Membranele biologice

Distribuirea asimetric a fosfolipidelor n membrane.

Rolul transportorilor lipidelor membranare (LT).
Transportul membranar prin canale, transportori i ionofori.
Autor Simionic Eugeniu
1. Distribuirea asimetric a lipidelor i rolul transportorilor LT.
Este important de menionat c rolul acestor transportori este nu att de a
menine asimetria fosfolipidelor membranare, ci de a asigura rspunsul membranei la
diferii factori. Adic, nsi asimetria, este un efect, un rezultat al perceperii sau
rspunsului la diveri factori cu care contacteaz membrana.
Se disting cel puin trei grupe de transportori LT: aminofosfolipid translocazele
(flipazele), flopazele i fosfolipid scramblazele.
Funcionarea flipazei

1.1 Aminofosfolipid translocazele

(flipazele) . Prezint o clas de
transportatori pentru lipide ATPdependeni. Sunt specifice pentru
fosfatidilserin i fosfatidiletanolamin,
cataliznd transportul lor din stratul
exterior (extracelular) n stratul interior
(citoplasmatic) al bistratului lipidic. Ele
sunt responsabile de meninerea unei
concentraii sczute a acestor
fosfolipide n stratul extacelular al
bistratului lipidic.

1.2 Flopazele asigura transportul invers i nu sunt att de specifice. Exemple:

multidrug resistanse-associated proteine (MRP1) poate funciona ca flopaz n
eritrocite. n general proteinele MRP sunt responsabile de eliminarea din celule a
compuilor conjugai cu glutation, glucuronat i sulfat. De exemplu secreia
glucuronid-bilirubinei din ficat n bil. De asemeni sunt responsabile pentru rezistena
la medicamente n unele cancere.
1.3 Fosfolipid scramblaza PLSR1 (phospholipid scramblase 1) faciliteaz
amestecarea nespecific bidirecional a fosfolipidelor ntre ambele monostraturi
lipidice ale membranei. Este stimulat de creterea intracelular a concentraiei de
Ca2+. PLSR poate fi reversibil palmitolat-depalmitolat i mai conine un situs de
fosforilare dependent de protein kinaza C, necesar pentru reglarea activitii ei. Acest
transportator mai are un rol important n coagulare i n recunoaterea de ctre
sistemul reticuloendotelial al celulelor mbtrnite supuse degradrii. n ambele

cazuri aceast scramblaz transport fosfatidilserina din stratul intern n cel extern a
bistratului lipidic, astfel are loc o expunere a fosfatidilserinei pe suprafaa extern a
membranei iniiind un rspuns.

Funcionarea scramblazei

2. Transportul membranar prin canale i transportatori

Transportul membranar poate fi asigurat prin difuzie, canale sau transportatori. n
prezent este stabilit structura fin i funcionarea numeroaselor canale i
transportatori. Cunoaterea structurii este major pentru a nelege funcionarea lor.
Sa stabilit c multe canale i transportatori sunt cauza diferitor patologii (fibroza
cistic, nefropatii, dereglri neurologice, rezisten la medicamente, senescen
precoce etc.). Muli transportatori au un rol deosebit n transportul diferitor
medicamente.
2.1 Canalele membranare
Se disting dou tipuri de canale: tip alfa i tip beta.
Canale de tip alfa - sunt proteine homo- sau hetero-oligomerice care conin 2-22 de
segmente transmembranare alfa-helicale. La canalele membranare de tip alfa fac
parte:

canalele voltaj-dependente specifice pentru ionii Na, K, Ca, Cl;

aquaporinele
canalele agonist sau ligand-dependente;
canalele cAMP-dependente;

Unele canale pot facilita translocarea specific a unor ioni anorganici, molecule
organice mici (e.g. urea) sau proteine, atele sunt nespecifice. n dependen de
esut, exist diferene structural-funcionale ntre unul i acelai canal pentru una i
aceiai substan transportat. De exemplu, n organismul uman sau depistat peste
15 feluri de canale voltaj-dependente pentru ionii K+.

a) Canalele voltaj-dependente specifice pentru ionii Na, K, Ca, Cl.

