea de strat lichid, -;-corpul modulului
nct lichidul s formeze un menisc conve la limita superioar a cuvelor,
se mpinge lamela 17, din sticla optic, tangent cu suprafaa peretelui
superior astfel ca ecesul de solvent i de lichid de analizat s fie refulat n
canalul colector c1, n felul acesta obinndu-se o grosime strat b bine
definit. *radierea volumului de lichid din cele dou cuve n vederea
fotometrrii se face pe rnd fr ca lamela 17 din sticl optic s fie
ndeprtat, radiaia trecnd i prin aceasta. (entru mrirea productivitii
la analize s-au construit module cu pn la opt cuve nseriate toate avnd
aceeai grosime de strat b. !e asemenea, s-a dezvoltat un modul special
cu opt grosimi diferite de strat, modul prezentat n figura 5. Acest modul
folosete determinrii rapide a limitei de liniaritate a legii $ambert >eer din
punct de vedere a concentraiei i a grosimii de strat. )n acest scop cuvele
C1.....C8 se umplu n eces uor cu soluie preparat cu substan pur,
57
Spectromicroscopie UV-VIS
de o anumit concentraie a speciei chimice urmrite, se ndeprteaz
ecesul cu lamela 19 i se fotometreaz pe rnd cuvele cu soluie
msurnd absorbana optic A a fiecrei cuve, dup care se vars soluia
din cuvele modulului, se spal cu ap bidistilat i se umplu cuvele din

-i..II.5.5. 8amilia de curbe obinut cu ajutorul spectromicroscopului de transmisie i a
unui modulul de cuve n trepte n scopul determinrii limitei de liniaritate a legii $ambert
>eer din punct de vedere a concentraiei i a grosimii de strat.
nou cu soluie de alta concentraie cunoscut a aceleiai specii. )n final se
reprezint, manual sau electronic, valorile de absorbanta <A= n funcie de
concentraia <c= i de grosimea de strat <b= rezultnd o familie de curbe de
natura celei din figura **.+.:. (rin stabilirea punctului limitei de liniaritate
pentru fiecare curb i unirea acestor puncte se obine o linie care
stabilete limita de liniaritate pentru concentraie i grosimea de strat
pentru specia chimic analizat. ?dat stabilite aceste limite, operatorul
58
Spectromicroscopie UV-VIS
poate lua decizia optim n alegerea dimensiunii cuvei sau a concentraiei
care s permit determinrile n limitele liniaritii legii $ambert->eer.
(entru studiul spectromicroscopic al soluiilor tulburi n condiii de
laborator poate fi folosit soluia prezentat n figura ,;, la care transmisia
informaiilor se realizeaz cu un sistem de fibr optic 12, 26, pentru probele
-+ fiind folosite nite cuve 24 cu grosimea stratului de soluie studiat de ,
mm.
-i..II.5.16. Schema de principiu a spectromicroscopului folosit la studiul spectrofotometric
al soluiilor tulburi n cuve lamelare subiri deschise. ,-sursa de radiaie, 6-spectrometru cu
reea de difracie fi i detector !iode - Arra2, 9-spectrogram, :-camer video, ,;-imagine
microscopic, ,--fibr optic ,.-lentil colimatoare, -/-cuv lamelar din sticl, -+-soluie de
analizat, -5-fibr optic, -6-lentil de focalizare.
(entru studiul spectromicroscopic continuu al soluiilor tulburi, in situ, este
recomandat spectromicroscopul prezentat n figura **.+.,,.
59
Spectromicroscopie UV-VIS
-i..II.5.11. Schema de principiu a spectromicroscopului folosit n studiul spectrofotometric
al soluiilor tulburi n cuve lamelare subiri nchise, cuplate n b2-pass ntr-un proces
tehnologic, pentru analiz continu in-situ, n regim on-line, ,-surs de radiaie, 6-
spectrometru cu reea de difracie fi i detector !iode-Arra2, 9-spectrogram, :-camer
video, ,;-imagine microscopic, ,--fibr optic, ,.-lentil colimatoare, -5-fibr optic, -6-
lentil de focalizare, -9-soluie de analizat n curgere provenit din procesul tehnologic, -:-
celul de curgere capilar din sticl, .;-pomp peristaltic, .,-reactor chimic, biochimic sau
rezervor ce conine materia lichid de analizat
Soluia de analizat provenit dintr-un reactor chimic, reactor biochimic sau
rezervor 31 este trimis de ctre o pomp peristaltic 30 n regim de b2-
pass printr-o celul de curgere capilar 29 din sticl, unde este traversat
de un fascicul luminos policromatic provenind de la o surs 1 de radiaie
policromatic ce preia n mod continuu din proba 28 de analizat structura
microscopic a particulelor n suspensie precum i compoziia spectral a
mediului lichid prin intermediul unei lentile de focalizare 27, cuplat la o fibr
optic 26 care se scindeaz ulterior n dou fibre optice. !e la una din
fibrele optice scindate este decodat informaia spectrometric cu ajutorul
unui spectrometru cu reea de difracie fi i detector !iode0Arra2, iar de pe
60
Spectromicroscopie UV-VIS
cealalt este decodat informaia de imagistic spectral cu ajutorului unui
detector 11!, al unei camere video sau a unui aparat foto digital, rezultatul
fiind n primul caz o spectrogram 8 a mediului lichid purttor, iar n cel de-al
doilea caz o imagine microscopic 10 a particulelor n suspensie. Acest tip de
studiu spectromicroscopic permite studii cinetice continue n funcie de
diveri parametri de proces.
