Sunteți pe pagina 1din 7

MICROSCOPUL OPTIC

1. Scopul lucrrii
Const n nsuirea utilizrii microscopului optic, cu finalitate n vizualizarea i msurarea diametrelor
unor celule sanguine.
2. Principiul lucrrii
Microscopul este un instrument optic care mrete diametrul aparent al obiectelor, formnd imagini
virtuale. Dimensiunea minim ce poate fi distins printr-un microscop este dat de lungimea de
und a radiaiei folosite, datorit fenomenului de difracie.
Microscopul formeaz imagini virtuale, mrite i rsturnate ale obiectului cu ajutorul unui sistem de
lentile (la microscopul electronic, lentilele sunt nite cmpuri electrice i magnetice care deviaz
fasciculele de electroni) grupate n obiectiv i ocular, prin care mersul razelor este cel reprezentat n
Fig. 11.

Fig. 11 Mersul razelor de lumin prin microscop


Pentru a distinge ntre performanele unor microscoape se compar caracteristicile acestora:
1.
Puterea - raportul dintre tangenta unghiului sub care se vede un obiect prin instumentul
optic (2) i dimensiunea liniar a obiectului pe direcia perpendicular pe axa optic. tg2
P = AB
2.
Grosismentul sau mrirea unghiular - raportul dintre tangenta unghiului sub care se vede
un obiect prin instumentul optic ( 2 ) i tangenta unghiului sub care se vede un obiect cnd este
privit cu ochiul liber aezat la distana optim de citire = 25 cm (1 ). Grosismentul microscopului
(Gmicroscop) este egal cu produsul dintre grosismentul ocularului (Goc) i cel al obiectivului (Gob).
Gmicroscop
Gmicroscop = Gob Goc
P

Relaia dintre puterea i grosismentul microscopului este: G = =

4 4 f1 f2 unde e este dinstana dintre focarul imagine al lentilei obiectiv i focarul obiect al lentilei
ocular, iar f1 i f2 reprezint distanele focale ale obiectivului i ocularului, respectiv (Fig. 11).
3.
Puterea separatoare () - inversul distanei separatoare (d ) care reprezint cea mai mic
distan la care se pot gsi imaginile a dou puncte care nu apar confundate:
1
=

Distana minim dintre dou puncte ale unui obiect care mai pot fi vzute separat
unul de cellalt prin microscop este
1.22
d=
2nsin u
unde reprezint lungimea de und a radiaiei folosite, n este indicele de refracie al mediului
strbtut de radiaie dintre obiect i obiectiv, u este unghiul dintre axa optic i razele cele mai
ndeprtate de ax care mai ptrund n obiectiv. Pentru a micora aceast distan, adic pentru a
mbunti performanele microsopului exist mai multe metode:

folosirea unei radiaii cu lungime de unda ct mai mic (de exemplu, pentru radiaie
ultraviolet s-au putut distinge obiecte de dimensiuni de 0.15 m)

folosirea unor medii ntre obiect i obiectiv cu indicele de refracie n ct mai mare
(microscop cu imersie)

folosirea obiectivelor cu deschidere ct mai mare, astfel nct sin u s fie ct mai mare, dar
aceste obiective ridic probleme de construcie datorit aberaiilor de sfericitate.
Microscopul optic folosete unde electromagnetice din domeniul vizibil. Lumina este transmis de-a
lungul axului optic al instrumentului, prin preparat, n aceste condiii obinndu-se un cmp vizual
puternic luminat, n care obiectele, pentru a putea fi vzute, se disting pe fondul luminos fie prin
opacitate, fie prin culoarea lor. Pentru a se face msurtori se folosesc nite lamele de sticl pe care
sunt gradate foarte fin nite scale, numite micrometre care sunt piese auxiliare microscopului.
Acestea au dimensiuni cunoscute sau uor de determinat i imaginea lor se poate suprapune peste
imaginea obiectului de cercetat. Micrometrele sunt de dou feluri: oculare (sunt aezate n ocularul
microscopului i imaginea lor este permanent n cmpul vizual al experimentatorului) i obiective
(acestea se aeaz pe platina microsopului n locul preparatului i sunt folosite pentru calibrarea
microscopului).
Descrierea microscopului optic
Prile componente ale microscopului optic (Fig. 12) sunt urmtoarele:

1)

Piciorul microscopului, constituit dintr-o plac metalic grea care are rolul de a susine fix
microscopul, pe care se afl platina microscopului. Pe aceasta se aeaz lamela de sticla pe care
se afla preparatul biologic ce urmeaz a fi studiat. Platina prezint un orificiu central care
permite trecerea razelor luminoase i niste orificii laterale n care sunt prini cavalerii cu ajutorul

crora lamela este fixat pe platin. Proba poate fi deplasat pe dou direcii perpendiculare cu
ajutorul unor uruburi, deplasarea fiind msurat pe dou scale ataate msuei.