Aceste canale sunt controlate de potenialul electric transmembranar, se deschid i
nchid foarte rapid, n milisecunde, i sunt responsabile de transmiterea semnalelor
electrice n membrana neuronilor i altor celule excitabile. Fiecare canal const din
subuniti glicoproteice specifice, homo- sau hetero-oligomerice. De exemplu, canalul
pentru Ca2+ const din subunitile alfa1, alfa2, delta i beta. Toate canalele ionice
conin o subunitate major alfa care funcioneaz ca por pentru ioni, alte subuniti
non-alfa sunt accesorii cu rol n reglarea canalului.
b) Aquaporinele.
Aquaporinele (AQP) prezint nite
proteine mici, asamblate n membran
sub forma unor homotetrameri, fiecare
monomer const din 6 segmente
transmembranare alfa-helicale.
Aquaporinele sunt foarte hidrofobe, nu
leag apa dar permit ca ea uor i
selectiv s treac prin membrana.
Selectivitatea este datorat capacitii
segmentrlor alfa transmembranare de
a se contracta, formnd un por cu
diametrul de 0,28 nm, fapt care

limiteaz dimensiunile moleculelor ce

pot s treac.

n prezent se cunosc peste 10 aquaporine descrise structural. n dependen de

structur i funcie se deosebesc dou clase: AQP specifice doar pentru ap i
aquagliceroporinele (AQGP) pentru ap i alte molecule mici. AQP sunt foarte
importante n meninerea unui gradient pH membranar deoarece nu permit
transportul ionului de hidroniu H3O+. n organismul uman se conin 10 aquaporine
notate AQP0 AQP9.
Rolul aquaporinelor este (unele din roluri):
protecia osmotic, AQP1
reabsorbia apei n snge,
AQP3
producerea lichidului cerebrospinal, AQP1
hidratarea alveolar, AQP1
sesizarea osmolaritii, AQP4
secreiile fluide n bronhii,
AQP4; trahee, AQP3
bilanul fluid n lentile, AQP0
producerea salivei AQP5
concentrarea urinei, AQP1
mediaz activitatea hormonului
vasopresina, AQP2
Pe lng ap, unele aquaporine transport CO2, glicerol, uree, purine, pirimidine,
nucleozide i acizi monocarboxilici.

c) Canalele agonist sau ligand-dependente permit trecerea moleculeor specifice

numai dup legarea la acest canal a unei molecule speciale numite agonist sau
ligand. Ca exemplu, poate servi legarea acetilcolinei(ligand) la receptorul nicotinacetilcolinic care va funciona ca canal ligand-dependent permind trecerea
selectiv n celul doar a Na+.
Canale de tip beta sau porinele - sunt proteine ce conin secvene de beta-structuri
transmembranare ce formeaz un cilindru cu diametrul de la 0.6 3 nm. Acest tip de
canale sunt mai mult prezente n membrana extern mitocondrial, n membranele
unor bacterii. Permit trecerea diferitor tipuri de molecule de la ioni anorganici pn la
proteine.

2.2 Transportorii membranari

Transportatorii membranari prezint un grup de proteine tranasmembranare foarte
diverse dup structur, specificitate i funcii. TM au un grad foarte nalt de
specificitate structural i chiar stereospecifitate fa de moleculele pe care le
transport. De exemplu transportorul pentru D-glucoza n eritrocite are o afinitate de
10 ori mai mic pentru D-galactoz i de 1000 ori mai mic pentru L-glucoz.
Se disting 4 etape n funcionarea transportorilor:
a.
b.
c.
d.

