S-au folosit apoi ARNm artificiali ce conineau o secven de dou nucleotide cunoscute. De exemplu ARN artificial ce
conine secvena UGUGUG, determin sinteza unui lan polipeptidic n care alterneaz cisteina i valina, deci cisteina
este codificat de codonul UGU iar valina de GUG
Problema cea mai grea, ce a trebuit rezolvat, a fost precizarea poziiei nucleotidelor n cadrul
codonului, pentru c cele dou nucleotide pot forma trei combinaii: GUU, UGU i UUG. Exist mai multe ci
pentru precizarea ordinii nucleotidelor n cadrul codonului, cea mai folosit fiind studiul mutaiilor de substituie
a unor aminoacizi din unele proteine mai bine cunoscute: hemoglobina, proteina virusului mozaicului tutunului,
triptofan-sintetaza din Escherichia coli .a. Caracteristicile codului genetic
Informaia genetic este codificat n acidul dezoxiribonucleic (ADN) sau n acidul ribonucleic viral
(ARNv) la unele virusuri, sub forma unor secvene de trei nucleotide (codoni). Informaia genetic este copiat
prin procesul de transcripie de ctre ARNm iar apoi tradus, prin procesul de translaie, ntr-o secven de
aminoacizi, n catena polipeptidic.
n prezent sunt cunoscui toi codonii de ARNm, care codific diferii aminoacizi (fig. 2.6). Codul
genetic cuprinde 64 de codoni. Doi codoni marcheaz nceputul sintezei unei catene polipeptidice i anume
AUG i GUG iar trei codoni sunt nonsens: UAA (ocru), UAG (ambr) i UGA (azur). Aceti codoni au rolul de
a marca terminarea sintezei unei catene polipeptidice (codoni stop).
Codul genetic are urmtoarele caracteristici: este universal, degenerat, ambiguu, neacoperit i fr
virgule.
Prin universalitatea codului genetic se nelege faptul c un anumit codon, codific acelai aminoacid
la orice organism, indiferent de gradul su de evoluie. Dovada cea mai evident a universalitii codului genetic
a fost urmtoarea: s-a izolat ARNm ce rspunde de sinteza hemoglobinei la iepure i s-a injectat n ovocitele de
broasc. S-a constatat c n ovocitele de broasc se sintetizeaz hemoglobina, dei n mod normal, ovocitele nu
sintetizeaz niciodat hemoglobin.
Codul genetic este degenerat, n sensul c mai muli codoni codific acelai aminoacid. De exemplu,
arginina este codificat de urmtoarele triplete: GGU, GGC, GGA, AGA i AGG.
n ceea ce privete importana nucleotidelor din codon s-a constatat c primele dou sunt cele mai
semnificative, n timp ce a treia poate fi uor nlocuit. Dac cea de a treia nucleotid este o baz purinic ea
poate fi nlocuit tot cu o baz purinic sau dac este o baz pirimidinic, poate fi nlocuit tot printr-o baz
pirimidinic. Diferii codoni, care au primele dou nucleotide identice, pot codifica acelai aminoacid. Numai
metionina i triptofanul sunt codificai de cte un singur codon (AUG i respectiv UGG).
n mod obinuit fiecare codon (triplet) codific un singur aminoacid. S-a constatat, n unele cazuri, c
un codon poate codifica mai muli aminoacizi. Aa este cazul codonilor GCG care codific alanina i arginina;
CGG-prolina i arginina; GGA-glicerina i acidul glutamic; AGG-glicina i fenilalanina. Se afirm c aceast
nsuire reprezint un avantaj evolutiv, deoarece nlocuirea unui aminoacid cu altul printr-o mutaie, ntr-o caten
polipeptidic este mai puin duntoare, dac cei doi aminoacizi au proprieti asemntoare, conferindu-i
codului genetic caracterul de ambiguu.
Codul genetic este neacoperit n sensul c doi codoni vecini nu au nucleotide comune i este fr
virgule, ntre doi codoni nu exist spaii sau ali codoni care s joace rolul unor semne de punctuaie.
