REZUMAT: Efectul polurii cu metale asupra microorganismelor acvatice: studiu

de caz n regiuni miniere (Romnia).

n aceast lucrare, se prezint rezultatele toxicitii metalelor grele asupra
microorganismelor, n cazul ecosistemelor lotice Lpu i Ssar, situate n regiunea
minier Baia Mare. Testele de toxicitate au fost realizate cu sistemul ToxTracer,
bazat pe reducerea luminiscenei, emise de bacteria Vibrio fisheri. Inhibiia
bioluminiscenei, cuprins ntre 30 - 80 % (Lpu) i 50 - 80 % (Ssar) a exprimat
sensibilitatea microorganismelor la concentraiile mari de metale grele din ambele
ruri (de exemplu 0,5 - 4,3 mg/l Fe i 15 380 g/l Cu n Lpu sau 0,6 - 5,4 mg/l
Fe i 40 - 140 g/l Cu n Ssar). Datele ToxTracer au fost, ulterior, comparate cu
date asupra concentraiei de metale (Fe, Mn, Zn, Cu, Cd, Cr, Pb i Ni),
cunoscute ca poluani caracteristici ecosistemelor investigate. Rezultatele au
sugerat dependene ntre datele ToxTracer i datele obinute prin analize chimice,
n ambele ruri. Prin urmare, testul de bioluminiscen poate deveni o modalitate
rapid de evaluare a apelor de suprafa, din zonele miniere, n care poluarea cu
metale grele este dominant.
Deeuri miniere depuse pe luncile rurilor i n canalele de ru sunt un mare
component de contaminare riveran cu metale grele i reprezint o surs important
de toxicitate metal pentru a biotei acvatice i riverane ( Hochelle et al . , 2004) . n
Romnia una dintre cele mai zone de impact ale activitilor miniere este regiunea
Baia Mare , care este convergena Zona rurilor Some , Ssar i Lpu .
Principalele surse de poluare sunt un numr de minele situate n regiunea de munte
din apropiere , dou topitorii specializate pe cupru i plumb de producie , dou
fabrici mari de flotare i o serie de iazuri de decantare , unii dintre ei nc activ (
Cordo i colab . , 2003) , e . g . EM Baia Sprie , EM Aurum , EM Biu , Cavnic
EM ,S. C. Cuprom , S. C. Romplumb , S. C. Transgold .
Ca o consecin rurile Ssar i Lpu sunt puternic poluate cu metale . printre
metalele grele produse de industria extractiv n aceast regiune cele mai nocive
pentru oameni includ cadmiu , plumb , nichel i mangan , care sunt toxice chiar i
la doze mici . Zinc, plumb ,aluminiu , crom i fier sunt de asemenea prezente i
toate acestea sunt toxice n special a plantelor cretere ( UNEP raport / OCHA ,
2000) . Concentraiile mai mari de Mn i Fe oferite de natural resursele sunt nc
mbuntit prin prezente i trecute activitile miniere , att n ap i sedimente
( Labunska colab . , 2000) . n consecin , n anumite seciuni ale acestor ruri de
bentos i abunden plancton i diversitate a sczut considerabil ( Cordo et al . ,
2003) . n Romnia limit admis sunt decontate pentru fiecare metalelor prin
normativ naional pentru apele de suprafa 161/2006 peste care metalele sunt n
general toxice .

