Electrozi chimic modificati

Student:

Profesor coordonator:

Cuprins

Capitolul 1: Scurt istoric

Capitolul 2: Electrozi chimici modificati electrocatilitici
Capitolul 2.1 Mediatori redox
electrozilor chimic modificai

utilizai

construcia

Capitolul 2.2:Electrozi chimici modificai bazai pe enzime

Capitolul 3: APLICAIILE ELECTROZILOR CHIMIC MODIFICAI
Capitolul 3.1: ERD Aplicatiile electrozilor chimic modificat
Capitolul 3.2: Electrozi chimic modificai coninnd TMPD

Capitolul 1: Scurt istoric

Cei mai vechi senzori electrochimici dateaz nc din anii 1950 i au fost utilizai
pentru monitorizarea oxigenului. Mai recent, din momentul n care OSHA (Occupational
Safety and Helath Administration) a nceput s cear monitorizarea gazelor toxice i
combustibile n aplicaiile din spaii nchise, au nceput s se dezvolte senzori noi mult
mai performai.
Pe la mijlocul anilor 1980, au aprut o serie de senzori electrochimici miniaturali
utilizai pentru detectarea multor gaze toxice n gama PEL, cu senzori care prezint o
bun densibilitate i selectivitate. n prezent, o mare varietate de senzori electrochimici
sunt

utilizai

multe

aplicaii

de

laborator

sau

portabile.

Dimensiunea fizic, geometria, selectarea diferitelor componente i construcia unui

sensor electrochimic deobicei depinde de utilizarea ulterioar. n fapt, aspectul senzorilor
electrochimici utilizai n determinarea diferitelor gaze poate fi similar dar funciile
acestora s fie puternic diferite. De exemplu, un sensor pentru determinarea
concentraiilor sczute de gas cu o sensibilitate foarte mare utilizeaz o membran
hidrofobic cu porozitate mare i capilaritate mai puin restrictiv pentru a permite
trecerea unui numr mai mare de molecule pentru a produce un semnal mai puternic
pentru o sensibiliate mai bun.Astfel, un sensor electrochimic cu sensibilitate mai mare
va avea un timp de via releativ mai scurt datorit pierderii umiditii prin membrane
poroas. n mod similar, compoziia electrolitului i materialul folosit pentru electrod sunt
selectate pe baza reactivitii chimice a gazului de msurat. Prin selectarea atent a
electrolitului i/sau a electrodului, se poate obine o selecie adecvat pentru gazul de
msurat

dar

sensibilitatea

de

msurare

poate

fi

redus.

Prin urmare, senzori electrochimici diferii pot s fie foarte asemntori dar s fe
construii din materiale diferite precum electrodul, compoziia electrolitului i porozitatea
barierelor hidrofobe. n plus, o serie de senzori electrochimici utilizeaz energie electric
extern pentru ai face s reacioneze cu gazul de msurat. Toate componentele senzorului
joac un rol foarte mare n determinarea tuturor caracteristicilor senzorului.

Capitolul
2:
Electrozi
electrocatilitici

chimici

modificati

Un electrod chimic modificat poate definit ca reprezentnd o modificare raional

intenionat a structurii moleculare a suprafeei electrozilor convenionali n scopul
utilizrii lor n cadrul unor aplicaii specifice .
Electrozii chimic modificai (CMEs) se bazeaz pe fixarea unui centru redox pe
suprafaa electrodului. Acesta funcioneaz ca un mediator pentru transferul rapid de
electroni spre molecula de substrat, fiind oxidat sau redus lent (sau deloc n unele cazuri)
la suprafaElectrozii chimic modificai (CMEs) se bazeaz pe fixarea unui centru redox pe
suprafaa electrodului. Acesta funcioneaz ca un mediator pentru transferul rapid de
electroni spre molecula de substrat, fiind oxidat sau redus lent (sau deloc n unele cazuri)
la suprafaa unui electrod convenional.
Un electrod chimic modificat ideal pentru aplicaii analitice, ceea ce presupune
funcionarea continu de durat n sisteme n flux, trebuie s prezinte urmtoarele
caracteristici:
a)
O bun stabilitate mecanic i chimic att ale electrodului de baz i a
grupri modificatoare, precum i a legturii dintre electrod i acesta din urm;
b)
Reproductibilitatea pe o anumit perioad i stabilitate n timp a activitii
gruprii modificatoare fa de compusul de analizat;
c)

Flexibilitate n capacitatea de legare a gruprii modificatoare;

d)

Un domeniu larg de linearitate a pspunsului;

e)

Cureni de baz mici i stabili pe domeniul de potenial utilizat;

f)

Compatibilitatea cu o gam larg de solveni apoi i organici.

n ultima perioad au fost folosite diferite procese de imobilizare a unor compui chimici
pe electrozi de diferite tipuri (n ceea ce privete materialul i construcia acestora), dar
majoritatea proceselor au avut la baz cteva tehnici:
I.