II.5.#.2. Di!$&,i%i+e &$%ice f&l&!i%e l !$ec%"&'ic"&!c&$ele (e
l)&"%&"
!ispozitivul optic din figura **.+.,- se refer la o structur opto-
mecanic destinat adaptrii unui sistem spectrometric modular portabil,
echipat cu fibr optic, unui microscop clasic cu sistem optoelectronic de
achiziie de imagine pentru a putea realiza eaminri microscopice
concomitent cu analize spectrometrice, figura **.+.,.. )n acest scop
este folosit un echipament ce poate fi montat pe tubul <-= optic al oricrui
microscop sau stereomicroscop n locul unui ocular al acestuia.
-i..II.5.1#. @edere cu seciune a dispozitivului de
adaptare spectrometric. ,-tub de adaptare la canalul
optic, --tub optic aparinnd unui microscop sau
stereomicroscop binocular sau trinocular, .- corpul
dispozitivului optic de adaptare, /-tij, +-fibr optic,
5-nveli polimeric, 6-lentil optic, 9- piuli de
blocare4
!ispozitivul optic este format dintr-
un tub de adaptare 1 n care se gsete
nfiletat un alt corp 3, iar n acesta se
gsete nfiletat la rndul ei o tija 4 n
centrul creia se gsete o fibr 5 optic
protejat de un nveli 6 polimeric,
dispozitivul mai conine o lentil 7 optic
i o piuli 8 de blocare, iar sistemul
61
Spectromicroscopie UV-VIS
spectrometric de tip miniatural compact este format dintr-o lentil :
optic condensoare, o reea 10 de

-i.. II.5.1/. Schema de principiu a canalului spectrometric realizat cu dispozitivul optic de
adaptare% ,-tub de adaptare la canalul optic, --tub optic aparinnd unui microscop sau
stereomicroscop binocular sau trinocular, .-corpul dispozitivului optic de adaptare, 5-nveli
polimeric, 6-lentil optic, :-lentil optic condensoare, ,;-reea de difracie fi,,,-oglind
optic plan de refleie, ,--detector de tip !iode-Arra2, ,.-interfa de tip 7S>, ,/-cablu
electric, ,+-calculator electronic
difracie fi, o oglind 11 optic plan de refleie, un detector 12 de tip
!iode-Arra2 i o interfa 13 de tip 7S> conectat printr-un cablu 14
electric la un calculator 15 electronic.
II.5./. S$ec%"&'ic"&!c&$e $&"%)ile
62
Spectromicroscopie UV-VIS
Spectromicroscoapele portabile au aplicaii deosebite pentru
analiaza in situ a materiei solide, dar pot fi folosite n unele situaii i
pentru analiza soluiilor colorate, mai ales a celor concentrate. Aplicaiile
se ntind de la controlul calitii alimentelor solide la forensic, la
atestarea autenticitii operelor de art, la controlul drogurilor, la analiza
mineralogic etc. )n figura **.+.,/ este prezentat schema de principiu, n
figura **.+.,+ o vedere a sondei aparatului portabil, n figura **.+.,5a, o
vedere a aplicaiei privind folosirea spectromicroscopului portabil la
spectrofotometrarea pe vertical a solu iilor, iar n figura **.+.,5b, o
vedere a aplicaiei privind folosirea spectromicroscopului portabil la
spectrofotometrarea i eaminarea microscopic a stratului limit pe
vertical la recipiente, reactoare chimice sau biochimice.
Spectromicroscopul portabil n structura sa de baz se compune
dintr-o sonda S, o parte E electronic i un calculator C portabil ce
dispune de soft specific. Sonda E este format dintr-un corp 2 cilindric n
interiorul cruia o fibr 3 optic se divide n dousprezece fibre 41-12 optice
dispuse radial n jurul unei alte fibre 5 optice centrale, un grup 6 de
lentile optice de focalizare, prevzute cu o armtur 7 filetat, o piuli 8 de
blocare i un divizor 9 optic ce mparte radiaia n dou fibre optice 10 i
11. (artea E electronic este format la rndul ei dintr-o surs 12 de
radiaie policromatic, un spectrometru 13 miniatural cu reea de difracie
fi i detector !iode-Arra2 i o camera 14 video miniatural. Acest
aparat dispune i de posibilitatea de lucru pe vertical folosit la
inspectarea microscopic a depunerilor sau a coroziunii pereilor
recipientelor adnci umplute cu lichid precum i analizei spectrometrice a
compoziiei chimice a lichidului din imediata vecinatate a peretelui. )n
aceast eecuie corpul 2 al aparatului este fiat perpendicular pe o tij
telescopic ce poate asigura lungimi de pn la ordinul metrilor.
63
Spectromicroscopie UV-VIS

-i..II.5.10. Schema de principiu a unui spectromicroscop portabil. ,-materialul cercetat, --
corpul cilindric al sondei, .-fibr optic de iluminare, /,-,--fibre optice de iluminare obinute
prin divizarea fibrei optice <.=, +-fibr optic central, 5-lentile de focalizare, 6-armatur
filetat, 9-piuli de blocare, :-divizor optic, ,;,,,-fibre optice, ,--surs de radiaie
luminoas, ,.-spectrometru miniatural cu detector !iode-Arra2, ,/-camer video
miniatural, f-punct focal, S-sond, #-parte electronic, 1-calculator portabil cu soft
specific.
64
Spectromicroscopie UV-VIS

-i..II.5.15. @ederea sondei unui spectromicroscop portabil i sec iune prin sond ,-
materialul cercetat, --corpul cilindric al sondei, .-fibr optic de iluminare, /,-,--fibre optice
de iluminare obinute prin divizarea fibrei optice <.=, +-fibr optic central, 6-armatur
filetat, 9-piuli de blocare, f-punct focal
Aplicaia pentru spectrofotometrarea solu iilor la diverse adncimi, fig.