Organismele vii se confrunt cu riscuri mari, cu expunerea acut i cronic la

metale grele .
Cu niveluri cronice de toxine expunere construi ntr-un organism -a lungul timpului
, crescnd toxicitatea sa i ameninare la adresa ecosistemelor locale ( raport UNEP
/ OCHA 2000) . n ciuda acestui fapt , cateva studii au fost face pe toxicitatea
apelor n regiunea Baia Mare ( Astratinei i Constantinescu ,2004) . Avnd n
vedere c n rndul populaiei biologice , bacteriile au o capacitate mai mare de a
rezista un nivel ridicat de toxicitate de metal , acestea pot fi utilizate ca un
instrument valoros pentru a identifica impactul metale grele asupra organismelor
vii . Pentru cele mai bune de cunotinele noastre bioluminiscent pe baz de
teste au fost greu de folosit n Romnia pentru monitorizarea mass-media
contaminate n timp ce alte ri s le aplice pe scar larg pentrubiomonitorizarea
de sedimente poluate ,eflueni de plante , toxicitatea a levigatului , contaminare a
solului i a proceselor de decontaminare ( Extrem i colab ., 1993; Ulitzur et al.,
2002 ; Blaise colab . 2006) .
Scopul cercetarii noastre este de a identifica gradul de adecvare a testului
bioluminiscen pentru screening rapid de toxicitate metal rurile din zona de
minerit Baia Mare .
Variaia n emisia de lumina de bacterii este utilizat ca msur de influena
poluanilor pe metabolismul lor . Prin urmare, am folosit bacterie bioluminiscent
Vibrio fisheri ca organisme de testare n scopul de a detecta toxicitatea probe de
ap prelevate din Lpu i Ssar ruri .
n plus, concentraiile de metale grele se obin la legtura cu scdere
bioluminescence .
Prelevarea de probe . Rul Lpu este 119 km lungime i are o suprafa bazin de
1.875 km2 . Avnd n contul surse de poluare , sase site-uri de prelevare au fost
selectate pentru Rul Lpu : amonte Biu ( Izvorul Alb - Negru ) ; Biu aval (
confluen Botiza ) ; Trgul Lpu ( Rogoz ) ;aval Trgul Lpu ( Rzoare ) ;
amonte Cavnic ( n zona Valea Mesteacn ) ;confluen aval Lpu - Ssar .
Rul Ssar este unul dintre principalii aflueni ai rului Lpu avnd o lungime de
31.6 km i o suprafa total de 311 km2 bazin . Cinci seciuni de prelevare au fost
selectate pentru Ssar River : amonte Baia Sprie ; aval Baia Sprie ; confluen aval
cu rul Firiza ; aval S. C. Cuprom ; aval Baia Mare . Pentru ambele ruri se iau
probe de la sfritul lunii martie 2007. Protocolul de eantionare pentru estimarea
coninutului de metale grele are s-au efectuat n conformitate cu standardul ISO
5667-4 : 1987 i ISO 5667-4 : 1991 . Pentru toxicitatea teste probele au fost
colectate n sticle sterile . nainte de toxicitatea teste a fost stabilit pH-ul probelor
ntre 6,0 i 8,0 i osmolaritatea a fost ajustat prin adugarea de soluie 0,1 ml
NaCl ( 22 % ) .

Testele de toxicitate . Evaluarea toxicitii ap ru a fost fcut cu ajutorul unui test