Adsorbia direct a modificatorului pe suprafaa electrodului;

II.

Legarea covalent a modificatorului la un centru specific al suprafeei;

III.

Acoperirea fizic a suprafeei cu un polimer coninnd modificatorul;

IV.
conductiv).

Amestecarea modificatorului cu o matrice conductiv (past

Dintre cele patru metode de fabricare prezentate, ultimele dou par s fac cea mai
posibil obinerea unui electrod ideal.
2

Folosirea CMEs n chimia analitic se bucur de un success considerabil. Prin

modificarea chimic a suprafeei electrozilor a fost posibil obinerea unei varieti de
electrozi chimic modificai prin intermediul crora pot fi determinai un numr mare de
compui chimici. Datorit selectivitii i sensibilitii mrite, electrozii chimic modificai
sunt ideali pentru electroanalize. CMEs i-au gsit largi aplicaii, dintre care n:
electroanaliz, preconcentrare, permeabilitate selectiv recunoatere specific, calea
fiind nc deschis i spre alte aplicaii .

Capitolul 2.1 Mediatori redox utilizai n construcia electrozilor

chimic modificai
Mediatorii redox sunt utilizai n construcia senzorilor biochimici utilizai n
diferite scopuri.
Datorit dificultilor de a realiza un transfer direct de electroni ntre enzyme i
electrozi s-a apelat la utilizarea unor molecule mici electroactive care se numesc
mediatori, acetia mrind viteza cu care are loc transferul de electroni.
Mediatorii redox sunt molecule chimice organice sau compleci organici care
pot avea proprieti catalitice asupra unor compui. Compusul de analizat (substratul n
forma redus Sred) difuzeaz n soluie spre suprafaa electrodului, unde este oxidat n
urma reaciei chimice cu forma oxidat a mediatorului (Mox). La nivelul electrodului se
aplic un potenial sufficient de pozitiv pentru ca forma stabil a mediatorului (Mred)
rezultat n urma reaciei electrochimice cu schimb de electroni s fie rapid reoxidat la
forma activ catalytic.
Proprietile mediatorilor redox
Un mediator ideal prezint proprietile:
1.

stoechiometrie a reaciei cu transfer de electroni bine definit.

2.

un potenial formal E0 cunoscut.

3.

un transfer electronic omogen i heterogen rapid.

4.

solubilitate mare n mediu apos la pH apropiat de 7.

5.

stabilitate n forma oxidat ct i redus.

6.
s nu prezinte interferene optice n domeniul n care se face
determinarea compusului de analizat.
7.
s nu interacioneze cu compusul de analizat ntr-o manier care s
altereze potenialul su redox.

n general se recomand utilizarea mai multor mediatori redox n scopul studierii

interaciei dintre acetia i biocomponentul de analizat. Este de dorit ca potenialul redox
al biocomponentului s nu varieze, n caz contrar se poate presupune existena unei
interacii ntre mediatorul redox i biocomponent. Potenialulu formal al compusului de
analizat este un alt criteriu important n alegerea mediatorului. Potenialul formal al
mediatorului ar trebui s fie nul la nceperea studierii biocomponentului. Parametrul care
urmeaz s fie msurat nu trebuie s varieze la utilizarea unui variator, astfel interacia
mediator-compus nu mai are loc corespunztor.