,:a, se compune dintr-un optocuplor 15, un corp 16 prelungitor pentru
fibrele 41-12 i + optice, corp care este prevzut la partea inferioar cu un
dispozitiv 17 optic ce prezint o fereastr f de inundare i o oglind 18
miniatural pentru reflectarea fasciculului luminos dup ce a trecut printr-o
grosime de strat de solu ie de analizat egal ca valoare cu deschiderea
ferestrei f.
65
Spectromicroscopie UV-VIS
Aplicaia pentru spectrofotometrarea i eaminarea microscopic a
depunerilor pe pereii reactoarelor chimice, a schimbtoarelor de cldur
precum i pentru spectrofotometrarea stratului lichid limit cu aceti perei,
fig.,:b, se compune dintr-un optocuplor 15, un corp 16 prelungitor pentru
fibrele 41-12 i 5 optice, corp care este prevzut la partea inferioar cu un
dispozitiv 19 optic ce conine o oglind 20 cu refleie total pentru
devierea radia iei luminoase spre lentila 6 a armturii 7 filetate, radiaia
focalizat n punctul focal f reflectndu-se din zona stratului 21 limit dintre
lichidul cercetat i peretele 22 al reactorului sau recipientului de stocare.
3odul de lucru cu spectromicroscopul n structura de baz este
urmtorul% se porne te partea electronic E i calculatorul C dup care se
ia sonda S n mn i se apropie ncet partea frontal a acesteia de
materialul 1 de analizat. (entru achiziia automat a datelor este necesar
ca zona eaminat s se gseasc tot timpul n punctul focal f al
obiectivului optic al spectromicroscopului portabil. )n acest scop, pe tot
timpul deplasrii manuale a sondei S spre materialul 1 analizat are loc n
mod automat, prin intermediul soft-ului specific, derivarea valorii
intensitii fotocurentului n funcie de timp. )n punctul focal intensitatea
radiaiei luminoase reflectate este maim, ca atare i fotocurentul mediu
Imed dat de sensorul 11! al camerei video are valoare maim, iar
valoarea derivatei a ,-a intr-un maim are ntotdeauna valoarea zero,
ceea ce n cazul concret duce la epresia%
0 =
dt
dI
med
<**.+.-=
1a atare, atingerea valorii zero a derivatei fotocurentului n funcie de timp
poate fi folosit pentru achiziia automat a spectrului i a imaginii ntr-
un timp de cca ,A+; secunde, momentul achiziiei i confirmarea
acesteia fiind semnalizate sonor de ctre difuzorul calculatorului C
portabil. Atunci cnd se dorete modificarea ordinului de mrire
66
Spectromicroscopie UV-VIS
microscopic se desfileteaz armtura 7 mpreun cu grupul de lentile 6
optice de focalizare de pe corpul 2 al sondei S i se schimb cu o nou
armtur, ce con ine un alt grup de lentile, cu alt ordin de mrire. (entru
ob inerea n noua situa ie a unui drum optic optim se apropie i se
deprteaz ncet sonda de materialul ncercat urmrind pe monitor
claritatea imaginii video, iar concomitent cu deplasarea sondei se
nfileteaz i se desfileteaz ncet noua armatur de pe corpul sondei. $a
obinerea unei imagini clare, armatura 7 se blocheaz prin strngerea ei
manual prin intermediul piuliei 8.
67
Spectromicroscopie UV-VIS
a= b=
-i..II.5.12. Aplicaii ale spectromicroscopului portabil la spectrofotometrarea pe vertical a
soluiilor <a= la spectrofotometrarea i eaminarea microscopic a stratului limit pe
vertical la recipiente, reactoare chimice sau biochimice <b=. --corpul cilindric al sondei, /,-,--
fibre optice divizate de iluminare, +-fibra optic central, 6-armatur filetat, 9-piuli de
blocare, ,+-optocuplor, ,5-corp prelungitor pentru fibrele / ,-,-, ,6-dispozitiv optic de
refleie, ,9-oglind miniatural, 19-dispozitiv optic, -;-oglind cu refleie total, f-punct
focal, -,-strat limit, ---perete recipient sau reactor4
68
Spectromicroscopie UV-VIS
3odul de lucru cu spectromicroscopul la aplicaia privind
spectrofotometrarea la diferite adncimi a solu iilor, <fig.**.+.,5a, este
urmtorul% se desfileteaz armtura 7 de pe corpul 2 i se nfileteaz n
locul acesteia optocuplorul 15 al unei tije 16 de adncime, dup care se
nfileteaz n partea inferioar a tijei dispozitivul optic 18, operaie urmat
de scufundarea tijei 16 n soluia de analizat pn la adncimea dorit,
dup care se realizeaz spectrofotometrarea solu iei cercetate.
3odul de lucru cu spectromicroscopul portabil folosit la aplicaia
privind spectrofotometrarea i eaminarea microscopic a straturilor limit
situate ntre volumul de baz al soluiei i pereii vaselor de depozitare sau
pere ii reactoarelor chimice sau biochimice, fig.**.+.,5.b, este urmtorul% se
desfileteaz armtura 7 filetat de pe corpul 2 i se nfileteaz n locul
acesteia optocuplorul 15 al unei anumite lungimi de tij 16, dup care se
nfileteaz n partea inferioar a tijei dipozitivul optic 20 pe care se
nfileteaz la rndul lui armtura 7 filetat, preluat de la structura de
baz a aparatului reprezentat n figura 11 i figura 12, opera iile fiind
urmate de scufundarea tijei 16 n soluia de analizat pn la adncimea
dorit i apropierea lent pe orizontal a armturii 7 filetate de stratul 21
limit dintre lichidul cercetat i peretele 22 al recipientului. $a
traversarea punctului focal al lentilei 6 are loc achiziia automat a
spectrului stratului limit dintre solu ie i peretele vasului de depozitare sau
reactorului chimic sau biochimic precum i achiziia automat a structurii
microscopice a depunerii de pe perete sau dup caz i structura
microscopic a stratului limit atunci cnd acesta conine suspensii.
