ANUL I GENETIC MOLECULAR

Macromolecule informaionale - curs

I. AMINOACIZII UNITI STRUC-TURALE DE BAZ ALE PROTEINELOR

I.1. Definiie, structur chimic, rspndire n natur
Aminoacizii sunt compui organici cu funciune mixt (conin n molecul o grupare amino
NH2 i o grupare carboxilic COOH) i reprezint unitile structurale de baz ale proteinelor. Din
cei aproximativ 200 de aminoacizi cunoscui n prezent, un numr de 20 sunt proteinogeni, adic
intr n mod curent n structura proteinelor. Din punct de vedere structural, aminoacizii proteinogeni
sunt aminoacizi i au formula general:
R CH COOH
I
NH2

Radicalul R poate fi alifatic, aromatic sau heterociclic. n funcie de natura acestui radical, aminoacizii se clasific n 7 clase.
1. Acizi monoamino-monocarboxilici. Din aceast clas fac parte 5 aminoacizi
proteinogeni cu caten normal sau ramificat: glicina (glicocolul), alanina, valina, leucina i
izoleucina:
CH2 COOH
I
NH2
Glicocol (Gly)

CH3 CH COOH
I
NH2
Alanin (Ala)

CH3 CH CH2 CH COOH

I
I
NH2
CH3
Leucin (Leu)

CH3 CH CH COOH
I
I
CH3 NH2
Valin (Val)

CH3 CH2 CH CH COOH

I
I
CH3 NH2
Izoleucin (Ile)

2. Hidroxiaminoacizii sunt aminoacizi ce conin n molecula lor, n afara grupelor NH2 i

COOH i o grupare alcoolic. Dintre aminoacizii proteinogeni, n aceast grup intr serina i
treonina.
CH2 CH COOH
I
I
OH NH2

CH3 CH CH COOH
I
I
OH NH2

Serin (Ser)

Treonin (Thr)

3. Tioaminoacizii (aminoacizii cu sulf) conin n molecula lor o grupare sulfhidril (SH),

alturi de gruprile amino i carboxil. Dintre aminoacizii proteinogeni, n aceast grup intr
cisteina i metionina:

2
CH2 CH COOH
I
I
SH NH2

CH2 CH2 CH COOH

I
I
NH2
S
I
CH3

Cistein (Cys)

Metionin (Met)

Cisteina joac un rol nsemnat n structura proteinelor deoarece grupele sulfhidril se pot oxida reversibil cu formarea unei aa-numite puni disulfidice ntre dou resturi de cistein genernd
cistina. Punile disulfidice se pot forma att intracatenar ct i intercatenar i ndeplinesc att un rol
structural ct i unul funcional:

CH2 CH COOH
I
I
SH NH2

CH2 CH COOH
I
I
S
NH2
I
S
I
CH2 CH COOH
I
NH2

+2H+;+2e-2H+;-2e-

Cistein (Cys)

Cistin (Cys-Cys)

n afara rolului su structural de aminoacid proteinogen, metionina mai ndeplinete n organismul viu i un important rol de detoxifiere. n acelai timp, metionina reprezint cea mai important surs de grupri metil, fiind principalul agent de metilare din organism. Aceast funcie este
ndeplinit de un derivat al metioninei (Sadenozilmetionina), un compus n care gruparea metilic
este deosebit de labil datorit sarcinii electrice pozitive de la atomul de sulf.
4. Acizii monoamino-dicarboxilici conin n molecula lor o grupare amino i dou grupe
carboxil i au caracter acid. Din aceast clas fac parte acizii glutamic i aspartic. n structura majoritii proteinelor naturale se ntlnesc i amidele acestora (glutamina i respectiv asparagina). Unii
autori consider c acestea sunt aminoacizi ca atare (ceea ce nseamn c exist 22 de aminoacizi
proteinogeni), iar ali autori le consider ca fiind derivai ai acidului glutamic, respectiv aspartic (i,
implicit, consider c exist 20 de aminoacizi proteinogeni):
HOOC CH2 CH2 CH COOH
I
NH2
Acid glutamic (Glu)

O = C CH2 CH2 CH COOH

I
I
NH2
NH2
Glutamina (Gln)

HOOC CH2 CH COOH

I
NH2
Acid aspartic (Asp)

O = C CH2 CH COOH
I
I
NH2
NH2
Asparagina (Asn)

3
5. Acizii diamino-monocarboxilici, conin n molecul dou grupri amino i au caracter
bazic. Ei intr n cantiti mari n structura proteinelor bazice (de exemplu histonele i protaminele),
iar n cazul multor enzime bicomponente au rolul de a lega cofactorul enzimatic de apoenzim prin
legturi puternice, covalente. De exemplu lizina, prin gruparea sa aminic din poziia poate lega
cofactori de tipul biotinei, acidului lipoic, acidului folic etc.:
CH2 CH2 CH2 CH2 CH COOH
I
I
NH2
NH2
Lizin (Lys)

HN = C NH CH2 CH2 CH2 CH COOH

I
I
NH2
NH2
Arginin (Arg)

6. Aminoacizii aromatici conin n molecula lor un nucleu benzenic. Dintre aminoacizii

proteinogeni, din aceast clas fac parte fenilalanina i tirozina, aceasta din urm putnd fi considerat ca un derivat al fenilalaninei (phidroxi-fenilalanina):

CH2 CH COOH
I
NH2

HO

Fenilalanin (Phe)

CH2 CH COOH
I
NH2
Tirozin (Tyr)

7. Aminoacizii heterociclici conin n molecula lor un heterociclu care este de regul

pentaatomic (imidazolic sau pirolic). Din aceast grup fac parte 4 aminoacizi proteinogeni:
triptofanul, histidina, prolina i hidroxiprolina:
CH2 CH COOH
I
NH2

CH2 CH COOH
I
NH2
N

HN

N
H
Triptofan (Trp)

Histidin (His)

HO
N
H

COOH

Prolin (Pro)

N
H

COOH

Hidroxiprolin (ProOH)

I.2.3. Proprietile chimice ale aminoacizilor

Prin condensarea a dou molecule de aminoacizi (identici sau diferii) se formeaz o
dipeptid. Condensarea acesteia cu o nou molecul de aminoacid conduce la formarea unei
tripeptide etc. Dac la reacia de condensare particip un numr mare de molecule se formeaz o
polipeptid:

4
O
II
H2N CH C OH +
I
R1

H N CH COOH
I
I
H R
2

H2O

O
II
H2N CH C N CH COOH
I
I
I
H R
R1
2
Legtur
peptidic

Legturile peptidice se formeaz deci prin participarea gruprii carboxilice a unui aminoacid
i a gruprii aminice a celuilalt aminoacid, aceste grupe situndu-se n poziia una fa de cealalt.
II. PEPTIDE. STRUCTUR CHIMIC, PROPRIETI, ROL BIOLOGIC
II.1. Noiuni generale
Dup cum s-a artat mai sus, una din principalele proprieti chimice ale aminoacizilor (datorate prezenei ambelor grupe funcionale) o constituie reacia de condensare intermolecular cu
formarea unei legturi covalente C N, numit legtur peptidic. Formarea legturilor peptidice
are loc in vivo n procesul complex al biosintezei peptidelor i proteinelor.
O importan deosebit pentru proprietile fizico-chimice i biologice ale peptidelor i proteinelor o joac natura legturii peptidice. Prin msurarea distanelor interatomice ale legturii simple C N i respectiv legturii duble C = O s-a demonstrat faptul c legtura peptidic nu este o
legtur covalent simpl. Ea este mai mic dect legtura covalent simpl C N (care este de
1,47 ), dar mai lung dect legtura dubl C = O (care msoar 1,22 ). Acest lucru demonstreaz
faptul c legtura peptidic nu este nici simpl, nici dubl, ci are un caracter aparte, de legturi parial dubl. Datorit efectelor electronice, ea oscileaz ntre dou forme extreme (I i II), structura
real (forma III) fiind dat de repartizarea uniform a electronilor neparticipani ntr-un nor electronic ce aparine n egal msur atomilor de O, C i N:

O
II
.... C N ....
I
H
I

II +
.... C N ....
I
H
II

O
I
+ ....
.... C

N
I
H
III

Aceast proprietate a legturii peptidice confer acesteia capacitatea de a mpiedica rotirea

liber a substituenilor (atomul de oxigen i respectiv cel de azot) n jurul ei, fapt ce face posibil
existena teoretic a celor doi izomeri geometrici cis i trans. S-a demonstrat faptul c n peptidele
i proteinele naturale, la nivelul legturilor peptidice se ntlnete doar izomeria de tip trans.
Dac n primele etape ale dezvoltrii biochimiei proteinelor au fost cercetate n principal
natura i proprietile produilor de hidroliz chimic a moleculelor proteice, n ultimul timp se
acord o atenie deosebit studiilor privind proprietile peptidelor de sintez i a celor naturale.
Peptidele naturale sunt sintetizate de microorganisme, plante i animale i ndeplinesc n
organismele vii mai multe funcii: componente structurale (plastice) ale celulelor i esuturilor,
transportori de electroni, factori de eliberare a hormonilor, hormoni, toxine, inhibitori naturali ai
enzimelor etc.
n funcie de numrul resturilor de aminoacizi ce intr n structura lor, peptidele se clasific
n dou mari grupe:
oligopeptide (ce conin n molecul 2 10 resturi de aminoacizi):

dipeptide;

tripeptide;

tetrapeptide;

...

decapeptide.

polipeptide ale cror molecule conin cte un numr mare sau foarte mare de resturi de aminoacizi.
III. PROTEINE
Proteinele sunt substane macromoleculare prezente n celulele tuturor organismelor vii unde
reprezint peste 50% din masa uscat a acestora.
III.1. Rolul biologic al proteinelor
Proteinele ndeplinesc n organismele vii mai multe funcii biochimice absolut indispensabile tuturor proceselor metabolice i fiziologice.

6
a) Rolul plastic este jucat de proteinele structurale ce reprezint constitueni principali ai
membranei celulare, citoplasmei, organitelor subcelulare, umorilor i fluidelor tuturor organismelor
vii.
b) Rolul energetic este asigurat prin faptul c n urma degradrii lor catabolice se elibereaz
o mare cantitate de energie ce se nmagazineaz n legturile macroergice ale moleculelor de ATP,
energie ce va fi utilizat n diferite procese vitale (efort fizic i intelectual, procese de biosintez
etc.).
c) Rolul reglator este ndeplinit de o serie de hormoni cu structur polipeptidic (hormonii
reglatori ai hipotalamusului, ai hipofizei, hormonii pancreasului, hormonii paratiroidieni, ai timusului i cei gastro-intestinali).
d) Rolul de aprare este ndeplinit de proteinele specifice din clasa imunoglobulinelor (anticorpi) care prezint proprieti speciale de a interaciona cu proteinele strine (antigene) n procesul
complex de aprare a organismului fa de agenii patogeni din mediul extern.
e) Rolul de transport al proteinelor se refer att la transportul activ prin membranele biologice care se efectueaz cu consum energetic, contra gradientului de concentraie al metabolitului
transportat, ct i la transportul specific al unor metabolii sau elemente absolut necesare vieii. n
acest din urm caz, un exemplu concludent l reprezint hemoglobina al crui rol biologic const n
transportul oxigenului de la plmni la nivelul tuturor organelor i esuturilor i a dioxidului de carbon pe calea invers.
f) Rol n contracia muscular. Procesul contraciei musculare, care st la baza efortului fizic, este un proces fiziologic i biochimic complex realizat prin consum energetic (cnd se utilizeaz energia nmagazinat n legturile macroergice ale moleculelor de ATP) de ctre o serie de proteine specifice actina i miozina ce formeaz un complex proteic cuaternar cunoscut sub numele
de complexul acto-miozinic.
g) Rolul catalitic este ndeplinit de ctre enzime care sunt, fr excepie, substane proteice.
n afara funciilor enumerate mai sus, proteinele reprezint instrumentul molecular al expresiei informaiei genetice coninute n acidul deoxiribonucleic din cromozomi. De aceea, proteinele
sunt componente structurale i funcionale intim legate de procesele vieii, procese ce nu pot i concepute n lipsa substanelor proteice.
III.2. Clasificarea proteinelor
n funcie de structura loc chimic, de rolul pe care l ndeplinesc n organismele vii i de proprietile lor fizico-chimice, proteinele pot fi clasificate n mai multe moduri.

7
Delimitarea net ntre proteine i polipeptide este foarte dificil deoarece exist proteine alctuite numai din catene polipeptidice (aa-numitele proteine simple sau holoproteine). Majoritatea
autorilor delimiteaz aceste dou clase de biomolecule dup masa lor molecular considernd c
polipeptidele au o mas molecular de pn la 10.000 Da, iar proteinele au masa molecular superioar acestei valori.
n funcie de forma moleculelor, proteinele sunt de dou tipuri:
proteine fibrilare care au molecula filiform i sunt, n general, insolubile n ap. Din
aceast grup fac parte de exemplu fibroina, keratinele, colagenul etc.
proteine globulare a cror molecul are form sferic sau elipsoidal i sunt uor solubile
n ap. Din clasa proteinelor globulare fac parte toate enzimele, globulinele serice i alte.
n funcie de rolul biologic principal pe care l ndeplinesc, proteinele se mparte n 6 clase
astfel:
Proteine structurale. Acestea sunt reprezentate de proteinele ce joac rol plastic, adic
acele proteine ce intr n structura membranelor biologice, a esuturilor i organelor. Proteinele
structurale cele mai bine studiate sunt: colagenul ntlnit n esutul conjunctiv din cartilaje, tendoane, piele, oase etc., elastina ce intr n structura esutului conjunctiv elastic din ligamente, fibroina
din mtasea produs de Bombix mori, sclerotina ntlnit n exoscheletul insectelor, -keratina ce
se gsete n cantiti mari n derm, pr, pene etc., proteinele membranare ce intr n structura
tuturor membranelor biologice i altele.
Proteinele de rezerv au rolul principal de a constitui principala rezerv de aminoacizi a
organismelor vii. Din aceast grup fac parte cazeina care este componenta proteic major a laptelui, gliadina din cariopsele cerealelor, zeina ce reprezint principala protein de rezerv din boabele de porumb, ovalbumina i lactalbumina din ou i respectiv din lapte, feritina care faciliteaz
acumularea ionilor de fier n splin i altele.
Proteinele contractile au un rol important pentru micarea organismelor vii fiind implicate
n contracia muchilor, cililor, flagelilor etc. Cele mai bine studiate proteine contractile sunt actina
i miozina implicate n contracia miofibrilelor i dineina care asigur micarea cililor i flagelilor
la nevertebrate.
Proteinele de transport sunt proteine cu o structur deseori complex ce ndeplinesc un
important rol n transportul diferiilor metabolii n organism. Cele mai bine studiate proteine de
transport sunt hemoglobina care asigur transportul oxigenului i dioxidului de carbon, mioglobina
cu rol n transportul oxigenului la nivel muscular, albuminele serice care realizeaz transportul
acizilor grai n circulaia sanguin, -lipoproteinele serice care asigur transportul lipidelor n