Capitolul 2.2: Electrozi chimic modificai bazai pe enzime

Unul din factorii care limiteaz aplicaiile practice n chimia analitic a senzorillor
chimici este selectivitatea. Folosirea enzimelor imobilizate, pe lng mediatorul redox
(M) , la construcia electrozilor rezolv problema selectivitii. Aprnd astfel i o nou
clas de detectori numii electrozi chimic modificai bazai pe enzime imobilizate
(IECMEs).
Studile privind IECMEs au luat amploare mai ales n ultimii ani, IECMEs fiind
instrumente analitice care combin selectivitatea, specificitatea i capacitatea catalitic a
enzimelor pentru substratul lor natural cu avantajele deteciei electrochimice.
n ultima decad electrozii chimic modificai i-au gsit largi aplicaii n
construcia biosenzorilor, care sunt electrozi chimic modificai bazai pe enzime,ce
combin specificitatea, selectivitatea Si capacitatea catalitic a enzimelor fa de
substratul lor natural cu avantajele deteciei electrochimice.
Biosenzorii bazai pe enzime pot fi folosii n mod selective n cadrul analizei
unor compui diveri. Un factor care limiteaz atingerea ntregului potenial de proiectare
i realizare a acestor senzori este legat de proprietile enzimei ca atare.
n ultimii ani o atenie deosebit s-a acordat unei noi clase de enzyme,
quinoproteinel, care prezint diferite activiti enzimatice asupra unor substane de
importan biologic.
Se presupune c prin utilizarea acestor quinoproteine n construcia
biosenzorilro se poate realiza un transfer direct ntre centrul activ al enzimei i electrod
eliminndu-se utilizarea mediatorilor redox. Schimbul de electroni direct ( fr mediatori)
ntre o grupare redox a proteinei suprafaa electrodului a fost studiat pentru un numr
de proteine ca: citocromul, plastocianina, azurine, glucoz-oxidaza.
n ultimii ani au fost realizai biosenzori amperometrici i poteniometrici, care
pe lng mediatorul redox include Si biomolecule, rezultnd o nou clasa de detectori
numii electrozi chimic modificai bazai pe enzime imobilizate. n literature de
specialitate exist o serie de revievuri [30-39] prezentnd principiul de construcie
funcionare, precum i principalele caracteristici i aplicaiile electrozilor chimic
modificai bazai pe enzyme imobilizate.
4

Sunt doua ci de cuplare a procesului de electrod cu reacia enzimatic. Prima

aproximare este bazat pe utilizarea mediatorilor de mrime molecular mic. n acest
caz reacia de transfer de electroni are loc fr mediatori. Regenerarea mediatorului are
loc pe suprafaa electrodului.
Tehnicile de imobilizare constau n metode fizice i chimice de imobilizare ct
i n combinaii ale acestora.
Principalele metode fizice sunt adsorbia pe matrici insolubile i entraparea n
geluri insolubile.
Imobilizarea chimic este efectuat prin legarea covalent pe suporturi
derivatizate sau legarea ncruciat intermolecular a biomoleculelor.

Capitolul 3: APLICAIILE ELECTROZILOR CHIMIC

MODIFICAI
Capitolul 3.1: Aplicaiile electrozilor chimic modificai
Nr. CME
1.

Cobaltftalocianina n
pasta de
crbune

2.

Cobaltftalocianina n
pasta de
crbune

Compuii
analizai
Hidrazina (N2H4)

Cisteina,
Homocisteina,
N-acetilcisteina,
Glutation

Caracteristici ale electrozilor chimic modificai

Oxidarea catalitic a N2H4 pe acest electrod
chimic modificat a fost folosit n FIA.
Detecia a fost realizat la o,1V v.s. Ag/AgCl
n soluie de NaOH 0,2 M, valoare care este cu
mai mult de 100 mV mai mic comparativ cu
cea necesar deteciei electrochimice la nivelul
unui electrod de crbune nemodificat.
Rspunsul liniar a fost observat pentru
concentraii de 10-8 10-3 M ale N2H4 , detecia
limit fiind mai mic de 1 pmol.
Electrodul chimic modificat catalizeaz
electrooxidarea tiolilor la +0,75 +0,85 V v.s.
Ag/AgCl ntr-un mediu de H2SO4 0,5 M sau
PO4-3 0,5 M. Folosit n combinare cu
cromatografia de lichide , electrodul chimic
modificat manifest un rspuns liniar pentru
cistein ntre 2,7 270 pmoli. Electrodul a fost
sufficient de stabil pentru folosirea continu
timp de o zi iar suprafaa sa a putut fi
regenerat cu o deviaie standard relativ de
o,7%. Metodele LCEC avand la baz electrozii
chimic modificai au fost utilizate pentru
determinarea cisteinei i glutationului n snge
i plasma.
5

3.

CobaltTiopurine
ftalocianina n
pasta de
crbune

4.

Cobaltftalocianina n
pasta de
crbune

Ac. Oxalic, ceto-acizi, ac.

Piruvic, ac. Fenil
piruvic, ac. ceto glutaric

5.

Electrod de
crbune
sticlos
acoperit cu un
film de
ruteniu i
cianur
Mn(III) mtetrafenil
porfirin
depus pe un
electrod de
crbune
sticlos

Insulina

7.

Electrod de
crbune
acoperit cu un
film compus
din cianur i
oxid de
ruteniu

Cistein,
glutation

8.

Electrod de
crbune
sticlos
acoperit cu

Compui tioici,
cistein,
glutation

6.

