Practica 6 Pruebas Bioquimicas

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE INGENIERA
CAMPUS GUANAJUATO.

Laboratorio de Microbiologa

REPORTE DE PRCTICA #6:

Pruebas Bioqumicas para identificar bacterias

Equipo # 3
Gonzlez Cervantes Nancy Ivette
Villanueva Fernndez Mara Goretty
Hernndez Arrona Jess Alejandro
Loredo Vzquez Mara Guadalupe Monzerrat

Grupo:
4FM1

Fecha de realizacin: 25/septiembre/2014
Fecha de entrega: 9 /octubre/2014


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OBJETIVOS

Identificar diferentes especies de bacterias, a travs de su metabolismo celular.

INTRODUCCIN
Los procedimientos que se llevan a cabo para la identificacin de bacterias van desde los
que son simplemente descriptivos que incluyen morfologa y tincin, pasando por las
pruebas bioqumicas simples las cuales sirven para la deteccin de productos metablicos o
de una determinada reaccin enzimtica, hasta llegar a tcnicas muy sofisticadas, tal como
el clculo del porcentaje G+C en bacterias o el empleo de sondas de ADN.
Un proceso profundo para la identificacin bacteriana contara con los siguientes pasos:
1. Caractersticas macroscpicas.
2. Caractersticas microscpicas.
3. Condiciones de crecimiento.
4. Propiedades bioqumicas.
5. Susceptibilidad a los antibiticos.
6. Estructura antignica (serotipia) y fagotipia.
7. Composicin qumica.
8. Produccin de bacteriocinas.
9. Patogenicidad.
10. Composicin del ADN
Las pruebas bioqumicas indican una serie de caractersticas metablicas que, en conjunto
permiten diferenciar unas bacterias de otras. En otras palabras el empleo de pruebas
bioqumicas permite identificar de manera altamente precisa muchas cepas, estas pruebas
del metabolismo bacteriano son hechas especialmente para cada bacteria. (Garca. S, et al,
2000)
La mayora de las pruebas utilizadas para estudiar la actividad bioqumica o metablica de
bacterias, se lleva a cabo mediante el cultivo en un medio con sustrato para la obtencin de
colonias aisladas, a las cuales posteriormente se les realizara pruebas bioqumicas, y
despus de uno o dos das de incubacin pueden interpretarse los resultados obtenidos.
(Garca. S, et al, 2000)
Fermentacin de carbohidratos:
La fermentacin es un proceso metablico de xido-reduccin el cual ocurre en un medio
ambiente anaerobio, en el que en vez de utilizar oxgeno se utiliza un sustrato orgnico que

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sirve como el aceptor final de hidrgeno (electrones). En pruebas bacteriolgicas este
proceso se detecta observando cambios de color en indicadores de pH a medida que se
forman productos cidos. (Bailn, 2003)
Aquellas bacterias que logran fermentar un hidrato de carbono por lo general son
anaerobios facultativos. Por medio de este proceso de fermentacin un hidrato de carbono
es degradado y descompuesto en dos molculas de carbono, las cuales son llamadas triosas,
estas son nuevamente degradadas en un nmero de compuestos de 1, 2, 3 y 4 carbonos.
Los resultados varan de acuerdo a cada especie bacteriana, las condiciones en las que se
encuentra el medio ambiente y del sistema enzimtico existente en la especie. (Collins. C.
H. 1989)
Al utilizarse un indicador de pH con determinado hidrato de carbono se puede determinar si
una bacteria ha degradado el mismo en varios productos terminales, observando un cambio
de color visible en el medio. Esta prueba da positivo si presenta una coloracin amarilla, en
cambio es negativa si presenta una coloracin rosa-rojizo. (Bailn, 2003)
Prueba de TSI:
La prueba de agar con hierro de Kliger/ azcar triple y hierro o TSI determina la capacidad
de una bacteria para atacar un especifico hidrato de carbono que se encuentre en un medio
de desarrollo basal, adems determina la posible produccin de cido sulfhdrico. La prueba
es positiva para la produccin de cido sulfhdrico si se observa un precipitado negro
(sulfuro ferroso) en todo el fondo, el cul enmascara la acidez. La prueba es positiva para
glucosa si se puede observar una coloracin amarilla en el fondo, es negativa si no se
observa ningn cambio de coloracin. La prueba es positiva para sacarosa y lactosa si en la
superficie puede observarse una coloracin amarilla, en cambio s hay una coloracin roja
en la superficie es negativa. (Mac Faddin, 2000)
Prueba de LIA:
Esta prueba se realiza con medio de agar lisina hierro el cual posee una coloracin violeta y
debe estar entubado en pico de flauta. Se debe sembrar sobre la superficie inclinada por
picadura y se deja incubando a una temperatura de 35-37 C en un tiempo de 18-24 horas.
La prueba de la descarboxilacin de la lisina es positiva si la pendiente del pico de flauta y
el fondo tienen una coloracin violeta, en cambio la prueba es negativa si el fondo tiene
coloracin amarilla y la pendiente tiene una coloracin violeta. (Guillem, 2005)
La prueba de desaminacin de la lisina es positiva si se observa un color rojo vinoso en la
superficie inclinada, la prueba es negativa si hay ausencia de coloracin rojiza en la

