MUTAGENEZA IN AMELIORAREA PLANTELOR

1. Definitie
Mutageneza este metoda de ameliorare genetica in care se valorifica efectul agentilor mutageni asupra
materialului genetic al plantelor si anume mutatia. In sens larg, mutatia poate fi definita ca o modificare a materialului
genetic, care nu e provocata de recombinarea genetica sau de segregare.
Termenul de mutatie provine din latinescul mutatio = schimbare, insemnand o variatie ereditara permanenta si
transmisibila celulelor fiice si generatiilor urmatoare. Acest termen a fost introdus in 1901 de Hugo de Vries, care a studiat
fenomenul schimbarii substantei ereditare la Lumanarica (Oenothera lamarckiana), insa fenomenul s-a dovedit a nu fi
mutatie ci o gresala de distributie a cromozomilor metafizici.
2. Importanta mutatiilor
Mutatiile sunt indiferente din punct de vedere al efectului foarte rar, de cele mai multe ori ele afecteaza negativ
individul si devin avantajoase numai in cazuri exceptionale. Totusi ele stau la baza evolutiei prin sporirea variabilitatii,
precum si prin cresterea numarului de combinatii posibile in cazul cresterii numarului de alele. In ameliorarea plantelor,
mutatiile sunt folosite cu succes in special la obtinerea unei rezistente la boli si daunatori. Realizari notabile din acest
punct de vedere sunt :
W.C. Gregory (1955) a izolat o mutanta de alune de pamant rezistenta la patarea frunzelor, boala foarte pagubitoare
pentru aceasta specie.
F.C. Elliot (1956) a transferat prin iradieri rezistenta la rugini a speciei Agropyron elongatum la graul hexaploid
(Triticum aestivum). Mecanismul a fost explicat prin producerea in urma iradierii a unor rupturi cromozomiale si
translocatii.
A. Moes (1959) si J. Mackey (1964) au obtinut la grau, orz si ovaz mutante rezistente la diferite specii de rugini.
In prezent, metoda de mutageneza este larg utilizata la din ce in ce mai multe specii, urmarindu-se obtinerea de
indivizi cu rezistenta crescuta la boli si daunatori.
Unele mutatii ce au importanta practica atrag dupa sine o modificare poate nedorita si a unui alt caracter. Spre exemplu,
s-a stabilit existenta unei corelatii intre scurtarea indusa a paiului si scaderea productiei. De aceea, utilizarea eficace a
mutatiilor necesita o hibridare cu soiul mama sau, uneori, cu alte soiuri. Atfel, prin selectie se poate realiza eliminarea
mutatiilor negative si fixarea caracterului cautat. Un astfel de sistem de selectie a fost cel introdus de Fossati A. (1972),
care este redat in figura 1.
3. Clasificarea mutatiilor
Mutatiile pot aparea in mod spontan (mutatii naturale) sau pot fi induse experimental (mutatii artificiale). O contributie
insemnata in domeniul producerii artificiale a mutatiilor au avut-o cercetatorii suedezi in frunte cu A. Gustafsson care au
obtinut numeroase mutante utile pentru procesul de ameliorare la cereale si alte plante cultivate, precum si cercetarile
initiate de H. Stubbe (inca din anul 1930) la cereale, tomate si Antirrhinum, care a investigat semnificatia radiatiilor
ionizante in ameliorarea plantelor. E. Mayr, a definit mutatiile ca ,,modificari discontinue cu efect genetic care pot afecta
diferite unitati ale materialului genetic:
genele mutatii genice;
cromozomii mutatii cromozomiale;
intregul genom mutatii genomice.
In cadrul mutatiilor genice, se disting mutatii care afecteaza genele structurale, operationale sau reglatoare, precum si
mutatii care afecteaza regiuni mai mici din gena (mutatii intragenice), putand afecta chiar si o singura pereche de
nucleotide (mutatii punctiforme).
La organismele diploide, mutatiile pot fi clasificate dupa modul de exprimare fenotipica in:
mutatii dominante;
mutatii codominante ;
mutatii semidominante ;
mutatii recesive.
Un alt criteriu de clasificare este cel al plasarii mutatiilor in cromozomi :
mutatii autozomale ;
mutatii heterozomale.
Pot exista si mutatii extranucleare, cele care afecteaza materialul genetic din citoplasma. De asemenea s-au putut
evidentia mutatii letale sau semiletale, care afecteaza gene de importanta majora in organism, prin blocarea carora se
poate produce moartea individului inainte de maturitatea sexuala. Prin mutatie, gena normala a tipului salbatic se poate

transforma intr-o alela diferita (mutatie directa / forward mutation) sau gena mutanta se retransforma in tipul initial
(mutatie de reversie / back mutation). O sinteza a clasificarii mutatiilor poate fi analizata in tabelul urmator :
Tabelul 1. Clasificarea mutatiilor dupa mai multe criterii de clasificare
(sinteza dupa C. Leonte, 2005)
Criteriul de clasificare
Dupa modul de aparitie :
Dupa marimea efectului exteriorizat :
Dupa modul de manifestare :