Recunoaterea din mulimea substanelor dizolvate doar a moleculei specifice

Legarea i translocarea moleculei specifice prin membran
Eliberarea moleculei n citosol
Regenerarea transportorului la starea iniial

n dependen de necesitile suplimentare pentru funcionarea transportorului,

deosebim transportori ce funcioneaz pasiv, fr consum de energie i transportori
care necesit energie pentru funcionare. Respectiv deosebim transport pasiv i
transport activ. Ultimul poate fi primar i secundar.

2.2.1 Transportul pasiv

Transportorii ce asigur transportul pasiv prezint molecule proteice ce conin ntre
400-600 resturi de aminoacizi. Lanurile lor polipeptidice formeaz de la 2 pn la 24
secvene transmembranare de tip alfa-helix. Transportorii pasivi transport ioni
anorganici, monozaharide, aminoacizi, diveri metabolii ai ciclului Krebs i glicolizei.
Exemple de transportori pasivi pot fi:
transportorii pentru glucoz GLUT1-GLUT5
Transportorii ce asigur antiportul pasiv al anionilor de Cl- i HCO3- n
eritrocite i rinichi (proteine schimbtoare de anioni). Sunt importani n
ajustarea concentraiei de HCO3- eritrocitar n sngele arterial i venos.
Transportorii membranei mitocondriale interne: antiporterii pentru ADP i
ATP; simporterii pentru fosfat i H+; antiporterii glutamat-aspartat. Aceti
transportori sunt importani n conservarea energiei i n metabolism.

2.2.2 Transportul activ

Transportorii activi catalizeaz translocarea moleculelor contra gradientului de
concentraie cu consum de energie. Se deosebesc transportori activi primari i
secundari, respectiv transport activ primar i secundar.
Transportori primar activi (PAT) necesit pentru funcionare ATP pe care l
scindeaz autofosforilndu-se tranzitoriu, substratul transportat nu este fosforilat. Aa

tip de transportori se refer la ATPaze. Se disting trei familii de PAT care catalizeaz
translocarea cationilor anorganici: transportatori de tip P, V i F.
Tipul P sunt fosforilai i defosforilai n timpul transportului ionilor de Na, K,
Ca. Se cunosc peste 300 de membri.
Tipul V (V de la vacuol) prezint pompe de H+, responsabili pentru
acidificarea coninutului lizozomal, endozomal, veziculelor Golgi i secretorii.
Tipul F sunt prezeni n membranele mitocondriei, cloroplastelor i bacteriilor.
Particip n translocarea H+ cu consum de ATP.
La PAT de asemenea face parte o superfamilie de transportori numii ABC
(ATP-binding cassette) care la fel scindeaz ATP pentru a transporta. Se cunosc
cteva zeci de familii ABC. Structural ei se caracterizeaz prin prezena unui
domeniu transmembranar i un domeniu citozolic de legare a ATP numit ATP
cassette. Genomul uman conine cel puin 49 de gene ce codific diferii
reprezentani. Transportorii ABC catalizeaz influxul sau efluxul diferitor fosfolipide,
Acil-CoA cu caten lung, srurile acizilor biliari, colesterolul, peptide. Aceti
transportori au un rol medical foarte important. Muli dintre ei sunt implicai n
transportul selectiv a diferitor compui exogeni, toxine i medicamente. Unii ABC
transportori sunt responsabili de fenomenul rezistenei la medicamente, n special
chimioterapice. De exemplu, proteinele asociate cu rezistena la medicamente MRP
(multidrug resistanse associated proteins), o subfamilie de ABC transportori, care
n mod normal sunt responsabile de eliminarea din celule a compuilor conjugai cu
glutation, glucuronat i sulfat, secreia glucuronid-bilirubinei din ficat n bil. Un ABC
transportor important este aa numitul receptor pentru sulfoniluree care
funcioneaz n reglarea secreiei insulinei indus de glucoz.
Alt ABC transportor, diferit de ceilali
reprezentani, este CFTR (cystic
fibrosis transmembrane
conductance regulator) care
funcioneaz ca un reglator i canal
pentru ionii de Cl-. Deleia restului de
fenilalanin F508 din acest transportor
a fost depistat la 70% din pacienii cu
fibroz cistic.