8
snge etc. Tot din aceast categorie fac parte i transportorii membranari care realizeaz transportul activ, contra gradientului de concentraie, al diferiilor metabolii prin membranele biologice.
Proteinele cu rol catalitic i hormonal reprezint o grup extrem de important de proteine funcionale. Din aceast grup fac parte enzimele (care sunt toate, fr nici o excepie, proteine),
precum i unii hormoni (hormonii reglatori ai hipotalamusului, hormonii hipofizei, cei pancreatici,
hormonii paratiroidieni, hormonii timusului etc.).
Proteine cu rol de protecie. Acestea sunt proteine implicate n diferite procese fiziologice
de protecie i aprare a organismului fa de anumii factori externi.
Cele mai bine studiate sunt trombina (o protein ce particip la procesul coagulrii sanguine), fibrinogenul (care este precursorul fibrinei, protein implicat, de asemenea, n procesul coagulrii sanguine), imunoglobulinele sau anticorpii (proteine capabile s formeze compleci anticorp antigen cu proteinele strine organismului respectiv i altele.
n funcie de structura lor chimic, proteinele se mpart n dou mari grupe: proteine simple
i proteine complexe.
Proteine simple (holoproteine). Acestea sunt proteine ale cror molecule sunt formate
numai din catene polipeptidice. Acest lucru a fost demonstrat prin faptul c prin hidroliz complet,
holoproteinele pun n libertate numai aminoacizi. Din aceast grup fac parte o serie de proteine ce
ndeplinesc importante funcii biochimice i fiziologice: , i -globulinele serice, anticorpii,
histonele, protaminele, fibrinogenul, miozina, actina, colagenul, fibroina, keratinele etc.
Proteinele complexe (numite i conjugate, sau heteroproteine) conin n molecula lor, pe
lng componenta proteic i o component de alt natur numit grupare prostetic. La rndul lor,
heteroproteinele se mpart n mai multe grupe n funcie de natura chimic a gruprilor prostetice.
Cromoproteinele conin n molecula lor o grupare prostetic de natur protoporfirinic.
Din aceast categorie fac parte o serie de proteine ce ndeplinesc importante funcii biochimice i
fiziologice: hemoglobina, mioglobina, citocromii, catalaza, peroxidaza etc.
Lipoproteinele conin n molecula lor grupri prostetice de natur lipidic. Din aceast
grup fac parte de exemplu lipoproteinele serice.
Fosfoproteinele. Gruprile prostetice ale hetero-proteinelor din aceast grup sunt reprezentate de resturi de serin esterificate cu acid fosforic. Cele mai cunoscute fosfoproteine sunt cazeina, vitelina, vitelenina, fosvitina i altele.
Glicoproteinele conin grupri prostetice de natur glucidic (galactoza, manoza, unele
hexozamine, acidul N-acetilneuraminic). Din grupa glicoproteinelor sunt bine studiate -

9
globulinele, orosomucoidul plasmatic, ovalbumina, glucoproteinele serice ce determin grupele
sanguine i altele.
Metaloproteinele conin unii ioni metalici (Fe2+, Fe3+, Cu2+, Zn2+) n calitate de grupare
prostetic. Din aceast grup fac parte de exemplu alcooldehidrogenaza, enolaza, feritina,
conalbumina, ceruloplasmina i altele. Trebuie menionat faptul c la metaloproteine, ionul metalic
este legat direct de catenele polipeptidice ale componentei proteice i nu este inclus ntr-o alt structur (cum ar fi nucleul protoporfirinic la cromoproteine).
Flavoproteinele conin un flavinnucleotid n calitate de grupare prostetic. Din aceast
grup fac parte flavoenzimele FMN- i FAD-dependente (succinat-dehidrogenaza, aminoacidoxidazele etc.).
Nucleoproteinele sunt poate cele mai importante proteine complexe datorit faptului c
gruparea lor prostetic este reprezentat de un acid nucleic. n funcie de natura acidului nucleic ce
joac rol de grupare prostetic ele se mparte n ribonucleoproteine (nucleoproteine ce conin ARN)
i deoxiribonucleo-proteine (ce conin ADN n calitate de grupare prostetic).
n moleculele proteinelor, resturile de aminoacizi sunt unite prin legturi peptidice ca i n
cazul peptidelor:
O
O
II
II
H 2N CH C N CH C
I
I
I
H R2
R1

.......... N CH COOH
I
I
H Rn

Datorit efectelor electronice, i n cazul proteinelor legtura peptidic prezint un caracter

parial de legtur dubl, mpiedicnd rotirea liber a substituenilor.
III.3. Proprietile proteinelor
III.3.1. Proprieti fizice
Solubilitatea proteinelor este extrem de diferit i depinde de structura acestora. n general,
proteinele fibrilare sunt insolubile n ap. Celelalte proteine prezint grade diferite de solubilitate,
aceast proprietate stnd la baza unor metode de separare i purificare preliminar. Unele proteine
sunt uor solubile n ap, altele sunt solubile n ap i n diferii solveni organici, alte proteine se
solubilizeaz doar n soluii saline de diferite concentraii etc.
Datorit prezenei unei multitudini de grupe funcionale libere ionizabile n structura macromoleculelor proteice (COO, NH3+, S etc.), soluiile proteinelor prezint un caracter amfoter. Pe aceast proprietate se bazeaz i rolul de sistem tampon pe care proteinele solubilizate n

10
diferite lichide biologice l ndeplinesc alturi de sistemul tampon carbonat-bicarbonat, sistemul
tampon al aminoacizilor, al hemoglobinei i altele.
Ca i n cazul aminoacizilor, datorit prezenei grupelor funcionale ionizate n moleculele
proteinelor, acestea se caracterizeaz prin valori bine determinare ale punctului lor izoelectric (sau
pH izoelectric pI sau pHi) care se definete ca fiind acea valoare de pH la care ncrcarea electric
global a moleculei este nul. Acest parametru fizico-chimic prezint o importan practic deosebit, el stnd la baza metodelor electroforetice de separare i determinare a diferitelor fraciuni proteice din lichidele biologice. Valorile punctelor izoelectrice ale proteinelor oscileaz ntre limite foarte
largi i nu depind de masa lor molecular (tabelul IV).
n structura tuturor proteinelor solubile aflate n mediu apos pot ioniza grupele NH2 terminale i grupele COOH terminale. n afar de acestea, exist 7 aminoacizi ale cror resturi pot ioniza chiar i atunci cnd se situeaz n interiorul catenelor polipeptidice.
Proteinele native au capacitatea de a precipita din soluii sub aciunea unor factori chimici i
fizici. n funcie de gradul de afectare a structurilor de ordin superior, precipitarea proteinelor poate
fi de dou tipuri:
precipitarea ireversibil (denaturarea) are loc atunci cnd proteina rmne sub form
solid (precipitat) i dup ndeprtarea agentului precipitant. Printre agenii denaturani, cei mai
cunoscui sunt valorile termice ridicate, acizii minerali, bazele puternice (deci valorile extreme de
pH), acidul picric, acetatul de uranil, acidul tricloracetic etc.;
precipitarea reversibil se realizeaz atunci cnd proteina precipitat revine la forma solubil dup ndeprtarea agentului precipitant. Acest tip de precipitare este des utilizat n primele etape ale tuturor metodelor de separare i purificare a proteinelor din lichide biologice deoarece diferite proteine precipit la concentraii diferite ale agentului precipitant. Practic, dintr-un mediu natural,
este precipitat proteina ce urmeaz a fi purificat mpreun cu cantiti variabile ale altor ctorva
fraciuni proteice, se separ precipitatul prin centrifugare sau filtrare i se resolubilizeaz fraciunea
proteic obinut ndeprtnd agentul precipitant prin dializ sau prin alte metode. Dintre agenii ce
realizeaz precipitarea reversibil, practic se utilizeaz foarte frecvent sulfatul de amoniu, etanolul,
metanolul, acetona etc.
III.3.3. Structura proteinelor
Elucidarea structurii proteinelor a reprezentat i continu s reprezinte una din problemele
principale ale biochimiei aplicate. Fiecare protein nativ reprezint un edificiu tridimensional
complex a crui conformaie depinde de dispoziia spaial a catenelor polipeptidice din care este

11
format. Orientarea n spaiu a catenelor polipeptidice componente poart denumirea de conformaie.
Comparativ cu celelalte biomolecule, proteinele prezint o structur chimic mult mai complex de care depind n mod direct funciile lor biologice i care se caracterizeaz prin existena a
patru nivele de organizare numite structur primar, secundar, teriar i respectiv cuaternar.
1. Structura primar a proteinelor este dat de numrul, natura i succesiunea resturilor de
aminoacizi n catenele polipeptidice ce intr n structura acestora.
n structura primar, resturile de aminoacizi sunt unite prin legturi peptidice identice cu
cele ntlnite n structura peptidelor:
legtur peptidic
........NHCHCONHCHCO.......
I
I
R
R'

Studiul peptidelor sintetice cu ajutorul metodei difraciei de raze X prin cristale pure a permis determinarea distanelor interatomice ntr-o caten polipeptidic, precum i a unghiurilor dintre
atomii componeni. Aceste determinri au demonstrat existena unei perioade de identitate de 7,2
pentru fiecare dou resturi de aminoacizi. Totodat s-a observat c distana interatomic C N este
mai mic, iar distana C = O este mai mare dect cele normal ntlnite n ali compui (fig. 3).
H
R

110
121

1,53
117

1,23

120 1,32

122
120

1,47

120
110

R'

Fig.3. Reprezentarea schematic a distanelor interatomice i unghiurilor de valen n catenele polipeptidice

Aceste rezultate indic prezena unei stri de rezonan a legturii peptidice ntre dou forme
limit (ca la peptide).

12
Proteinele formate din mai multe catene polipeptidice se numesc proteine oligomere, iar polipeptidele componente se numesc protomeri). Protomerii se unesc ntr-o molecul oligomer prin
legturi covalente, dar nu de natur peptidic. Cel mai adesea, protomerii se leag prin puni
disulfidice intercatenare, adic realizate de resturi de cistein localizate n catene polipeptidice diferite.
Prima protein creia i s-a determinat structura primar (n 1955) a fost insulina care are o
mas molecular de 6.000 Da. Civa ani mai trziu s-a stabilit structura primar a ribonucleazei (M
= 13.000 Da), iar n prezent sunt cunoscute structurile primare ale multor proteine cu mase moleculare mult mai mari i care sunt formate din sute sau chiar mii de resturi de aminoacizi.
2. Structura secundar a proteinelor.
Modelul helicoidal. Studiul proteinelor fibrilare din clasa scleroproteinelor prin metoda difraciei razelor X a evideniat faptul c acestea se caracterizeaz prin prezena unor regulariti
structurale ale moleculei, prin uniti care se repet i care sunt dispuse de-a lungul unui ax imaginar al moleculei.
Aceste regulariti n structura moleculei au fost numite perioade de identitate i ele difer
de la o protein la alta.
n funcie de mrimea perioadelor lor de identitate, proteinele se mpart n 3 grupe:
grupa keratinei, miozinei i fibrinogenului cu perioada de identitate 5,1 5,4 ;
grupa keratinei i fibroinei cu perioada de identitate de 6,5 7,0 ;
grupa colagenului cuprinde proteine a cror perioad de identitate este cuprins ntre 2,8
2,9 .
Efectund experimente pe cristale peptidice, Pauling i Corey au stabilit cu rigurozitate condiiile formrii catenelor polipeptidice i au constituit modele experimentale care s ilustreze modul
n care catenele polipeptidice sunt orientate n spaiu n funcie de natura i numrul legturilor
peptidice, precum i de dimensiunile lor. Autorii au stabilit de asemenea, urmtoarele criterii care
stau la baza formrii catenelor polipeptidice:
aminoacizii constitueni trebuie s prezinte configuraie L i au n structura proteinelor
aceeai valoare, deoarece catenele lor laterale nu influeneaz structura secundar;
distanele interatomice i unghiurile de valen trebuie s prezinte aceleai valori, indiferent de mrimea catenei polipeptidice;

13
atomii participani la legtura peptidic trebuie s fie coplanari, aceast aezare fiind favorizat energetic;
modelul experimental elaborat pe baza datelor de laborator trebuie s permit formarea
unui numr maxim posibil de legturi de hidrogen.
Pe baza acestor postulate, Pauling i Corey gsesc c cel mai simplu aranjament corespunztor acestor cerine este modelul helicoidal sau spiralat, denumit -helix. Acesta rezult prin spiralizarea catenei polipeptidice n jurul unui cilindru imaginar (fig.6.).
n funcie de direcia de spiralizare, -helixul poate s apar teoretic sub dou forme:
-helixul de dreapta are sensul unui urub cu pasul spre dreapta;
-helixul de stnga are sensul unui urub cu pasul spre stnga.

Fig.6. Reprezentarea schematic a modelului -helicoidal al structurii secundare a

proteinelor (Lentner,C. 1986).

Catenele laterale ale resturilor de aminoacizi ies n afara corpului propriu-zis al -helixului
i pot interaciona ntre ele sau cu solventul n care este dizolvat proteina.
Dintre toi aminoacizii proteinogeni, prolina, hidroxiprolina i chiar glicocolul nu se ncadreaz perfect n -helix, determinnd o deranjare a structurii regulate a -helixului.
Aceast structur helicoidal a macromoleculelor proteice a fost postulat cu 16 ani naintea
lui Pauling i Corey de ctre biochimistul romn Haralamb Vasiliu.

14
Aceast aezare spaial, care confer moleculei o arhitectur structural special, este meninut datorit formrii unui mare numr de puni de hidrogen intracatenare la care particip oxigenul carbonilic din vecintatea unei legturi peptidice i hidrogenul iminic din vecintatea alteia,
situat la o distan de 4 resturi de aminoacizi. Aceste puni de hidrogen sunt aproape paralele cu
axul moleculei, iar ntr-o spir intr 3,6 resturi de aminoacizi.
Cele mai multe proteine prezint o organizare structural parial helicoidal, n sensul c
regiuni cu structur de -helix pot alterna cu regiuni ce prezint alt tip de structur secundar. Procentul de -helix n structura proteinelor oscileaz ntre 0 10% n cazein, actin i -globulin,
ntre 10 20% n ribonucleaz, ntre 20 30% la pepsin i histone, ntre 30 45% la ovalbumin,
muramidaz i fibrinogen, ntre 60 80% la mioglobin i hemoglobin i respectiv ntre 80
100% n tropomiozin.
Modelul straturilor pliate. Datorit structurii lor chimice, prolina i hidroxiprolina nu se
nscriu n structura -helicoidal. Aceti doi aminoacizi heterociclici, dar i glicocolul, tind s confere catenelor polipeptidice un alt tip de structur secundar, denumit -conformaie, care corespunde modelului straturilor pliate.
Conform acestui model, dou sau mai multe catene polipeptidice, sau fragmente ale aceleiai catene se orienteaz spaial sub form pliat n zig-zag (fig. 7).
Modelul straturilor pliate se poate prezenta n dou variante:
modelul straturilor pliate paralele (caracteristic de exemplu pentru -keratin) se ntlnete atunci cnd la o extremitate a moleculei sunt orientate capetele C-terminale, iar la cealalt capetele N-terminale ale catenelor polipeptidice;

C = O .......... H N
R C H

H C R

N H .......... O = C

Fig. 7. Reprezentarea schematic a modelului straturilor -pliate ale structurii secundare a

proteinelor

15
modelul straturilor pliate antiparalele (ntlnit de exemplu la fibroin) se caracterizeaz
prin faptul c la ambele extremiti ale moleculei capetele C-terminale ale catenelor polipeptidice
alterneaz cu cele N-terminale. n mod automat, atunci cnd structura -pliat este format de diferite fragmente ale aceleiai catene polipeptidice, aceasta va fi de tip antiparalel.
Structura -pliat este stabilizat de puni de hidrogen care se formeaz n mod similar ca n
cazul structurii helicoidale, dar care sunt intercatenare i perpendiculare pe axul moleculei. Dac la
-helix radicalii laterali ai resturilor de aminoacizi sunt orientai spre exterior, n structura -pliat
ei se orienteaz de o parte i de alta a planului legturii peptidice, perpendicular pe acesta.
De regul, punctele de trecere de la fragmentele helicoidale la cele pliate i invers sunt reprezentate de resturile de prolin i hidroxiprolin i uneori de cele de glicin.
3. Structura teriar a proteinelor. Majoritatea proteinelor native au o structur spaial
compact determinat de dimensiunile i polaritatea resturilor de aminoacizi precum i de succesiunea acestora n catenele polipeptidice componente. Acest nivel de organizare structural reprezint
deci rezultatul interaciunilor dintre resturile aminoacizilor din catenele polipeptidice. Structura
teriar este definit ca fiind forma structural ce rezult prin superspiralizarea a dou sau mai multe
catene polipeptidice ce conin fragmente -helicoidale i -pliate ntr-o arhitectur spaial complex sub form de ghem sau globul.
Formarea unei structuri globulare native, caracteristic pentru o protein dat este un proces
complex ce are la baz formarea unei multitudini de legturi slabe, necovalente. Principalele proteine ale cror structuri teriare au fost bine studiate sunt hemoglobina, mioglobina, muramidaza, ribonucleaza, papaina, chimotripsinogenul, carboxipeptidaza A, subtilizina i altele. Meninerea i stabilizarea structurii teriare se realizeaz prin forele de atracie ce apar ntre radicalii aminoacizilor
componeni care se pot orienta n aa fel nct s ajung n poziii favorabile formrii diferitelor
tipuri de legturi: legturile de hidrogen, legturile ionice, legturile van der Waals.