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pendiente. La prueba de produccin de H
2
S es positiva si hay ennegrecimiento del medio y
es negativa si hay ausencia de ennegrecimiento. (Guillem, 2005)
RESULTADOS Y DISCUSIN
A continuacin se muestran los resultados obtenidos de las diferentes pruebas bioqumicas
que se hicieron en el laboratorio con diferentes microorganismos, incluyendo despus de
cada resultado la discusin respectiva de cada prueba.
1) Prueba de Hidrolisis de almidn.
Despus de inocular, se dej la muestra con una temperatura de 37C por 24 horas y se le
agrego lugol para revelar los resultados (tabla 1).
Tabla 1.- Resultados obtenidos por la prueba de hidrolisis de almidn, con los
microorganismos Bacillus subtilis y Escherichia coli. Despus de haber agregado el
reactivo de lugol.
Microorganismo Imagen Resultado

Bacillus subtilis

Se form un halo al
aadirle lugol a la muestra,
del microorganismo
Bacillus subtilis. La
muestra fue positiva.

Escherichia coli

No se form un halo en la
parte que contena
Escherichia coli al
agregarle lugol. Siendo
negativa esta prueba para
dicho microorganismo.


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Discusin:
El almidn es producido principalmente por plantas superiores, este compuesto de amilosa
y amilo pectina. Diversas enzimas amiloliticas hidrolizan el almidn y sus productos.
- Sustrato: almidn (polmero de glucosa)
- Enzima: Amilasa (exoenzima).
- Producto: Glucosa.
El lugol con el almidn al combinarse forman un precipitado color caf-prpura que
desaparece cuando el almidn ha sido degradado.
La amilasa: tiene la funcin de catalizar la reaccin de hidrolisis de los enlaces 1-4 del
componente alfa-amilasa al digerir el almidn y esto produce que se formen azcares
simples. (UNAM, 2012).
Las alfa-amilasas son producidas por hongos y bacterias (Papaloapan, 2013). Algunos
bacilos como Bacillus subtilis puede producir amilasa, produciendo dextrinas, glucosa y
maltosa como producto de la hidrolisis. (Vega, 2011). Con respecto a E. coli se puede
observar (tabla 1) que los resultados fueron negativos y se puede sugerir que esta bacteria
no contiene la enzima amilasa para poder hidrolizar el almidn, en cambio esta misma
bacteria fermenta la glucosa ms no puede hidrolizar el almidn. (Papaloapan, 2013). En
cambio se puede observar que la muestra que contiene Bacillus subtilis se muestra un halo
claro sugiriendo que a partir del indicar del lugol desapareci el color caf intenso debido a
que hubo degradacin del polisacrido.
Como se puede observar en la imagen (figura 1)
muestra el resultado de (Anda, 2011). Ellos
realizaron su trabajo mediante Bacillus subtilis y
E. coli sugiriendo los mismos resultados obtenidos
en la prctica, utilizando como indicador el lugol
para demostrar un halo claro en la degradacin del
almidn.
Figura 1. Resultados de (Anda, 2011) Hidrolisis del almidn.
Realizando una segunda comparacin con otros trabajos y
discutiendo lo observado en los resultados obtenidos, segn
(Vega, 2011) realizo la prueba con B. subtilis obteniendo
como resultado lo mostrado en la figura 2.
Figura 2. Muestra los resultados de (Vega, 2011). Hidrolisis del almidn.