S-a demonstrat c citirea mesajului genetic ncepe dintr-un punct fix, se realizeaz ntr- un singur sens,
astfel c, absena unui nucleotid (deleie) sau adugarea altuia (adiie), schimb sensul mesajului.
MUTATII GENETICE
5
Noiunea de mutaie a fost introdus de Hugo de Vries, nelegnd prin aceasta, o schimbare brusc a
nsuirilor ereditare. E. Baur o definete drept o modificare ereditar, care a aprut n afara hibridrii, iar E.
Guyenot, o variaie brusc i ereditar, ce poate apare spontan sau sub influena unor factori experimentali.
Mutaia este o nsuire a materialului genetic i este tot att de important ca i stabilitatea lui. Ea apare
la toate organismele i alturi de recombinarea genetic este principala surs de variabilitate a lor.
7.3.2. Temperatura
Temperatura este un agent mutagen slab. Aciunea ei a fost sesizat n special la Drosophila. Odat cu
ridicarea temperaturii la care sunt crescute musculiele, frecvena mutaiilor crete. Dar cu creterea sau scderea
treptat a temperaturii, frecvena mutaiilor crete nensemnat. Mult mai eficace sunt ocurile de temperatur,
aplicate pentru o perioad scurt de timp.
Prin tratarea larvelor de Drosophila cu temperaturi de 36-380C timp de 12-24 ore, frecvena mutaiilor
letale crete de dou ori fa de acele crescute la temperaturi normale. Dac ocul corespunde temperaturilor
sczute de -60C timp de 25-40 minute, frecvena mutaiilor crete de trei ori fa de acele crescute la temperaturi
normale.
S-a obinut pn la 24% spor de letalitate. Ulterior, s-au obinut rezultate i la plantele superioare, la ciuperci i
microorganisme.
Principalii ageni mutageni chimici sunt: agenii alkilani, acidul nitros, hidroxilamina, acridinele etc.
Agenii alkilani, dintre care face parte i iperita, se numesc astfel, deoarece conin un radical numit
alkil (metil, etil, propil), care poate fi transferat nucleotidelor. Majoritatea lor opresc diviziunea mitotic, de
aceea sunt folosii i n tratamentul cancerului. Ei intr n reacie cu molecula de ADN, unde pot produce
urmtoarele modificri: ruperea coloanei glucido- fosforice, alkilarea bazelor azotate, depurinizrile moleculei
de ADN, blocarea mitozei prin formarea unei legturi transversale intercatenare. Efectul mutagen al agenilor
alkilani a fost pus n eviden la bacterii, Drosophila melanogaster, Neurospora crassa, Vicia faba .a.
Substanele alkilante acioneaz n perioada S a ciclului mitotic.
Acidul nitros (HNO2) este un agent mutagen care acioneaz asupra bazelor purinice i pirimidinice,
dezaminndu-le. S-a artat c prin tratarea ARN din virusul mozaicului tutunului cu acid nitros, se produce
dezaminarea bazelor azotate i adenina a trecut n hipoxantin, guanina n xantin i citozina n uracil.
Aceste treceri au repercusiuni asupra blocrii biosintezei unei enzime i n consecin asupra unei
proteine.
Hidroxilamina (NH2OH) acioneaz n special asupra citozinei, care face parte din bazele pirimidinice.
Ea provoac o dezaminare a citozinei i transformarea ei n uracil. A fost experimentat asupra virusului
mozaicului de la tutun, asupra fagului T4.
Acridinele sunt colorani bazici care produc mutaii, acionnd asupra moleculelor de ADN, dar ale
cror mecanisme nu sunt nc bine elucidate.
n afar de substanele artate mai sus se mai cunosc i altele cu aciune mutagen: hidrazina,
formaldehida, clorura de mangan, peroxizii organici, apa oxigenat, clorura feroas .a.
O alt deosebire important ntre ADN i ARN este faptul c macromolecula de ARN este
monocatenar, fiind format dintr-un singur lan poliribonucleotidic. Acest fapt face ca bazele azotate purinice s
nu fie n cantitate egal cu cele piridimice.
innd seama de rolul pe care l ndeplinete ARN se apreciaz c sunt dou categorii: acidul
ribonucleic viral (ARNv) i acidul ribonucleic celular, implicat n sinteza proteinelor.