Datorit

apariiei interaciunilor enumerate mai sus este asigurat pe de o parte nu numai stabilitatea structurii tridimensionale ci i conformaia optim din punct de vedere termodinamic. Pe de alt parte,
diversitatea tipurilor de legturi ntlnite n structura teriar a proteinelor, precum i valorile energiilor de legtur, explic marea labilitate a proteinelor sub aciunea diverilor factori fizico-chimici
cum ar fi pH-ul mediului, temperatura, presiunea osmotic, prezena sau absena unor substane
chimice etc.
Dezorganizarea structurii teriare, care este foarte complex i variat, determin pierderea proprietilor biologice ale proteinelor!

16
4. Structura cuaternar a proteinelor. Aceasta reprezint nivelul de organizare cel mai nalt
al proteinelor i este rezultatul interaciunilor dintre catenele polipeptidice independente, fiecare cu
structura sa primar, secundar i teriar caracteristic.
Acest tip de structur nu se ntlnete la toate proteinele. El este caracteristic, n principal,
proteinelor globulare a cror mas molecular este mai mare de 50.000 Da i sunt proteine
oligomere, adic au molecula format din mai muli protomeri. Subunitile proteinelor oligomere
pot fi foarte diferite n funcie de complexitatea structurilor primar, secundar i teriar. Unele
proteine oligomere formeaz structuri cuaternare prin asocierea subunitilor globulare (cum se ntmpl n cazul hemoglobinei) sau a unor subuniti spiralate, filiforme (ca de exemplu la proteina
virusului mozaicului tutunului VMT).
Un exemplu concret de protein oligomer cu structur cuaternar este insulina, n formarea
creia, un rol extrem de important l joac diferii parametri fizico-chimici. Structura primar a insulinei este cunoscut, cea secundar este de tip -helix, iar structura teriar nu este nc pe deplin
elucidat. Structura cuaternar rezult prin polimerizare i depinde de pH, temperatur, concentraia
insulinei n mediu i de prezena ionilor de Zn2+. n condiii obinuite, insulina este un tetramer cu
masa molecular de 24.000 Da. Insulina cristalizat poate exista sub form de dimer dau hexamer,
ns uneori este prezent exclusiv sub form de monomer.
III.3.6. Proteine simple
Holoproteinele (proteinele simple) conin n molecula lor una sau mai multe catene
polipeptidice. Din punct de vedere cantitativ acestea sunt mai puin numeroase ns funciile lor
biologice sunt extrem de importante.
Histonele i protaminele sunt holoproteine cu caracter puternic bazic i au masele moleculare cuprinse ntre 4.000 i 12.000 Da. Caracterul lor bazic este datorat unui coninut ridicat de lizin, arginin i histidin. Att histonele ct i protaminele sunt localizate preponderent n nucleele
celulelor.
Histonele cele mai bine studiate aparin fraciunilor H1, H2A, H2B, H3 i H4 care se deosebesc ntre ele prin ponderea aminoacizilor bazici (ntre 21 i 30%), mobilitate electroforetic i localizare intracelular.
Protaminele au un coninut mai mare de aminoacizi bazici (pn la 80%). n prezent sunt
bine cunoscute unele protamine obinute din diferite surse biologice: salmina din somon,
scrumbina din scrumbia de mare, clupeina din scrumbia de Dunre etc.
Principala funcie biologic a histonelor i protaminelor const n formarea structurii complexului nucleoproteic cunoscut sub numele de cromatin.

17
Albuminele i globulinele sunt uor solubile n ap i soluii saline. Din soluie sau din
omogenatele tisulare, albuminele precipit reversibil la o concentraie a sulfatului de amoniu de 80
100% din concentraia de saturaie.
Albuminele prezint un coninut crescut de leucin (~ 15%) precum i de lizin, acid aspartic
i acid glutamic, iar glicocolul se gsete n cantiti nensemnate. Albuminele sunt larg rspndite
n snge, limf i n citoplasma tuturor celulelor vii.
Globulinele sunt proteine globulare slab solubile n soluii saline, precipitnd complet la o
concentraie a sulfatului de amoniu ce reprezint 50% din concentraia de saturaie. Spre deosebire
de albumine, globulinele sunt ceva mai bogate n glicocol (~3%). Principalele funcii biologice ale
globulinelor includ funciile de aprare (n special -globulinele care reprezint anticorpii de o nalt
specificitate) i cele legate de procesul de coagulare a sngelui.
Glutelinele i prolaminele sunt holoproteine de origine vegetal. Din grupa glutelinelor
sunt bine studiate glutenina din boabele de gru, glutelina din boabele de porumb, orizenina din
orez i altele. Sunt proteine insolubile n ap dar se dizolv uor n soluii diluate de acizi i baze.
Prolaminele au un coninut crescut n prolin. Din grupa prolaminelor sunt bine studiate
zeina din boabele de porumb, gordeina din ovz, gliadina din secar i gru etc. Spre deosebire de
gluteline, prolaminele sunt uor solubile n etanol 70 80%, proprietate ce st la baza metodelor de
separare i purificare a acestor fraciuni proteice din diverse surse de natur vegetal.
Proteinoidele sunt holoproteine fibrilare ntlnite preponderent n oase, cartilaje, pr, tendoane etc. Ele sunt absolut insolubile n ap, soluii saline i soluii diluate de acizi i baze. Cei mai
importani reprezentani ai acestei grupe de holoproteine sunt colagenul (ntlnit n esutul conjunctiv) i oseina (suportul organic din esutul osos). Din aceeai grup mai fac parte keratinele ce intr
n structura prului, penelor, copitelor etc. Caracteristic pentru keratine este coninutul crescut n
cistein.
III.3.7. Proteinele complexe
Proteinele complexe se mai numesc i heteroproteine sau proteine conjugate sau proteide.
Ele conin n molecul pe lng componenta proteic (reprezentat de una sau mai multe catene
polipeptidice) i o component de alt natur numit grupare prostetic. n funcie de natura chimic a gruprilor lor prostetice, heteroproteinele se clasific n mai multe grupe: cromoproteine,
lipoproteine, fosfoproteine, glicoproteine, metaloproteine, flavoproteine i nucleoproteine.
a) Cromoproteinele sunt heteroproteine ce conin n molecula lor o grupare prostetic colorat. Grupele prostetice ale multor cromoproteine conin ioni metalici. Astfel, hemoglobina, mioglobina, catalaza, peroxidaza i citocromii conin fier, hemocianina conine cupru, iar clorofilele

18
conin magneziu. n funcie de natura chimic a gruprii prostetice, cromoproteinele se pot clasifica
n dou categorii:
cromoproteine porfirinice care conin n molecul o grupare prostetic cu structur
tetrapirolic de natur porfirinic;
cromoproteine neporfirinice.
Cromoproteinele

porfirinice.

Din

aceast

categorie

fac

parte

hemoproteinele

(hemoglobinele, mioglobina, leghemo-globina i citocromii), unele enzime (catalaza, peroxidaza),

cruorinele i cloroplastinele.
Hemoglobinele sunt cromoproteine alctuite dintr-o component proteic cu caracter bazic
numit globin i o grupare prostetic numit hem (fig. 12). Hemoglobinele au masele moleculare
cuprinse ntre 60.000 i 70.000 Da n funcie de sursa biologic, iar specificitatea de specie este
determinat de globin deoarece hemul are aceiai structur la toate hemoglobinele.
Fiecare molecul de hemoglobin conine 4 nuclee protoporfirinice n centrul crora se gsete un atom de fier bivalent, hexacoordinat i 4 catene polipeptidice care formeaz globina. Dup
structura lor chimic, catenele polipeptidice pot fi de tip , , , sau n funcie de modul n care
sunt asamblate n structura hemoglobinei, dnd natere la diferite tipuri de hemoglobine.
Elucidarea structurii chimice a hemoglobinei s-a realizat, pe de o parte prin stabilirea structurii hemului i respectiv a globinei, iar pe de alt parte a modului n care cele dou componente se
leag ntre ele.
Cazeina din lapte este o fosfoprotein foarte bine studiat datorit importanei sale alimentare. Pentru aceast protein s-a determinat masa molecular care este cuprins ntre 75.000
100.000 Da, n funcie de surs. Cazeina nativ poate fi separat electroforetic cu obinerea a trei
fraciuni ce au fost notate cu , i i care reprezint 75%, 20% i respectiv 5% din cazeina total. Componenta fosforic poate exista n molecula cazeinei sun form de monoesteri, diesteri i
pirofosfat, iar fosforilarea are loc la nivelul unui situs ce cuprinde urmtoarea succesiune:
...... Glu Ser Ser Ser Asp
I
I
I
P
P
P

......

Conform cercetrilor efectuate de ctre Linderstrom, L. et al., n imediata vecintate a resturilor de serin fosforilate se afl, de regul, un rest de acid glutamic i respectiv unul de acid aspartic.
Albumina din albuul de ou este o fosfoprotein de rezerv ce reprezint aproximativ 70%
din proteinele totale din ou. Pe cale electroforetic, ovalbumina poate fi separat n dou fraciuni

19
neomogene n raport de 8:2 care au fost notate A1 i A2. Ovalbumina A1 conine dou resturi
ortofosfat per molecul, spre deosebire de fraciunea A2 care conine doar unul.
Ovalbumina poate fi inclus i n grupa glicoproteinelor deoarece, pe lng radicalii
ortofosfat, conine i o component glucidic alctuit din resturi de D-manoz i 2-amino-2deoxiglucoz. Din masa sa molecular de 45.000 Da, componenta glucidic reprezint 3,2 3,3%,
aceasta din urm legndu-se de componenta proteic printr-un rest de N-acetil-glucoz, la nivelul
unui rest de asparagin, printr-o legtur N-glicozidic.
Glicoproteinele reprezint o clas mare de proteine complexe. Din punct de vedere structural, glicoproteinele naturale se mpart n dou grupe principale: glicoproteine propriu-zise (sau neutre) i mucoproteine (sau glicoproteine acide). n structura glicoproteinelor propriu-zise intr oze i
aminoglucide n calitate de grupare prostetic, iar mucoproteinele conin preponderent resturi de
acizi uronici, sulfai i aminoglucide legate slab de componentele proteice. Caracterul acid al
mucoproteinelor este dat de coninutul crescut n acizi uronici i sulfai. La rndul lor,
mucoproteinele se mpart n condroitin-mucoproteine (care conin n calitate de grupare prostetic
acidul condroitin-sulfuric i care predomin n cartilaje) i respectiv hialo-mucoproteine (ce conin acid hialuronic n calitate de grupare prostetic i intr n cantiti mari n esutul conjunctiv).
Glicoproteinele se formeaz prin asocierea unei holoproteine cu o grupare prostetic de natur glucidic, asocierea realizndu-se, cel mai adesea, la nivelul unui rest de asparagin din structura catenelor polipeptidice ale componentelor proteice. Ele mai pot fi considerate ca fiind produi de
condensare a glucidelor cu holoproteinele i peptidele.
Studiul glicoproteinelor, att din punct de vedere structural ct i funcional, prezint un
interes deosebit pentru biochimie (i n general pentru biologice), medicin i alte domenii datorit
funciilor lor biologice i comportamentului patologic al acestor biomolecule. Glicoproteinele sunt
larg rspndite n lumea vie, fiind prezente att n esuturile animale i vegetale, ct i n microorganisme unde ndeplinesc funcii extrem de diverse.
Metaloproteinele sunt heteroproteine ce conin n calitate de grupri prostetice diferii ioni
metalici legai direct de catenele polipeptidice (spre deosebire de cromoproteine unde ionul metalic
este nglobat ntr-un compus heterociclic care la rndul lui se leag de componenta proteic) conferind acestora proprieti specifice. Cel mai adesea se ntlnesc ionii de fier, cupru, zinc, mangan,
cobalt etc. Majoritatea metaloproteinelor sunt enzime dar exist i metaloproteine ce ndeplinesc i
alte funcii biologice.
Feritina este o metaloprotein ce conine aproximativ 23% fier. Acesta nu este fier heminic,
ci se leag direct de componenta proteic, fapt demonstrat i prin aceea c poate fi uor ndeprtat
prin dializ n prezena unor ageni reductori de tipul ditionitului, glutationului, acidului ascorbic

20
sau a substanelor complexante cum ar fi o-fenantrolina, ,-dipiridilul etc. Fierul este prezent sub
forma unui miceliu asociat cu o protein numit apoferitin.
n organismul mamiferelor, feritina este larg rspndit n splin, ficat, mucoasa intestinal,
mduva osoas i placent. Principala funcie a feritinei este cea de depozitar al fierului, apoferitina
fiind capabil s lege att fierul anorganic de provenien alimentar ct i fierul eliberat de
transferinele din ficat, splin, mduva osoas etc. Factorii ce influeneaz fixarea fierului n feritin
sunt agenii oxidani, agenii reductori, acidul uric, acidul ascorbic .a.
Hemosiderina este o protein ce conine fier ntr-un procent mult mai mare dect feritina
(36 38%). Ea se ntlnete n celulele sistemului reticulo-endotelial, ntr-o serie de organite citoplasmatice denumite siderocromi. Rolul biologic al hemosiderinei const n medierea transferului
fierului ntre nivelul sanguin i feritin. n cazul unor hemoragii sau al altor situaii cnd exist o
necesitate stringent de a acumula fier, acesta poate ns trece direct din hemosiderin n snge. n
situaii contrare cum ar fi o alimentaie bogat n fier sau n procesele intense de hemoliz, fierul
poate trece direct din snge n hemosiderin.
Conalbumina este o alt metaloprotein ce a fost descoperit n albuul de ou. Ea are o mas molecular de 87.000 Da i un punct izoelectric la pH = 6,1. O molecul de conalbumin conine
doi atomi de fier sub forma ionilor Fe3+ care confer proteinei o rezisten mai mare fa de aciunea
alcaliilor.
Denaturarea proteinei sau chiar modificrile mici structurale induse printr-o serie de tratamente blnde, determin pierderea capacitii de legare a fierului. Conalbumina poate lega ntr-o
form uor disociabil i ioni de cupru sau zinc.
Ceruloplasmina este o metaloprotein cu masa molecular 150.000 Da ce conine opt ioni
de Cu+ i opt ioni de Cu2+. Ceruloplasmina reprezint principala cupru-protein din snge, cuprul
din ceruloplasmin reprezentnd aproximativ 3% din cantitatea total de cupru din organism. Una
din principalele funcii biochimice ale ceruloplasminei const n participarea sa la reglarea metabolismului cuprului n organism. De aceea, n boala Wilson (boal cauzat de intoxicaiile cu cupru),
coninutul sanguin al ceruloplasminei scade considerabil. Ceruloplasmina mai prezint i unele proprieti enzimatice asemntoare cu cele ale laccazei, putnd oxida ionii de fier feros (Fe2+Fe3+).
Aceast funcie este extrem de important, dat fiind faptul c doar fierul trivalent poate nglobat n
transferin. Din aceast cauz, ceruloplasmina mai este cunoscut i sub numele de feroxidaz.
Nucleoproteinele sunt heteroproteine ce conin n molecula lor o component proteic cu
caracter bazic, cu mas molecular relativ mic i o grupare prostetic reprezentat de un acid nucleic, ce poate fi acidul ribonucleic (ARN) sau acidul deoxiribonucleic (ADN).

