Ubicuitin-proteaza din plante i

rolul su n semnalizarea giberelinei

Feng Wang, Xing Wang Deng
Cell Research (2011) :1-9.

SCOPUL LUCRARII
Medierea degradrii proteinei int prin
intermediul proteazei 26S care reprezint
procesul principal de degradare selectiv a
proteinelor, conservat la eucariote.
n acest studiu s-a discutat compoziia
molecular, reglarea i funcia ubicuitineiproteaze din plante, cu accent pe modul n care
degradarea proteinelor DELLA acioneaz n mod
esenial asupra transduciei semnalului
giberelinei i implicaiile sale n reglarea creterii
plantelor.

INTRODUCERE
Ub este o protein cu 76 aminoacizi, nalt
conservat, care se leag la restul de Lys prin
glicina C-terminal.
Ubichitinarea proteinelor este un proces
complex care implic 3 reacii secveniale
catalizate de 3 enzime E1, E2, E3.

Reacia iniial, Ub este activat prin

legarea gruprii carboxil a glicinei Cterminale la gruparea SH a enzimei E1 n
prezena ATP.
A doua etap este o reacie de
transacilare, n care Ub de la E1-Ub este
transferat la o cistein din cca al enzimei
E2. Enzimele Ub E2 dicteaz funciile
biologice specifice ale Ub datorit faptului c
specificitatea interaciei E2/E3 limiteaz
substratele finale la care Ub este ataat.

 Al treilea pas al ubichitinilrii const n

transferul UB la proteina int, catalizate de
Ub-protein ligaza sau enzima E3. Ub se leag
prin glicina sa C-terminal printr-o legtur
izopeptidic cu gruparea -amino a unui rest de
Lys din substratul proteic.
Ulterior, un rest de Lys din Ub ataat la
proteina int , poate fi el nsui implicat n
reacia de ubichitinare mediat de E3,
rezultnd proteine poliubichitinilate.

REZULTATE

Lanul poliubihuitinic esenial pentru recunoaterea

proteazei 26S conduce apoi la degradarea substratului
poliubicuitinic. Lanul poliubichitinic poate fi dezasamblat de
ctre activitatea DUB (enzima de deubicuitizare) pentru a
elibera jumtile legturilor de ubichitin care sunt refolosite n
urmtorul ciclu de formare a ubichitinei (Figura 1).

 n aceste lanuri, moleculele Ub sunt legate

printr-o legtur izopeptidic ntre K48(sau
K29, K63) i G76.
Prezena lanurilor poli Ub pe proteina int
reprezint o necesitate pentru degradarea n
proteasom.
E3 i E2 recunosc un motiv de secven
primar n proteine care este semnal de
ubichitinilare. Ulterior proteinele int sunt
poli Ub, semnal recunoscut de proteasom.
Selecia proteinelor pentru ligarea Ub se face
n principal de ctre E3

Proteaza 26S este un complex proteaz 2.5-Mda dependent ATP care const dintr-o
particul cilindric (CP) de baz 20S, la ambele capete aflndu-se o particul reglatoare
(RP) 19S (Figura 2). 20S CP const dintr-o configuraie de 2 inele de subuniti
exterioare i 2 inele de subuniti proteolitice care susin activitatea proteazei n
interiorul camerei interne. Deschiderea ctre camera CP e suficient de ngust pentru ca
doar proteinele nepliate pot intra n camer i accesa siturile proteolitice. 19S RP poate fi
mai departe divizat n dou componente, lid and base(Figura 2), iar proteinele
componente ale RP regleaz multe activiti care au legtur cu degradarea dependent
de proteaz, inclusiv recunoaterea substraturilor de ubicuitin, ndeprtnd i reciclnd
jumtile de legtur ale ubicuitinei, pliind i transportnd proteina int n camera
central a CP

Complexele SCF, un grup mare de ligaze E3 cu multiple subuniti

ale domeniului RING, reprezint familia E3 cea mai abundent i
mai bine caracterizat. Complexul SCF este numit dup cele trei
din patru subuniti ale sale: Skp1 (la plante se face referire la
ASK), culin 1 (CUL1) i proteina F-box.
Cea de-a patra subunitate este proteina RBX1 coninnd RINGfinger. n complexul SCF, proteina culin leag RBX1de capatul Cterminal , iar subunitatea de legtur SKP1 de domeniul su Nterminal. Proteina SKP1 n schimb, interacioneaz cu motivul Fbox la capatul N -terminal al proteinelor F-box pentru a forma un
complex SCF complet.
Capatul C -terminal ale proteinelor F-box conin domenii de
interaciune protein-protein incluznd, dar fr a se limita la
WD-40, KELCH i domenii repetate Leu-rich. Aceste domenii pot
recruta substraturi specifice pentru complexul SCF (Figura 4A)

