TECHNIQUES D’ANALYSES BIOLOGIQUES

TRAVAUX PRATIQUES
Titrage des acides aminés par pHmètrie

Les acides aminés , possèdent tous à l’exception de la proline, au moins 2 groupes

fonctionnels caractéristiques : un groupe carboxylique -COOH et un groupe aminé NH2, situé en
par rapport au carboxyle. Certains possèdent en outre un groupement ionisables dans leur radical :
groupements carboxyle des acides aspartique et glutamique, OH phénolique de la tyrosine,
imidazole de l’histidine, guanidine de l’arginine, entre autres. Il est important de connaître les
caractéristiques de titrage (pK) de ces différentes fonctions. Elles permettent de mieux comprendre
le mode de fonctionnement des enzymes (fonctions ionisables situées au centre actif). Le
comportement des peptides et des protéines en électrophorèse et en chromatographie d’échange
d’ions, etc. Le titrage doit souvent être réaliser sur les molécules moins complexes que sont les
peptides et les protéines.

1. Principe

Prenons l’exemple le plus simple, celui de la glycine, acide aminé neuter, ne possédant pas de
fonction ionisable sur la chaîne latérale. En solution aqueuse, elle se présente sous forme d’un ion
bipolaire (Zwittérion). Cet ion à la fois cation par NH3+ et anion par COO-.
- En présence d’un acide, l’ion bipolaire se comporte comme une base et peut fixer un proton ; la
constante de dissociation est K1.
- En présence d’une base, l’ion bipolaire se comporte comme un acide et peut libérer un proton ;
la constante de dissociation K2.
On peut résumer ceci de la façon suivante :
 1. Courbe de titration d’un acide amine.

3. Manipulation

Introduire dans un bêcher de 100 ml : 40 ml de solution de glycocolle = glycine 0.04 M le

barreau aimanté. Placer le bêcher sur l’agitateur magnétique, lancer l’agitation, lire le pH ajouter
0.6 ml de Hcl 1N, Noter le pH.

- continuer à ajouter la même solution de Hcl goutte à goutte (maximum 1.4 à 2 ml au

total) jusqu’à obtenir un pH de 2.
- à la solution de glycocolle acidifiée par les 1.4 à 2 ml de Hcl 1N, ajouter une solution de NaOH 0.1
N, 0.5, en notant la valeur de pH après chaque addition, jusqu’à atteindre un pH de 11.5 à 12. 4.
Compte-rendu
-Courbe de titrage de la glycine des pH en fonction des ml de NaOH versés :

-Détermination graphique de pK1, pK2 et pHi (emplacement exact des ces valeurs : voir courbe de
titrage d’un acide aminé simple).

- Calcul du pHi dont la valeur est à comparer à celle obtenue graphiquement.

- détermination des formes ioniques et leur % à chaque pH. ( pH très acide et très basique).

4.Conclusion : intérêt de la titration de l’acide aminé.