21
n cele mai multe cazuri, componenta proteic face parte din clasa protaminelor i
histonelor, iar caracterul bazic este datorat faptului c n succesiunea polipeptidic exist o pondere
nsemnat a acizilor diamino-monocarboxilici (arginin i lizin). n unele cazuri, locul componentei proteice este luat de o serie de substane cu caracter bazic relativ simple cum ar fi spermina,
spermidina i bis-aminopropilamina. Acizii nucleici pot forma ns compleci nucleoproteici i cu
alte proteine, cu mas molecular mare i fr caracter bazic, de tipul albuminelor i globulinelor.
Tipul de legtur dintre acizii nucleici i componenta proteic nu este pe deplin elucidat,
presupunndu-se c acest complex spaial complex este meninut datorit legturilor dintre ioni,
dipoli, precum i prin electrovalen.
Nucleoproteinele sunt biomolecule de o importan capital pentru celulele vii, fiind localizate n special n infrastructurile celulare care particip nemijlocit la diviziunea celular i la procesul complex al biosintezei proteinelor. Cunoaterea structurii nucleoproteinelor a devenit posibil
prin utilizarea unor metode de cercetare deosebit de fine i exacte ca de exemplu spectrele de difracie a razelor X, spectrometria n UV i IR, diferite variante ale cromatografiei i electroforezei etc.
n funcie de natura gruprii prostetice, nucleoproteinele pot fi de dou tipuri: ribonucleoproteine (ce conin n calitate de grupare prostetic un acid ribonucleic) i respectiv
deoxiribonucleoproteine (ce au drept grupare prostetic acidul deoxiribonucleic). Componentele
proteice ale nucleoproteinelor prezint toate proprietile specifice holoproteinelor la care trebuie
menionat caracterul relativ puternic bazic datorat ponderii nsemnate a lizinei i argininei n structura catenelor polipeptidice.
IV. ACIZII NUCLEICI
Acizii nucleici sunt substane macromoleculare greu solubile n ap rece, puin solubile n
ap la cald i uor solubile n soluii alcaline diluate. Sunt insolubile n etanol i n numeroi ali
solveni organici care, adugai peste soluiile de acizi nucleici, determin denaturarea lor.
Degradarea hidrolitic succesiv a nucleoproteinelor n mediu acid sau alcalin, sau n prezena unor enzime proteolitice specifice numite nucleaze realizeaz clivarea celor dou componente: acidul nucleic (ARN sau ADN) i componenta proteic. Hidroliza n continuare a acizilor nucleici conduce la formarea nucleotidelor care reprezint unitile lor structurale e baz. La rndul lor,
nucleotidele pot fi hidrolizate n continuare sub aciunea unor fosfoesteraze cu formare de
nucleozide i fosfor anorganic. Degradarea nucleozidelor conduce la obinerea unui amestec de
baze azotate i pentoze.
Din cele afirmate mai sus rezult c prin condensarea unei baze azotate cu o pentoz se formeaz un nucleozid. Nucleozidele se pot fosforila la nivelul grupelor hidroxilice libere ale restului

22
de pentoz cu formare de nucleotide, iar polimerizarea (sau mai exact ncatenarea) nucleotidelor
conduce la formarea acizilor nucleici. Deci, din punct de vedere structural, acizii nucleici sunt
polinucleotide care, n funcie de natura pentozei se clasific n poliribonucleotide (n ARN) i respectiv polideoxiribonucleotide (n ADN).
IV.1. Bazele azotate purinice i pirimidinice
Bazele azotate din structura nucleozidelor i nucleotidelor sunt compui heterociclici ce deriv de la dou cicluri de baz numite pirimidin i purin prin substituirea unor atomi de hidrogen:
4

5N

1N

N
1

Pirimidin

7
N

8
N9
H

N 4
3

Purin

Principalele baze azotate purinice sunt adenina i guanina, iar cele pirimidinice sunt
citozina, timina i uracilul:
O

NH 2
N

N
N

N
H

H 2N

Adenin

O
HN

N
H

Citozin

N
H

Guanin

NH2
N

HN

O
CH 3

HN
N
H

Uracil

N
H

Timin

Compoziia n baze azotate a acizilor nucleici este urmtoarea: moleculele de ADN conin
adenin, guanin, citozin i timin, iar cele de ARN au n compoziia lor adenin, guanin, citozin
i uracil. Deci, din punctul de vedere al compoziiei n baze azotate, cele dou tipuri de acizi nucleici difer doar printr-o baz azotat pirimidinic (timin n ADN i respectiv uracil n ARN).
Aceste baze azotate, ca i altele care nu intr n structura acizilor nucleici, pot exista n dou
forme structurale: o form enolic (sau form lactim) i o form cetonic (sau form lactam).
n afara acestor baze azotate care intr constant n structura acizilor nucleici, mai exist i
alte baze purinice i pirimidinice naturale. Astfel, unii derivai naturali ai purinelor se gsesc n stare liber n cteva plante tropicale i au o puternic aciune farmacologic. De exemplu, boabele de
cacao conin teobromin, frunzele de ceai conin teofilin, iar boabele de cafea conin cafein.

23
Toate aceste substane sunt diuretice, iar cafeina este un excitant al sistemului nervos central
i un puternic stimulator al muchiului cardiac. Datorit importanei lor practice pentru medicin,
muli derivai ai bazelor azotate purinice i pirimidinice cu aciune farmacologic se obin i prin
sintez chimic.
n organismele vii se mai ntlnesc i alte baze azotate care sunt produi intermediari de degradare a celor ce intr n structura acizilor nucleici sau ai degradrii altor biomolecule. Astfel, prin
dezaminarea guaninei se formeaz xantina.
Dezaminarea adeninei sub aciunea xantin-oxidazei conduce la formarea hipoxantinei. La
rndul ei, hipoxantina constituie precursorul xantinei n care trece prin oxidare enzimatic sub aciunea aceleiai xantin-oxidaze. Prin oxidarea n continuare a xantinei se formeaz acidul uric care
este principalul produs de excreie a azotului acizilor nucleici la reptile i psri.
O alt baz azotat natural este acidul orotic care este precursorul acidului orotidilic din
calea de biosintez a bazelor azotate pirimidinice. Ali derivai ai bazelor pirimidinice sunt acidul
barbituric care are o aciune sedativ i hipnotic, tiouracilul care prezint proprieti antitiroidiene
i este folosit ca medicament n hipertiroidism i tireotoxicoz i alii. n organismele vii se ntlnesc uneori i unele baze azotate neobinuite, numite baze minore. Astfel, n ARNt din plante i
animalele superioare se gsesc 5-metilcitozina, dihidrouracilul etc., iar la unii fagi se ntlnete 5hidroximetil-citozina.
Bazele azotate purinice i pirimidinice prezint o serie de proprieti fizico-chimice comune.
Astfel, cu excepia uracilului, toate bazele azotate sunt greu solubile n ap. Pentru toate bazele azotate este caracteristic existena formelor tautomere. Tautomeria acestora conduce la modificarea
structurii electronice i, implicit, la modificarea proprietilor fizico-chimice.
Molecula adeninei neutre prezint dou forme tautomere (amino imino i prototrop), iar
guanina are cea mai mare capacitate de a forma tautomeri datorit prezenei grupei carbonil n poziia 6 care d i tautomerie ceto-enolic. n soluii apoase neutre, citozina poate da att tautomerie
amino imino ct i tautomerie ceto-enolic, iar pentru uracil i timin sunt mai stabile formele
dicetonice.
Datorit faptului c bazele azotate purinice i pirimidinice conin n molecul un heterociclu
cu caracter aromatic ele sunt capabile s absoarb radiaiile electromagnetice din domeniul ultraviolet. Fiecare baz azotat din structura acizilor nucleici prezint un spectru specific de absorbie la
lungimi de und cuprinse ntre 200 300 nm, cu un maximum de absorbie la 260 280 nm.
IV.2. Pentozele din structura acizilor nucleici

24
n structura acizilor ribonucleici intr riboza sub forma sa furanozic, anomer . Moleculele
de ADN conin un derivat al acesteia (2-deoxiriboza) sub forma anomerului al ciclului furanozic:
O

CH 2 OH

-D-ribofuranoza

CH 2 OH

-D-2-deoxi-ribofuranoza

Resturile de pentoz se leag de bazele azotate prin legturi Nglicozidice la nivelul atomului N1 al bazelor pirimidinice, respectiv N9 al bazelor azotate purinice.
IV.3. Nucleozide
Nucleozidele sunt Nglicozide ale bazelor azotate purinice i pirimidinice n care gliconul
este reprezentat de riboz, respectiv 2-deoxiriboz. Restul de pentoz, sub form -D-furanozic,
este legat de baza azotat printr-o legtur -glicozidic astfel: hidroxilul glicozidic (deci cel legat
de atomul de carbon C1) se condenseaz cu hidrogenul iminic al atomului de azot din poziia 9 a
bazelor purinice, respectiv din poziia 1 a celor pirimidinice.
O

NH 2
N

HN
5'

CH 2OH
4'

1'
2'

H 2N

Guanozin

NH 2

HN
N

CH 2OH

CH 2OH

NH2
N
N

Uridin

Citidin

CH 2OH

3'

Adenozin

HN

CH2OH

Deoxiadenozin

H2N

CH2OH

Deoxiguanozin

25

NH2

CH3

HN

N
N

CH2OH

CH2OH

Deoxitimidin

Deoxicitidin

Pentru evitarea oricror confuzii legate de numerotarea atomilor n nucleozide, aceasta se

face astfel: 1, 2, 3,.. pentru atomii ce alctuiesc baza azotat i respectiv 1, 2, 3,.. pentru
atomii restului de pentoz. Denumirea nucleozidelor ce intr n structura acizilor nucleici se face n
funcie de numele bazelor azotate (tab. VI).
Tabelul VI
Nucleozidele din structura acizilor nucleici
Baza azotat

Ribonucleozide

Deoxiribonucleozide

Adenina

Adenozina

Deoxiadenozina

Guanina

Guanozina

Deoxiguanozina

Citozina

Citidina

Deoxicitidina

Timina

Deoxitimidina

Uracilul

Uridina

n organismele vii exist i alte nucleozide ce ndeplinesc diferite funcii biochimice. Un

exemplu concret n acest sens l reprezint nucleozidele ce intr n structura coenzimelor piridinnucleotidice (NAD+ i NADP+), a celor flavinice (FMN, FAD) i a coenzimei A.
n esuturile vegetale i animale, precum i la microorganisme, se ntlnesc i alte nucleozide
ce nu intr n structura acizilor nucleici; acestea sunt intermediari n biosinteza i catabolismul acizilor nucleici. Unele dintre ele, cum ar fi inozina i xantozina, se ntlnesc i n stare liber n celule.
Se cunosc de asemenea numeroase nucleozide de sintez sau naturale care au o puternic
aciune bactericid i respectiv antitumoral. Dintre acestea, cele mai importante sunt nebularina,
nucleocidina, psicofuranina, puromicina, angustimicina i cordicepina.

26

IV.4. Nucleotide
Nucleotidele sunt esteri ai nucleozidelor cu acidul fosforic. Ele conin n molecula lor restul
unei baze azotate purinice sau pirimidinice, un rest de riboz sau deoxiriboz i unul pn la trei
resturi de acid fosforic. n funcie de restul de pentoz pe care l conin, nucleotidele sunt de dou
tipuri: ribonucleotide i deoxiribonucleotide. n funcie de numrul resturilor de acid fosforic din
molecul ele pot fi mono-, di i trifosforilate (nucleozid-monofosfai, nucleozid-difosfai i respectiv nucleozid-trifosfai). Teoretic, esterificarea nucleozidelor se poate face n poziiile 2, 3 i
5 n cazul ribonucleozidelor i respectiv 3 i 5 la deoxiribonucleozide. n structura acizilor nucleici sunt esterificate doar grupele alcoolice din poziiile 3 i 5 att la ribonucleotide ct i la
deoxiribonucleotide.
Nucleotidele celorlalte baze azotate se formeaz n mod similar. Adenina mai st la baza
structurii a numeroi derivai nucleotidici ce joac un rol important n procesele de activare a acizilor grai i a aminoacizilor. Dintre acetia, cei mai importani sunt aminoacil-adenozinmonofosfaii, acil-adenozin-monofosfaii, acidul adenozin-5-fosfo-sulfuric i acidul adenozin-3fosfat-5- fosfo-sulfuric.
Adenina st de asemenea la baza structurii familiei de compui cunoscui sub denumirea de
acizi adenilici care sunt substane macroergice larg rspndite n toate celulele vii (acidul adenozindifosforic ADP i acidul adenozin-trifosforic ATP).
NH 2
N

N
N

O
O
O
II
II
II
CH 2 O PO ~ P O ~ P OH
I
I
I
OH
OH
OH

AMP
ADP
ATP

Rolul acestora este de a acumula i de a ceda energia, n funcie de necesitile de moment

ale celulei. Resturile de acid fosforic din moleculele de ADP i ATP sunt unite ntre ele prin legturi speciale, numite legturi macroergice. La acest nivel, energia de legtur este de 3 4 ori mai
mare dect n cazul celorlalte legturi fosfoesterice.

27
Toate bazele azotate purinice i pirimidinice pot forma nucleotide trifosforilate, structura lor
asemnndu-se cu cea a ATP-ului cu deosebirea c difer baza azotat, dar dintre derivaii
trifosforilai ai nucleozidelor, n afar de ATP, numai GTP i ITP intervin n unele procese energetice celulare.
n afar de rolul lor energetic, nucleozidtrifosfaii sunt utilizai n celul i pentru biosinteza
acizilor nucleici. Un rol deosebit n procesele metabolismului intermediar l ndeplinesc ns i
nucleoziddifosfaii ADP, GDP, UDP i CDP. n toate organismele vii, n afara nucleotidelor ce intr
n mod frecvent n structura acizilor nucleici se mai ntlnesc i alte nucleotide ce ndeplinesc diferite funcii biochimice: cofactori enzimatici, precursori sau intermediari n diferite ci de biosintez,
donori de grupri fosfat sau sulfat, activatori ai monozaharidelor n vederea biosintezei
poliglucidelor etc.
IV.5. Acizii ribonucleici
Acizii ribonucleici (ARN) sunt compui biochimici informaionali prezeni n absolut toate
organismele vii. Ei sunt substane macromoleculare alctuite din uniti structurale de baz numite
ribonucleotide, deci sunt substane poliribonucleotidice. Raporturile molare dintre bazele azotate
purinice i pirimidinice din ARN variaz ntre limite foarte largi, ns suma A+C este egal ntotdeauna cu suma G+U. n celulele vii exist mai multe tipuri de ARN.
ARN ribozomal (ARNr) intr n structura ribozomilor i reprezint aproximativ 80% din totalul ARN-ului celular. Acest tip de ARN se caracterizeaz printr-o mare stabilitate metabolic i
are masa molecular cuprins ntre 500.000 2.000.000 Da.
ARN de transport (ARNt) reprezint aproximativ 15% din totalul ARN-ului celular, are masa molecular cuprins ntre 25.000 28.000 Da i are rolul de a activa i de a transporta n mod
specific aminoacizii din citosol la nivelul ribozomilor n vederea biosintezei proteice.
ARN mesager (ARNm) sau informaional (ARNi) reprezint numai 5% din totalul ARN-ului
celular. Are o durat de via relativ scurt, este deosebit de activ i prezint o mas molecular de
aproximativ 500.000 Da. Rolul biologic al ARNm este acela de a copia informaia genetic codificat n ADN-ul din cromozomi.
n afar de aceste trei tipuri principale de ARN, mai exist i alte forme speciale, cu funcii
biochimice specifice.
ARN-ul virusurilor reprezint ntre 5 40% din nucleoproteinele ce intr n structura virusurilor. De exemplu, ARN-ul din virusul mozaicului tutunului (VMT) este o macromolecul cu masa molecular de 2.000.000 Da i reprezint aproximativ 5% din masa virusului. Se prezint sub
forma unei singure catene spiralate, nconjurat de o protein oligomer de tip histonic, format din

28
2.100 subuniti dispuse, de asemenea, sub form spiralat. ARN-ul din virusul mozaicului tutunului este infecios i n stare pur, iar capacitatea sa de a infecta tutunul este anulat dup prelucrarea
preparatului pur cu ribonucleaz. Virusurile gripei, ciumei i mieloblastozei aviare au o form sferic i conin ntre 1 3% ARN viral. Bacteriofagii pot conine, de asemenea, n celula lor numai
ARN, fr a exista i ADN. Ponderea ARN-ului poate ajunge pn la 31% din masa fagului.
Structura primar a ARN-ului. Analiza structurii produilor de hidroliz n mediu alcalin ai
moleculelor de ARN a artat c legtura dintre monomerii ribonucleotidici se realizeaz prin intermediul gruprilor fosfodiesterice care unesc C3 i C5 din dou nucleotide vecine. Molecula de
ARN se prezint astfel sub forma unei catene liniare, n care bazele azotate purinice i pirimidinice
sunt localizate n calitate de radicali laterali (fig. 26).
..
.