II.5.0. A$licii le !$ec%"&'ic"&!c&$iei &$%ice
II.5.0.1. S$ec%"&'ic"&!c&$ )i&l&.ic (e %"n!'i!ie
69
Spectromicroscopie UV-VIS
)n figura **.+.,6 este reprezentat o aplicaie specific analiticii
alimentare la care este studiat cinetica formrii micotoinelor n diverse
medii chimice i biologice de lucru. )n acest scop este folosit ca structur
de baz lanul optic al unui microscop biologic cu sistemul de iradiere a
probei p de analizat format dintr-o surs de radiaie 1 policromatic i o
fibr optic 2, informaia microscopic i spectrometric fiind preluat de la
obiectivul optic al microscopului printr-o fibr optic 6 care se divide ulterior
n dou fibre identice. (e una din fibre informaia optic este transmis
ctre un spectrometru miniatural cu detector !iode-Arra2 7, iar pe cealalt
fibr informaia optic este transmis ctre o camera video 9. (e masa
22 de baz a microscopului este montat o alt mas 21 rotativ cu
ajutorul creia probele p de analizat snt
70
Spectromicroscopie UV-VIS
71
Spectromicroscopie UV-VIS
-i.. II.5.13 Aplicaie privind folosirea unui spectromicroscop cu transmisie, echipat cu
fibr optic, la studiul cinetic al evoluiei micotoinelor ntr-un mediu lichid n funcie de
diveri parametrii% ,-surs de radiaie luminoas, --fibr optic de iluminare, .-microscop
optic cu transmisie, 5-divizor pentru fibre optice, 6-spectrometru miniatural cu detector
!iode-Arra2, 9-spectrogram, :-camer video, ,;-imagine microscopic, ,:-sistem de
dozare cu specii chimice sau biologice pentru studiul influenei acestora asupra evoluiei
micotoinelor, -;-cuve din sticl coninnd speciile de analizat, -,-mas rotativ, ---masa
microscopului, -.-servomotor pentru acionarea mesei rotative.
aduse pe rnd, la timpi bine stabilii, n dreptul canalului optic de iradiere,
cu ajutorul unui servomotor 23 pas cu pas. 7n sistem de dozare
volumetric 19 face posibil dozarea precis i introducerea unor specii
chimice sau biologice n probele analizate ceea ce permite studiul influenei
cineticii concentraiei micotoinelor alturi de studiul evoluiei
microscopice a speciilor biologice care le genereaz n funcie de
diferii factori eterni.
II.5.0.#. S$ec%"&'ic"&!c&$ )i&l&.ic (e "efle7ie
)n figura **.+.,9 este prezentat schema de principiu a unui
aranjament privind folosirea unui spectromicroscop cu refleie, echipat
cu fibra optic, pentru studiul cinetic al degradrii unui produs alimentar
solid in funcie de temperatur.

72
Spectromicroscopie UV-VIS
-i..II.5.14. Aplicaie privind folosirea unui spectromicroscop cu refleie, echipat cu fibra
optic, folosit la studiul cinetic al degradrii unui produs alimentar solid n funcie de
temperatur% ,-surs de radiaie luminoas, /<+=-optica microscopului, 6-spectrometru
miniatural cu detector !iode-Arra2, 9-spectrogram, :-camer video, ,;-imagine
microscopic, ,/-cuva cu proba de analizat, ,+,,5- fibre optice speciale cu ase fibre <a=
de iluminare i cu o fibr <b= pentru transmiterea informaiei optice, ,6-sistem de
termostatare a probei, ,9-termostat electronic
73
Spectromicroscopie UV-VIS
II.5.0./. S$ec%"&'ic"&!c&$ 'e%l&."fic
*n figura **.+.,: este prezentat o aplicaie spectromicroscopic pentru
depuneri galvanice, scopul investigrii fiind n acest caz studiul influenei
compoziiei chimice a stratului limit din imediata vecintate a catodului
asupra dimensiunii i formei grunilor cristalini electrodepui pe catod.
#chipamentul modular este format dintr-o surs de radiaie policromatic 1,
dou fibre optice cu bifurcare4 prima fibr cu bifurcare 2 realizeaz pe o
ramur iradierea catodului 3 printr-o lentil colimatoare 4, iar pe cealalt
ramur realizeaz preluarea informaiei sub form de radiaie reflectat de pe
acesta, cea de-a doua fibr optic cu bifurcare 5 realizeaz pe o ramur
transmiterea informaiei optice preluate spre un canal microscopic 6 prevzut
cu camer video 11! i soft specific de analiz optoelectronic a imaginii
microscopice, iar pe cea de-a doua ramur realizeaz transmiterea
informaiei spectroscopice spre un spectroscop
74
Spectromicroscopie UV-VIS
-i.. II.5.15. Schema de principiu a spectromicroscopului electrochimic. ,-sursa de radiaie
policromatic, -,+-fibre optice cu bifurcare, /-lentil colimatoare, 5-canal microscopic, 6-
canal spectrometric, 9-spectrogram, :-imagine video a structurii microscopice
7@-@*S 7, prevzut cu reea de difracie, detector !iode-Arra2 i soft de
analiz automat a spectrelor. &ezultatul se valorific sub forma unor
spectrograme 8 ce reflect n timp real evoluia compoziiei i concentraiei
electrolitului din imediata vecintate a catodului corelat cu o succesiune
corespunztoare de imagini video 9 a structurii microscopice a germenilor
cristalini ce se formeaz pe catod ca urmare a depunerii electrochimice a
metalului sau aliajului metalic.
