Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Proteina killer recunoate i se leag la nivelul unui receptor specific localizat la suprafaa
peretelui celular al celulelor sensibile. La acest nivel toxina este scindat proteolitic n cele dou
subuniti, n interiorul celulelor ptrunznd numai subunitatea .
Efectul letal al toxinei se datoreaz formrii unor pori ireversibili la nivelul membranei
plasmatice prin care celula pierde o serie de constitueni eseniali.
Semnificaia biotehnologic a fenomenului killer
Caracterizarea taxonomic a anumitor specii sau tulpini de drojdii - biotipare;
Caracterul killer poate constitui factor de selecie n experimentele de transfer de material
genetic, inclusiv n fuziunile de protoplati;
Pentru protecia proceselor de fermentaie pentru obinerea vinului.
Protocol de lucru
Pentru evidenierea caracterului killer la S. cerevisiae se utilizeaz:
-
glucoz 2 % ;
pepton 1%;
agar 2%;
Celulele vii sunt albe (incolore) deoarece metabolizeaz colorantul, n timp ce celulele
moarte sunt albastre pentru c nu pot degrada colorantul.
Mod de lucru
1. Se utilizeaz diferite tulpini de S. cerevisiae, crescute n mediu YPG lichid, timp de 18 ore la
30C ;
2. Se inoculeaz tulpina sensibil prin inundare, 1ml suspensie n plci Petri cu mediu selectiv,
agarizat (conine colorant vital - albastru de metilen). Se aspir excesul;
3. Plcile inoculate dup ndeprtarea surplusului de suspensie sunt meninute 15 minute la
temperatura camerei pentru ca suprafaa mediului s se usuce;
4. Tulpinile considerate killer se inoculeaz cu ansa n striuri;
5. Plcile inoculate sunt meninute la temperatura camerei, deoarece toxina killer este
termolabil;