O
HO P = O
O

NH
I

CH

N
N

5'

HO P = O
O

O
N

CH

NH

3'

5'

A
P

NH

G
P

O
HO P = O

NH

P
CH

HO P = O

NH

CH

3'

5'

3'

O
HO P = O
O

..
..

Fig. 26. Formula molecular i reprezentarea schematic a structurii primare a ARN-ului

29
Utilizndu-se o serie de enzime hidrolitice pure, cum ar fi fosfodiesteraza din veninul se
arpe, ribonucleaza T, fosfataza alcalin i altele, s-a determinat structura primar a ARN-ului care
este definit ca fiind dat de numrul, natura i succesiunea nucleotidelor n catena
poliribonucleotidic a ARN.
Structura secundar a ARN-ului. Pentru moleculele de ARN, structura secundar a fost
studiat mai puin dect structura secundar a ADN-ului. n prezent, este cunoscut aceast structur numai pentru moleculele de ARNt i pentru ARN-ul izolat din Escherichia coli.
n soluii cu trie ionic mic, moleculele de ARN se comport ca lanuri polielectrolitice tipice, iar prin creterea triei ionice a soluiei, catenele se scurteaz, acest fenomen fiind nsoit de
micorarea densitii specifice i de modificarea constantei de sedimentare. Prin metoda difraciei
de raze X s-a demonstrat c bazele azotate pot forma dou i respectiv trei puni de hidrogen astfel:

Numrul legturilor duble ce se formeaz ntre bazele azotate este determinat de structura chimic a
acestora. Astfel, ntre adenin i uracil se formeaz dou puni de hidrogen, iar ntre guanin i
citozin trei asemenea legturi conform schemei:
O
HN

N H

O
Uracil
H
I
NH

O
Citozin

N
N

I
H

Adenin

O
N

H N

HN

S-a demonstrat

HNH
I

HN
I
H

I
H

Guanin

moleculele de ARN sunt reprezentate de cte o caten

poliribonucleotidic care prezint segmente spiralate ce alterneaz cu regiuni nespiralate (fig. 27).
Se presupune c la formarea regiunilor spiralate pot participa ntre 40 i 70% din resturile de
mononucleotide ale moleculei.
Aceast structur se explic prin aceea c n lanul polipeptidic al moleculei de ARN exist
fragmente ale cror succesiuni de baze azotate sunt complementare cu succesiunile de baze azotate
existente n alte fragmente ale aceleiai molecule, complementaritatea constnd n modul de forma-

30
re a punilor de hidrogen i numrul acestora. Fragmentele moleculare nespiralate create de spiralizarea unor astfel de zone poart numele de bucle.
U

U
G

bucl

U
C

U
.......
C .......
....... G
....... A
U .......

.......
G .......
....... C
.......
A .......
U

fragment
dublu spiralat
A

Fig. 27. Reprezentarea schematic a fragmentelor spiralate i nespiralate din moleculele de

ARN

Structura teriar a ARN-ului. n ultimele decenii, toate datele experimentale privind structura ARNt au indicat faptul c acest tip de ARN prezint i o structur teriar i c funciile sale
biochimice pot fi mult mai numeroase dect s-a crezut. Conform acestor cercetri, moleculele de
ARNt prezint dou stri conformaionale reversibile ce se deosebesc ntre ele din punctul de vedere
al activitii biologice, precum i dup comportarea loc cromatografic. n cazul ARN-ului de
transport, structura teriar este dat de una din aceste stri conformaionale care este forma
superspiralizat.
IV.6. Acizii deoxiribonucleici
Acizii

deoxiribonucleici

(ADN),

din

punct

de

vedere

structural

sunt

polideoxiribonucleotide, adic sunt compui macromoleculari alctuii dintr-un numr mare de uniti structurale de baz numite deoxiribonucleotide.
ADN-ul are masa molecular cuprins ntre 106 109 Da i este localizat aproape exclusiv n
nucleul celular. La eucariote, ADN-ul se gsete ntr-o cantitate de aproximativ 2 mg/gram de esut
umed i poate fi gsit, n cantiti mult mai mici i n mitocondrii sau chiar n citoplasm. Bacteriile
i unele virusuri conin ADN, dar n acest caz el nu este localizat ntr-o structur morfologic definit.
Cantitatea de ADN n celulele unei specii de vieuitoare este ntotdeauna aceeai i depinde
de numrul de cromozomi. n cursul diviziunii celulare, cantitatea de ADN se dubleaz pentru ca n
mitoz s se reduc la jumtate n aa fel nct celulele fiice diploide s conin aceeai cantitate de
ADN ca i celulele parentale caracteristice speciei.

31
n celulele haploide (gamei) cantitatea de ADN este njumtit deoarece prin fecundare
are loc restabilirea cantitii de ADN specific speciei respective, iar n celulele poliploide cantitatea de ADN corespunde gradului de poliploidie al speciei.
Macromoleculele de ADN sunt alctuite din uniti monomere de baz care sunt
mononucleotide ale 2-deoxiribozei i anume dAMP (deoxiadenozin-monofosfat), dGMP (deoxiguanozin-monofosfat), dCMP (deoxicitidin-monofosfat) i dTMP (deoxitimidin-monofosfat) legate
ntre ele prin puni 3,5fosfodiesterice. Compoziia macromoleculelor de ADN n baze azotate
purinice i pirimidinice este caracteristic pentru fiecare organism n parte (deci nu pentru fiecare
specie!) i rmne aceeai indiferent de vrst, de condiiile fiziologice sau de condiiile de mediu.
n urma unui studiu referitor la coninutul n ADN al genomului a peste 1100 de plante superioare i peste 1300 de specii de plante inferioare s-a constatat c toate organismele cu o cantitate
de ADN n genom mai mic de 5103 pg sunt considerate procariote, iar cele cu o cantitate mai
mare de 3,610-2 pg sunt eucariote.
Structura primar a ADN-ului este dat de numrul, natura i succesiunea
deoxiribonucleotidelor n catenele moleculelor de ADN. Spre deosebire de ARN, macromoleculele
de ADN sunt dublu-catenare. Una din catene este complementar cu cealalt din punctul de vedere
al succesiunii bazelor azotate datorit specificitii formrii punilor de hidrogen ntre acestea:
G

CH 3
I
O
HN

NH

O
Timin

H
I
NH
HN

si

sau

HNH
I

N
N

Adenin H

O
N

H N

O
Citozin

HN
I
H

I
H

Guanin

Structura dublu catenar este meninut datorit acestor puni de hidrogen. Structura primar
dublu-catenar a macromoleculelor de ADN poate fi reprezentat n mod similar cu cea a ARN-ului
(fig. 28).

32
..
.

..
.
NH 2
I

HO P = O
O

CH 2
O

O
HO P = O

HN

CH 3 CH 2
O

O
O
HO P = O

NH 2

CH 2
O

HO P = O
N

NH

NH 2

O
CH 2

HO P = O

NH 2

CH 2
O

H 2N

HO P = O
N

H N

CH 2

O
HO P = O

NH 2
I

H 3C

NH

CH 2
O

HO P = O
N

CH 2

O
O
HO P = O
HO P = O

..
..

..
..

Fig.28. Formula molecular a dubluhelix-ului de ADN

Schematic, un fragment tetranucleotidic al moleculei de ADN poate fi reprezentat astfel:
3'
3'

5'

P
3'

5'

3'

P
G

P
C

P
3'

5'

A
P

P
5'

5'

5'

3'

3'

33
Cele dou catene polideoxiribonucleotidice au o orientare antiparalel. Aceasta nseamn c
la fiecare extremitate a moleculei, una din catenele polinucleotidice este orientat cu captul 5
OH, iar cealalt cu captul 3OH liber, la cealalt extremitate orientarea fiind invers. Cele dou
catene ale dublu helix-ului de ADN se unesc prin puni de hidrogen dup regula de mperechere a
bazelor azotate purinice i pirimidinice.
Structura secundar a ADN-ului. Studiul structurii moleculare a ADN-ului s-a realizat cu
ajutorul metodei difraciei razelor X aplicat pe preparate nalt purificate.
n urma acestor studii, precum i prin determinarea unor proprieti fizico-chimice ale ADNului, Chargaff elaboreaz regula care i poart numele conform creia numrul bazelor azotate
purinice este egal cu cel al bazelor pirimidinice (A = T i G = C sau, altfel spus, A + G = T + C).
Regula Chargaff a fost apoi confirmat prin faptul c bazele azotate formeaz puni de hidrogen n mod specific, aa cum se ntmpl i n cazul moleculelor de ARN. Lund n calcul toate
aceste date experimentale, Watson i Crick au elaborat modelul tridimensional al structurii secundare a ADN-ului. Conform acestui model, molecula de ADN reprezint un dublu helix de dreapta i
este alctuit din dou catene polideoxi-ribonucleotidice rsucite una n jurul celeilalte i ambele n
jurul unui cilindru imaginar, bazele azotate fiind unite ntre ele prin puni de hidrogen (fig. 29).

Fig. 29. Reprezentarea schematic a dublu helix-ului de ADN

Fiecare tur de spir cuprinde 10 baze azotate i are o lungime de 3,4 . Cele dou catene
polinucleotidice sunt complementare i orientate n sens contrar, adic sunt antiparalele. Bazele
azotate purinice i pirimidinice din fiecare caten polinucleotidic se gsesc situate n planuri paralele ntre ele i perpendiculare pe axul moleculei.
Bazele ce aparin unei catene sunt perechi cu bazele catenei polinucleotidice complementare
i sunt situate n aceleai planuri. Structura moleculei de ADN prezint un ax de simetrie n jurul
cruia se rsucete elicea. Aceast structur se caracterizeaz prin faptul c permite formarea unui
numr maxim posibil de puni de hidrogen i c aceste legturi confer moleculei un maximum de
stabilitate.
Wilkins a adus unele mici modificri modelului propus de Watson i Crick preciznd c
exist dou tipuri de fose (concaviti) ntre dou spire succesive ale helixului fose mari i fose
mici care dau posibilitatea moleculei de ADN s se combine sau s intre n contact cu diferii con-

34
stitueni celulari cum ar fi histonele, unii hormoni, antibiotice, enzime etc. Aceasta nseamn c
fosele confer acestor interaciuni o anumit specificitate. Structura de dublu helix a moleculei de
ADN, confirmat de studiile de difracie a razelor X pe preparate de ADN de diferite proveniene,
este n concordan cu numeroase proprieti fizice i chimice ale ADN-ului i poate explica rolul
pe care acest acid nucleic l ndeplinete n celul unde particip la stocarea i transmiterea informaiei genetice.
Modelul elaborat de Watson i Crick a fost confirmat experimental ntr-o serie de experiene
efectuate pe E. coli n care s-a folosit metoda ultracentrifugrii n gradient de clorur de cesiu
(CsCl). Tulpina E. coli a fost cultivat pe un mediu nutritiv ce coninea 15NH4Cl n calitate de unic
surs de azot. Colonia obinut sintetizeaz ADN marcat cu 15N. Ea a fost apoi rensmnat pe alt
mediu nutritiv care coninea 14NH4Cl ca surs de azot i a fost lsat s se divid o singur dat. Din
cele dou culturi de E. coli s-a extras i purificat ADN-ul i s-a msurat densitatea lui prin
ultracentrifugare n gradient de CsCl.
ADN monocatenar i ADN circular. n 1959 s-a reuit izolarea dintr-un bacteriofag ce infecteaz celulele de E. coli, a unui ADN format dintr-o singur caten polinucleotidic ce conine
5.000 nucleotide. Acest tip de ADN se caracterizeaz prin A + G T + C, ceea ce nseamn c nici
teoretic nu poate exista sub form de dublu helix. n acelai timp el d o reacie pozitiv cu formaldehida datorit faptului c gruprile amino ale bazelor azotate sunt libere i nu formeaz puni de
hidrogen. De asemenea, este foarte sensibil fa de fosfodiesteraz care l hidrolizeaz imediat.
Studii ulterioare au demonstrat faptul c aceast molecul de ADN poate exista sub dou
forme: o form liniar, care este componenta S2 fr proprieti virulente i o form circular care
este componenta S1 virulent i care rezult din forma liniar prin formarea unei legturi covalente
ntre extremiti. Numeroi bacteriofagi conin ADN dublu spiralat n timp ce ali fagi au ADN
monocatenar.
Tabelul VII.
Coninutul n ADN al nucleelor celulelor din diferite esuturi ale unor animale, n pg (1012
g)/nucleu(*
Organul

obolan

Gin

Bou

Broasc

Crap

Ficat

6,4

2,6

6,4

15,7

3,3

Rinichi

6,7

2,3

6,3

Splin

6,5

2,6

Plmni

6,7

Leucocite

6,6

35
Eritrocite

2,6

15,0

3,5

Pancreas

7,3

2,7

Inim

6,5

2,5

Creier

2,3

Sperm

1,3

2,8

1,6

*)

Wolkenstein, M. W. 1965

Forma circular a moleculei de ADN a fost descoperit i n celulele de E. coli. Macromolecula de ADN extras din E. coli are o mas molecular de 2,81010 Da, conine peste 4 milioane de
perechi de baze azotate i are o lungime care depete de 1.000 de ori conturul celulei de E. coli.
Existena ADN-ului circular la acest microorganism este n concordan cu faptul c harta lui genetic este, de asemenea, circular.
ADN-ul circular se ntlnete i n mitocondrii ntr-o concentraie de 4 6 molecule per mitocondrie. Acest tip de ADN se deosebete ns de cel nuclear prin compoziia n baze azotate. Masa sa molecular este de 1 milion sau un multiplu de 1 milion de daltoni i poate exista sub form
circular ca monomer sau ca dimer, dar i sub form de dimer catenat.
Dat fiind faptul c principala funcie biologic a ADN-ului o constituie stocarea informaiei
genetice, precum i faptul c fiecrei specii de vieuitoare i este specific un anumit numr de cromozomi, ponderea ADN-ului n nucleu difer de la o specie la alta. Experimental s-a demonstrat c
exist diferene i n cadrul aceleiai specii, de la un organ la altul (tab. VII).
Rolul biologic al acizilor nucleici. Rolul informaional al acizilor nucleici a fost clarificat
relativ recent, doar dup clarificarea structurii chimice a acestor biomolecule. Primele cercetri n
acest domeniu s-au realizat n deceniul 5 i au constat n izolarea ADN-ului din pneumococul virulent de tip S care a fost apoi injectat la oareci mpreun cu pneumococii neviruleni de tip R. n
aceste experimente s-a constatat c oarecii infectai au fcut pneumonie i au sucombat.
Ulterior s-au izolat din cadavrele lor pneumococii de tip S. Acest experiment a demonstrat
faptul c a avut loc transformarea pneumococilor R n pneumococi de tip S care au rmas stabili.
Aceste rezultate au stat la baza unor cercetri ulterioare care au demonstrat rolul ADN-ului n reproducerea virusurilor. Prin utilizarea metodei izotopilor radioactivi s-a stabilit c la parazitarea
bacteriilor de ctre virusuri, n celula bacterian ptrunde doar ADN-ul, respectiv ARN-ul viral.
Astzi se cunoate cu precizie faptul c acizii nucleici reprezint suportul material al genelor care
sunt constituite din succesiuni oligonucleotidice localizate ntr-o ordine bine determinat n catenele
polinucleotidice ale moleculelor de ADN. La unele virusuri, aceast funcie este ndeplinit de ctre
ARN, dat fiind faptul c aceste virusuri nu conin ADN.