II.5.0.0. S$ec%"&%e"'&'ic"&!c&$ 'e%l&."fic
75
Spectromicroscopie UV-VIS
*n figura **.+.-; este prezentat o aplicaie specific studiului
spectromicroscopic al unor metale i aliaje la temperaturi ridicate n scopul
corelrii dimensiunii grunilor cristalini cu temperatura precum i cel al
determinrii compoziiei elementale a diferitelor aliaje studiate pe baza
spectrometriei de emisie atomic a aliajului studiat nclzit. )n acest scop
este folosit un microscop metalografic 1 echipat cu un dispozitiv - de
nclzire progresiv electro-rezistiv prin contact a probei de analizat 3, un
sistem de rcire 4 al obiectivului optic 5 al microscopului, o fibr optic
special 6 cu trifurcaie8 un spectroscop miniatural 7@- @*S-*& 7 prevzut
cu reea de difracie, detector !iode-Arra2 i soft specific de analiz
spectral calitativ i cantitativ ce valorific semnalul optic de pe
ramura a a fibrei de sticl ntr-o spectrogram 8 precum i n alte
informaii calitative i cantitative referitoare la
76
Spectromicroscopie UV-VIS


-i..II.5.#6. Schema de principiu a spectrotermomicroscopului. ,-microscop metalografic, 2-
dispozitiv de nclzire, .-prob de analizat, /-sistem de rcire, 5-obiectivul optic al
microscopului, 5-fibr optic cu trifurcaie8 6-spectrometru miniatural, a-ramura de fibr
optic din care se valorific informaia spectral, b-ramura de fibr optic din care se
valorific informaia microsopic, c-ramura de fibr optic din care se valorific informaia
de temperatur, 9-spectrogram, :-camer video sau aparat foto digital, ,;-structur
metalografic, ,,-sistem optoelectronic de conversie, ,--termogram
compoziia chimic a probei, un sistem optoelectronic 9 cu camer 11! de
nalt rezoluie care transform informaia de pe ramura b a fibrei optice
n semnal video, rezultatul procesrii electronice fiind o structur
metalografic 10 afiat pe displa2 i dup caz tiprit, un sistem
77
Spectromicroscopie UV-VIS
optoelectronic 11 de conversie a componentei infraroii a semnalului de pe
ramura c a fibrei optice n uniti de temperatur, redate printr-o
termogram 12 care reflect evoluia nclzirii probei 3 n timp.
II.5.0.5. Si!%e' !$ec%"&'ic"&!c&$ic $en%"* $"&)e c* +&l*'
"e(*!
Sistemul combinat spectroscopic i microscopic este destinat
analizei spectrometrice calitative i cantitative a unor volume mici de prob
lichid de ordinul microlitri precum i realizrii concomitente a imaginilor
video-microscopice a probei analizate. )n acest scop este folosit o
structur optoelectronic modular, figura **.+.-,, interconectat cu fibre
optice, care permite iradierea unui strat sub ire de solu ie de analizat,
laminat ntre dou lentile colimatoare, urmat de analiza spectrometric
i microscopic a informa iei optice transmise prin prob. Sistemul
spectromicroscopic este compus dintr-o surs de radia ie policromatic, din
ni te fibre optice de iradiere a probei i de preluare a radia iei trecute prin
prob, un cle te spectrometric, figura **.+.--, un spectrometru portabil cu
detector !iode-Arra2, o camera video cu detector 11! i o unitate de
calcul. 1le tele spectrometric folose te pentru iradierea unei pelicule
sub iri din proba de analizat, pelicul a crei grosime este stabilit i
msurat cu un urub micrometric. (e bra ul superior al cle telui
spectrometric se gse te montat o lentil colimatoare miniatural
cuplat la fibr optic, iar pe bra ul inferior se gse te montat o alt
lentil colimatoare, prevzut cu o cup, n care se gse te proba de
analizat. @aloarea razei de curbur a cupei
89
Spectromicroscopie UV-VIS
-i..II.5.#1. Schema optoelectronic a spectromicroscopului pentru probe cu volum redus de
prob% 7&-unitate de radia ie, 1S-cle te spectrofotometric, 7S-unitate spectral, 73-
unitate microscopic, 71-unitate de calcul, ,-surs de radia ie policromatic, --bra
articulat mobil, .-bra articulat fi, +- urub micrometric, 5-lentil colimatoare, 6-fibr optic, 9-
lentil colimatoare, :-fibr optic cu scindare, ,;,,,-fibre optice scindate, ,--
spectrofotometru miniatural cu detector !iode-Arra2, ,.-camer video cu detector 11!, ,/-
set de obiective optice interschimbabile, ,+-calculator electronic, ,5-imprimant
electronic,,6-buton de blocare, (-program de calcul specific aplica iei fotometrice
este egal cu valoarea razei de curbur a lentilei colimatoare din bra ul
superior, astfel nct la o apropiere avansat a celor dou lentile
colimatoare s se inchid ntre ele o pelicul laminar sub ire de grosime
uniform din proba de analizat. $entila colimatoare din bra ul inferior se
continu i ea cu o fibr optic care ulterior se scindeaz n dou fibre
optice independente. !in una din fibrele optice scindate este decodat
informa ia spectrometric cu un spectrometru miniatural echipat cu
detector !iode-Arra2, iar din cealalt fibr optic este decodat informa ia
de imagistic microscopic cu un detector 11!, ntregul sistem de
achizi ie, prelucrare i afi are date este gestionat de un calculator cu
ajutorul unui program specializat.
