T4 BACTERIOPHAGE

Su nombre deriva del griego tnyos, que significa msculo, referido a la cola contrctil.

TAXONOMY

Group I: dsDNA viruses

Order: Caudovirales
Family: Myoviridae
Subfamily: Tevenvirinae
Genus: T4likevirus
CHARACTERISTICS OF T4 BACTERIOPHAGE

Virion

No envuelto
Virion es ~ 210x106 nm,
densidad de flotacin en CsCl es de 1,50 g / cm 3 y S20w ~ 1030S.
La infectividad es ter y cloroformo resistente.HEAD: Phage heads are prolate icosahedra,
~111 x 78 nm, and consist of 152 capsomers (T:13 Q:21).

CABEZA
Cabezas de fagos son icosaedros alargado, miden ~ 111 x 78 nm, y constan de 152
capsmeros (T:13 Q:21).

La protena vrtice, gp24, la principal protena de la cpside gp23.

Hoc (protenas de la cpside externa altamente antignica), un monmero en forma de pesa de
gimnasia en el centro de cada hexon de gp23, hasta 155 copias por la cpside (39 kDa;
subunidades rojos); y Soc (pequea protena de la cpside externa), una molcula en forma de
barra que se une entre hexones gp23, hasta 870 copias por la cpside (9 kDa; subunidades blanco).
Tanto Hoc y Soc son prescindibles, y se unen a la cpside despus de la finalizacin de ensamblaje
de la cpsida.
El montaje Soc ofrece una gran estabilidad a fago T4 para sobrevivir en ambientes hostiles como
pH extremo (pH 11), alta temperatura (60 C), choque osmtico, y una gran cantidad de agentes
de desnaturalizacin.
Soc mejora su supervivencia por ~ 104 veces. Por otro lado, Hoc no proporciona estabilidad
adicional significativo. Hoc puede interactuar con ciertos componentes de la superficie bacteriana,
proporcionando una ventaja adicional para la supervivencia (Sathaliyawala y Rao, resultados no
publicados).

TALLO: Is contractile, measure 113 x 16 nm and have a collar

Las fibras largas de la cola se pueden extender ms de 1000 . Se componen de cuatro protenas
diferentes. Es la regin C-terminal del dominio pie de gp37 (rojo) que es responsable para el
reconocimiento de la membrana externa de la bacteria husped.
Fibras de la cola cortas estn unidos a la placa de base por la parte delgada N-terminal, mientras
que el C-terminal globular se une a los receptores de la clula husped LPS

PLACA BASAL: 6 short spikes and 6 long fibers

El fago T4 inicia la infeccin de E. coli mediante el reconocimiento de los receptores de la

superficie celular de LPS con los extremos distales de sus largas fibras de la cola. La seal de
reconocimiento se transmite entonces a la protena de fijacin placa de base, GP9, y luego a la
propia placa de base.

Genome

lineal
dsDNA genoma de 168.903 pb
Genomas tienen un Mr ~ 120 x 106, que corresponde a 48% del peso de la partcula.
T4 tiene ~ 300 genes
T4 tiene un total de 289 genes que codifican protenas.
El ADN contiene 5-hidroximetilcitosina (HMC) en lugar de citosina (estos nucletidos son
glicosilada), un contenido de G + C de 35%

T4 LIFE CYCLE
LYTIC INFECTIONS

ADSORPTION, PENETRATION AND INJECTION

Ligandos: Tail fibers
Receptors: Membrane porin protein, ompC or
lipopolysaccharide (LPS)

the specialised membrane lipid

ADSORCION: El virus se fija o adsorbe a componentes de la superficie celular que actan como
receptores especficos. Se adhiere a ese sitio por medio de sus fibras de la cola

INYECCION Y PENETRACIN: Despus de la adsorcin, se produce un cambio configuracional en

las protenas de la placa basal, alguna de las cuales tienen actividad enzimtica y producen un
poro en la membrana citoplasmtica de la clula. La vaina del fago se contrae y el material
gentico viral ingresa en la clula, mientras que la envoltura proteica queda en el exterior. El fago
usa lisozima para degradar una porcin de la pared celular bacteriana para la insercin del ncleo
de la cola. El ADN se inyecta en el periplasma de la bacteria.

REPLICATION

El material gentico viral que ingresa en una clula contiene bases modificadas que evitan la
degradacin por nucleasas bacterianas. Esta modificacin consiste en la glicosilacin y/o
metilacin de algunas determinadas bases. En el caso del fago T4 se glucosila la base 5'hidroximetilcitosina. Para lograr una efectiva replicacin del genoma viral se deben sintetizar
algunas protenas ni bien el material gentico ingresa en la clula. Esta protenas tempranas
reparan el poro de la membrana citoplasmtica por donde ingres el genoma viral, degradan el
DNA bacteriano lo que proporciona una fuente de precursores, evita la sntesis de RNA y protenas
bacterianas, y proporciona ribosomas para la sntesis de protenas del fago.

As comienza el complejo comportamiento de este genoma viral. Algunos de los primeros genes
que se transcriben, llamados inmediata-temprana , codifican enzimas que descomponen ADN del
husped. Anfitrin ADN se descompone con el fin de utilizar nucletidos husped para producir
ADN viral ms.