36
Informaia genetic stocat n succesiunea bazelor azotate ale moleculelor de ADN poate fi
transmis mai departe pe dou ci diferite. Una din ci const n transmiterea la urmai a informaiei ereditare datorit capacitii ADN-ului de a se replica semiconservativ. n acest proces, informaia genetic este transmis de la vechea molecul de ADN la cele dou molecule fiice de ADN nou
sintetizate. A doua cale de transmitere se realizeaz prin transcripie cnd informaia codificat n
ADN se transmite n succesiunea de baze azotate ale moleculelor de ARN ce se sintetizeaz utiliznd o caten de ADN drept matri i respectiv prin translaie, adic prin traducerea informaiei
genetice stocate n ARN n succesiunea de aminoacizi din moleculele proteinelor nou sintetizate.
Aceast circulaie a informaiei genetice reprezint dogma central a biologiei moleculare i poate
fi reprezentat schematic astfel:

ADN

transcriptie

ARN

translatie

Proteine

Dup cum rezult din aceast schem, acizii ribonucleici joac un rol intermediar n acest
mecanism al transmiterii informaiei genetice. Mecanismele prin care diferite tipuri de ARN ndeplinesc aceast funcie sunt oarecum diferite. ARN-ul mesager (ARNm) numit i informaional
(ARNi) preia informaia genetic prin nsui mecanismul biosintezei sale. Acest proces se realizeaz
prin utilizarea n calitate de matri a unei catene de ADN. Procesul biosintetic respect regula mperecherii bazelor azotate. Aceasta nseamn c succesiunea bazelor azotate din molecula de ARNm
nou sintetizat este complementar cu succesiunea bazelor azotate din fragmentul de ADN utilizat
drept matri.
ARNr (ribozomal) reprezint suportul informaional al ribozomilor, organite subcelulare la
nivelul crora se realizeaz procesul de biosintez a proteinelor. Informaia genetic la acest nivel
nseamn o succesiune bine determinat a bazelor azotate n catena poliribonucleotidic a ARNr.
ARNt (de transport sau de transfer) are drept rol principal captarea i activarea aminoacizilor
solubili din citosol. Sub aciunea unor enzime specifice numite aminoacilARNtsintetaze, moleculele de ARNt cu structuri diferite, formeaz cu aminoacizii solubili compleci activi de tipul
aminoacilARNt. Pentru fiecare aminoacid exist un ARNt specific, cu o anumit succesiune a bazelor azotate. Odat format acest complex, el migreaz la nivelul ribozomilor. Aici se fixeaz la
nivelul centrului activ n vederea ncatenrii n noua protein numai atunci cnd succesiunea de
baze azotate a fragmentului de ARNr situat n acelai centru activ este complementar cu succesiunea bazelor azotate din ARNt care a transportat aminoacidul (vezi cap. IX).
Revers-transcripia. n ultimii ani s-a descoperit faptul c exist situaii cnd ARN-ul se
poate sintetiza fr a folosi catenele de ADN drept matri. Astfel, la retrovirusuri, ARN-ul servete

37
drept matri pentru biosinteza ADN-ului monocatenar care, la rndul su, servete drept matri
pentru biosinteza celei de a doua catene de ADN n celula gazd. Dup contaminare, moleculele de
ADN astfel sintetizate n celula gazd vor servi drept matri pentru biosinteza ARN-ului care va fi
identic cu cel ce a iniiat ciclul. Acest fenomen poart numele de transcripie invers sau reverstranscripie:
ARNretrovirus

revers-transcriptie

ARNcelul gazd

translatie

ADNcelul gazd

transcriptie

Proteinecelul gazd

Aceast transmitere a informaiei genetice nspre napoi, de la ARN la ADN este posibil
deoarece este posibil formarea moleculelor hibride ARN ADN dublu catenare.
Revers-transcripia este posibil datorit existenei unor enzime specifice numite reverstranscriptaze. Se pare c n celulele normale, biosinteza acestei enzime nu are loc n absena
retrovirusurilor.
Gene discontinue. n celulele organismelor eucariote, genele sunt diferite de cele ale procariotelor. Aceste diferene sunt datorate repartizrii i utilizrii judicioase a nucleotidelor. De exemplu, secvenele nucleotidice care codific aminoacizii din hemoglobin sau din ovalbumin sunt
frecvent ntrerupte prin fragmente nucleotidice care nu codific nici o informaie genetic. Aceste
fragmente se numesc introni, n timp ce fragmentele care codific aminoacizii viitoarelor proteine
se numesc exoni.
Cele mai multe gene care codific ARNm la eucariote sunt ntrerupte de introni. nc n nucleu, nainte de migrarea ARN-ului n citosol, ele sunt transmise ntr-o molecul de ARN precursor
care i pierde apoi intronii pe cale enzimatic. Exonii rmai sunt apoi sudai din nou formnd molecule de ARN care, migrnd n citoplasm, devin ARNm.
Rezumnd cele de mai sus se poate spune c macromoleculele de ADN i ARN ndeplinesc
funcii biologice bine determinate n toate organismele vii. Pentru ADN, principala sa funcie const
n stocarea i transmiterea informaiei genetice. Prin intermediul codului genetic, n macromoleculele de ADN sunt nmagazinate toate caracterele ereditare ale organismului, toate informaiile referitoare la structura proteinelor, toate detaliile proceselor metabolice etc., sau, altfel spus, toate informaiile referitoare la fenotipul organismului. Toate fenomenele i procesele biochimice la care particip moleculele de ADN reprezint fundamentul molecular al geneticii. Acestea includ replicarea
ADN-ului, mutageneza, recombinarea, repararea i respectiv transcripia. Obiectul geneticii moleculare const n analiza tuturor acestor procese care pot fi reacii enzimatice sau neenzimatice. Legat de aceasta, direciile principale de cercetare n genetica molecular sunt reprezentate de studiul

38
acestor procese n aa fel nct acestea s poat fi apoi reproduse in vitro cu ajutorul preparatelor
nalt purificate ale ADN-ului i ale enzimelor implicate.
ARN-ul reprezint a doua categorie de biomolecule, dup ADN, ce ndeplinete funcii cibernetice n organismele vii, asigurnd circuitul informaiei n celul. Din acest punct de vedere
se poate considera c rolul ARN-ului este chiar mai complex dect rolul jucat de ADN. Dac moleculele de ADN stocheaz informaia genetic n succesiunea bazelor azotate din catenele
polideoxiribonucleotidice, informaie absolut necesar creterii i multiplicrii celulelor, ARN-ul
particip direct la acest proces de multiplicare, asigurnd desfurarea normal a transcripiei, adic
a biosintezei proteinelor.
Din aceste motive, coninutul n ARN al celulelor este mult mai variabil comparativ cu
ADN-ul, depinznd foarte mult de condiiile de mediu, elementele nutritive din alimente etc. Succesiunea de baze azotate din catenele dublu helix-ului de ADN conine informaii referitoare structura
tuturor proteinelor din celul. n afar de aceasta ns, este extrem de important viteza cu care se
sintetizeaz fiecare protein, aceasta depinznd de interaciunile celulei cu mediul i de mecanismele de reglare a biosintezei proteice. De aceea, cantitatea de ARN total din celul depinde de viteza
cu care se realizeaz procesul de biosintez a proteinelor n esutul din care face parte celula respectiv.
Aceast interdependen este asigurat de un mecanism reglator complex care asigur declanarea biosintezei de ctre celul a anumitor enzime n care celula este deficitar n anumite condiii de mediu. Aceasta nseamn c, n condiii intrinseci i extrinseci date, cantitatea de ARN total
reprezint materializarea funcionrii acestui mecanism, iar rezultatul acestor fenomene l reprezint
biosinteza rapid a anumitor enzime, respectiv biosinteza lent a altora.
Este cunoscut faptul c celula vie are propriul su mecanism de transcripie a ARN-ului pe
molecula de ADN. Cu toate acestea, coninutul specific n ARN nu concord ntotdeauna cu coninutul n ADN. n ceea ce privete compoziia chimic a acestor dou tipuri de acizi nucleici, cel
puin la bacterii exist o corelaie, dar nu o identitate. Acest fapt nu reprezint un paradox deoarece
transcripia se realizeaz neuniform, la nivelul unor fragmente diferite ale moleculei de ADN. De
aceea, funciile biologice ale ARN-ului sunt diverse, existnd din acest punct de vedere mai multe
tipuri de ARN celular (ARNm, ARNt, ARNr).
Organizarea ADN-ului n cromozomi. ADN-ul reprezint componenta funcional cea mai
important a cromozomilor. Organizarea macromoleculelor polideoxiribonucleotidice de ADN n
cromozomi este mult mai complex la eucariote comparativ cu procariotele. La procariote, cel mai
adesea se ntlnete ADN-ul monocatenar circular. Din cauza mrimii moleculei, ADN-ul se
superspiralizeaz puternic n celula procariot formnd o structur complex n care intr i molecule proteice de natur histonic.

39
Pe lng ADN-ul cromozomial principal, n celulele bacteriene se ntlnesc i molecule circulare de ADN cu masa molecular de aproximativ 107 Da, numite plasmide. Acestea prezint o
importan practic deosebit fiind utilizate n calitate de vectori n ingineria genetic.
La eucariote, ADN-ul intr preponderent n structura cromozomilor unde este asociat cu
ARN, proteine, cantiti mici de lipide i unii ioni metalici cu care formeaz o arhitectur spaial
complex numit cromatin. Proteinele asociate cu ADN-ul n structura cromatinei sunt de tip
histonic, dar i non-histonic. Indiferent de specie, raportul ADN/histone din cromatin este ntotdeauna egal cu unitatea.
Prin studii de microscopie electronic s-a stabilit c fibra de cromatin din cromozomii interfazici are aspectul unui irag de mrgele, fiind format din uniti repetitive aproape sferice cu
diametrul de 10 nm, unite ntre ele prin segmente flexibile. Aceste uniti structurale fundamentale
ale cromatinei se numesc nucleosomi. Fiecare nucleosom este reprezentat de un ansamblu molecular alctuit dintr-un complex cilindric compus din histonele H2A, H2B, H3 i H4 grupate n octamer n
perechi de cte dou molecule. n jurul acestui cilindru se nfoar lanul de ADN pe o lungime de
160 pn la 250 perechi de nucleotide.
ntre doi nucleosomi succesivi se afl o poriune din aceeai macromolecul de ADN cu o
lungime ce corespunde la 60 perechi de nucleotide, aceast poriune fiind complexat cu o molecul
histonic. Extremitile N i Cterminale ale moleculei histonice se leag de nucleosomii adiaceni. Rolul ei este acela de superspiralizare, deci de scurtare a fragmentelor polinucleotidice
internucleosomale.
Prin hidroliza cromatinei sub aciunea nucleazei mitocondriale s-a reuit obinerea particulelor nucleosomale lipsite de histone, coninnd un fragment de ADN alctuit din aproximativ 15 perechi de nucleotide, numit miezul nucleosomului.
Asamblarea celor 8 molecule histonice n miezul nucleosomic conduce la constituirea unui
disc n care partea central este format dintr-un tetramer histonic, iar extremitile sunt alctuite
din ceilali doi dimeri histonici. Octamerul histonic astfel alctuit se stabilizeaz prin interaciuni
hidrofobe ce apar ntre capetele lor C-terminale, iar extremitile N-terminale sunt dispuse la suprafaa octamerului unde se leag de ADN-ul care nfoar miezul histonic.
Superspiralizarea dublu-helixului de ADN n jurul octamerului histonic este determinat
doar de histonele H3 i H4. Toate histonele interacioneaz cu ADN-ul n aa fel nct sunt neutralizate sarcinile negative existente doar pe o parte a dublu-helixului. Pe partea opus sunt meninute
forele de repulsie ntre sarcinile negative ale radicalilor fosfat care faciliteaz n felul acesta nfurarea moleculei de ADN n jurul miezului histonic.

40
Nucleosomii constituie ns doar primul nivel de condensare a ADN-ului. Fibra de cromatin are, in vivo, un diametru de 2 3 ori mai mare dect cel al nucleosomului. Aceasta nseamn c
filamentul nucleosomal din fibra de cromatin se mpacheteaz ntr-o structur mult mai compact,
formnd fibra propriu-zis de cromatin de cca 30 nm.
Pentru redarea arhitecturii moleculare s-au propus mai multe modele conform crora fibrele
se spiralizeaz n structuri solenoide cu diametre de 25 30 nm i nlimi ale pasului de aproximativ 11 nm.
Un alt model structural consider c unitatea repetitiv din structura fibrei de cromatin nu
este nucleosomul ci un dimer denumit nucleodisom care este format din dou elemente ale fibrei,
de 10 nm, aezate n zig-zag. Prin nfurarea acestei fibre n jurul axei se formeaz o spir cilindric cu diametrul de 25 30 nm. Pe suprafaa lateral a spiralei exist o concavitate unde se poate
fixa o molecul de histon care, de asemenea, stabilizeaz structura general. Exist informaii conform crora formaiunile solenoide se organizeaz n structuri mai complexe ce pot conferi cromatinei o condensare suplimentar, determinnd o individualizare morfologic a cromozomilor.
V. CATABOLISMUL ACIZILOR NUCLEICI
Catabolismul nucleoproteinelor debuteaz prin scindarea acidului nucleic (n calitatea sa de
grupare prostetic) de componenta proteic. Clivarea celor dou componente se realizeaz n tubul
digestiv sub aciunea enzimelor proteolitice (pepsin, tripsin etc.) dup care componentele proteice sufer aceleai transformri ca i proteinele simple, iar degradarea acizilor nucleici se realizeaz
pe ci specifice, sub aciunea unor enzime specifice.
V.1. Hidroliza enzimatic a acizilor nucleici
Legturile internucleotidice 3,5-fosfodiesterice din catenele polinucleotidice ale acizilor
nucleici sunt scindate fr eliberarea de ortofosfat sub aciunea unor enzime specifice din clasa hidrolazelor numite nucleaze, ruperea acestor legturi fcndu-se ntre atomii de fosfor i oxigen:

O
II
R1 O P O R 2
I
OH

H2O
Nucleaz

O
II
R1 O P OH
I
OH

R 2 OH

Prin ruperea legturilor fosfodiesterice se pot forma produi fosforilai la captul 3 sau la
captul 5. n funcie de specificitatea de substrat, nucleazele se clasific n urmtoarele trei grupe:
ribonucleaze (notate prescurtat RN-aze sau ARN-aze) sunt enzime ce hidrolizeaz moleculele acizilor ribonucleici;

41
deoxiribonucleaze (notate prescurtat DN-aze sau ADN-aze) sunt enzime ce scindeaz moleculele acizilor deoxiribonucleici;
nucleaze fr specificitate.
Din punctul de vedere al modului de aciune, nucleazele, ca i alte enzime ce acioneaz
asupra unor substrate macromoleculare, pot fi endonucleaze i exonucleaze.
Exonucleazele

hidrolizeaz

att

catenele

poliribonucleotidice

ct

cele

polideoxiribonucleotidice prin clivarea succesiv a mononucleotidelor de la unul din capetele catenei. Ele manifest o specificitate nalt de substrat care se refer la capacitatea lor de a aciona asupra polinucleotidelor mono- sau bicatenare.
Endonucleazele hidrolizeaz legturile fosfodiesterice aflate n interiorul catenelor
polinucleotidice ale moleculelor de ADN i ARN cu formarea unor fragmente oligonucleotidice.
Att n organismele animale, ct i la plante i microorganisme au fost descoperite diferite
tipuri de ribonucleaze ce pot fi endo- sau exonucleaze. Multe ribonucleaze au fost studiate profund,
fiindu-le cunoscute structura primar, mecanismele de aciunea i funciile biochimice ndeplinite.
Astfel, ribonucleaza pancreatic (cunoscut i sub numele de RN-aza I) are pH-ul optim de aciune
de 7,7 i are rolul de a descompune moleculele de ARN din hran. Ea se ntlnete n toate celulele
vii i hidrolizeaz ARN-ul cu formare de 3-mononucleotide.
Ribonucleazele II, III, IV, P i H se ntlnesc n unele esuturi animale, n Escherichia coli i
n alte surse biologice i catalizeaz hidroliza precursorilor ARNm, ARNt i ARNr cu generarea
formelor funcionale corespunztoare. Multe ribonucleaze sunt capabile s recunoasc secvene
nucleotidice strict determinate i s hidrolizeze numai legturile fosfodiesterice ale secvenelor respective.
Dintre endodeoxiribonucleaze, cele mai bine studiate sunt DN-aza I i DN-aza II.
DN-aza I (deoxiribonucleaza pancreatic) are un pH optim de aciune n zona neutr i slab
alcalin (pHoptim = 7,0 8,0) i este activat n prezena ionilor de Mg2+, Mn2+, Co2+ etc. Ea scindeaz preferenial legturile fosfodiesterice dintre mononucleotidele purinice i pirimidinice din moleculele de ADN. Oligonucleotidele formate posed restul ortofosfat la captul 5.
DN-aza II este rspndit preponderent n splin i timus i are un pH optim de aciune cuprins ntre 4,0 i 5,0. Ea hidrolizeaz legturile fosfodiesterice din ambele catene de ADN cu formarea de oligonucleotide la care captul 5 este liber iar captul 3 este fosforilat.
Dintre exodeoxiribonucleaze, numite i fosfodiesteraze, cele mai bine studiate sunt DN-azele
I, II III i IV.
Exonucleaza I se gsete n Escherichia coli i scindeaz ADN-ul monocatenar ncepnd cu
extremitatea 5 cu formare de deoxiribonucleozid-3-monofosfai (mononucleotide fosforilate n
poziia 3).