rapid de bioluminescence efectuate cu echipamentul ToxTracer oferite de Skalar
companie ( rile de Jos ) . Sistemul const dintr-un ToxTracer luminometru , un
bloc de rcire i un reactive Kit , care include bacteriile liofilizate ( Vibrio fisheri ) .
Cu toate acestea , n studiile efectuate pe sisteme Ssar i Lpu am folosit bacterii
proaspt preparate direct de la plac conform Broers ( 2001) . O suspensie de celule
standard a fost amestecat cu apa probe i luminiscen a fost msurat dup 30 de
minute , conform cu Ulitzur i colab . ( 2002) .
Inhibarea luminescenta a fost estimat cu luminometru ToxTracer .
Izolarea i cultivarea de Vibrio fisheri . In acest studiu cultivarea luminii
emitoare bacterie Vibrio fisheri fost realizat ca o alternativ la utilizarea kitul de
reactivi .
Bacteriile liofilizate au fost re- suspendate ntr-un mediu protector coninnd ( g /
100 ml ) : NaCl ( 0,4 ) , D - glucose.H2O ( 6.6 ) , L - histidin ( 0,2 ) , albumin (
0,05 ) . Prin utilizarea dungi Tehnica bacteriile luminiscente fost transferate pe un
mediu de agar care conine ( g / 100 ml ) :
NaCl ( 3 ) ; NaH2PO4.H2O ( 0,61 ) ; K2HPO4 ( 0,208 ) ; MgSO4.7H2O ( 0.0204 )
; ( NH4 ) HPO4 ( 0,05 ) ;
Caso - pepton ( 5 ) ; extract de drojdie ( 0,05 ) ; agar ( 1,5 ) i 0,3 ml de glicerol .
Placa de agar inoculat
cu bacterii a fost incubat la 22 C timp de 48 ore . Dezvoltarea bacteriilor a fost
verificat ntr-un
camer ntunecat . O singur colonie luminiscente fost transferat la 0,5 ml de
mediu proaspt HBS - G ,
care a coninut ( g / 100 ml demiwater ) : hepes ( 1,19 ) , D - glucose.H2O ( 0,8 ) ,
NaCl ( 2 ) ,
MgCl2.6H2O ( 0,2 ) i KCl ( 0,03 ) , n funcie de Broers , 2001.Ultima Amestecul
a fost
suspensie de celule standard care ulterior a fost utilizat pentru testele de toxicitate .
Metale grele . Atomic absorbtie Spectrometrie ( AAS ) conform ISO 15586 :
2003 a fost realizat cu scopul de a determina concentraiile de metale grele ( Fe ,
Mn , Zn , Cu,
Cr , Pb , Ni i Cd) n Lpu i Ssar ruri . Rezultatele au fost raportate la limitele
standardelor
stabilit prinnormativ 161/2006 naional .
Rezultatele de toxicitate , exprimate ca inhibare % drepte sunt prezentate n cadrul
propus
Gama de toxicitate ( Tab . 1 ) . Criterii pentru maini de toxicitate ap au fost
derivate din datele similare

obinute n anchetele anterioare ( Broers , 2001 , Astratinei i Constantinescu ,

2004 ;
Proiectul SWIFT UE , 2004)
Rezultatele testelor de toxicitate efectuate cu probele de ap recoltate din Lpu i
Ruri Ssar sunt prezentate n tabelele 2 i 3 , respectiv . Prin compararea
bioluminiscen
nivel ( % ) din probele de ap cu cea a unei probe de control - ap curat , diferite
niveluri de
Toxicitatea ap , exprimat ca inhibiie % din lumina bacteriene au fost msurate .
Urmtoarea distribuie a toxicitii a fost obinut pentru rul Lpu : trei
site-uri de prelevare Biu aval , amonte Trgul Lpu i n aval de confluena
Lpu - Ssar prezentat toxicitate critic ( 50-80 % ) ; dou site-uri de prelevare ,
confluen amonte
Cavnic i Biu amonte corespuns toxicitatea ap moderat ( 30-50 % ) ; un mic
Nivelul de toxicitate ( 20-30 % ) a fost identificat n aval Trgul Lpu . Avnd n
ansamblu
ru mai nalt de toxicitate ( 75 % ) a fost detectat n aval exploatarea minier de
Biu ( fig. 1A ) .
Toxicitatea a fost prezent la fel de bine in apa de Ssar River ( Tab 3; . . Figura 1B
) cu
urmtoarea distribuie : niveluri critice de toxicitate ( 50-80 % ), au fost gsite n
patru site-uri de prelevare
( aval Baia Sprie , Romplumb aval , Cuprom aval i n aval Baia
Mare) i numai n amonte Baia Sprie a fost identificat un nivel moderat de
toxicitate ( 45 % ) .
cel mai nalt nivel de toxicitate ( 80 % ) a fost gsit n aval SC Cuprom , o unitate
de procesare
minereuri neferoase .
Concentraiile de metale obinute sunt prezentate n tabelul 4. valori ridicate pentru
Fe , Cu,
Mn i Cd au fost identificate n Lpu River ( Tab . 4A ) . n comparaie cu romni
normativ 161/2006 , concentraiile Fe i Cu au fost atribuite n clasele de calitate
IV - V i
Mn i Cd au fost atribuite n clasele de calitate III - IV . n ordinea gravitii patru
site-uri de prelevare
s-au dovedit a fi puternic contaminate : aval Biu ( 4,4 mg / l Fe i 376 pg / l Cu) ,
amonte Trgul Lpu ( 1,8 mg / l Fe ; 217 pg / l Cu) , confluen aval Lpu - Ssar
( 3.7