Acidul ribonucleic celular este de trei tipuri: acidul ribonucleic mesager (ARN m), acidul ribonucleic de
transport sau solubil (ARNt) i acidul ribonucleic ribozomal (ARNr).
Acidul ribonucleic viral (ARNv) constituie materialul genetic al unor ribovirusuri cum ar fi: virusul
mozaicului tutunului (VMT), virusul gripal, virusul poliomielitei, virusul stomatitei veziculare, bacteriofagii F2,
R17, QB i altele.
Studiindu-se molecula de ARNv de la virusul mozaicului tutunului s-a determinat c este alctuit din
aproximativ 6.000 ribonucleotide, ntr-o anumit ordine, determinnd coninutul mesajului genetic. La mai multe
virusuri molecula de ARNv este format din dou catene complementare nfurate elicoidal n jurul unui ax
imaginar. Molecula de ARNv este n general liniar, cu excepia virusului encefalomielitei oarecilor, la care
molecula de ARNv este circular.
Acidul ribonucleic mesager (ARNm). A fost descoperit n celulele bacteriene infectate cu
bacteriofagi, apoi n toate celulele organismelor. A.D. Hershey i colab. (1953) au ajuns la concluzia c sinteza
ARNm este dependent de ADN. Ei au identificat ntr-o celul bacterian infectat, pe lng ADN i o mic
cantitate de ARN, care era complementar ADN. Acest tip de ARN are rolul de a copia informaia ereditar de pe
o poriune din molecula ADN i de a o transmite n citoplasm la ribozomi, organite citoplasmatice la nivelul
crora are loc sinteza proteinelor. De aceea, acest tip de acid ribonucleic a fost denumit ARN mesager
(messenger ARN), prescurtat ARNm (F. Jacob i J. Monod, 1961).
Acidul ribonucleic mesager se sintetizeaz n procesul de transcripie a informaiei
genetice.
Acidul ribonucleic solubil sau de transfer (ARNs sau ARNt). Acest tip de acid ribonucleic are o structur
chimic asemntoare cu a celorlalte tipuri de ARN. Are o greutate molecular mic i anume 25.000 daltoni,
avnd 75-90 nucleotide, este solubil n soluie de NaCl, de aceea i s-a dat numele de ARN solubil.
Rolul ARNs este de a transporta aminoacizii din citoplasm la ribozomi, n procesul de sintez a
proteinelor.
Molecula de ARNs are la un capt tripleta citozin-citozin-adenin (CCA), iar la cellalt capt are un
nucleotid ce conine guanina (G). Molecula ARNs este monocatenar, dar are i poriuni bicatenare datorit
legturilor de hidrogen dintre A-U i G-C, dndu-i forma caracteristic a unei frunze de trifoi.
R.W. Halley de la Universitatea Cornell (SUA) a determinat, n anul 1965, ordinea nucleotidelor unui ARN s care
transport alanina la ribozomi, la drojdia de bere (Saccharomyces cerevisiae)
Macromolecula de ARNs are trei regiuni distincte pentru recunoaterea moleculelor sau structurilor
celulare:
a) Regiunea pentru recunoaterea aminoacidului este situat pe braul cu codonul CCA de la un capt al
moleculei. Aminoacidul se fixeaz de aceast regiune cu ajutorul enzimei aminoacil - ARNs - sintetaza, care are
o structur foarte variat de la un organism la altul, existnd cte o enzim pentru fiecare aminoacid.
b) Regiunea anticodonului este format dintr-o triplet de nucleotide complementar unui codon din
ARNm. Numrul anticodonilor este egal cu cel al codonilor.
c) Regiunea pentru recunoaterea ribozomului este alctuit dintr-o secven de cinci nucleotide: G-TP-C-G (P-pseudouracilul). Aceast regiune realizeaz legtura cu ribozomul n timpul procesului de sintez a
proteinelor.