Alte defecte n transportorii ABC sunt implicate n maladia Tangier, retinit,

anemie sideroblastic, colestaz intrahepatic familial, ankilosis spondylitis, diabetul
zaharat insulino-dependent.

Transportori secundar activi (SAT) nu necesit direct ATP pentru funcionare. La

acest tip de transportori fac parte transportorii Na+ - dependeni (SSAT, sodiumdependent secondary active transporters). La aceast familie de transportori fac
parte peste 400 de reprezentani. SAT asigur transportul monozaharidelor,
aminoacizilor, ionilor i altor micromolecule prin simport cu Na+. SAT folosesc ca
surs energetic gradientul electochimic creat de Na+; ulterior excesul de Na+
acumulat intracelular este pompat de ctre Na+/K+-ATPaz, de unde i denumirea de
transportori secundar activi. SAT folosesc energia ATP indirect, deoarece ATP este
folosit doar pentru meninerea gradientului Na+ i nu pentru fosforilarea sau activarea
transportorului.
Ca exemple de SSAT pot servi cotransportorul pentru glucoz SGLT
(sodium/glucose cotransporter) i cotransportorul pentru aminoacizi SAAT
(sodium/amino acid cotransporter).
SGLT asigur transportul D-glucozei utiliznd gradientul ionilor de sodiu. n
natur se ntlnesc peste 35 de membri SGLT, dintre care 4 n organismul
uman. Structural toi SGLT conin 13 segmente transmembranare alfahelicale, cu excepia SGLT1 uman care are 14 segmente. SGLT pot cataliza
uniportul Na+ i apei n lipsa glucozei.

Funcionarea SGLT n celulele tuburilor

proximali renali

SAAT asigur transportul aminoacizilor i este localizat n membranele

enterocitelor. Se cunosc n jur de 7 SAAT pentru diferite clase de aminoacizi.

2.3 Ionoforii
Prezint un grup de substane liposolubile sintetizate i excretate de ctre bacterii,
care n membranele altor celule au rolul de a transloca ioni anorganici. Ionoforii sunt
membrii unui tip special de canale sintetizate non-ribozomal. Se disting dou
subgrupe principale:
a.) Ionofori mobili - leag ionul i mpreun trec prin membran. Exemplu de ionofor
mobil poate servi valinomicina, care are afinitate pentru K+ de 1000 ori mai mare
dect pentru Na+.

Valinomicina legat cu K+

Structura valinomicinei

b.) Ionofori-canale - formeaz canale. De exemplu, gramicidina A - un peptid din

15 AA care n membranele biologice capt conformaia de beta-helix dimeriznduse cu formarea unui canal cu diametrul de 0,5 nm. Acest canal permite trecerea apei
i a cationilor monovaleni dar nu a anionilor.

Dimerul Gramicidinei A localizat n

membran

Pe lng rolul lor de a transporta, ionoforii posed i activitate antibiotic

dereglnd echilibrul ionic intracelular. De asemenea ei prezint un obiect de
cercetare n studierea experimental a mecanismului de translocare a ionilor n
membranele biologice.

2.4 Toxine generatoare de pori (por-toxine)

prezint o clas larg (72 familii) de peptide i proteine, majoritatea sintetizate de
bacterii, dar unele sunt produse i de celulele mamiferelor. Toxinele secretate
formeaz pori transmembranari n alte celule. Porii creai permit fluxul necontrolat a
ionilor i micromoleculelor prin membran genernd efectul toxic. Un exemplu de
por-toxine pot servi unele defensine. Defensinele sunt oligopeptide de 18-45
aminoacizi. Sunt produse i secretate de ctre celulele sistemului imun i de
majoritatea celulelor epiteliale. Ele i manifest efectul toxic prin crearea unor pori n
membranele microorganismelor patogene. Ca rezultat are loc efluxul ionilor i
substanelor nutritive importante din celula bacterian provocnd moartea ei.