Sunteți pe pagina 1din 14

Lucrare

Organizarea ultrastructural a celulei eucariote:


organitele sintezei i secreiei celulare si organitele
generatoare de energie
Citoplasma este format din dou compartimente:
1.Citoplasma nestructurat sau hialoplasma (substana fundamental a
citoplasmei),
2.Citoplasma structurat sau morfoplasma, reprezentat de organitele celulare.
n afar de organitele celulare, n citoplasm se pot gsi incluziunile celulare,
produi de secreie i acumulri de produi exogeni.

Clasificarea organitelor celulare dup funcia lor n celul:

A. Organitele sintezei i secreiei


celulare:

D. Organitele motilitii celulare:

-reticulul endoplasmic,

-microfilamentele,

-ribozomii,

-microtubulii,

-complexul Golgi.

-centrul celular.

B. Organitele generatoare de energie:

E. Incluziuni celulare

- mitocondriile.

- substane proteice, de exemplu


hemoglobina;

C. Organitele digestiei celulare:

- lipide, sub form de picturi sferice

-lizozomii,

- glicogen-

-peroxizomii.

- substanele minerale - fier, siliciu

A. ORGANITELE SINTEZEI SI SECRETIEI CELULARE:

1. RETICOLUL ENDOPLASMIC

Este un organit membranar, reprezentat de un sistem de canalicule i


cisteme delimitate de endomembrane trilaminate cu o grosime de 5-6
nm.
Comun tuturor celulelor cu excepia hematiei adulte

Definiie

Localizare

Este prezent n numr mare n celulele angajate n sinteze de proteine,


glucide i lipide, fiind bine dezvoltat n celulele secretorii exo- i
endocrine.

Numr

- RE neted

- RE rugos (granular)

in

REN este bine reprezentat n


celulele care sintetizeaz hormoni
steroizi
(glanda
suprarenal,
celulele)nterstiiale din testicul i
ovar), glicogen (hepatocite) i
pigmeni (melanocite).

RER este bine reprezentat n


celulele glandulare (pancreatice),
n hepatocite (unde formeaz
corpii Berg), n celulele nervoase
(unde formeaz corpii lui Nissl).

Forma , dimensiuni

Este un sistem de canalicule i


cisteme
delimitate
de
endomembrane trilaminate cu o
grosime de 5-6 nm.

Este un ansamblu de structuri


canaliculare
i
veziculare
membranare, cu diametru de
aproximativ 20 nm, pe suprafaa
crora se gsesc ataai ribozomi,
prin subunitatea mare i care
sintetizeaz proteine de export.

Organizare
structurala -MO

Nu este vizibil la microscopul


fotonic.

Este vizibil la microscopul fotonic


datorit prezenei ribozomilor

Organizare
ultrastructuralaME

Apare ca un labirint de canalicule


care comunic cu sacii RER i la
nivelul crora nu se ataeaz
ribozomi. Membranele REN au
aceeasi structura ca si a RER

Apare sub form de saci aplatizai


sau
vezicule
delimitate
de
membrane
trilamelate
care
delimiteaz
un
lumen.
Membranele REG se continu cu

Tipuri:
Reprezentare
celule

Evidentiere

doar ca din loc in loc prezinta


fenestrari asemanatoare porilor
nucleari.
In celula musculara striata, REN,
poarta
numele
de
reticul
sarcoplasmatic.

membrana extern a nveliului


nuclear, iar lumenul, cu cisterna
perinuclear. (figurile 1, 2)
cu hemalaun picro-indigo-carmin
(culoare brun), tricromul lui
Ramony Cajal (tent roie),
RER se evideniaz bine in
celulele
glandulare
(acinii
pancreatici), unde ocup o poziie
baza1, n celulele nervoase
(corpii Nissl), n hepatocite (corpii
Berg)

Figura 1. Localizarea RER si REN n celul n raport cu


nucleul.

a.

b.

c.