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Se puede analizar que se obtuvo positivo el experimento al compararlos con otros trabajos
al cual se puede concluir contrastando con la literatura que la bacteria B. subtilis contiene la
enzima amilasa, la cual, puede degradar el almidn convirtindolo en glucosa como su
producto y esto se verifica por el halo claro que se produce, debido al indicador del lugol.
Con respecto a E. coli no se observ ningn halo claro se mantuvo el halo obscuro el cual
no se forma debido a que el lugol mas el almidn producen un precipitado obscuro caf
concluyendo que no se degrado dicho polisacrido.
2) Prueba en agar triple azcar y hierro (TSI).
Despus de inocular, se incubo la muestra a una temperatura de 37C por 24 horas. En esta
prueba se observ ms de una caracterstica en los resultados, los cuales fueron; ausencia o
presencia de glucosa, Lactosa y sacarosa, produccin de H
2
S, produccin de CO
2
y H
2
.
(Tabla 2)
Tabla 2.- Se observan los resultados de la prueba TSI con los microorganismos
Bacillus subtilis y Escherichia coli.


Escherichia coli

-Glucosa positiva: Se
observ la formacin de un
fondo amarillo.
-Lactosa y sacarosa positiva:
La superficie se ve puede
notar amarilla
-Sin produccin de H
2
S.
-Produccin de CO2 y H2,
se observa muesca en la
parte inferior del tubo.

Bacillus subtilis

-Glucosa positiva: Se form
un fondo amarillo.
-Lactosa y sacarosa
negativa: Se observa una
superficie rojiza.
-No hay produccin de H2S.
-Positivo para la produccin
de CO
2
y H
2
, se observa
una muesca en la parte
inferior.


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Discusin:
Hay microorganismos capacitados para fermentar glucosa, se manifiestan cuando pueden
crecer en un medio nutritivo como el medio TSI. S el microorganismo elegido no puede
fermentar la glucosa, no se observa cambio en el medio de cultivo, indicando ausencia de
cido. En esta prueba se puede identificar bacterias que fermentan glucosa, sacarosa y
lactosa, como las que no fermentan ninguno de los azcares mencionados anteriormente
(Winn, 2008).
Para Escherichia coli: La prueba de agar triple azcar hierro resulto positiva en la
fermentacin de hidratos de carbono y negativa para la produccin H
2
S (tabla 2). De
acuerdo a lo encontrado en la literatura estos resultados para Escherichia coli son correctos
puesto que esta bacteria es catalasa-positiva, oxidasa-negativa y anaerobio facultativo.
Adems fermenta lactosa y glucosa. (Rodriguez, 2009)
Para Bacillus subtilis: El resultado de esta prueba fue correcto (tabla 2) pues de acuerdo a
lo consultado deba salir negativo en la produccin de H
2
S y positivo para la fermentacin
de hidratos de carbono. (Koneman, 2008).
3) Prueba en medio LIA (lysine iron agar)
Se muestran los resultados despus de inocular los microorganismos Escherichia coli,
Salmonella y Proteus Vulgaris. Despus de ser incubados durante 24 horas a 37C. (Tabla
3).
Tabla3.- Muestra los resultado a la prueba de LIA con los diferentes
microorganismos; Escherichia coli, Salmonella y Proteus Vulgaris.

Escherichia coli

Desaminacin de
aminocidos: negativa, la
superficie es color purpura.
Descarboxilacin de
aminocidos: positiva,
fondo del tubo purpura
Sin produccin de H
2
S.

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Salmonella

Desaminacin de
aminocidos: negativa, la
superficie es color purpura.
Descarboxilacin de
aminocidos: negativa,
fondo del tubo oscuro.
Produccin de H2S se
observa ennegrecimiento.

Proteus vulgaris

Esta prueba es negativa
para la Desaminacin de
aminocidos,
Descarboxilacin y
produccin de H2S.

Discusin:
Esta prueba establece la capacidad enzimtica de algunos microorganismos para
descarboxilar y desaminar la lisina. El medio LIA, puede mostrar una produccin de cido
sulfhdrico debido a que este medio tiene como componentes; citrato amnico frrico y
Tiosulfato (Olivas, 2004).
Para Escherichia coli: La prueba fue negativa (tabla 3) para descarboxilacin de lisina y
desaminacin, siendo este un resultado correcto comparndolo con lo ledo en la literatura.
(Rodriguez, 2009)
Para Salmonella: Miembro de la familia Enterobacteriaceae, anaerobia facultativa, catalasa-
positiva y oxidasa-negativa (tabla 3). De acuerdo a la literatura esta prueba deba salir
positiva para la descarboxilacin de la lisina, lo cual no sucedi y se pudo deber a
contaminacin del medio. En la produccin de H
2
S el resultado fue el esperado.
(Rodriguez, 2009)

