DETERMINAREA CAPILAR ELECTROFORETICA DE CARNITINA N

SUPLIMENTELE ALIMENTARE
ABSTRACT
L-Carnitina este o substan natural din organismul uman care transfer acizi grasi la locul de
ardere-mitocondrii i ajut la transformarea grsimilor n energie i n acest fel susine
reducerea excesului de greutate i de performan fizic imediat, crete rezistena la
sarcin fizic i inima este protejata de suprasarcin.
n acest studiu sunt descrise metode electroforetice nou dezvoltate (PTI, CEH cu directa
i / sau detecie UV indirect) pentru determinarea carnitinei n diferite probe. Rezultatele au
fost comparate cu rezultatele obinute prin metoda HPLC. Toate aceste metode au dat
rezultate comparabile. Limitele de detecie ale metodelor electroforetice au fost ntre 2,4 i 4,7
g / ml, reproductibilitate (deviaia standard relativ, RSD%) a fost ntre 1,2 i 4,4%, iar
sumele
recuperate
au
fost
ntre
91
i
113%
din
diferite probe. Analiza scurta a sczut costurile de funcionare fiind principalele avantaje ale
metodelor de CE.
1.INTRODUCERE
L-carnitina ( ( R ) - 3 - carboxi - 2 - hidroxi - N , N , N - trimetil -1 - propaminium hidroxid
sare intern ) este o substan critic necesara pentru meninerea sntii , dar nu este
necesar ca nutrieni n dieta . L-carnitina este utilizat ca suport pentru transportul acizii grai
cu lan lung n mitocondriile unei celule pentru betaoxidare pentru a produce energie .
L - Carnitina , de asemenea, particip la controlul mitocondrial acyl-CoA/CoA raport ,
peroxisomal, oxidarea acizilor grai , precum i producia de ceton in organisme .
Datorit interaciunii lor intrinsec cu procese bioenergeticr , ele joac un rol important n
bolile asociate cu compromis metabolic , mai ales relatarea tulburri mitocondrice. Un deficit
de carnitin este cunoscut a avea efecte nocive majore asupra SNC . Mai multe sindroame
deficitului de carnitin secundare au fost descrise ca poate duce la defecte in metabolismul
intermediar i modificri care implic n principal ci oxidative mitocondriale[ 1 ] . Absena L
- carnitin afecteaz pierderea de energie i acumulri toxice de acizi grai liberi . L-carnitina
este un mod natural de amoniu cuaternar endogen compus n toate speciile de mamifere [ 1 ] .
Persoane adulte pot sintetiza carnitina n ficat i rinichi (de la amino acizi l - lizin i L metionina ) sau preluat n alimente . Plasma concentraia carnitinei se coreleaz pozitiv cu
aportul regimului alimentar de carnitin . Aprovizionare exogena a acestui condiionat
esenial-hrana este furnizat n principal de carne , lapte i legume dar , de asemenea, prin
laptele matern sau de formulele de nceput cu lowcarnitine suplimentarea [ 2,3 ] . n general ,
doar foarte mici cantiti din ea se gsesc n plante , cu cteva excepii , cum ar fi avocado i
unele produse fermentate-soia, de exemplu, tempeh . l - carnitina este o molecula chiral .
Stereoizomerul su d carnitina a fost dovedit a avea o influen toxic considerabil asupra
procese biochimice datorit efectelor de inhibare asupracarnitina acetiltransferaza , ceea ce
duce la o epuizare a organismului L - carnitina stoc [ 4,5 ] . Au fost descrise mai multe metode
pentru determinarea carnitinei n esuturi biologice , corpul fluid , formule de nceput i de
droguri . Astfel , de injecie n flux enzimatic[ 2 ] , test radio- enzimatice , cromatografie de
gaze , gaze - cromatografie spectrometrie de mas ( GC - MS ) i atom rapid bombardament
spectrometrie de mas ( FAB - MS ) , printre altele metode [ 6-10 ] .
Cu toate acestea , cea mai comuna tehnica de separare a fost cromatografia lichid ( LC ) cu
detecie UV i electroforez. Electroforez capilar (CE) s-a dovedit a fi o tehnic de separare
extrem de eficiente pentru molecule diferite . Sistemul de detectare include UV direct i
indirecta sau fluorescenta de detectare , electrochimic i alte detectoare [ 11 ] . Ca carnitina
nu are nici o absorbie UV specific , trebuie s fie derivat pentru detectarea direct .