Figura 2. Reticul endoplasmic neted si rugos, schema si ME

2. RIBOZOMII sau corpusculii lui Palade (1953)

Definitie

Localizare
Tipuri

Ribozomii sunt organite celulare submicroscopice, nemembranare,


formate din ribonucleoproteine (ARNr) avnd rol n procesele de
sintez a proteinelor.
sunt prezeni n citoplasma tuturor celulelor, cu excepia eritrocitelor
Pot fi de dou tipuri:
- ribozomi liberi n citoplasm
-izolai
- grupai n poliribozomi (polizomi)
-ataai de membranele reticulului endoplasmic i de faa
citoplasmatic a nveliului nuclear

Numar

Numrul ribozomilor variaz n funcie de tipul de celul.


Astfel, ei se gsesc n numr foarte mare n celulele secretorii
angajate n sinteza de proteine.

Dimensiuni

diametrul este cuprins ntre 15 - 30 nm.

Organizare
structurala -MO

Organizare
ultrastructurala- ME

ribozomii nu pot fi observai datorit dimensiunilor foarte mici, sub


limita puterii de rezoluie. In celulele n care se desfoar procese
intense de proteogenez (celulele foliculare din ovar), ribozomii
formeaz zone intens bazofile n citoplasm.
apar sub form de granule ovalare sau elipsoidale cu diametrul mare
de 20-30 nm i diametrul mic de 16-17 nm. Prezint dou subuniti
inegale ca dimensiune i diferite ca structur morfologic i
biochimic, (figura 3, 4).
- subunitatea mic, cu coeficient de sedimentare de 40SV;
- subunitatea mare de 60SV, prevzut cu un canal prin care trece
lanul peptidic sintetizat

Figura 3. Poliribozomii . Formarea lanturilor sinuoase in care


ribozomii sunt uniti intre ei printr-o molecula de ARNmcare are
forma unui filament gros.

Figura 4. Ribozomi atasati reticulului endoplasmic,


ME.
La

nivelul

poliribozomilor

liberi

se

sintetizeaz

proteinele de structur (procese de diviziune i cretere),


iar la nivelul ribozomi lor ataai membranelor RE se
sintetizeaz proteine de export (enzime, hormoni,
anticorpi).

3. APARATUL GOLGI

Definiie

Este un sistem intracitoplasmatic de caviti limitate de citomembrane,

Localizare

Este prezent att n celulele vegetale ct i n celulele animale, cu


excepia hematiei adulte. Este diferit n funcie de tipul i activitatea
celulei - n neuroni este plasat perinuclear, n celulele secretorii
exocrine se afl supranuclear, iar n celulele tiroidiene se deplaseaz
ntre cei doi poli ai celulei
Reea de canalicule anastomozate si de vacuole de diferite mrimi,
dictiozomi(formatiuni izolate sau grupate sub forma de tubuli
anastomozati intre ei sau sub forma de cisterne)
Corpii Golgi se caracterizeaza ultrastructural prin :
-saci turtiti formati din unitatea membranara , aranjati paralel cu

Organizare
structurala -MO
Organizare

ultrastructuralaME

Evidentiere

extremitatile mai dilatate ce prezinta o fa proximal, de formare,


orientat ctre nucleu (cis) si o fa distal, de maturare, orientat
ctre plasmalem (trans) (figura 5).
-vezicule, situate in extremitatea sacilor , n raport cu faa de
maturare, cu diametrul de 25-50 nm
-vacuole de 0,5-1micron situate lng faa de formare (pe fata concava)
a sacilor paraleli (figurile 6,7,8,9)
Poate fi evidentiat in celula proaspata cu colorantul rosu-neutru, iar in
celula fixata prin colorare cu saruri de osmiu unde apare ca o retea
filamentoasa anastomozata, situata peri sau paranuclear.

Figura 5. Aparatul Golgi - dictiozomi - formai din cisterne aplatizate i vezicule delimitate de membrane lipoproteice
Au rol in formarea de endomembrane, sinteza complexelor de hidrai de carbon, formarea proteoglicani1or i a
glicoproteinelor, maturarea lipoproteinelor , formarea lizozomi lor primari.