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Para Proteus vulgaris: Los resultados fueron los esperados de acuerdo a la literatura (tabla
3), en esta prueba se tena que volver rojo en el agar inclinado y acido en el fondo. (Forbes,
Diagnostico Microbiologico, 2009)
4) Prueba Citrato
Se muestran los resultados obtenidos despus de la inoculacin de los microorganismos E.
coli y Bacillus subtilis y la incubacin de estos de 24 hrs a una temperatura de 35C (tabla
4).
Tabla 4. Resultados observados de la prueba citrato con los microorganismos
Escherichia coli y Salmonella y la incubacin de estos de 24hrs a una temperatura de
35C (tabla 4).

Escherichia coli

Negativo: No se observa
ningn cambio de color, la
coloracin sigue color verde,
por lo que no hubo ningn
crecimiento.

Salmonella

Positivo: Se observa
crecimiento con un color azul
intenso en el pico de flauta.


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Discusin:

Segn la literatura la prueba de citrato se utiliza para determinar si los microorganismos
Escherichia coli y Salmonella son capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono
para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad. (Mac Faddin, 2000)
El medio incluye citrato de sodio, un anin como nica fuente de carbono y fosfato de
amonio como nica fuente de nitrgeno. (Mac Faddin, 2000)
Algunas precauciones que se deben tomar es que el inoculo debe ser liviano, ya que si este
es demasiado grande, compuestos orgnicos preformados dentro de la pared celular de las
bacterias que estn muriendo pueden liberar suficiente carbono y nitrgeno como para dar
un resultado falso-positivo. (Bailn, 2003)
Para Escherichia coli: La prueba fue negativa (tabla 4), esto debido a que no hubo ningn
crecimiento o cambio alguno en el pico de flauta, demostrando que este microorganismo es
incapaz de usar el citrato como nica fuente de energa (carbono), comparndolo con la
literatura esta prueba resulta negativa, por lo que nuestro resultado es correcto. (Mac
Faddin, 2000)
Para Salmonella: La prueba fue positiva (tabla 4) observndose un color azul intenso en el
pico de flauta, lo cual quiere decir de acuerdo a lo ledo en la literatura, que este
microorganismo es capaz de metabolizar el citrato como nica fuente de carbono , mediante
la condensacin de acetilo con coenzima A y oxalacetato. (Bailn, 2003)


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5) Prueba Rojo de metilo.
Se muestran los resultados obtenidos despus de la inoculacin de los microorganismos E.
coli y Bacillus subtilis y la incubacin de estos de 24 hrs a una temperatura de 35C (tabla
5).

Tabla 5. Resultados observados de la prueba rojo de metilo con los microorganismos
Escherichia coli y Bacillus subtilis.

Sin inocular

Se observa nicamente el
medio de cultivo MR/PV
de cada tubo, con un color
amarilloso.

Escherichia coli

Positivo:
Una vez ya pasado el
tiempo de incubacin. Se
observa un color rojo
brillante en la superficie
del tubo, justo cuando se
agrega el indicador rojo de
metilo.

Bacillus subtilis

Negativo:
Una vez ya pasado el
tiempo de incubacin. Se
observa un color amarillo
en la superficie del tubo,
justo cuando se agrega el
indicador rojo de metilo.

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Discusin:

La prueba se hizo para diferentes microorganismos y despus de colocar el indicador de
pH rojo de metilo se pudieron ver los cambios de color en el medio, esto sucede ya que se
forman productos cidos (Bailn, 2003). La finalidad de esta prueba ya que es cuantitativa,
es poder establecer la concentracin de acidez o alcalinidad del microorganismo, y puede
determinarse cuando el organismo fermenta la glucosa, debido a las variaciones en las
enzimas que se encuentran en el metabolismo de los microorganismos (Winn, 2008).