Tipuri de mutatii
Mutatii naturale sau spontane
Mutatii artificiale sau induse
Mutatii mari (macromutatii)
Mutatii mici (micromutatii)
Mutatii morfologice
Mutatii fiziologice
Mutatii biochimice

Dupa locul afectat :

Mutatii germinale
Mutatii somatice

Dupa cantitatea de material genetic modificat

Mutatii genomice
Mutatii cromozomice
Mutatii genice (dominante sau recesive)
Mutatii directe
Mutatii inverse (retromutatii)

Dupa sensul modificarii

4. Tehnica mutagenezei
Pentru a obtine forme mutante de plante se utilizeaza agenti mutageni fizici sau chimici, precum si combinat, a
caror actiune se aplica o data sau de mai multe ori, la seminte, organe ale plantei sau chiar la planta intreaga.
Momentul de aplicare a agentilor mutageni este diferit, in functie de specia utilizata ca material initial de ameliorare, cat si
scopul urmarit.
In orice situatie trebuie avuta insa in vedere doza letala a agentului mutagen utilizat (DL 50%) si de obicei, in cadrul
experientelor se aplica doze diferite din acelasi agent mutagen, pentru a vedea atat gradul de afectare a materialului
genetic, cat si pentru siguranta obtinerii efectului mutagen. Materialul biologic folosit in mutageneza trebuie sa
indeplineasca mai multe conditii si anume:
ciclu vital scurt ;
prolificitate ridicata;
numar redus de cromozomi, de dimensiuni mari, care se diferentiaza intre ei usor din punct de vedere morfologic;
caractere si insusiri distincte, usor de evidentiat ;
conditii ieftine de experimentare, usor de realizat.

Fig. 3.
Clasificar
ea
agentilor
mutagen
i
4.1.
Agentii
mutagen
i fizici
Factorii
mutagen
i fizici
reprezint
a un real
interes
pentru
mutagen
eza
experim
entala
deoarec
e produc o frecventa relativ mare de mutatii. Factorii mutageni fizici actioneaza asupra acizilor nucleici in stare de repaus.
Din aceasta categorie fac parte radiatiile, variatiile de temperatura si ultracentrifugarea.
Prakken R. (citat de Nicolae N., 1978) a clasificat radiatiile dupa capacitatea lor de ionizare, in doua categorii: radiatii
ionizante si radiatii neionizante.
Radiatiile ionizante sunt cele care produc reactii radiochimice. Din aceasta categorie fac parte radiatiile
electromagnetice si cele corpusculare.
Radiatiile electromagnetice sunt reprezentate de radiatiile norului electronic al atomilor si sunt produse de dezintegrarile
radioactive. Din aceasta categorie fac parte razele Rentgen (X) o lungime de unda de 0,5 si 100 si radiatiile gamma ()
cu lungimea de unda cuprinsa intre 1,4 si 0,005 . Desi razele Rentgen sunt mai putin nocive pentru operator si chiar
daca au o putere de penetrare mai redusa sunt mult mai folosite decat razele gamma.
Radiatiile corpusculare sunt reprezentate de un flux de atomi care se deplaseaza cu o viteza variabila. Ele sunt impartite in
trei grupe: particule elementare usor incarcate electric (electronii si protonii), particule grele incarcate electric (protoni,
deutroni si particule ) si particule neutre (neutronii). Cele mai utilizate elemente corpusculare in biologie si agricultura
sunt razele (), beta () si netronii.
Radiatiile neionizante provoaca excitatii la nivel molecular prin intermediul reactiilor fotochimice pe care le
produc. Dintre acestea, cel mai des utilizate sunt radiatiile ultraviolete. Razele ultraviolete sunt fotoni cu energie joasa si
cu lungime de unda cuprinsa intre 136 si 4000 . Cercetarile recente au aratat ca razele ultraviolete au o lungime de unda
de 2 580 , care corespund spectrului de absorbtie al ADN si au cel mai puternic efect mutagen.
Actiunea radiatiilor asupra organismelor vii este foarte profunda si complexa. Patruzand in organismele vii radiatiile
ionizante actioneaza in doua sensuri: pot da nastere la mutatii sau pot produce leziuni letale.
Patrunse in celule, radiatiile actioneaza asupra ultrastructurii celulare, indiferent daca acestea sunt citoplasmatice sau
nucleare.
Iradierea prezinta unele particularitati determinate de sursa utilizata, precum si de planta sau organul iradiat si poate
actiona direct asupra materialului de ameliorat sau, indirect, prin intermediul mediului nutritiv sau al plantei gazda.
Eficienta iradierii asupra organismelor in vederea provocarii mutatiilor depinde, dupa cum arata Dubinin N.P. (1966), de
intensitate, durata de actiune si tipul radiatiilor, de substratul genetic asupra caruia se actioneaza, de viteza diviziunii, de
sensibilitatea leziunilor provocate. Eficienta iradierii este influentata de pH, continutul in apa, continutul in oxigen,
temperatura.