Sinteza ARNs este determinat de genele din cromozomi, gene care se gsesc ntr-un numr mare de
copii. Teoretic ar trebui s existe attea tipuri de ARN s cte tipuri de codoni exist, dar, n realitate, numrul lor
este mai mic deoarece sunt i codoni care servesc pentru punctuaie sau sunt sinonimi.
Acidul ribonucleic ribozomal (ARNr). Acidul ribonucleic ribozomal (ARNr) reprezint aproximativ
85% din cantitatea total a ARN din celul, fiind localizat numai n ribozomi. O caracteristic important a ARNr
este aceea c se gsete ntotdeauna asociat cu proteinele. ARN r a fost izolat din ribozomii purificai de
Escherichia coli i s-a stabilit c are o greutate molecular de 5 x 106, nefiind purttor al informaiei genetice.
Acidul ribonucleic ribozomal are o structur bicatenar n proporie de 60-70% iar restul are o structur
monocatenar.
Sinteza ARNr se realizeaz prin genele din ADN specializate n acest sens i a cror numr este
foarte mare datorit necesitii de a se sintetiza o cantitate mare de ARNr ntr-un timp scurt.
Replicaia ADN
Una dintre nsuirile de baz ale macromoleculei de ADN este cea de replicaie sau autoreplicaie,
constituind funcia autocatalic a materialului genetic. La eucariote replicarea ADN i deci a genelor care nu sunt
dect segmente de ADN, are loc n timpul diviziunii mitotice, asigurndu-se transmiterea exact de la o generaie
la alta a caracterelor ereditare.
J.D. Watson i F.H. Crick (1953) n urma elaborrii modelului structural al moleculei de ADN au emis
i ipoteza replicrii acestuia dup tipul semiconservativ. Acest tip de sintez const n ruperea punilor de
hidrogen dintre cele dou catene complementare. Fiecare caten servete ca matri pentru sinteza unei catene
noi. n final, dintr-o molecul veche de ADN vor rezulta dou molecule, dar care sunt noi numai pe jumtate.
Modelul replicrii dup tipul semiconservativ, asigur o mare fidelitate n sinteza noilor molecule de
ADN. Termenul de replicaie deriv de la faptul c n acest proces fiecare caten servete ca matri pentru
catenele noi sintetizate, informaia genetic fiind transmis fidel noilor molecule.
Sinteza ADN dup tipul semiconservativ se realizeaz astfel: la o extremitate sau ntr-un punct oarecare
al macromoleculei de ADN, punile de hidrogen se rup, fenomen ce continu pe toat lungimea moleculei,
asemntor desfacerii unui fermoar. Fiecare caten se rsucete n spaiu cu 180, prin rotirea nucleotidelor n
planul exterior, n jurul radicalului fosforic. n citoplasm se gsesc sintetizate cele patru tipuri de nucleotide,
care conin bazele azotate purinice i pirimidinice: adenin, guanin, citozin i timin. Pe baza fenomenului de
complementaritate dintre bazele azotate purinice i pirimidinice, o nucleotid care conine adenin se va lega
prin puni de hidrogen de una ce conine timin, iar una ce conine guanin se va lega de una ce conine citozin.
n final, paralel cu catenele vechi s-au sintetizat dou catene noi, rezultnd dou molecule fiice, identice cu
molecula mam
Replicarea macromoleculei de ADN se realizeaz n trei etape
n prima etap are loc sinteza precursorilor nucleotidelor ce intr n alctuirea ADN de tipul acidului
uridilic i acidului inosinic;
- n etapa a doua are loc sinteza nucleotidelor propriu-zise ce intr n structura ADN:
dezoxiadenozintrifosfat ,dezoxiguanozintrifosfat,,
dezoxicitidintrifosfat si dezoxitimidintri
-n etapa a treia are loc polimerizarea nucleotidelor sub controlul enzimei ADN- polimeraza.
Enzima ADN-polimeraza determin esterificarea oxidrilului de la carbonul 3' al catenei
polinucleotidice de ctre fosfatul ce esterific oxidrilul de la carbonul 5' al nucleotidei, aa nct dac catena
veche are polaritatea 5' - 3', catena nou sintetizat va avea polaritatea invers 3' -5'.