Acid ascorbic,
hidralazin,
epinefrina

Procedeul a fost realizat pentru determinarea 6mercaptotiopurinei, 6-tioguaninei i a altor

tiopurine din snge i plasm. Detecia limit a
fost de 1,58 pmoli, aproximativ cu un ordin de
mrime mai mare dect detecia prin absorbie
n U.V. sau prin fluorescen.
Electrodul chimic modificat catalizeaz
oxidarea acidului oxalic i a cetoacizilor la o
valoare cuprins ntre + 0,75 + 0,90 V v.s.
Ag/AgCl ntr-un mediu de PO4-3 0,5 M, pH =2
care reprezint o valoare cu 500 mV mai mic
comparativ cu potenialul aplicat unui electrod
nemodificat. La 0,75 V rspunsul pentru acid
oxalic a fost liniar ntre 10-72*10-5 M, iar
detecia limit este de o,3 pmoli. Pentru
cetoacizi detecia limit variaz ntre 0,15
1,00 nmoli.
Electrodul chimic modificat catalizeaz
electrooxidarea insulinei print-un mecanism
presupus ce implic oxidarea uneia sau mai
multor legturi SS. cataliza se realizeaz la un
potenial mai pozitiv + 0,9 V v.s. Ag/AgCl
permind o detecie FIA la o concentraie de
10-7 M.
Electrozii de crbune sticlos coninnd
compleci porfirinici pe baz de Mn conduc la
oxidarea diferiilor compui biologici.
Deoarece efectul apare la diferite poteniale
pentru aceti compui, cataliza implic probabil
interacii specifice ntre compusul de analizat i
mediator i nu un process de sarcin mediat. n
FIA efectul primar al electrodului chimic
modificat const n micorarea
potenialuluinecesar oxidri cu 50360 mV
comparativ cu electrodul nemodificat.
Electrodul chimic modificat catalizeaz
oxidarea cisteinei i glutationului la un
potenial cuprins ntre + 0,9 +1,0 V v.s.
Ag/AgCl. n FIA detecia limit a acestor
compu a fost stabilit sub un nivel microM,
iar rspunsul a fost liniar pentru trei ordine de
mrime. Stabilitatea n timp a electrodului
chimic modificat a fost foarte bun; nu s-au
osservat scimbri pentru mai mult de 200 de
injectri, timp de dou sptmni.
Electrodul chimic modificat este folosit ca
sensor amperometric n cromatografia de
lichide. Acest electrod realizat prin
electropolimerizare anodic a C0-4,44 ,4,44
6

Coftalocianin

tetra-amino-ftalocianina ofer compatibilitatea

fa de solvenii organici i , de asemenea ,
stabilitate. Cu ajutorul acestui electrod s-au
putut determina diveri compui tiolici n
cantiti de pmoli. Pspunsul electrodului este
foarte stabil n timp, dup 40 de ore de
funcionare continu pstrndu-i aproximativ
80% din activitatea iniial.

Procedee de imobilizare a enzimelor:

Metoda
1. adsorbia pe matrici
insolubile

Avantaje
Simpl, condiii de lucru
blnde, fr distrugere a
enzimei.

2. Entraparea n gel

Procedur aplicabil
oricrei enzyme, condiii
blnde.

3. Legarea covalent de o
membran , de un support
insolubil ( celuloza, dextran,
collagen, gelatin, albumina,
rini schimbtoare de ioni,
policlorura de vinil, sticla
poroas).
4. Legarea ncruciat de un
agent multifuncional (cum ar
fi derivai ai bis-izocianat sau
bis-diazobenzidin
glutaraldehidei).

Complexul enzima-suport
este stabil, metoda este
ideal pentru producia n
mas i comercializare.

5. electropolimerizarea

Procedura simpl, legturi

chimice puternice a
biomoleculelor cu support;
larg folosit n stabilizarea
fizic a enzimelor adsorbite
pe un support.
Procedura relativ simpl, se
poate controla grosimea
filmului de polimer i
implicit cantitatea de
enzim depus n imediata
apropiere a suprafeei
electrodului. Se poate folosi
uor la realizarea
microelectrozilor.

aparine de

Dezavantaje
Legturile enzimei cu
suportul sunt puternic
dependente de pH, solvent i
temperatur.
Bariere difuzionale latgi,
pierderea activitii , posibila
denaturare a moleculei
enzimei ca rezultat al
apariiei unor radicali liberi.
Tehnica complicat, timp de
lucru mare, posibilitatea
pierderii activitii datorit
reacilor n care sunt
implicate gruprile eseniale
pentru activitatea biologic.
Dificulti n controlul
reaciei, necesit o cantitate
mare de enzim, activitate
enzimatica relativ mic dup
imobilizare.
Mecanismul proceselor
cinetice este nc neelucidat.