Datorita sensibilitatii diferite a diverselor organe si a specificitatii reactiei genelor fata de mutageni, aplicarea radiatiilor
trebuie facuta diferentiat.
Iradierea se aplica in diverse faze de vegetatie. Daca aplicarea se face o singura data, cu o doza masiva, se face o iradiere
acuta si care se aplica de regula semintelor in stare de repaus. In cazul in care tratamentul este indelungat iradierea este
cronica, dozele fiind moderate.
Pentru stabilirea dozelor de radiatii s-au facut numeroase cercetari, intrucat efectul mutagen maxim are loc la fiecare
specie si chiar la fiecare soi numai la anumite doze.
Conventional, s-a stabilit ca doza corespunzatoare de iradiere, pentru fiecare specie, doza care opreste cresterea sau
provoaca moartea la 50% din indivizii iradiati.
Aceasta valoare este cunoscuta sub denumirea de doza letala si se noteaza cu DL 50% si variaza in limite foarte largi de la
o specie la alta, si chiar in cadrul speciei de la un soi la altul. Doza de iradiere nu trebuie sa depaseasca DL 50%, adica doza
care provoaca moartea a 50% din indivizi (tabelul 2).

Agentii mutageni chimici

In ultima vreme, eforturile oamenilor de stiinta sunt concentrate asupra efectelor mutagene ale diferitelor substante
chimice, dintre care unele sunt mult mai active decat radiatiile ionizante.
In comparatie cu radiatiile ionizante, care patrund usor in materia vie, agentii chimici pot ramane in straturile superficiale
ale corpului, pot fi eliminate inainte de a procuce mutatii, pot fi metabolizate in alti compusi inofensivi pentru organism.
Din aceste considerente, inducerea de mutatii cu ajutorul substantelor chimice mutagene prezinta o serie de avantaje:
aplicarea tratamentelor se face mai usor decat iradierea;
pericolul poluarii mediului exterior este redus complet;
interactiunea dintre mutagen si materialul biologic se face cu eficacitate;
procentul indivizilor supravietuitori este mai mare;
frecventa mutatiilor pentru unii mutageni chimici este de 5 10 ori mai mare.
Factorii mutageni chimici se impart, conform clasificarii lui Freese E. (1963), in doua categorii:
substante care actioneaza in decursul biosintezei replicatoare, grupa din care fac parte analogii bazelor azotate,
acridinele, inhibitori de concurenta a precursorilor acizilor nucleici;
substante care actioneaza asupra acizilor nucleici in stare de repaus: acidul azotos, hidroxilamina, hidrazina,
substantele alchilante.
In prezent, clasificarea agentilor chimici mutageni se face in raport cu starea functionala a ADN-ului, care intermediaza
activitatea mutagena a acestora. Intre substantele mutagene a caror actiune este cunoscuta, amintim: azoserina, cofeina,
timidina, 5-bromuracil, 2-aminopurina, iperita, formaldehida, fenolul, etc.
Cele mai importante si folosite adesea pentru producerea de mutatii utile sunt agentii alchilanti. Dintre aceste substante
mentionam: iperita, dietilsulfatul, etilmetansulfonatul, etilenimina, epoxizii, azaserina, etc.
Dintre substantele alchilante folosite mai frecvent pentru inducerea de mutatii la plante mentionam: etilenimina (EI),
etilmetansulfonatul (EMS) si dietilsulfatul (DES) (tabelul 3).
De asemenea, s-au dovedit utile pe langa cele prezentate mai sus si hidroxilamina, nitrozoetil ureea, nitrozometil ureea.
In tratarea cu substante chimice, doza nu poate depasi anumite limite, atat datorita faptului ca aceste substante sunt
putin solubile, cat, mai ales, datorita nocivitatii lor foarte pronuntate. Un rol aparte in cadrul substantelor chimice il are
colchicina, care are ca principal efect dublarea garniturii cromozomale, fiind, deci, un factor poliploidizant.
4.3. Agentii mutageni biologici
In urma diverselor cercetari s-a constatat faptul ca unele enzime pot avea un efect slab mutagen, de asemenea si unele
virusuri si insecte parazite pot produce mutatii prin intermediul produsilor lor metabolici.
Acesta latura a mutagenzei nu a fost suficient explorata de catre cercetatori si de aceea necesita studii suplimentare.