Para E. coli, se apreci un color rojo brillante (tabla 5), ya que este microorganismo es MR
positiva, puede conservar una alta concentracin de iones hidrogeno. Adems de que este
microorganismo le gana al sistema buffer fosfato del medio. (Mac Faddin, 2000). Por lo
tanto la prueba fue positiva, ya que hubo una produccin de cidos lo que origin un pH
bajo (menor a 4.4). (Forbes, 2007) Se mantendr un color rojo con un pH menor a 4.4
Para Bacillus subtilis, se observ color amarillo (tabla 5), ya que este es un microorganismo
RM negativo, que si tienen produccin de cidos, pero tienen menor concentracin de
iones hidrgeno. (Mac Faddin, 2000). Ya que se metabolizaron los productos de
fermentacin por medio de descarboxilacin para producir acetona, esta hace que se
reduzca la acidez y aumente el pH (mayor a 5.5) resultando una prueba negativa.
6) Prueba de ureasa
Se muestran los resultados despus de una incubacin a 37C por 24 horas, de los
microorganismos Proteus vulgaris y Escherichia coli. Producindose un cambio de color.
(Tabla 6)
Tabla 6.- Se observan los resultados despus de hacer la prueba de ureasa de los
microorganismos; Proteus vulgaris y Escherichia coli.

Proteus vulgaris

Resultado positivo debido
al cambio de color, aunque
no se consigui un color
rojo fuerte pero cambio de
color a rosa.

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Escherichia coli

No hubo cambio de color
resultado negativo.

Medio nutritivo

Tubos antes de inocular
con los microorganismos
para la prueba de urea.

Discusin:
La ureasa ataca el enlace entre el carbono y nitrgeno de la urea produciendo CO
2,
agua y
amonaco. Usualmente se utiliza un indicador rojo fenol, puesto que este cambia de color
de amarillo cuando se encuentra en un ambiente alcalino y toma un color rojo al estar en un
ambiente cido. Esta prueba es til para distinguir Proteus de otras bacterias entricas
Gram negativas. Esta prueba indica que existe la enzima ureasa y se conoce debido al
cambio de color del indicador debido a la disminucin del pH, puesto que la urea siendo
una base y al reaccionar con la ureasa forma amoniaco siendo este una base dbil pero ms
cido que la ureasa por eso el cambio de color si se forma este producto ms el CO
2
(Jr,
2012)
.
Conforme a que esta prueba es especfica para identificar bacterias que son Proteus se
obtuvo un resultado positivo al utilizar Proteus vulgaris (Tabla 6) debido al cambio de
color (rosa), como ya se explic se puede concluir que dicho microorganismo contiene la
enzima ureasa obteniendo un cambio en el color de la muestra. Este microorganismo es
anaerbico en forma de bacilo se encuentra en el tracto intestinal de animales y seres

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humanos, es un patgeno oportunista y causa infecciones urinarias, de heridas y abcesos
hepticos. (Ecured, 2009).
Al analizar comparar con otros trabajos los resultados
obtenidos, segn (salud, 2009) obtuvieron los resultados
mostrados en la figura 3 utilizando Proteus vulgaris y E.
coli de igual manera que se utiliz en la prctica, la nica
diferencia es el color de la muestra negativa conforme al
color obtenido y esto se puede discutir por contaminacin
en el medio, aunque en conclusin se obtuvieron
resultados claros. Concluyendo que las bacterias de
genero Proteus pueden generar una enzima ureasa para
degradar la urea y se explica por el cambio de color del
pH bsico terminando a un pH cido (Amarillo a rojo).
Figura 3.- muestra los resultados de (Ecured, 2009) en la prueba de urea.
7) Prueba MIO
Se muestran los resultados obtenidos despus de la inoculacin de los microorganismos
Proteus vulgaris, Salmonella y Escherichia coli y la incubacin de estos de 24 hrs a una
temperatura de 35C (tabla 7).
Tabla 7. Se observan los resultados despus de hacer la prueba MIO de los
microorganismos; Proteus vulgaris, Salmonella y Escherichia coli.

Proteus vulgaris

Movilidad: Positivo, se
observa diseminacin a
partir de la lnea de siembra
(turbidez).
Descarboxilacin de
Ornitina: Negativo, se
observa color amarillo.
Presencia de indol: Negativo
no hay cambio de color.


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Salmonella

Movilidad: Negativo se
observa crecimiento sobre la
lnea de siembra, no se
observa diseminacin.
Descarboxilacin de
observa color amarillo.
Presencia de indol:
Negativo, no hay cambio de
color.

Escherichia coli

Movilidad: Negativo, se
observa crecimiento sobre la
lnea de siembra, no se
observa diseminacin.
Descarboxilacin de
observa color amarillo
Presencia de indol: Positivo,
hay desarrollo de color rojo
fucsia.

