Tcnicas para aislar protenas

Aislamiento de las protenas es un mtodo de segregacin de un nico tipo

de protenaa partir de un grupo de protenas que se encuentran en una mezcla. Este
proceso es importante en el estudio de la funcin de laprotena, as como su
estructura individual y cmo interacta con otros nutrientes en el cuerpo. Existen
diferentes tcnicas de aislamiento de protenas utilizadas en este proceso y, a travs
de ellos, las propiedades de la protena tales como tamao, fsico-qumica y la
afinidad de unin se puede determinar.
Extraccin
La extraccin es una tcnica de aislamiento de protena en la que el tejido se divide en
una solucin para obtener la protena a estudiar. El tejido se somete a procedimientos
tales como ciclos de congelacin, sonicacin, homogeneizacin, filtracin o
permeabilizacin utilizando disolventes orgnicos. Despus de que las protenas
solubles han sido separadas de las no solubles, laprotena de inters puede separarse
de las membranas celulares y finalmente se extrae el ADN.
Precipitacin y solubilizacin diferencial
La precipitacin y solubilizacin diferencial es una manera rentable de aislar protenas
a granel. Este mtodo utiliza la precipitacin con sulfato de amonio, durante el cual se
aade al tejido este compuesto de manera creciente con el fin de recoger las diferentes
fracciones de la protena precipitada.

Ultracentrifugacin
Otra tcnica de aislamiento de protena es la ultracentrifugacin, que utiliza la fuerza
centrfuga por medio de un dispositivo de ultracentrfuga para separar partculas de
diferentes masas de una mezcla dada. Las partculas presentes en la mezcla se mueven
hacia afuera de acuerdo con su masa, con las protenas menos densas girando ms
lentamente que las ms densas. Cuando se centrifuga el tiempo suficiente, las
protenas se segregan en funcin de su densidad, ya que permanecen en suspensin en
los lugares en los cuales su densidad de flotacin se equilibra con la fuerza centrfuga
aplicada. Hay dos tipos de tcnicas de ultracentrifugacin: centrifugacin y
centrifugacin en gradiente de sacarosa.
Cromatografa
Tambin se pueden aislar protenas por medio de un procedimiento de cromatografa.
Una mezcla de protenas se vierte en una columna rellena de diferentes materiales con
los cuales pueden interactuar las protenas presentes. Las protenas se detectan de
acuerdo al material con el que interactan as como por su nivel de absorbencia.
Existen muchos procedimientos de cromatografa, como exclusin de tamao,
interaccin hidrfoba, intercambio inico, de afinidad, de inmunoafinidad, de unin a
metal y cromatografa lquida de alto rendimiento.
Concentracin
Una vez terminado el proceso de aislamiento, la protena separada se somete a un
proceso de concentracin como liofilizacin, en el que la protena se seca y se separa de
todas las dems partculas solubles mediante ultrafiltracin, donde la solucin
de protena se pasa a travs de membranas permeables por medio de bombas o
centrifugacin. Una vez concentrada, la solucin de protena se puede utilizar para el
estudio.