Fig. 12 Microscopul optic monocular

2)

Tubul microscopului pe care sunt prini ocularul i obiectivul; lui i se poate imprima o
micare ampl, vizibil cu ochiul liber cu ajutorul macrovizei i o micare fin cu ajutorul
microvizei. Ocularele de diverse puteri se monteaz la captul superior al tubului.
Microscopul poate fi mono sau binocular. n general, ocularele sunt construite din dou lentile i
anume aa numita lentil de cmp i lentila ocular propriu-zis. Ele sunt aezate ntr-un tub care se
introduce n partea superioar a tubului microscopului.
La microscoapele moderne ocularele moderne au mai multe lentile.
Obiectivul, care conine un set de lentile centrate, se monteaz n revolverul de la captul inferior al
tubului. Revolverul are locauri pentru mai multe obiective i permite schimbarea lor prin rotire.
Lentilele obiectivului au asemenea convergene nct s poat fi corectate aberaiile de sfericitate.
Lentila inferioar a obiectivului este plan convex avnd faa plan spre obiectiv. Cu ct distana
focal a obiectivului este mai mic cu att puterea de mrire este mai mare. Un obiectiv cu putere
separatoare mare determin o putere separatoare mare a microscopului. Obiectivele cu putere
mare au o vedere de ansamblu foarte bun, n timp ce obiectivele cu putere mai mic sunt mai
luminoase. Exist dou tipuri de obiective: uscate i cu imersie. Obiectivele uscate primesc fasciculul
de lumin ce trece prin preparat direct prin aer, astfel c o parte din razele trimise de obiect ctre
lentila obiectivului se pierd prin fenomenul de reflexie total. Pierderea razelor de lumin datorit
acestui fenomen se poate nltura dac ntre preparat i obiectiv se pune o pictur dintr-un lichid
(de exemplu ulei de cedru) cu indice de refracie apropiat de cel al sticlei din care este fcut lentila
frontal a obiectivului. Se obine astfel un obiectiv cu imersie. 3) Dispozitivul de iluminare este
format din:

oglind care are rolul de a dirija razele de la sursa de lumin spre axul optic al microscopului;
prezint o suprafa plan i una concav i este fixat pe un suport, n aa fel nct se poate roti
n jurul a dou axe perpendiculare

Fig. 13 Mersul razelor de lumin prin microscop

condensorul format din 2 sau 3 lentile care concentreaz lumina reflectat de oglind asupra
obiectului; fasciculul paralel de lumin care cade pe condensor este transformat ntr-unul
convergent; pentru a obine o imagine clar condensorul se poate deplasa pe vertical pn
cnd obiectul se gsete n focarul fasciculului convergent care iese din condensor; razele de
lumin, nainte de intrarea n condensor, trec printr-un suport de filtre i o diafragm (apertur
cu rol de a controla diametrul bazei "conului" luminos); exist filtre de diferite culori care pot
modifica spectrul luminii transmise. n practic, diametrul aperturii poate fi redus uor pentru
obinerea unui compromis ntre rezoluie i contrast. Reglarea diametrului aperturii nu trebuie
fcut pentru a controla intensitatea luminoas deoarece acest procedeu nu face dect s
produc imagini cu contrast mare, dar cu rezoluie sczut.
4) Piesele auxiliare ale microscopului sunt:

micrometrul ocular care este un disc de sticl cu diametrul egal cu diametrul interior al
tubului ocularului pe care sunt trasate niste diviziuni; acest micrometru se aeaz n ocular chiar
n planul imaginii date de obiectiv, motiv pentru care el se vede ntotdeauna clar n microscop; n
dreptul diviziunilor lui se pot aduce cu ajutorul msuei mobile obiectele ce urmeaz a fi
msurate. Micrometrele oculare sunt de mai multe tipuri, n funcie de ceea ce se urmrete a fi
msurat (Fig. 14)

Fig.14 Tipuri de micrometre oculare

micrometrul obiectiv care este o lam de sticl pe care sunt trasate pe o lungime de 1mm,
cu un vrf foarte fin de diamant, 100 de diviziuni. Acest micrometru este folosit pentru
calibrarea microscopului. El se aeaz n locul preparatului, urmnd s se fac suprapunerea
scalei micrometrului ocular cu scala micrometrului obiectiv, pentru determinarea dimensiunii
unei gradaii a micrometrului ocular (Fig. 15).