mg / l Fe ; 127 pg / l Cu) i confluena amonte Lpu - Cavnic ( 2,6 mg / l Fe ; 91

pg / l Cu) .
n Ssar River ( Tab . 4B ) , s-au obinut valori extrem de ridicate pentru Fe , Mn ,
Zn, Cu , i
Cd , care a atribuit cele mai multe dintre site-urile de eantionare pentruclasele de
calitate IV i V de la nivel naional
normativ pentru calitatea apelor de suprafa ( 161/2006 ) . De exemplu, n aval
Baia Sprie , Fe , Zn
i Cd msurat 1,8 mg / l , 850 pg / l i 3,86 ug / l , respectiv . n aval site-ul
industrial
Cuprom , concentraia de metal se ncadreaz n clasa V de calitate a apei de
suprafa .
Plumb ( Pb ) a fost msurat n concentraii relativ mari n ambele ruri . Cea mai
mare
concentraia de Pb ( 24.5g / l) a fost obinut confluen aval cu Ssar , pentru
Lpu
River, i n aval Baia Mare (11,3 pg / l) pentru Ssar . n concentraii mai mari de
Fe generale
( 5,4 mg / l ) , Mn ( 2,0 mg / l ) , Zn (1994 pg / l ) , i Cd ( 9,5 ug / l) au fost
determinate de-a lungul Ssar
n timp ce a fost mai mare de Cu ( 380 ug / l) n rul Lpu .
Printre organismele acvatice bacteriile sunt implicate n principalele procese ale
bioconversie
i , prin urmare, joac un rol important n potenialul de auto- purificare a rurilor (
Fisher et al . ,
2000) . Pe de alt parte rspunsul lor rapid a compuilor toxici d esenial biologic
indicaii cu privire la nivelul de poluare toxice a ajuns n diferite ecosisteme .
n aceast lucrare s-au efectuat testele de toxicitate pentru rurile Lpu i Ssar
folosind
Sistem ToxTracer , care se bazeaz pe inhibarea luminiscen bacteriene . Astfel
bioluminiscen Vibrio fisheri poate fi vzut ca exprimnd sensibilitatea
microorganismelor ,
i mai mult , n special bacterii , la un nivel ridicat de metale toxice .
Pentru sistemul Rul Lpu au fost detectate cele mai ridicate niveluri de toxicitate
n probele din
Biu , Cavnic i Baia Mare ( Tab . 2 , fig. 1A ) sugernd influenele puternice ale
mineritului
activiti desfurate de site-uri industriale, cum ar fi EM Biu , Cavnic EM i SC
Transgold ,

respectiv etc. Avnd n intervalul de inhibare bioluminiscen ( 30-80 % ) , River

Lpu
ap a avut o moderat pn la toxicitate critic pentru bacterii .
Niveluri critice de toxicitate au fost gsite de asemenea n probele de rul Ssar
inferior
( Tab . 3 ) , respectiv n aval principalele surse industriale de poluare ( EM Baia
Sprie ,
SC Romplumb , SC Cuprom i SC Transgold ) . Un nivel de toxicitate ridicat ( 68
% ) a fost
gsit nainte de confluena cu Ssar Lpu . Pentru Ssar tendinade a toxicitii
crete de-a lungul rului a fost observat n mod clar ( fig. 1B ) . Puini teste de
toxicitate au fost efectuate n
regiune , pentru a permite compararea datelor . Lucru nepublicate precedent pe
Ssar ( Astratinei , 2004)
a raportat un nivel de toxicitate de 50 % din aval Baia Sprie , 20% mai mici dect
toxicitatea detectat n
acest studiu .
Toxicitatea a probelor de ap a fost comparat cuconinutul de metal determinat prin
AAS . Metalele studiate sunt responsabili pentru degradarea de ap n ambele ruri
. literatur
arat nici o intrare din metal , evoluia i toxicitate pentru regiunea n cauz (
Labunska et al., 2000 ) . n ambele
de ruri concentraii semnificative de metale grele sunt menionate n mod
sistematic n diferite
rapoarte , n urma accidentelor miniere sau dup monitorizarea de rutin ( raport
UNEP / OCHA 2000 ;
Garvey i colab ., 2000; Bud i colab ., 2002; Rapoarte APM Baia Mare 2000-2006
Nivelul de toxicitate almostrelor ( Tab . 2 , 3 ) a fost legat de concentraia
metale grele ( Tab . 4A , B) . Concentraiile mai mari de metale grele ( Fe , Mn, Cu
i Cd )
a coincis cu o toxicitate relativ mare n Lpu River ( fig. 1A ) . Punctele de
prelevare , care
au avut concentraii ridicate de metale , cum ar fi Biu aval , amonte Trgul Lpu
i
confluen aval Lpu - Ssar prezentat niveluri critice de toxicitate , precum i
reprezentani
cu , 75 % , 58% i 68 % scdere luminiscen , respectiv . Comparaia ntre
date de toxicitate i concentraia de metal n cazul rului Lpu arat o legtur
clar ntre