aparine

Capitolul 3.2: Electrozi chimic modificai coninnd TMPD

n principiu este posibil s se realizeze aceleai procese catalitice la nivelul ECM
coninnd TMPD.
ECM utilizai n acest studiu au fost electrozii pe baz de past de crbune
modificai chimic prin simpla adugare a cantitii dorite de TMPD n pulberea de grafit
naintea realizrii pastei de crbune. cest tip de ECM a fost ales datorit simplitii
construciei a posibilitii de variere a concentraiei de electrocatalizator i a uurinei de
generare a suprafeelor noi de electrod, prezentnd o reproductibilitate cantitativ.
Electrodul chimic modificat cu TMPD este stabil i reproductibil. Prin baleierea
potenialului n sens anodic, pe baz de past de crbune ce conine TMPD ca mediator,
se observ apariia unei unde de oxidare n domeniul de poteniale asemntor cu cel la
care are loc oxidarea TMPD n soluie.
ECM poate fi ciclizat repetitive nspre prima und de oxidare pe o perioad de 1520 minute, fr s se observe o scdere notebil a intensitii curentului obinut. Totui,
scanarea potenialului nspre cea de-a doua und a TMPD face electrodul inutilizabil.
Electrodul poate fi inactivat fie prin meninerea acestuia n soluie timp de cteva
ore, sau prin aplicarea continu a potenialului corespunztor picului anodic timp de
cteva minute. n ambele cazuri inactivarea are loc datorit trecerii n soluie a
mediatorului. Activitatea electrodului poate fi uor refcut prin refacera suprafeei prin
poliare, ndeprtndu-se stratul extern i generndu-se o suprafa nou electrochimic
activ. Elctrozii rennoii prin aceast metod prezint o comportare electrochimic
stabil i reproductibil pe o perioad definit de timp ( cteva sptmni), funcie de
numrul de determinri effectuate. Suprafeele noi de electrod pot fi uor regenerate cu o
reproductibilitate a picului anodic de 5-10%.

Influena fa de pH
n ambel cazuri (TMPD n soluie i fixat n pasta de crbune), potenialele picurilor
anodice i catodice au fost influenate n mod identic de modificarea vitezei de
baleiere a potenn ambel cazuri ( TMPD n soluie i fixat n pasta de crbune),
potenialele picurilor anodice i catodice au fost influenate n mod identic de
modificarea vitezei de baleiere a potenialului. Pentru valori de pn la 50 mV/s
potenialele de pic au fost independente de viteza de baleiere, n timp ce pentru valori
mai mari, att procesele de faz omogen ct i heterogen, au fost deplasate spra
valori mai mari de potenial. n plus, variaiile potenialelor de pic cu pH-ul , au fost
identice pentru ambele sisteme. n ambele cazuri graficul Ep-pH (figura 3.5.) a
prezentat un salt de 59 mV/unitate de pH la valori de pH mai mici dect 6,0, curbele
aplatizndu-se peste aceast valoare de pH.

Acest tip de dependen fa de pH sugereaz faptul c gruprile electroactive din

ECM-PC se comport ca adevrate center active de suprafa, influenate de condiiile
din soluie, ele nefiind ascunse n interior, ECM nu prezint o comportare ideal
corespunztoare unui monostrat (un singur strat de grupri modificatoare fixate pe
suprafaa electrodului).
Criteriile experimentale utilizate n caracterizarea comportrii unui ECM sunt
separarea picului anodic de cel catodic, i dependena curenilor anodici i catodici
asociai Ipa i Ipc pentru astfel de elctrozi variaz direct proporional cu rdcina
ptrat a vitezei de baleiere a potenialului, specific electrozilor controlai de difuzie.
Aa cum rezult din figurile 3.3 i 3.4. pentru Ecm-PC folosind n acest studiu, forma
i separarea picurilor anodice i catodice observate pentru primul transfer electronic
TMPD sunt asemntore cu cele obinute pentru TMPD n soluie la suprafaa unui
sensor nemodificat de past de crbune; aceast comportare persist i pentru valori
mici de baleiere a potenialului.
n final, au fost construii i comparai diferii ECM coninnd concentraii diferite de
TMPD n amestecul iniial de past de crbune. Aa cum se observ din tabelul 3.1.,
pentru ECM fabricai din amestecuri de past coninnd 0,25% pn la 1% TMPD n
greutate, curenii obinui au fost proporionali cu concentraia de TMPD.