Retraso en los genes tempranos y medios codifican las 20 protenas que estn implicadas en la
replicacin viral. De hecho , T4 codifica casi toda su propia maquinaria de replicacin. Hay dos
procesos de replicacin distintos de T4
ETAPA 1 - replicacin se produce de una manera bidireccional con mltiples orgenes de
replicacin en el genoma. La primera de varias rondas de replicacin se inician por los cebadores
de ARN sintetizados por la ARN polimerasa husped. Estos cebadores de ARN pueden viajar a su
regin de cortesa en dsDNA y desplazar a la otra hebra para producir una estructura llamada un
bucle R. El ARN unido ahora puede actuar como un cebador para la cadena principal de la
replicacin del ADN. La cadena retrasada se sintetiza a continuacin, utilizando la helicasa
replicativa, gp41. La replicacin del ADN se termin por gp30 que es la ligasa de T4 codificada, as
como la ADN ligasa de acogida.
Etapa 2 - En este punto el virus utiliza su propia maquinaria replicativa para transcribir sus genes
tardos con un proceso conocido como el modelo de pinza deslizante gp45. Los cebadores para la
sntesis de la cadena principal son productos intermedios de recombinacin en lugar de ARN
hechas por la ARN polimerasa

ENSAMBLE

Genes finales se expresan, (1) la placa basal viral se reuni primero , (2) este se adhiere a la cola y
(3) protenas de la fibra de la cola. Estas tres vas de protenas diferentes se combinan para formar
un T4 madura de la cpside del fago. ADN se empaqueta en la protena de la cpside madura por
el envasado y el corte de los concatmeros utilizando un complejo terminasa se encuentra al final
de la cadena de ADN concatemerized . El complejo terminasa se une a la cabeza de la cpside y se
mueve de ADN en la cabeza de la cpside vaca. La cpside tambin encierra enzimas necesarias
para las infecciones futuras, como la ADN polimerasa codificada por el virus

LIBERACION

La enzima viral codificada holina (gpt) crea los agujeros en la membrana interna de la clula
husped bacteriana para permitirla salida de la lisozimas y degradar la pared celular de
peptidoglicano. La lisis celular posteriormente sigue la liberacin de una ducha de la progenie del
bacterifago en el espacio extracelular.

APLICACIONES NANOTECNOLGICAS

Los virus han demostrado recientemente til para la deteccin de analitos diana tales como
explosivos, protenas, bacterias, virus, esporas y toxinas con alta selectividad y sensibilidad. los
fagos lticos pueden romper especficamente bacterias para liberar molculas marcadoras de
clulas especficas tales como enzimas que pueden ensayarse. Adems, los fagos tienen buena
estabilidad qumica y trmica, y se pueden conjugar con los nanomateriales y se inmovilizan en
una superficie del transductor en un dispositivo analtico.
Aunque la funcin natural de los virus es para almacenar y transportar material gentico, que
recientemente se han demostrado para actuar como plantillas para la sntesis y ensamblaje de los
nanomateriales, como vehculos para la administracin de frmacos y gen diana, y como sondas
para la deteccin e imgenes
Los biosensores han sido recientemente considerado como alternativas atractivas a las
plataformas existentes de deteccin de patgenos convencional. Los biosensores son dispositivos
analticos que se traducen un evento especfico bio-reconocimiento en una seal medible. Ofrecen
varias ventajas, tales como alto grado de sensibilidad y especificidad de la deteccin, preparacin
de la muestra mnima, costo-efectividad, la miniaturizacin y portabilidad para in situ monitoreo
en tiempo real y reducen el tiempo total requerido para la deteccin. En los sensores, el elemento
de reconocimiento o bien se integra dentro o se asocia estrechamente con una interfaz de
transductor que puede convertir qumicos, fsicos, o interacciones biolgicas en una salida
medible.
Durante las ltimas dos dcadas, los sensores, especialmente biosensores, se han convertido en
necesaria para la deteccin de diferentes analitos tales como explosivos, protenas, ADN,
marcadores de cncer, bacterias, virus, y las toxinas en la elaboracin de alimentos, la vigilancia
ambiental, diagnsticos clnicos, y la lucha contra el bioterrorismo. En cuanto a las propiedades del
transductor, biosensores se pueden clasificar como ptica, termomtrico, piezoelctrico,
magntico, micromecnica, y electroqumica.

Figure 18. Left. Schematic representation of A) bacteriophage T4 with all its native structures and
B) the non-infectious functional T4 nanoparticle decorated with a capture moiety resulting from
genetic engineering of the wild type bacteriophage T4. Right. Schematic representation of a sensor
surface which utilizes functional T4 nanoparticles as biorecognition elements. The detection of the
target could be done through optical or electrical transduction.

Estudios

Deteccin de Staphylococcus aureus usando fagos lticos (deteccin de lmite de ~ 104 ufc ml-1)
por resonancia de plasmn superficial (SPR). (Balasubramanian S., et al. 2006)
inmovilizacin orientada de bacterifago T4 travs de la introduccin de ligandos de unin
especficos en la cabeza de fagos usando una tcnica de presentacin en fagos. Fusin del gen de
la protena portadora de carboxilo biotina (BCCP) o el gen mdulo de unin a celulosa (CBM) con
el gen de la protena de la cpside pequea exterior (SOC) de T4 como resultado la expresin del
ligando respectivo en la cabeza del fago.