42
Exonucleaza III se gsete tot n Escherichia coli. Ea hidrolizeaz ADN-ul bicatenar ncepnd cu extremitatea 3, cu formare de nucleozid-5-monofosfai.
Exonucleaza II este numit i exonucleaza legat cu ADN-polimeraza I i se gsete tot la E.
coli. Ea ndeplinete aceleai funcii ca i exonucleaza IV, ambele fiind rspunztoare de scindarea
secvenial a ADN-ului n direcia 35 i respectiv 53 jucnd n felul acesta un rol extrem de
important n mecanismele replicrii i reparrii ADN-ului.
O serie de exonucleaze se utilizeaz ca instrumente analitice n studiul structurii primare a
ADN-ului i/sau ARN-ului sau la obinerea de nucleozid-5-monofosfai i nucleozid-3monofosfai.
Endonucleazele de restricie sau restrictazele sunt endo-deoxiribonucleaze cu o nalt specificitate de substrat. Ele hidrolizeaz ADN-ul numai la nivelul anumitor legturi fosfodiesterice, caracteristice pentru secvene unice de nucleotide. Restrictazele intr n alctuirea aa-numitului sistem celular protector de restricie-modificaie fiind capabile s hidrolizeze ADN-ul strin cum ar fi
de exemplu ADN-ul viral fr a aciona ns asupra ADN-ului propriu, acesta deosebindu-se prin
caracterul modificaiei.
Pn in prezent au fost izolate aproape 400 de restrictaze din mai multe specii bacteriene.
Aceste enzime descompun ADN-ul n peste 80 de fragmente cu mase moleculare determinate i cu
secvene nucleotidice specifice. Denumirea restrictazelor se formeaz n funcie de suele microbiene din care au fost obinute, iar dac denumirea include i cifre romane, aceasta nseamn c din
tulpina microbian respectiv au fost obinute mai multe restrictaze (de exemplu Eco R I i Eco R II
din E. coli, Hae I i Hae II din Haemophylus aegypticus, Hind III din Haemophylus influenzae etc.).
V.2. Hidroliza enzimatic a nucleotidelor i nucleozidelor
Mononucleotidele formate n urma hidrolizei enzimatice a acizilor nucleici sunt degradate n
continuare cu formare de nucleozide i ortofosfat. Acest proces poate avea loc sub aciunea catalitic a fosfomonoesterazelor nespecifice sau a hidrolazelor specifice. Din prima categorie fac parte
fosfomonoesteraza (sau fosfataza) alcalin i respectiv cea acid, iar dintre hidrolazele specifice
cele mai bine studiate sunt 5-nucleotidaza care hidrolizeaz nucleozid-5-monofosfaii i respectiv
3-nucleotidaza care manifest o nalt specificitate fa de nucleozid-3-monofosfai.
Hidroliza enzimatic a nucleozid-trifosfailor i nucleozid-difosfailor este realizat de enzime specifice. De exemplu, hidroliza ATP-ului i ADP-ului este realizat de ctre ATPfosfozidrolaz sau ATP-az (a), ATP-pirofosfohidrolaz (b) i respectiv nucleozid-difosfataze (c)
conform urmtoarelor reacii:

43
a) ATP

2O

ADP

3 PO 4

b) ATP

2O

AMP

4P 2O 7

c) ADP

2O

AMP

3 PO 4

Dinucleotidele (ca de exemplu NAD+-ul, FAD-ul etc.) sunt hidrolizate sub aciunea
nucleozid-pirofosfatazelor specifice cu formarea mononucleotidelor corespunztoare.
Rezultatul aciunii fosfomonoesterazelor i hidrolazelor specifice asupra nucleotidelor l
reprezint deci nucleozidele i ortofosfatul. Ionii ortofosfat intr n metabolismul hidro-mineral, iar
nucleozidele sunt degradate n continuare cu formare de baze azotate i pentoze sub aciunea
nucleozidazelor care pot hidroliza legturile N-glicozidice din nucleozide dar chiar i din
nucleotide. Nucleozidele mai pot fi ns degradate i prin transferul restului de pentoz pe o molecul de ortofosfat cu formarea pentozo-fosfailor i a bazelor azotate libere. n fine, au mai fost
identificate n diferite organe i esuturi i unele fosfodiesteraze capabile s hidrolizele legturile
fosfodiesterice din 3,5-mononucleotidele ciclice cu formarea nucleozid-5-monofosfailor corespunztori.
V.3. Catabolismul bazelor azotate purinice i pirimidinice
Bazele azotate rezultate n urma hidrolizei nucleotidelor i nucleozidelor pot avea o soart
diferit, n funcie de necesitile de moment ale celulei. Astfel, ele pot participa la biosinteza noilor
nucleotide sau pot fi degradate n continuare pe ci specifice.
V.3.1. Catabolismul bazelor azotate purinice
Degradarea bazelor azotate purinice debuteaz prin dezaminarea lor hidrolitic dup care are
loc oxidarea produilor de dezaminare cu formare de acid uric.
Adenina formeaz hipoxantina sub aciunea adenin-dezaminazei, iar guanina trece n xantin
n urma aciunii guanin-dezaminazei. Hipoxantina format prin dezaminarea adeninei trece la rndul ei n xantin sub aciunea xantin-oxidazei care este o flavoprotein ce conine cupru i molibden
i care utilizeaz oxigenul molecular n calitate de agent oxidant:
NH2

H2O
N

N
N

N
H

Adenin

OH

NH3

N
Adenindezaminaza

N
H

Hipoxantin

44
OH

OH

NH3

N
H2N

H2O

Guanindezaminaza

HO

H
Xantin

Guanin

OH

H2O

OH

H2O2

O2

Xantinoxidaza

HO

H
Xantin

Hipoxantin

Sub aciunea aceleiai xantin-oxidaze, att xantina provenit din adenin ct i cea rezultat
prin dezaminarea guaninei, se oxideaz n continuare la acid uric. Acidul uric reprezint produsul
final al catabolismului bazelor azotate purinice la om i la primate:

OH

O2

OH

H2O2

N
HO

H2O

N
OH

Xantinoxidaza

HO

Xantin

N
H

N
H

Acid uric

La mamiferele inferioare, la reptile, precum i la unele molute, acidul uric se descompune

n continuare. Sub aciunea urat-oxidazei, el trece n alantoin, care reprezint produsul final al degradrii adeninei i guaninei la aceste organisme:
O2
O

H2O2

H
NH2 O

O
O

CO2

2 H2O

Uratoxidaza

H
H
Acid uric

O
O

Alantoin

La animalele inferioare, la unele microorganisme precum i la multe plante superioare,

alantoina se degradeaz n continuare. La aceste organisme se ntlnete enzima numit alantoinaz
care hidrolizeaz alantoina cu formare de acid alantoic:

45
H
NH2 O

H2O

N
O

O = C OH
O
O
II
II
H2N C NH CH NH C NH 2

Alantoinaza

Acid alantoic

Alantoin

Acidul alantoic este produsul final al catabolismului bazelor azotate purinice la unii peti,
unele microorganisme i la unele plante. La toate celelalte vieuitoare, acidul alantoic se degradeaz
n continuare datorit existenei enzimei numite alantoicaz care are capacitatea de a cataliza reacia de hidroliz a acidului alantoic cu formare de uree i acid glioxilic:
H2O
O = C OH
O
O
II
II
H2N C NH CH NH C NH2
Alantoicaza
Acid alantoic

H
O
II
I
H2N C NH2 + HOOC C = O
Uree

Acid glioxilic

Ureea este produsul final al catabolismului adeninei i guaninei la peti, amfibieni, midii,
unele plante i unele microorganisme. Majoritatea plantelor ns, precum i unele microorganisme
i chiar animale inferioare sintetizeaz ureaza, enzim ce hidrolizeaz ureea cu formare de amoniac
i dioxid de carbon. De aceea, la aceste organisme, amoniacul reprezint forma sub care se elimin
azotul bazelor purinice:
H2O
O
II
H2N C NH 2
Uree

2 NH3

Ureaza

CO2

VII.3.2. Catabolismul bazelor azotate pirimidinice

Degradarea citozinei debuteaz prin dezaminarea sa hidrolitic sub aciunea citozindezaminazei, cu formare de uracil. n continuare, att uracilul ca atare, ct i cel provenit din
citozin, este redus cu formare de dihidrouracil care, sub aciunea dihidrouracil-hidrolazei, trece n
acid -ureido-propionic:
NH 2

H 2O

NH 3

NAD(P)H+H

NAD(P)

N
O

Citozindezaminaza

Citozin

Uracil

Dihidrouracil
dehidrogenaza

46
O

H2O

N
N

H2N C NH CH 2 CH 2 COOH

Dihidrouracilhidrolaza

Acid -ureidopropionic

Dihidrouracil

Acidul -ureido-propionic astfel rezultat este scindat hidrolitic sub aciunea unei hidrolaze
specifice cu eliberare de amoniac i dioxid de carbon i formare de -alanin:
H 2O
H 2N C NH CH

CO 2

NH 3

CH 2 COOH

H 2N CH 2 CH 2 COOH

-Ureidopropionat-

hidrolaza
Acid -ureidopropionic

-Alanin

Degradarea timinei se realizeaz pe o cale asemntoare cu a celorlalte dou baze azotate

pirimidinice, iar n calitate de produs final se formeaz acidul -aminoizobutiric:
+

NAD(P)H+H NAD(P)
O
CH3

HN
O

H2O

O
Dihidrotimindehidrogenaza

CH3

HN
O

Dihidrotiminhidrolaza

Timin

Dihidrotimin

H2O
H2N C NH CH2 CH COOH
O

CH3

CO2

NH3

Ureido-izopropionatreductaza

Acid -ureidoizobutiric

H2N CH2 CH COOH

CH3

Acid -aminoizobutiric

-Alanina i acidul -aminoizobutiric reprezint produii finali ai catabolismului bazelor

azotate pirimidinice. Amoniacul rezultat n urma degradrii acestor baze azotate intr n ciclul
ureogenetic i se elimin din organism sub form de uree.

47
VI. BIOSINTEZA ACIZILOR NUCLEICI
Datorit structurii deosebit de complexe a catenelor polinucleotidice, precum i datorit rolului jucat n stocarea i transmiterea la urmai a informaiei genetice, biosinteza acizilor nucleici
reprezint un proces extrem de complicat, nc insuficient elucidat, ce se realizeaz n mai multe
etape.
VI. 1. Biosinteza nucleozid-monofosfailor
n prima etap a procesului de biosintez a acizilor nucleici se realizeaz formarea
mononucleotidelor, aduc a unitilor structurale monomere ce intr n structura catenelor
polinucleotidice ale acizilor nucleici (AMP, GMP, CMP i UMP pentru acizii ribonucleici i respectiv dAMP, dGMP, dCMP i dTMP n cazul biosintezei ADN-ului). Nucleozidmonofosfaii se
pot sintetiza att de novo, din precursori cu o structur chimic simpl, ct i din bazele azotate libere formate n urma degradrii pariale a acizilor nucleici. n anumite celule predomin una din aceste ci iar n altele biosinteza se realizeaz preponderent pe cea de a doua cale.
La mamifere, mononucleotidele se sintetizeaz preponderent de novo, dei n esuturile cu
cretere rapid sunt implicate ambele ci, n timp ce la multe specii bacteriene procesul biosintetic
are loc prin utilizarea bazelor azotate formate n urma degradrii acizilor nucleici.
VI.1.1. Biosinteza nucleotidelor purinice
Procesul de biosintez de novo a nucleului purinic se realizeaz dup acelai mecanism la
microorganisme, plante i animale, fapt ce demonstreaz o dat n plus unitatea proceselor biochimice specifice lumii vii.
Pentru descifrarea mecanismelor moleculare i a succesiunii transformrilor enzimatice ce
stau la baza cii de biosintez a mononucleotidelor purinice s-a folosit metoda izotopilor radioactivi
cu ajutorul creia s-au stabilit precursorii atomilor ce alctuiesc nucleul purinic (fig.64).
Glicocol

CO2
Acid
aspartic

Metiltetrahidrofolat
N

Formiltetrahidrofolat
Glutamin

Fig. 64. Reprezentarea schematic a provenienei atomilor ce alctuiesc nucleul purinic

al bazelor azotate
Procesul de biosintez a bazelor azotate purinice utilizeaz n calitate de prim precursor Dribozo-5-fosfatul care, n urma unei succesiuni de transformri enzimatice trece n acid inozinic. n
etapa urmtoare, acidul inozinic este convertit n acid adenilic i respectiv acid guanilic.