8olosirea sistemului spectromicroscopic descris prezint avantajul
efecturii concomitente i n acela i loc att a analizei spectrometrice ct i
90
Spectromicroscopie UV-VIS
a studiului microscopic al probei urmrite folosind volume de solu ii
etrem de mici de ordinul microlitrilor.
-i..II.5.##. @ederea cle telui spectromicroscopic% a-vedere din fa , b-vedere lateral, --
bra articulat mobil, .-bra articulat fi, /-arc de presare, +- urub micrometric, 5-lentil
colimatoare, <,;=,<,,=-fibre optice ,6-buton de blocare, p-proba de analizat
Sistemul spectromicroscopic poate lucra op ional n mod
spectromicroscopic, spectrometric sau microscopic, astfel%
,. 3odul de lucru combinat spectromicroscopic-permite determinarea
n acela i timp a compozi iei chimice calitative, a concentra iei speciilor
chimice sau biologice prezente, folosind metoda semicantitativ precum
i studiul video-microscopic al materiei din zona n care s-a efectuat
analiza spectrometric. (entru modul de lucru combinat se procedeaz n
felul urmtor%
a= )n scopul analizei spectrometrice se picur cu o pipet o pictur
din proba p de analizat n cupa lentilei colimatoare 8 i se coboar bra ul 2
articulat mobil prin rotirea urubului 5 micrometric spre stnga, succesiv, n
91
Spectromicroscopie UV-VIS
func ie de distan a d dintre cele dou lentile 6 i 9 optice, pictura va trece
prin fazele ,-+ reprezentate n figura --, n faza -, apare spectrul pe
ecranul calculatorului 15, n continuare urubul 5

-i..II.5.#/. 3odul de repartizare a probei de analizat la diferite distan e intre cele
dou lentile 6 i 8 colimatoare, <8ig.**.+.-,=
micrometric se rote te mai incet urmrind ca peaB-urile spectrale s fie
maime i ct mai nguste la baz, dup care se comand achizi ia
spectrului care ndepline te cel mai bine aceste condi ii. 1u ajutorul
programului specializat calculatorul identific i afi eaz automat, pe baza
lungimilor de und ale peaB-urilor, denumirea speciilor chimice prezente n
proba analizat, de asemenea determin prin calcul semicantitativ
concentra ia fiecrei specii pe baza valorii nl imii fiecrui (eaB raportat la
valoarea sumei tuturor peaB-urilor.
b= )n scopul studiului video-microscopic i al achizi iei imaginii care
reflect cel mai clar structura microscopic a materiei analizate, se rote te
urubul 5 micrometric, din ultima pozi ie corespunztoare achizi iei
spectrogramei, ncet spre dreapta i spre stnga pn cnd imaginea
video-microscopic apare clar pe ecran, n continuare ajustarea clarit ii
maime a imaginii video se face rotind repetat i u or prima dat urubul 5
micrometric spre stng i pe urm din nou spre dreapta, dup care se
92
Spectromicroscopie UV-VIS
comand achizi ia n baza de date a imaginii video-microscopice cu cea
mai bun claritate optic.
-. 3odul de lucru numai spectrometric0permite determinarea automat
a compozi iei chimice calitative precum i a concentra iei speciilor chimice
sau biologice din proba analizat, folosind metoda semicantitativ. )n
acest scop se aplic modul operator ,a
.. 3odul de lucru numai microscopic0este folosit pentru studiului video-
microscopic i al achizi iei imaginii care reflect cel mai clar structura
microscopic a materiei cercetate care se gse te ntre lentila 6
colimatoare i lentila 8 colimatoare. )n acest scop se introduce prima dat
din setul 14 de obiective optice, obiectivul optic corespunztor unui
anumit ordin de mrire optic dorit, n loca ul specific situat ntre fibra
optic 11 i camer 13 video, dup care se picur o pictur n proba p
de analizat n cupa lentilei colimatoare 8, opera ie urmat de coborrea
bra ului 2 mobil, prin rotirea spre stnga a urubului 5 micrometric, pn
cnd pe ecranul calculatorului 15 electronic apare o imagine video clar a
structurii microscopice. Atingerea clarit ii maime a imaginii video se face
rotind repetat i u or urubul 5 micrometric, prima dat spre stng i pe
urm din nou pre dreapta, iar la ob inerea imaginii microscopice cu cea
mai bun claritate optic se comand preluarea acesteia )n baza de date.