 Pe lng complexul SCF E3, exist i alte complexe de ligaze E3

ale domeniului RING bazate pe culin . Primul tip, complexul
ligaze E3 CUL3-BTB . n acest grup de ligaze E3 complexe,
proteinele BTB sunt folosite att pentru a recunoate
substraturile ct i pentru a interaciona cu proteina CUL3
(Figura 4B). Al doilea tip, complexele ligaze E3 CUL4-DDB (legate
de distrugerea ADN) Enzimele E3 CUL4-DDB folosesc domeniul
WD40 ce conine proteine DWD pentru recunoaterea
substratului i folosete proteina DDB1 care leag proteinele
DWD de proteina CUL4 (Figura 4C).
Al treilea tip, E3 APC (complexul de promovare anafaz) conine
cel puin 11 subuniti, inclusiv proteina APC2 asemntoare cu
culin , proteina APC11 asemntoare cu RBX1 i cteva
subuniti care adaug substrate, cum ar fi APC10, CDC20
(proteina 20 pentru ciclul diviziunii celulare ) i CDH1 (CDC20omoloag 1; Figura 4D). mpreun, toate cele patru subtipuri ale
complexelor E3 au fost numite ligaze RING tip culin (CRLs).

Figura 4 ilustreaz desene simplificate componente ale ligases E3 Cullin-RING (CRL).

(A) Complexul E3 CSA. (B)
CUL3-BTB E3 complexe. (C) CUL4-DDB E3 complexe. (D) Complexul E3 APC.

 Asamblarea i activitatea complexelor CRL sunt

reglate de o protein RUB (care are legtur cu
ubichitina) mic.
Proteina RUB (numit i Nedd8 la animale) este
ataat la subunitatea culin a complexului CRL
prinr-o cascad enzimatic similar cu cea a
procedeului ubichitinei.
Complexele CRL au importana in reglarea
celular i rubilarea culin , de asemenea
activitatea complexelor CRL este strns reglat de
alte complexe n opoziie cu calea de conjugare
RUB.

 Semnalul COP9 (CSN) a fost prima oar

identificat drept un complex esenial care
reprim fotomorfogeneza, ns acum e
cunoscut ca avnd un rol extins n creterea i
dezvoltarea plantelor. CSN este un complex
multi-proteine constnd n 8 uniti (CSN1CSN8 .
Funcia biochimic cea mai bine caracterizat
a complexului CSN este activitatea
isopetidazei RUB care ndeprteaz
modificarea RUB de proteinele cullin.

 La Arabidopsis, mutantul cand1 a fost

descoperit printr-un screening genetic i are
un fenotip pleiotropic cu rspunsuri alterate la
civa fito-hormoni, inclusiv acidul giberelic
(GA) i auxin. CAND1 se leag preferenial de
culina derubinizat , mpiedic formarea
complexelor SCF

 Calea ubicuitin-26S proteaz regleaz aproape toate

aspectele creterii i dezvoltrii plantelor, inclusiv
dezvoltarea florii, reglarea epigenetic i patogeneza
plantelor i controlul bolilor. Lumina este unul dintre
factorii de mediu cel mai important pentru plante;
astfel, c degradarea proteinelor prin UPS este larg
implicat n reglarea rspunsurilor la lumin a
plantelor. Fotoreceptorul PHYA (phytochrome A)
absorbe lumina roie i rou-ndeprtat,
fotoreceptorul CRY2 (cryptochrome 2) absorbe
lumina albastr i factorii de interaciune fitocrom
(PIFs) sunt inte de proteoliz ale plantelor UPS i
degradarea lor este reglat de fosforilare

 Bazat pe inhibarea degradrii proteinei DELLA

de inhibitori specifici proteazomali i existena
unor proteine polyubicuitinate DELLA,sa
presupus c, GA-indus degradareaza
proteinele DELLA prin intermediul caii
proteazomale ubicuitin-26S.
Hormonul din plante GA i reglarea dezvoltrii
GA joac un rol important n diverse procese de
cretere i dezvoltare de-a lungul ntregului ciclu
de via al plantelor, inclusiv germinarea
seminelor, expansiunea frunzelor i dezvoltarea
florilor.

 Percepia GA este mediat de ctre GID1

(gibberellin insensitive dwarf 1), un receptor care
similar cu lipazele sensibile la hormoni (HSLs), dar
fr activitatea enzimatic. GID1 a fost iniial
descoperit prin screening genetic pentru
mutanii GA semnalizatori la orez.
Mai trziu, studiile efecuate pe Arabidopsis au
dus la identificarea a trei ortologi, GID1a, GID1b i
GID1c, drept receptori GA (Figura 5). Studiile
genetice au demonstrat c i la orez i la
Arabidopsis, proteinele GID1 sunt eseniale
pentru a percepe GA i a inti toate rspunsurile
care au legtur cu GA.

Figure 5 GA signaling
pathway in rice and
Arabidopsis. There
are three GA receptors
and five DELLA
homologues in
Arabidopsis,
in contrast with the
single-gene encoded
GID1 and
SLR1 in rice.

CONCLUZII
O cascada de interactiuni proteina-proteina
declansata de perceptia GA, controleaza
degradarea proteinei DELA pentru a media
raspunsul GA.
Degradarea proteinei DELA elibereaza factorii
transcriptionali si permit genelor de raspuns care
au fost inactive sa devina active.
In concluzie aceste studii au mare valoare in
agricultura privind studiul cresterii dezvoltarii si
intreg ciclului celular al plantelor.