Diferiti cromofori au fost descrisi n literatura de specialitate , reacionnd fie cu carboxil sau
gruparea hidroxil de carnitin [ 12 ] . CE de asemenea, poate avea mai multe avantaje n
comparaie cu HPLC pentru separarea carnitin Pregtirea de prob este , n general, mai
uoara i cantitatea de solvent este mai mica . Analiza este mai rapida i mai puin
costisitoare. In consecin , procedurile CE pentru separarea standard de carnitin
au fost descrise ca soluii [ 5,11,13-16 ] . Recent , ea produce o mul ime de suplimente
alimentare cu L - carnitin , opional cu ali aditivi ( de exemplu crom ) , dar produsul de
control necesare pentru productorii efectuate prin metoda HPLC este exigent i
consumatoare de timp . Prin urmare , aceast lucrare descrie trei metode electroforetice
diferite ( ITP - PTI , CZE cu detecie UV direct / indirect) pentru determinarea de L carnitin. Toate aceste metode au fost comparate fiecare alte i corelate cu rezultatele HPLC
pe
modelul
i
reale
probe
.
2. REZULTATE I DISCUII
Toate sistemele electroforetice au fost comparate pentru a determina cea mai buna gama de
liniaritate , sensibilitatea i reproductibilitatea pentru determinarea L - carnitina n
suplimentele
alimentare
.
Linearitatea a fost testata ntr-un interval de concentraie de G / ml L - carnitina , i zona de
vrf a fost folosita n condiiile optime de funcionare . O d calibrare externa a fost utilizat ca
seturi in zon individual / de concentrare si au fost supuse la liniar de regresie mai mici
ptrate . A existat o liniaritate bun ( r > 0,99 ) pentru toate metodele aplicate . Limitele de
detecie ( LOD ) i cuantificare ( LOQ ) au fost calculate ca raport semnal -zgomot , respectiv
de 3 i 10 . detectarea limit i cuantificare limit au fost mai ru pentru electroforeza zonei
capilare
.
Abaterea standard relativ ( RSD ) a fost determinat prin msurare a trei probe individuale cu
diferite nivelurile de concentraiei de L - carnitin i recuperrile au fost obinut prin
msurarea probelor i aceleai probe cu adugarea a 100 % din standard. Cele RSDwas mai
mici sunt pentru toate tipurile de CZE apoi pentru 2D - CITP .
Metode de notat c rezultatele au fost foarte similare i , prin urmare, a fost necesar pentru a
observa dificultate de pregatire de probe, instrumente i injecie automat sa se faca si prin
alte posibiliti . n acest caz CEH cu detecie UV indirect efectuate pe Hewlett - Packard a
fost
cel
mai
bun
.
Buna liniaritate i sensibilitate a fost obinuta pentru capilar isotachophoresis .
Dezavantaj al acestei metode CITP i ofCZE cu realizare indirect pe analizor electroforetic
EA 101 a fost imposibilitatea de injectare automate . Derivarea cu FMOC a fost necesar
pentru electroforeza cu detecie direct UV iar acest lucru nu este practic pentru seria de
probe. n plus , curba de calibrare a trebuit s fie fcut ntotdeauna cu noi serii de probe .
Electroforez capilar cu UV directe are alte avantaje : primul este posibilitatea de a separa
l-/d-carnitine i cu ct este eliminarea tuturor interferon proteine i peptide are loc n timpul
derivatizare proceduri , prin urmare, nu multe componente de interferen au fost observate n
timpul separrii .Prin urmare ase eantioane din fabric cu diferite concentraii
de L - carnitin au fost msurate prin cromatografie lichid i metode electroforetice pentru
aceast comparaie ( tabelul 1) . Acolo nu s-au constatat diferene statistice ntre metode
electroforetice i HPLC . Fiecare corelaie ntre cele dou metode a fost ntr- un interval

acceptabil ( r > 0.995 , limitele de ncredere a interceptrilor i pante acoperi zero i unitate ,
respectiv ) .
Tabel 1. Compararea rezultatelor obinute prin diferite metode; carnitin (g/100 g) n probele
de fabric

a Villa

Sample
.
LC 1

HPLC

ITP-ITP

CZEa (indirect UV)

CZEb (indirect UV)

CZE (direct UV)

1.4

1.6

1.1

1.6

1.3

LC 2

1.1

1.8

1.5

2.0

1.4

LC 3

38.9

38.2

36.2

35.5

35.9

LC 4

7.3

7.6

7.3

7.4

7.5

LC 5

36.8

33.8

37.3

37.3

35.8

LC 6

41.5

40.8

41.2

45.6

37.7

Labeco.