II.5.0.2. -&%&'e%"* *%&'% $en%"* (e%e"'in"e
c&ncen%"iei i !%*(i*l*i 'ic"&!c&$ic (in +&l*'e
"e(*!e (e $"&)1
8otometrul descris reprezint un echipament combinat fotometric
i microscopic automat care permite concomitent i n acela i loc att
determinarea cu precizie ridicat a concentra iei unei anumite specii
chimice dintr-o solu ie ct i studiul microscopic al unui volum de ordinul Cl
din acea solu ie. )n acest scop este folosit o structur optoelectronic
modular, figura **.+.-/, figura **.+.-+, cu fibre optice care permite iradierea
93
Spectromicroscopie UV-VIS
probei cu o radia ie monocromatic, cu lungimea de und specific speciei
chimice analizate, iradiere urmat de analiza fotometric i imagistic a
informa iei optice transmise prin proba de analizat care se gse te sub
forma unui strat sub ire ntre dou lentile colimatoare mobile care pot fi
apropiate, respectiv deprtate una fa de cealalt prin intermediul unui
motor pas cu pas comandat. Sistemul optoelectronic, folosit, figura **.+.-/,
este compus la rndul lui dintr-o surs de radia ie monocromatic cu $#!-
uri, fiecare $#! avnd lungimea de und a radia iei de emisie acordat pe
lungimea de und specific de absorb ie a unei anumite specii chimice, un
multipleor

-i..II.5.#0 Schema bloc a fotometrului automat. 7&-unitate de radia ie, 1S- cle te
fotometric, 78-unitate fotometric, 73-unitate microscopic, 71-unitate de calcul
optoelectronic care la comand aprinde numai $#!-ul cu lungimea de
und specific speciei analizate, ni te fibre optice de iradiere i de preluare
a radia iei trecute prin prob i un cle te spectrometric, figura **.+.-+, cu
distan a reglabil i msurabil ntre bra e prin intermediul unui motor pas
cu pas, a unui senzor incremental de deplasare i a pr ii electronice a
fotometrului. (e bra ul superior al cle telui spectrometric se gse te
montat o lentil colimatoare miniatural cuplat la fibr optic, iar pe
bra ul inferior se gse te montat o alt lentil colimatoare, prevzut cu
o cup, n care se picur proba de analizat, avnd valoarea razei de
94
Spectromicroscopie UV-VIS
curbur a cavit ii egal cu valoarea razei de curbur a lentilei din bra ul
superior, astfel nct la presarea celor dou lentile ntre ele se nchide un
strat de lichid de grosime uniform, reglabil i
-i..II.#5. Schema optoelectronic a fotometrului automat. 7&-unitate de radia ie, 18- cle te
fotometric, 78-unitate fotometric, 73-unitate microscopic, 71-unitate de calcul. ,-surs
de radia ie cu mai multe $#!-uri, --multipleor optoelectronic comandat, .-bra articulat
mobil, /-bra articulat fi, +-motor pas cu pas, 5- senzor incremental de deplasare, 6-
angrenaj urub-piuli , 9-lentil colimatoare, :-fibr optic, ,;-lentil colimatoare, ,,-fibr
optic cu scindare, ,-,,.-fibre optice scindate, ,/-fododiod, ,+-camer video cu detector
11!, ,5-set de obiective optice interschimbabile, ,6-calculator electronic, ,9-imprimant
electronic, ,:-buton de blocare, (-program de calcul specific aplica iei fotometrice, p-
proba de analizat
msurabil. $entila colimatoare inferioar este conectat i ea la o fibr
optic care ulterior se scindeaz n alte dou fibre optice. !e pe una din
fibrele optice scindate este decodat informa ia fotometric folosind o
fotodiod conectat la partea electronic, iar de pe cealalt fibr optic
este decodat informa ia de imagistic microscopic folosind o camer
video echipat cu detector 11!, ntregul sistem de achizi ie, prelucrare i
95
Spectromicroscopie UV-VIS
afi are date fiind gestionat de un calculator cu ajutorul unui program
specializat.
-i..II.#2. @ederea cle telui fotometric. a-vedere din fa , b-vedere lateral, .-bra articulat
mobil, /-bra articulat fi, +-motor pas cu pas, 5-sensor incremental de deplasare, 6-
angrenaj urub-piuli , 9-lentil colimatoare, <,-=,<,.=-fibre optice, ,:-buton de blocare.
8olosirea sistemului combinat de tip fotometric-microscopic aduce
urmtoarele avantaje%
- prin modificarea automat, controlat din aproape n aproape, a
grosimii de strat analizat, fotometrul ofer posibilitatea determinrii precise
a concentra iei, att la probe de solu ii de concentra ie ridicat, fr
diluarea acestora ct i la probe de concentra ii reduse din domeniul
urmelor, concomitent cu studiul microscopic al solu iei analizate.
- fotometrul combinat permite trasarea n citeva minute a familiei de
curbe de calibrare realizate n coordonate% absorban - A optic, grosime
- b de strat, concentra ie 0 c a speciei chimice analizate precum i
determinarea limitei de liniaritate a absorban ei A optice n func ie de
96
Spectromicroscopie UV-VIS
grosimea b de strat i n func ie de concentra ia c a speciei chimice
analizate.