concentraia de metale i nivelul de toxicitate ( fig. 1A ) , n ciuda faptului c este

un ru Lpu mai
implicnd mai multe condiii hydrogeomorfological i fizico - chimice complexe .
Corelaiile dintre concentraiile de date toxicitate i metale au fost identificate ca n
Ssar River ( fig. 1B ) . Ca Concentraiile de metale grele a crescut n probele de
lumina
Vibrio pescuit a sczut . Principalele contaminrile din Ssar au fost de mare Fe ,
Mn , Zn, Cu , Cd
Concentraiile ( Tab . 4B ) . Toxicitatea critic de probe aval Baia Mare ( 75 % ) ,
Baia
Sprie ( 60 % ) , SC Romplumb ( 70 % ) i SC Cuprom ( 80 % ) au corespuns
metalul
Concentraiile de clase de calitate IV -V , n conformitate cu normativ 161/2006
naional .
Rapoarte de monitorizare anterioare au aratat ca, in ciuda ultimul timp reducerea
miniere din Baia
Zon Mare , nici o imbunatatire a fost observat lastarea ecologic att de ruri (
APM Baia
Rapoarte Mare , 2000 - 2006 ; proiect PROECO PN05 , 2006) . Coninutul de
metale corespunztoare
clasele de nalt calitate ( IV , V) a identificat n aceast lucrare i confirmat n alte
studii ( Cordo
et al . , 2003) pentruSasar i Lpu a indicat degradarea crescute n aceste
ecosisteme
n acest rezultate de lucru cu privire la efectele de toxicitate ale poluare cu metale
asupra microorganismelor au
Sa raportat pentruLpu i Ssar rurile , din zona de minerit Baia Mare . Similar
cu aceast
cercetare , teste de toxicitate prin bacterii luminiscen au fost efectuate anterior
pentru
ap dulce ( AFNOR , 1991; Ulitzur , 2002) i sedimente proaspete ( Extrem colab
, 1993; . Blaise et
al. , 2006) . Datele obinute n cadrul investigaiilor anterioare ( Broers i colab . ,
2001 , Astratinei i
Constantinescu, 2004; Proiect UE SWIFT , 2004) au fost folosite n activitatea
noastr pentru a obine criterii pentru
Clasificarea toxicitii pe baz de ap pe a sczut bioluminiscen de Vibrio pescuit
( Tab . 1 ) .
Cu toate acestea multe dintre aceste teste bioluminescence trebuie s fie efectuate
pe miniere romnesc

site-uri pentru a realiza un set mai mare de date , permind o clasificare mai exact
.
Testul bioluminescence folosit aici este un instrument promitor pentru screeningul toxicitii
ap de suprafa din zonele miniere dominate de poluare cu metale . Aceste bacterii
relativ simple
teste , ar putea fi uor aplicate rapid identificare clasificare a probelor de ap toxice
. cnd
necesar , poluanii cheie poate fi determinat prin teste chimice sau teste de
toxicitate traditionale .