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- dans une autre série de tubes à essais, on prélève des volumes différents (100 µL au MAXIMUM) de la solution de
protéines à doser (éventuellement diluée) complétés par une solution tampon ;
- après avoir ajouté 1 mL de colorant et mélangé, on mesure l'absorbance à 595 nm de ces solutions EN MÊME TEMPS
que l'absorbance des solutions de la gamme étalon. Les résultats sont les suivants :
10 60
Volume prélevé de solution à doser (µL)
sérum 1 sérum 2
Dilution préalable de la solution à doser Non diluée 3
A partir de la droite étalon et de ces valeurs, calculez la concentration en protéines de la solution à doser en
mg/ml.
Réponse a: (complétez le tableau suivant). De combien est diluée la BSA avant la préparation de la gamme
d’étalonnage ?
Réponse b : sérum 1 :0.46 mg/ml ; sérum 2 : 0.39 mg/ml ; dilution de la BSA : 1/10…
.Attention :
.Exercice n°2
Quel est le pH d’un mélange de 5 ml d’acétate de sodium et de 4 ml d’acide acétique 0,1mol/l avant (pH1) et après (pH2)
ajout de 1ml d’HCl à 0,1 mol/l ? (le pKa de l’acide à 25 °c = 4,76).
Réponse : pH1 : 4,86 pH2 : 4,66
Quelle conclusion tirez vous de la solution décrite ci-dessus ?
Réponse : (très brève)…Solution tampon (le pH a subi une variation de 0,2 unités seulement).
Exercice n°3
Le mode opératoire classique réalisé au laboratoire, est une méthode de précipitation sélective par un hétéropolyacide
(A) de concentration de 7 mmol/l (PM=5708) en présence d’un cation bivalent (B) à 2 M. Le tableau récapitulatif ci-
dessous (à compléter) permet d’avoir chaque fraction de lipoprotéines séparément, en utilisant des concentrations
connues et précises pour chaque fraction de lipoprotéines indépendamment.
Exercice n°4
Préparation de solutions de caféine de différentes concentrations
Avec la caféine extraite que l'on a purifiée, on fabrique une solution de caféine dans le dichlorométhane de concentration
32 mg.L-1.
On désire préparer des solutions de concentrations 4 mg.L-1, 8 mg.L-1, 12 mg.L-1et 16 mg.L-1
Parmi le matériel suivant, indiquer celui utilisé pour préparer la solution de caféine de
concentration 16 mg.L-1. Justifier votre choix.
Matériel à disposition :
- béchers de 100 mL et 200 mL
- fioles jaugées de 5,0 mL ; 10,0 mL et 50,0 mL
- pipettes jaugées de 2,0 mL et 5,0 mL
- éprouvette graduée de 5 mL
Réponse :…Fioles et pipettes jaugées
MESURE D'ABSORBANCE On a tracé ci dessous (figure n°l) le spectre d'absorption de la caféine entre 220 nm et 320 nm
pour une des solutions de caféine.
Dans tous les cas, l'absorbance est proportionnelle à la concentration en caféine : A = k.c
Soit A = k271.c pour la droite n°2 et A = k228.c pour la droite à identifier.
D'après la figure 1, on constate qu'une solution de concentration donnée en caféine absorbe moins la lumière dont =
228 nm que celle dont = 271 nm. Donc k228 < k271
Le coefficient directeur de la droite à identifier est plus faible que celui de la droite n°2.
Exercice n°5
La manipulation et la mise en évidence de la quantité de glycogène par la méthode colorimétrique présent dans le foie
se déroulent en deux temps. Expliquer brièvement le protocole (2 lignes) ?
Réponse :
il faut en premier lieu ...Extraction..................................................................................................
puis dans un deuxième temps…Dosage du glycogène grâce courbe d’étalonnage……………
Exercice n°6
Afin de doser les sucres réducteurs d’un jus de fruit par la méthode colorimétrique, nous avons pressé le matériel
biologique (oranges), puis nous avons utilisé 3 traitements successifs. En 1centrifugation du jus (Préciser le type de
centrifugation utilisée). En 2 récupération de l’échantillon dans du méthanol. En 3 ajout de la liqueur de Fehling suivi de la
solution molybdique. Expliquez le rôle de chaque étape ?
Réponse :
1 Centrifugation différentielle ; les sucres étant solubles (récupération dans le surnageant).
2…Précipitation des protéines
3…Dosage des sucres réducteurs ; précipitation et dépôt (cuivrique) par fehling redissolution par la solution molybdique.