b Hewlett-Packard

Corelaie foarte bun a fost gsit pentru compararea HPLC versus ITP sau HPLC fa CZE cu
detecie direct UV ( r = 0,999 ) .
Pentru a demonstra aplicabilitatea metodei electroforetice propuse, au fost aplicate la
determinarea de L -carnitina n suplimentele alimentare care conin concentraii diferite
de ea i , de asemenea, alte substane de analizat . Rezultatele obinute din msurtori
electroforetice au fost comparate cu valorile declarate de productor ( tabelul 2 ) . Datele
au fost foarte bine comparabile ; doar un singur productor a declarat pentru produsul su de
coninut de aproximativ trei ori mai mare de L carnitin dect a fost gsit .
Tabel 2. Coninutul de L-carnitina, n unele suplimente alimentare (g l-carnitine/100 g prob)
Food supplement

Karnitin+ chrom Naturvita a.s., Czech Republic

Chroma Slim Ultra GSN, USA

Neo carnitargin Nutrend D.S., a.s., Czech Republic

Viaredin Walmark, a.s., Czech Republic

a Villa

Labeco.
b Hewlett-Packard.

Declared by producer

ITP-ITP

CZEa (indirect UV)

CZEb (indirect UV)

CZE (direct UV)

21.4

25.3

25.1

19.3

21.6

3.7

1.1

1.3

1.0

2.2

2.0

2.0

1.9

1.8

2.2

0.4

0.3

0.2

0.3

Fig. 1 Electroferogramele de supliment alimentar eantion "Chroma Ultra Slim".; Mod ITP
(A); Modul CZE cu detecie UV indirect (B), modul CZE direct cu detecie UV (C); R, de
raspuns de conductometre; UV, detector UV de rspuns; pentru a vedea condiiile n text.

3 . CONCLUZII
In acest studiu trei moduri de electroforez capilar au fost testate pentru determinare L
carnitina n suplimentele alimentare.
Comparativ cu metoda HPLC ,analiza CE este mai rapida , consum mai puini solven i i
costurile totale de funcionare sunt mai mici dect HPLC . Nu este foarte simplu prepararea
probei pentru isotachophoresis capilar i electroforez capilara, cu ajutorul unui chinina
tampon cu detecie fotometric indirect i metode permit determinarea direct a L carnitinei fr utilizarea de reacii de derivatizare anterioare complexe
Zona capilara electroforetic cu detecie direct UV poate fi utilizat pentru analiza a
carnitinei dup derivatizare. Acest procedura de analiz nu este, din pcate potrivit pentru
analizele de rutina n laboratoare industriale.

Referine
1] A. Virmarni, Z. Binienda, Mol. Asp. Med. 25 (2004) 533.
[2] H.E. Indyk, D.C. Woolard, J. AOAC Int. 78 (1995) 69.
[3] A. Lee Carter, T.O. Abney, D.F. Lapp, J. Child Neurol. 10 (Suppl.2) (1995) 253.
[4] H. Jung, K. Jung, H.P. Kleber, in: A. Fiechter (Ed.), Advances in Biochemical Engineering
Biotechnology, Springer, Berlin,1993.
[5] C. Vogt, S. Kiessig, J. Chromatogr. A 745 (1996) 53.
[6] S. Lowes, M. Rose, Analyst 115 (1990) 511.
[7] K. Matsumoto, Y. Ichitani, N. Ogasawara, H. Yuki, K. Imai, J. Chromatogr. A 678 (1994)
241.
[8] H. Kamimori, Y. Hamashima, M. Konishi, Anal. Biochem. 218 (1994) 417.
[9] J. Bounoure, J. Souppe, Analyst 113 (1988) 1143.
[10] K. Altria, Chromatographia 35 (1993) 177.
[11] C. Mardones, N. Vizioli, C. Carducci, A. Rios, M. Valcarcel, Anal. Chim. Acta 382
(1999) 23.
[12] L. Vernez, W. Thormann, S. Krahenbuhl, J. Chromatogr. A 895 (2000) 309.

[13] P. De Witt, R. Deias, S. Muck, B. Galletti, D. Meloni, P. Celletti, A. Marzo, J.

Chromatogr. B 657 (1994) 67.
[14] C. Vogt, A. Georgi, G. Werner, Chromatographia 40 (1995) 287.
[15] C. Mardones, A. Rios, M. Valcarcel, R. Cicciarelli, J. Chromatogr. A 849 (1999) 609.
[16] S. Kiessig, C. Vogt, J. Chromatogr. A 781 (1997) 475.