Discusin:

De acuerdo a la literatura la prueba MIO se utiliza para la identificacin de Enterobacterias
sobre la base de movilidad, la produccin de ornitina descarboxilasa y de indol. (Bailn,
2003)
La descarboxilacin de ornitina mide la capacidad de un organismo para descarboxilar el
aminocido ornitina para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad. Este es el
proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas especficas son
capaces de atacar a los aminocidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina
y anhdrido carbnico. La descomposicin de los aminocidos se produce anaerbicamente,
es irreversible, no oxidativo y requiere una coenzima comn el fosfato de piridoxal.
(Bailn, 2003)


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Prueba de la produccin de indol:
El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres
metabolitos principales: Indol, escatol e indolactico. (Mac Faddin, 2000)
Diversas enzimas intracelulares que intervienen en ste proceso reciben el nombre de
triptofanasas, lo que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la produccin
del indol. El principal intermediario en la degradacin del triptfano es el cido
indolpirvico. (Mac Faddin, 2000)
La degradacin del triptfano libera indol, cido pirvico, amoniaco y energa. La prueba
de indol se basa en la formacin de un complejo de color rojo cuando el indol reacciona
con el grupo aldehdo de p-dimetilaminobenzaldehdo (sustancia activa del reactivo de
Kovacs). (Mac Faddin, 2000)
La formacin de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces de fermentar
los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentacin de la glucosa
puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir la enzima. El agregado de triptfano
estimula la produccin de indol mientras que la glucosa la inhibe. (Mac Faddin, 2000)
Movilidad.
Determina si un organismo es mvil o inmvil. Las bacterias tienen movilidad por medio
de sus flagelos, que se encuentran principalmente entre los bacilos; sin embargo algunas
formas de cocos son inmviles. (Bailn, 2003)
Las bacterias mviles pueden contener un solo flagelo o muchos; adems su localizacin
vara con su especie bacteriana y las condiciones de cultivo. A veces, las bacterias con
movilidad producen variantes no mviles que parecen ser estables y raramente se revierten
en formas mviles. Los organismos no mviles carecen de flagelos. (Bailn, 2003)
Para los microorganismos Proteus vulgaris, Salmonella y Escherichia coli. La prueba para
descarboxilacin de ornitina resulto negativa para los tres, demostrando as como ya se
mencion antes que estos microorganismos no poseen enzimas descarboxilasas, por lo cual
no tienen la capacidad de descarboxilar el aminocido ornitina para formar una amina.
Comparando con la literatura los resultados esperados de esta prueba estn en lo correcto.
Mientras que para la prueba de produccin de indol dio negativo para Proteus vulgaris y
Salmonella, en cambio para Escherichia coli. Fue positiva demostrando que esta tiene la
capacidad de oxidar el aminocido triptfano para producir indol, cido pirvico, amoniaco
y energa mediante el uso de enzimas intracelulares (triptofanasas) y tambin de fermentar
los hidratos de carbono.

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Finalmente para la prueba de movilidad Proteus vulgaris fue el nico que dio positivo,
demostrando que este puede poseer uno o ms flagelos.
8) Licuefaccin de gelatina.
Se observan los resultados despus de que los microorganismos; Staphylococcus aureus y
Escherichia coli, estuvieron en incubacin durante 96 horas (4 das) a una temperatura de
37C. Pasado este tiempo se pusieron a refrigerar durante 20 minutos a -4C.
Tabla 8. - Se observan los resultados de la gelatina despus de someterse a refrigerar,
con los microorganismos; Staphylococcus aureus y Escherichia coli.

Staphylococcus aureus

Negativo: Despus de que se
puso a refrigerar el tubo con el
medio de cultivo y el
microorganismo este,
permaneci solido

Escherichia coli

Negativo: Negativo: Despus
de que se puso a refrigerar el
tubo con el medio de cultivo y
el microorganismo este,
permaneci solido

Discusin:

Esta prueba es para microorganismos con la capacidad de producir enzimas proteolticas
(gelatinasas), que hidrolizan o lican a la gelatina del medio de cultivo, y por ello se
muestran cambios debido a los productos de degradacin. Cuando se producen gelatinasas,
ayudan a la identificacin de bacterias fermentadoras. (Mac Faddin, 2000).