- fotometrul combinat prezint un pre redus deoarece detectorul lui
optic este o fotodiod i nu un spectrometru
)n continuare snt redate posibilit ile de lucru i modul operator cu
fotometrul combinat dup cum urmeaz%
,. 3odul de lucru combinat fotometric - microscopic permite att
determinarea pe cale fotometric, cu precizie ridicat, a concentra iei unei
anumite specii chimice sau biolgice prezente n solu ia de analizat, folosind
metoda curbei de calibrare, ct i studiul microscopic al probei analizate
folosind analiza optoelectronic de imagine, astfel%
a= (entru determinarea concentra iei unei anumite specii chimice din
solu ia analizat pe cale fotometric este necesar prima dat realizarea
familiei curbelor de calibrare, figura **.+.-6. )n acest sens are loc prima dat
setarea lungimii de und specific acelei specii ceea ce duce la comanda
automat a multipleorului 2 n sensul aprinderii $#!-ului corespunztor
din sursa 1 de radia ie, dup care se realizeaz, folosind substan pur
a celei specii chimice, un set de solu ii de concentra ii cresctoare,
97
Spectromicroscopie UV-VIS
-i..II.5.#3. 8amilia curbelor de calibrare realizate pentru o specie chimic la diferite
concentra ii ale acesteia i la diferite grosimi de strat ale solu iei analizate
bine cunoscute, dup aceea se picur o pictur din solu ia de calibrare,
avnd concentra ia c de valoarea cea mai mic din rndul celor preparate,
pe lentila colimatoare 10 i se ini iaz dintr-o tast a calculatorului 17
electronic nceperea msurrii, ceea ce are ca efect msurarea automat
a absorban elor A optice la diferite grosimi de strat b, valoarea acestora
fiind introdus alturi de valoarea grosimilor de strat corespunztoare, n
familia curbelor de calibrare. 7rmeaz aceea i procedur pentru
98
Spectromicroscopie UV-VIS
urmtoarea concentra ie pn la epuizarea ntregului lot de concentra ii din
solu ia de calibrare urmat de comanda pentru realizarea automat a
familiei curbelor de calibrare folosind triple i de valori% absorban - A,
concentra ie- c, grosime de strat, fig.**.+.-6, familii n care este eviden iat,
tot automat, domeniul de liniaritate pentru fiecare concentra ie i grosime
de strat. !up realizarea familiei curbelor de calibrare se aduce o pictur
din proba p de analizat pe lentila colimatoare 10 i se ini iaz dintr-o tast a
calculatorului 17 electronic nceperea msurrii ceea ce are ca efect o
prim determinare automat a absorban ei optice a crei valoare este
introdus, alturi de valoarea grosimii de strat corespunztoare, n familia
curbelor de calibrare. !ac msurtoarea se nscrie n zona dependen elor
liniare calculatorul 17 electronic valideaz determinarea i determin
automat prin calcul de etrapolare concentra ia speciei analizate. !ac
valoarea absorban ei optice nu se nscrie n zona dependen elor liniare
programul calculatorului comand pornirea motorului 5 pas cu pas, acesta
mic ornd grosimea de strat, prin apropierea bra elor 3 i 4, pn cnd
valoarea absorban ei A optice se nscrie n domeniul liniar, dup care are
loc determinarea automat a concentra iei prin calcul de etrapolare,
valoarea acesteia fiind afi at digital. 1urbele de calibrare memorate
electronic pot fi folosite ori de cte ori este nevoie pentru determinarea
concentra iei speciei chimice pentru care au fost realizate. "rebuie
men ionat c la determinarea concentra iei pe cale fotometric se
deosebesc dou situa ii%
- n prima situa ie, se urmresc cte specii chimice, din numrul celor
pentru care sursa 1 de radia ie cu $#!-uri poate asigura lungimi de und
specifice, snt prezente n solu ia de analizat, dup care se decide
pentru care din aceste specii i n ce ordine se va determina concentra ia
pe cale fotometric. )n acest scop e ini iaz din tastatura calculatorului 17
pornirea multipleorului 2 optic ceea ce are ca efect iradierea succesiv a
probei analizate de ctre sursa 1 de radia ie cu $#!-uri ce emit fiecare o
anumit valoare a lungimii de und specific unei anumite specii chimice.
(entru fiecare specie chimic prezent n solu ie apare un (eaB de
99
Spectromicroscopie UV-VIS
absorban optic la lungimea de und specific ei. )n continuare, pentru a
se determina concentra ia speciei alease se procedeaz ca la punctual ,a.
- n cea de-a doua situa ie, se cunoa te natura i numrul speciilor ce
se doresc a fi analizate. )n acest caz se stabile te ordinea n care se va
determina concentra ia acestor specii dup care se seteaz din tastatura
calculatorului 17 electronic prima lungime de und pe care trebuie s o
asigure multipleorul 2 optic din ordinea stabilit, opera ie urmat de
procedura stabilirii familiei curbelor de calibrare descrise la punctul ,a <face
ecep ie situa ia n care aceste familii de curbe snt deja n baza de date de
la determinri anterioare=. !up realizarea i memorarea familiei curbelor
de calibrare are loc controlul automat al nscrierii valorii absorban ei n
domeniul liniar <vezi punctual ,a= urmat de validarea rezultatului i
afi area concentra iei pentru specia chimic analizat. ?pera iile se repet
identic pentru determinarea concentra iei celorlalte specii chimice,
hotrte a fi analizate, din solu ia cercetat.
b= !eterminarea structurii microscopice se realizeaz fr
ndeprtarea solu iei folosite pentru determinarea concentra iei comandnd
manual din tastatura calculatorului 17 electronic pa i mici de deplasare a
lentilei 8 colimatoare nspre i dinspre lentila 10 colimatoare urmrindu-se
n mod continuu pe ecran imaginea microscopic a solu iei dintre cele dou
lentile colimatoare, iar pentru imaginea cu cea mai bun rezolu ie se
comand preluarea acesteia n baza de date.
-. 3odul de lucru numai fotometric0permite determinarea automat a
concentra iei speciilor chimice din proba analizat, folosind metoda
curbelor de calibrare. )n acesp scop se aplic modul operator de la punctul
,a
.. 3odul de lucru numai microscopic0este folosit pentru studiul
microscopic automat al probei p cu ajutorul analizei optoelectronice de
imagine. )n acest scop se introduce prima dat, n loca ul specific situat
ntre fibra optic 13 i camer 15 video, un obiectiv, din setul 16 de
obiective optice, corespunztor unui anumit ordin de mrire dorit, dup
care se picur o pictur n proba p de analizat n cupa lentilei 10
100
Spectromicroscopie UV-VIS
colimatoare, opera ie urmat de comanda, din tastatura calculatorului 17
electronic, a servomototului 5 pas cu pas ceea ce are ca efect coborrea
bra ului 3 mobil. 1omanda de coborre se eecut atta timp pn cnd pe
ecranul calculatorului 17 electronic apare o imagie video clar a structurii
microscopice. Atingerea clarit ii maime a imaginii microscopice video se
ob ine n continuare comandnd repetat i cu pa i mici rota ia n ambele
sensuri a motorului 5 pas cu pas. $a ob inerea imaginii microscopice cu
cea mai bun claritate se comand preluarea acesteia n baza de date.
101