Fig. 15 Micrometrul ocular i micrometrul obiectiv

camera clar care este un dispozitiv ce se poate adapta ocularului microscopului i permite
suprapunerea n ochiul observatorului a imaginii unui obiect vzut direct n mrime natural
peste imaginea obiectului vzut prin microscop.

camera de numrare sau hematocitometrul care este un dispozitiv auxiliar microscopului cu


ajutorul cruia se poate determina numrul de celule dintr-un volum oarecare.
3. Mod de lucru
Materiale necesare:
-

microscop optic

oculare, obiective de diferite puteri

micrometre oculare i obiective

obiecte de msurat

Lucrarea experimental presupune urmtoarele etape:


1) Calibrarea microscopului care se face n cazul n care valoarea diviziunilor micrometrului
ocular nu este cunoscut.
2) Msurarea dimensiunilor obiectelor de studiu.
Pentru calibrarea microscopului se procedeaz n felul urmtor:
-

n locul preparatului se pune un micrometru obiectiv cu dimensiuni cunoscute;

- cu ajutorul msuei mobile i rotirii ocularului se aduc alturi cele dou scale ce apar n
cmpul aparatului;
- se observ cte diviziuni ale micrometrului obiectiv sunt necesare s acopere ntreaga scal
a micrometrului ocular i se determin valoarea dimensiunilor micrometrului ocular.

Fig. 16 a) i b) Calibrarea microscopului; c) Msurarea diametrului unei cellule


Odat microscopul calibrat, se poate trece la msurarea diametrelor celulelor sanguine, urmnd
paii:
- se aeaz obiectul pe platina microscopului i se fixeaz cu cavalerii; privind din lateral
microscopul, se coboar tubul acestuia folosind macroviza pn cnd obiectivul de mare putere
aproape atinge preparatul; Microscoapele optice de laborator sunt special concepute astfel
nct atunci cnd se folosete obiectivul cel mai mic, s existe o distan de siguran ntre faa
lamei i vrful obiectivului; n acest fel este imposibil spargerea accidental a lamei.
-

se rotete revolverul astfel nct s ajung deasupra probei obiectivul de mic putere;

- apoi, privind prin microscop se clarific imaginea cu ajutorul microvizei; se rotete din nou
revolverul pentru alegerea obiectivului de mare putere i se clarific din nou imaginea, folosind
exclusiv microviza. Folosirea macrovizei atunci cnd este ataat un obiectiv de putere mare
este o greeal frecvent, care poate duce la spargerea lamei i la mprtierea produsului
biologic in mediu.
- privind n aparat se deplaseaz condensorul cu diafragma complet deschis pn cnd
marginile luminoase coincid cu marginile imaginii obiectivului;
-

se manevreaz diafragma condensorului pn cnd marginile cmpului apar nete;

n acest moment apertura condensorului este egal cu cea a obiectivului;

se introduce n ocularul folosit micrometrul ocular;

- prin micarea msuei mobile i prin rotirea ocularului, lungimile ce trebuie msurate sunt
aduse n dreptul diviziunilor micrometrului ocular, a cror valoare este deja cunoscut;
-

se vor msura diametrele eritrocitelor, fcndu-se apoi calculul erorilor;

- valoarea diametrului mediu obinut va fi comparat cu valoarea teoretic acceptat a


acestuia i se va stabili dac diferena dintre cele dou valori este semnificativ; pornind de la
aceast diferen se poate atribui hematiilor calificativul de normocitoz, microcitoz sau
macrocitoz;
- comparnd variana calculat pe eantioanele studiate cu valoarea teoretic a acesteia din
literatura de specialitate, se va atribui populaiei de hematii studiate calificativul de izocitoz sau
anizocitoz;

- pentru dou eantioane de cte 15 hematii fiecare se vor compara mediile calculate
stabilindu-se dac diferena este semnificativ.
Protocol de siguran pentru microscopia optic
Probele biologice sunt preparate special pentru examinarea la microscop, ele fiind fixate pe o lam
de sticl (suport) i n cele mai multe cazuri acoperite i izolate cu o lamel de sticl (protecie).
Exist i preparate simple, fr lamel, de exemplu frotiul simplu de snge (strat monocelular
uniform ntins pe suprafaa lamei).
Atunci cnd se manipuleaz orice produs sau preparat biologic, se consider ca aceasta este un
material cu potenial infectant. De aceea este necesar respectarea strict a unor reguli care s
asigure evitarea contaminrii operatorului sau a mediului.
Pentru mnuirea produselor preparate de microscopie optic, acest set de reguli include i o
procedura de lucru care sa previn posibilitatea spargerii accidentale a lamei (i a mprtierii
cioburilor cu produs biologic):
A.

Purtarea mnuilor de protecie este obligatorie dac produsul nu este sterilizat

B.
Lama se apuc i se manipuleaz numai de partea mtuit (n felul acesta se elimina riscul
tierii accidentale n marginile ascuite). Atingerea zonei cu produs biologic este strict interzis (risc
de contaminare; riscul de a distruge proba)
C.
Lama se aeaz ntotdeauna numai n zone special delimitate - cutie de lame, cmp de lucru,
msua microscopului - , i ntotdeauna se pune cu zona de produs biologic n sus (se evit
contaminarea accidental a mediului de lucru)

S-ar putea să vă placă și