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Las protenas naturales que se producen a menudo son muy grandes para entrar en una
clula, y para que puedan ser usadas se deben de catabolizar a unas ms pequeas. El
catabolismo de las protenas se da por medio las gelatinasas en dos procesos; primero se
forman Polipptidos y despus se forma una mezcla de aminocidos aislados (Mac Faddin,
2000).

Para los microorganismos; Staphylococcus Aureus y E. Coli Ambas pruebas resultaron
negativas (tabla 8) ya que posiblemente estos microorganismo no son idneos para
producir enzimas proteolticas, por lo que no pueden desdoblar a protenas como la gelatina
(Bailn, 2003).
Aunque para el microorganismo Staphylococcus Aureus, la prueba tambin se observ
negativa, este debi ser positivo en esta prueba, ya que si tiene la capacidad de secretar
enzimas proteolticas como las gelatinasas (Mac Faddin, 2000). Esta prueba pudo resultar
negativa ya que este microorganismo pudo requerir ms tiempo de incubacin, incluso
hasta 14 das, para poder presentar licuefaccin de las gelatinasas. (Forbes, 2007).

CUESTIONARIO
1. Explicar el significado de la presencia o ausencia de un halo claro, al agregar el
lugol, en las pruebas de hidrolisis del almidn.
Esto se debe a que el lugar al combinarse con el almidn producen un combinado de color
caf obscuro, entonces la prueba de hidrolisis de almidn se fundamenta en si el
microorganismo tiene la facultad de tener la enzima amilasa al degradar el almidn este
precipitado de color caf que se produce por el almidn-lugol desaparece debido que la
amilasa se encarga de degradar la amilasa y al no existir este polisacrido se forma un halo
claro.

2. Explicar por qu en las pruebas de fermentacin de azcares en tubos con campana
de Durham se emplea un indicador de pH, cual es el indicador y cul es su intervalo
de sensibilidad.
En las pruebas de fermentacin las molculas orgnicas sirven como donadores o aceptores
de electrones. Y los productos finales de la fermentacin puede ser muy variado
dependiendo del microorganismo se pueden generar: cidos, diferentes molculas orgnicas
o gases, los cuales pueden ser utilizados para la identificacin del organismo por eso es
necesario usar un indicador de pH debido a que los cidos que bajan el pH. El indicador
que se emplea es el rojo de fenol (Olivas E., Alarcn R. 2004)

Rojo de fenol

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cido: amarillo
Base: Rojo
El intervalo de cambio de color se da de (6.4 - 8.0 pH) (Wentworth, 1977)

3. Qu otros azcares se pueden utilizar para la fermentacin de azcares?
Maltosa y Manitol (Evangelina Olivas E., 2004)

4. Cul es el indicador de pH que se emplea en las pruebas de utilizacin de sales
orgnicas y cul es su intervalo de sensibilidad?
Azul de bromocresol
cido: amarillo
Base: Azul
El intervalo de cambio de color se da de (6.0 - 7.6 pH) (Wentworth, 1977)

5. Cmo se detectan los productos de la degradacin de los aminocidos: arginina,
lisina y ornitina?
Los productos detectados en la degradacin de los aminocidos es causada por la
descarboxilacin en el aminocido por medio de la enzima descarboxilasa dando una amina
y un anhdrido carbnico, estos cambios en el aminocido causan un cambio de pH a
alcalino (Evangelina Olivas E., 2004).

6. Explicar cul es la utilidad de detectar la capacidad de hidrlisis de protenas que
tienen ciertos microorganismos. De qu manera se detectan estas enzimas
proteolticas de los microorganismos?
Estos la usan para liberar la aminocidos que los microorganismos usaran como nutrientes,
se hacen pruebas y se encuentra con cual enzima reaccionara est. (Evangelina Olivas E.,
2004)
CONCLUSIN
A pesar de que las pruebas bioqumicas son una herramienta muy til en el
reconocimiento de un microorganismo e identificacin de su metabolismo, estas
pruebas contienen sus limitantes puesto que no se puede concluir una clasificacin en
base a estas, pero cabe mencionar que la importancia es inmensa puesto que se
comienza a conocer el comportamiento y utilidades que podra tener el
microorganismo basndose en sus mismas rutas metablicas que contienen. Al
finalizar es importante mencionar que al realizar adecuadamente las tcnicas para
inocular el microorganismo en cada prueba se debe realizar tal como se menciona
pues esto puede cambiar o alterar los resultados de la prueba.

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