Figura 6. Aparat Golgi, adenohipofiza, ME

Figura 7. Aparat Golgi, capsula Bowmann


rinichi, ME

Figura 9. Aparat Golgi, Limfocit, ME

Figura 8. Aparat Golgi, epididim, ME

B. ORGANITELE GENERATOARE DE ENERGIE:

1. MITOCONDRIILE

Definiie

Localizare

Numr
Dimensiuni
Forma

Organizare
structurala -MO
Organizare
ultrastructuralaME

Evidentiere

Mitocondriile sunt organite membranare ce conin sisteme enzimatice


necesare oxidrii materialelor nutritive, sintezei moleculelor de A TP i
cuplarea acestor dou procese (fosforilarea oxidativ).
Prezente n toate celulele cu metabolism aerob, cu excepia eritrocitului
adult. Sunt rspndite n ntreaga citoplasm, cu predilecie la polii
celulei sau perinuc1ear n momentele de intens activitate de sintez.
Depinde de gradul activitii celulare, fiind mai numeroase n celulele
n care activitatea funcional este intens (ex. hepatocite).
Lungimea este de aprox. 7m, iar grosimea de 0,5 m; cu ct o celul
este mai activ cu att mitocondriile sunt mai mari.
- au o mare plasticitate
- alungit n celulele pancreasului exocrin
- granular n hepatocite
Ia microscopul fotonic n contrast de faz: sub form de granule izolate
n citoplasm,
granule niruite ca mrgelele sau filamente,
(figura 10).
Form sferic, formate din dou membrane trilamelare: membrana
extern i membrana intern care trimite n interior prelungiri ce
formeaz crestele mitocondriale.
Spaiul dintre cele dou membrane se numete camera extern, iar
ntre membrana intern i crestele mitocondriale se afl camera
intern sau matricea mitocondrial
Membrana intern este alctuit din particule elementare - unitile
tripartite care sunt alctuite dintr-un cap sferic, o tij cilindric i o
baz patrulater (figurile 11, 12, 13)
Coloraii supravitale cu verde Janus B pentru celulele nefixate i
hematoxilin feric Regaud pentru celulele fixate

Figura 10. Structura mitocondriei, schema. 1. Membrana externa, 2. Membrana interna ce trimite in interior
prelungiri, 3. Cristele mitocondriale, 4. Matricea mitocondriala

Figura 11. Criste mitocondriale, ME

Figura 12. Tubuli mitocondriali, ME

Figura 13. Mitocondrii intermediare, ME

Metode de studiu ale biologiei celulare


Fracionarea celular

Fracionarea celular este o tehnic de rupere a esuturilor i celulelor


ntr-un mod controlat. Se realizeaz astfel omogenizarea sau destrucia legturilor
celulare prin diferite procedee, separarea fraciunilor celulare fcndu-se n
funcie de densitate i volum.

Tehnica de fracionarea celular are dou aplicaii majore:


-extragerea organitelor celulare, separarea lor de mediul normal celular, ntr-o
cantitate suficient i de o mare puritate, pentru a putea fi studiate compoziia
chimic i funciile lor; de exemplu: fracionarea celular a fost folosit pentru

nelegerea mecanismului fosforilrii oxidative desfurat n mitocodrii, sau a


evenimentelor

care

rezult

ca

urmare

legrii

ribozomilor

la

reticulul

endoplasmatic.
-identificarea calizrii intracelulare a unor molecule specifice, alturi de
celelalte tehnici de citochimie.
Deoarece, morfologia multora dintre organite se modific dup dezbinarea
celulei, tehnica fracionrii celulare necesit folosirea unor procedee analitice
pentru identificarea fraciunilor celulare, nu doar dup morfologia organitelor din
care ele provin, ci i de asemenea, dup constituenii chimiei i enzimatici.

Principiile fracionrii celulare


Primul pas n extragerea unor cantiti suficiente de organite celulare, l
reprezint ruperea membranelor plasmatice, prin diferite procedee mecanice i
chimice, urmat de separarea fraciunilor celulare prin centrifugare, n funcie de
volum i densitate.
Centrifugarea se folosete, pentru o rezoluie ct mai bun a diferenierii
organitelor celulare, de diferenele dintre proprietile lor fizice, din care cele mai
importante sunt mrimea i densitatea. Exist numeroase similitudini ntre
organite att n ceea ce privete mrimea ct i densitatea lor, ns n general
structuri care au un volum asemntor au densiti diferite.
Centrifugarea difereniat presupune separarea fraciuni lor celulare fie doar
n funcie de mrimea particulelor subcelulare, fie doar dup densitatea lor.
Pentru ruperea membrane lor plasmatice, celulele sunt suspendate ntr-o
soluie ce conine o sare cu un pH apropiat cu al mediului intracelular, de ex.
sucroza- izotonic. Ulterior este necesar agitarea suspensiei celulare la o vitez
foarte mare (variaz n funcie de tipul organitului celular care trebuie separat),

prin centrifugare, sau prin plasarea sa ntr-un cmp sonie de nalt frecven
(ultrasonare) .

Izolarea organitelor celulare


Procesul de

separare a organitelor celulare presupune parcurgere

urmtoarelor etape:
-ruperea membranelor celulare, de obicei prin tehnici mecanice;
-fraciunile concentrate de organite sunt apoi pregtite pentru separarea prin
centrifugarea difereniat;
-purificarea tipurilor de organite celulare, bazat pe diferena gradientelor de
densitate.
Prima etap const n distrugerea membranei celulare, n condiii care s
produc afectarea minim a organitelor celulare, se realizeaz folosind un
omogenizator mecanic.
n funcie de tipul de celule, se cunosc tehnici diferite pentru fragmentarea
membranei celulare (omogenizatorul Dounce este de obicei utilizat pentru
culturile de celule, omogenizatorul Potter-Elvehjem pentru esuturile fragile -ficat).
Omogenizarea celulelor sau a esuturilor cauzeaz de obicei distrugerea
parial a unor organite.
Dup fracionarea peretelui celular, suspensiile respective sunt centrifugate
pentru separarea diferitelor tipuri de organite. Viteza de centrifugare este iniial
foarte mare (4000 rot. / min.), pentru cteva ore), timp n care fiecare particul
subcelular migreaz la o poziie de echilibru; n funcie de mrimea lor i de
densitate, acestea sunt redistribuite n sediment dup centrifugare, astfel: nuclei,
mitocondrii, lizozomi i peroxizomi, RE i aparatul Golgi, i n final ribozomii
liberi.

n urma centrifugrii fiecare oragnit va rmne la un anumit nivel n


eprubet, n funcie de densitatea lui de echilibru, cu formarea unor benzi (faze),
ce reprezint fiecare fraciune celular separat.
Lizozomii i peroxizomii, care au mrimi i densiti asemntoare, sunt mai
greu de separat. De asemenea, fragmentele membranare derivate din REN,
complexul Golgi, endozomi i membranele plasmatice sunt recunoscute prin
formarea de vezicule cu suprafee netede, dar care frecvent sunt greu de separat.
Izolarea unui anumit organit celular poate fi facilitat prin creterea
numrului lor. De exemplu, cnd cobaii sunt tratai cu clofibrat, numrul
peroxizomilor n celulele hepatice crete considerabil. Creterea numrului de
organite celulare, care apare dup administrarea diverilor compui chimici, are
ca rezultat mbuntirea purificrii pe tipuri de organite.

Activitate practic:
Evidenierea Corpusculilor Nissl cu Violet Cresyl

Fixatori: alcool etilic absolute sau 95%, Carnoy sau formol neutru salin

Soluii :
1. Soluia de Cresyl violet :

-cresyl violet.0,5g
-ap distilat100ml

2. Soluia difereniatoare :

-acid acetic glacial0,25ml


-alcool etilic 100ml.

Tehnica de colorare:

-deparafinare
-hidratare
-colorare cu Cresyl violet, 10-20 minute
-spalare n ap distilat
-difereniere n alcool acid 4-8 secunde (pn nu se mai scurge colorant)
-trecere scurt prin alcool absolut
-difereniere n xilen (control microscopic, la nevoie se reia diferenierea)
-montare n balsam de Canada.

Rezultate: (figura 14)

-corpusculii Nissl i nucleolii apar albastru-nchis


-neuronii se coloreaz albastru palid
-nucleii se coloreaza albastru deschis.

Figura

14.

Corpi

Violet Cresyl, ob.X40

Nissl,

col.