48
Prima reacie a cii de biosintez const n interaciunea ribozo-5-fosfatului cu o molecul
de ATP cu formarea fosforibozil-pirofosfatului (PRPP). ATP-ul se scindeaz n AMP i pirofosfat,
iar acesta din urm d o reacie de pirofosforilare a ribozo-5-fosfatului sub aciunea ribozofosfatpirofosfat-kinazei:
AMP

ATP
O

CH 2 O P

Ribozofosfatpirofosfat-kinaza

CH 2 O P

POPO
-5-Fosforibozilpirofosfat

-D-Ribozo-5-fosfat

Fosforibozilpirofosfatul astfel format sufer apoi o aminare n poziia 1 cu ajutorul grupei

amidice din glutamin, n prezena ionilor de magneziu, ntr-o reacie de dublu schimb catalizat de
o enzim specific numit amino-fosforibozil-transferaz. n urma acestei transformri se mai formeaz acid glutamic i pirofosfat, reacia fiind nalt specific deoarece radicalul pirofosfat din poziia 1 a ribozei nu poate fi substituit cu nici un radical asemntor din punct de vedere structural. La
acest nivel al cii biosintetice are loc totodat i conversia anomerului al restului de riboz n
anomer :
Glu PP i

Gln
O

CH 2 O P

Mg 2+

H2 N

CH 2 O P

Amido-fosforiboziltransferaza
POPO
5-Fosforibozil-1-amin

-5-Fosforibozil-pirofosfat

Fosforibozilamina rezultat sufer o reacie de condensare cu glicocolul la nivelul grupei

sale aminice, sub aciunea fosforibozil-glicinamid-sintetazei i n prezen de ATP i Mg2+. n urma
acestei reacii se formeaz glicinamid-ribonucleotidul n care legtura C N ce unete restul de
riboz cu cel de glicocol este sub forma anomeric i reprezint viitoarea legtur glicozidic a
nucleotidului ce urmeaz a fi sintetizat:
Gly
ATP
H2N

CH2 O P

ADP+Pi
Mg2+

H2N CH2 CO NH

CH2 O P

Fosforibozil-glicinamidsintetaza

5-Fosforibozil-1-amin

Glicinamid-ribonucleotid

Glicinamid-ribonucleotidul accept o grupare formil de la acidul N5,N10-metilentetrahidrofolic dnd natere N-formil-glicinamid-ribonucleotidului:

49
H2N CH 2 CO NH

CH 2 O P

Metilen-THF

THF

Glicinamid-ribonucleotid

O = CH NH CH

CO NH
O

H
I
N

CH 2 O P
sau

C=O
I
H

NH

Ribozofosfat

N-Formil-glicinamid-ribonucleotid

N-formil-glicinamid-ribonucleotidul astfel rezultat este capabil s reacioneze n continuare

cu glutamina, n prezena unei molecule de ATP n calitate de donor de energie i sub aciunea catalitic a fosforibozil-glicinamid-transferazei cu formarea N-formil-glicinamidin-ribonucleotidului:
H
I
N

ATP
C=O
I
H

NH

Gln

Glu

H
I
N

ADP+Pi

Fosforibozil-glicinamidtransferaza

C=O
I
H

HN

NH

Ribozofosfat

Ribozofosfat
N-Formil-glicinamidinribonucleotid

N-Formil-glicinamidribonucleotid

Prin eliminarea unei molecule de ap i cu ajutorul energiei din ATP se formeaz n continuare 5-amino-imidazol-ribonucleotidul care, sub aciunea fosforibozil-aminoimidazol-carboxilazei
fixeaz o molecul de CO2 trecnd n 5-amino-4-carboxi-imidazol-ribonucleotid. Sistemul enzimatic ce catalizeaz formarea acestui compus este alctuit din dou subuniti ce pot cataliza conversia
n etape a substratului, ambele etape fiind dependente de energia din ATP:
H
I
N

HN

ATP
C=O
I
H

NH

Ribozofosfat
N-Formil-glicinamidinribonucleotid

ADP+Pi
Mg2+

H2O

H2N

Ribozofosfat
5-Amino-imidazolribonucleotid

50
CO2

HOOC

Fosforibozil-aminoimidazol-carboxilaza

H2N

Ribozofosfat
5-Amino-imidazol4-carboxi-ribonucleotid

Atomul de azot N1 al heterociclului imidazolic este introdus n continuare printr-o reacie pe

care o d 5-amino-imidazol-4-carboxi-ribonucleotidul cu acidul aspartic, cnd se formeaz 5 amino imidazol 4 N succino - carboxamido-ribonucleotidul. Pe parcursul acestei reacii, care
este activat n prezena ionilor Mg2+, se consum o nou molecul de ATP n calitate de donor de
energie. Noul produs astfel rezultat pune n libertate acid fumaric trecnd n 5-amino-imidazol-4carboxamid-ribonucleotid. Acesta accept, n cursul unei reacii catalizat de fosforibozilaminoimidazol-carboxamid-formil-transferaz, o grupare formil de la formil-tetrahidrofolat, la nivelul gruprii sale 5-amino, dnd natere precursorului imediat al acidului inozinic, care este 5formamido-imidazol-4-carboxamid-ribonucleotidul:

HOOC

ATP

ADP+P i

Asp
Mg 2+

H 2N

COOH
I
CH 2
I
CH NH CO
I
COOH

H 2N

Ribozofosfat

Ribozofosfat

5-Amino-imidazol4-carboxi-ribonucleotid

Fumarat

H 2 N CO

H 2N

5-Amino-imidazol-4-N-succinocarboxamido-ribonucleotid

Formil-THF

H 2 N CO

N
THF

Ribozofosfat
5-Amino-imidazol-4carboxamid-ribonucleotid

NH
I
C=O
I
H

Ribozofosfat

5-Formamido--imidazol-4carboxamid-ribonucleotid

Penultimul produs al procesului biosintetic este supus apoi aciunii IMP-ciclo-hidrolazei

cnd are loc o ciclizare prin eliminarea unei molecule de ap:

51
O
N

H2N CO

H2O

HN

IMP-ciclo-hidrolaza

NH
I
C = O RibozoI
fosfat
H

Ribozofosfat

5-Formamido--imidazol-4carboxamid-ribonucleotid

Acid inozinic (IMP)

Calea de biosintez a acidului inozinic este un proces endergonic pe parcursul cruia se consum 5 moli de ATP pentru fiecare mol de IMP nou sintetizat.
Aceast secven metabolic este inhibat specific de antibioticele azaserin i sulfonamid
i de antimetabolitul 6-diazo-5-oxo-norleucin (DON), acesta din urm fiind frecvent folosit la
combaterea paraziilor intestinali. Din punct de vedere structural, azaserina i DON-ul sunt analogi
ai glutaminei:
H2N CO CH 2 CH2 CH COOH
I
NH2
Glutamin

N = N = CH CO CH2 CH2 CH COOH

I
NH2
DON

N = N = CH CO O CH2 CH COOH
I
NH2
Azaserin

H2N

O
II
S NH R
II
O
Sulfonamide

Azaserina izolat din mediul de cultur al unor specii aparinnd genului Streptomyces blocheaz transferul grupei NH2 din gruparea amidic a glutaminei la 5-fosforibozil-1-pirofosfat,
acionnd ca un inhibitor competitiv, dar i transferul grupei NH2 a grupei amidice a glutaminei la
-N-formil-glicinamid-ribonucleotid. Se presupune c mecanismul de aciune al azaserinei se realizeaz prin intermediul modificrilor n aciunea catalitic a transferazelor corespunztoare. DON-ul
acioneaz printr-un mecanism asemntor. Sulfonamidele, care sunt analogi structurali ai acidului
p-aminobenzoic, ca i aminopterina, blocheaz etapele de transfer a radicalilor formil n care intervine acidul metenil-tetrahidrofolic.
Folosirea n terapeutic a analogilor structurali ai acidului folic pentru tratamentul cancerului se bazeaz pe capacitatea acestor compui de a inhiba biosinteza acizilor nucleici.
Acidul inozinic este precursorul comun imediat, folosit n biosinteza nucleotidelor purinice
Aceasta nseamn c adenina i guanina nu se sintetizeaz sub form liber ci sub forma
nucleotidelor corespunztoare, adic acidul adenilic (AMP) i respectiv acidul guanilic (GMP).
Biosinteza acidului adenilic se realizeaz prin reacia acidului inozinic cu acidul aspartic cu
formare de acid adenilo-succinic. n aceast reacie donorul de energie este GTP-ul, iar radicalul

52
succinat este fixat la nivelul atomului C6 al acidului inozinic. n continuare, acidul adenilo-succinic
este transformat n acid adenilic n urma eliminrii unei molecule de acid fumaric:
O
N

HN

GDP+P i

GTP
Asp

H 2O

CH 2 O P

Acid inozinic (IMP)

HOOC CH CH
I
NH

COOH

Fumarat

CH 2 O P

Acid adenilo-succinic

NH 2
N

CH 2 O P

Acid adenilic (AMP)

Biosinteza acidului guanilic (GMP) decurge n dou etape distincte. n prima faz, acidul
inozinic este dehidrogenat cu formare de acid xantilic, iar acesta din urm este apoi aminat n faza
urmtoare cu formare de acid guanilic. Spre deosebire de procesul de biosintez a acidului adenilic,
n acest caz donorul de energie este reprezentat de ctre ATP:
O
1/2 O2

HN
N

N
O

CH2 O P

Acid inozinic (IMP)

H2O

53
O

Gln
N

HN
O

AMP+PPi

ATP

N
I
H

Glu

CH2 O P

Acid xantilic
O
N

HN
H 2N

CH 2 O P

Acid guanilic (GMP)

Nucleozid-trifosfaii corespunztori (ATP i respectiv GTP) se formeaz sub aciunea

fosfokinazelor specifice (nucleozid-monofosfokinaza i respectiv nucleozid-difosfokinaza). n aceste
reacii ATP-ul joac att rol de donor de energie ct i acela de donor de radicali ortofosfat:
ATP

ADP

AMP

ATP

ADP
ATP

ADP

ATP
GMP

ADP

ATP
GDP

ADP
GTP

VI.1.2. Biosinteza nucleotidelor pirimidinice

Mononucleotidele pirimidinice se sintetizeaz prin utilizarea n calitate de precursori a unor
compui cu mas molecular mic (acid aspartic, amoniac, dioxid de carbon). Proveniena atomilor
heterociclului pirimidinic a fost demonstrat prin utilizarea metodei izotopilor radioactivi ca i n
cazul nucleotidelor purinice (fig.65).
NH3

O
HN
Aspartat
O

N
H

CO2

Fig. 65. Reprezentarea schematic a provenienei atomilor ce alctuiesc bazale azotate

pirimidinice

54
Formarea nucleozidului, adic legarea componentei glucidice la nucleul pirimidinic are loc
dup biosinteza acestuia din urm, deci total diferit comparativ cu nucleozidele i nucleotidele
purinice.
Procesul de biosintez a nucleotidelor pirimidinice a fost mai intens studiat pe diferite tulpini microbiene i pe unii mutani ai acestora. Muli autori presupun c la vertebrate, biosinteza
nucleotidelor pirimidinice ar putea avea loc dup un mecanism asemntor.
Prima etap a acestui proces const n carboxilarea acidului aspartic n prezena carbamilfosfatului i sub aciunea specific a aspartat-transcarbamilazei care este o enzim reglatoare
alosteric. Acidul carbamil-aspartic care se formeaz n urma acestei reacii este apoi convertit n
acid L-dihidro-orotic prin deshidratare , sub aciunea dihidro-orotidazei. Dihidro-orotatul astfel
format este ulterior oxidat la acid orotic sub aciunea dihidroorotat-dehidrogenazei, o enzim nalt
specific, FAD-dependent. n etapa urmtoare, acidul orotic reacioneaz cu 5-fosforibozil-1pirofosfatul, sub aciunea orotidin-5-fosfat-pirofosforilazei cu formare de orotidil-5-fosfat sau acid
orotidilic (OMP):
HO
COOH
P
I
O
CH
2
II
H2N C O P + I
AspartatCH NH2
transcarbamilaza
I
COOH

Carbamil-fosfat

Acid
aspartic
O
II

H2O

CH2

H2N

CH COOH

C
O

N
I
H
Acid N-carbamilaspartic
O
II

FADH2

FAD

HN

HN
Dihidroorotidaza O

O
C

COOH Dihidroorotatdehidrogenaza

COOH
O

N
H

H
Acid L-dihidroorotic

Acid
orotic

O
II
PRPP

PPi

HN
COOH
O

Orotidin-5'-fosfatpirofosforilaza

CO2

N
O

CH2 O P

Orotidil-5'-fosfat
(OMP)

Orotidilfosfatdecarboxilaza

55
O
II
HN
O

N
O

CH2 O P

Acid uridilic
(UMP)

Acidul uridilic ia natere prin decarboxilarea acidului orotidilic. La rndul su, el poate fi
ulterior fosforilat cu formarea nucleozid-difosfatului i a nucleozid-trifosfatului corespunztor, conform reaciilor:
ATP

ADP

UMP

UDP

ATP

ADP

UDP

UTP

Acidul uridin-trifosforic (UTP) poate fi aminat la atomul C4 cu formare de acid citidin-5trifosforic. Aceast reacie este endergonic, avnd loc cu consum de ATP, iar donorul gruprii
aminice este amoniacul la microorganisme, respectiv glutamina la mamifere:
O
HN
O

N
O

O
O
O
II
II
II
CH2 O P O ~ P O ~ P OH
I
I
I
OH
OH
OH

NH3
(Gln)

H2O
(Glu)

CTP-sintetaza

UTP
NH 2
I
N
O

N
O

O
O
O
II
II
II
CH 2 O P O ~ P O ~ P OH
I
I
I
OH
OH
OH

CTP

VI.2. Biosinteza deoxiribonucleotidelor

Deoxiribonucleotidele se sintetizeaz pe calea reducerii ribozei la 2-D-deoxiriboz la nivelul
ribonucleotidelor. Att la Escherichia coli ct i n celulele animale, n aceste reacii sunt utilizate n
calitate de substrate ribonucleozid-difosfaii. Hidrogenul necesar procesului de reducere provine de

56
la NADPH, prin intermediul unei proteine specifice numit tioredoxin ce conine dou resturi
apropiate de cistein. Acestea pot trece reversibil din forma redus n cea oxidat asigurnd n felul
acesta transferul hidrogenului. Tioredoxina poate fi deci oxidat i redus reversibil, oscilnd ntre
formele disulfidic i respectiv ditiolic. Conversia tioredoxinei din forma oxidat n cea redus este
catalizat de tioredoxin-reductaz, o enzim NADP-dependent:
S

NADPH+H

NADP

Tioredoxin

SH
Tioredoxin

Tioredoxin-reductaza

Tioredoxin
oxidat

SH
Tioredoxin
redus

Forma redus a tioredoxinei transfer cei doi protoni ribonucleozid-difosfatului acceptor

care trece n deoxiribonucleozid-trifosfat, aceast reacie fiind catalizat de ribonucleotidreductaz:
SH
Ribonucleoziddifosfat

+ Tioredoxin
SH

Ribonucleotid-reductaza

Tioredoxin
redus

S
Deoxiribonucleozid+ Tioredoxin
difosfat

H2O

S
Tioredoxin
oxidat

n afar de tioreductaz, protonii pot fi cedai i de ctre glutationul redus. Glutationreductaza catalizeaz n acest caz reducerea glutationului oxidat (deci forma disulfidic) cu ajutorul
NADPH-ului. n procesul transferulul hidrogenului de la glutationul redus la ribonucleotidreductaz intervine o nou protein specific numit glutaredoxin. Prin reducerea ADP, GDP,
CDP i UDP sub aciunea catalitic a sistemelor enzimatice specifice (ribonucleotid-reductaze) se
formeaz deoxiribonucleotidele corespunztoare (dADP, dGDP, dCDP i dUDP). Deoarece n
structura ADN-ului nu intr uracilul, este necesar conversia acestuia n timin. Formarea
deoxitimidin-monofosfatului (dTMP) se realizeaz fie pe calea metilrii dUMP care, la rndul lui,
se obine prin scindarea hidrolitic a dUDP, fie prin dezaminarea dCMP.
Reacia de metilare a dUMP este catalizat de timidilat-sintetaz, enzim n care rolul de
cofactor este jucat de N5, N10-metilen-tetrahidrofolat:

57
O

Metilen-THF

THF

HN

CH3

HN
Timidilat-sintetaza
N

Deoxiribozo5'-fosfat

Deoxiribozo5'-fosfat

dUMP

dTMP

VI.3. Biosinteza nucleozid-difosfailor i nucleozid-trifosfailor

Pentru a putea participa la biosinteza catenelor polinucleotidice ale acizilor nucleici,
ribonucleozid-monofosfaii i deoxiribonucleozid-monofosfaii trebuie s fie activai sub forma
nucleozid-trifosfailor corespunztori. Reaciile prin care se formeaz aceti compui bogai n
energie se realizeaz cu participarea ATP-ului n calitate de donor de energie i radicali ortofosfat i
sub aciunea catalitic a kinazelor specifice. Astfel, nucleozid-monofosfat-kinazele catalizeaz transferul

unui rest ortofosfat de la ATP la nucleozid-monofosfaii corespunztori cu formarea

nucleozid-difosfailor respectivi. n continuare intervin nucleozid-difosfat-kinazele ce convertesc

nucleozid-difosfaii n nucleozid-trifosfaii necesari biosintezei ARN i ADN:
ATP

ADP

AMP

ATP
ADP

ATP

ADP

ATP
ATP

GMP
ATP

ADP

ADP
GTP

GDP
ADP

UMP

ATP

ADP

UDP

UTP

CTP

i respectiv
ATP

ADP

dADP

dATP
ATP

ADP

dGDP

dGTP

ATP

ADP

dCDP
ATP
dTMP

dCTP

ADP

ATP
dTDP

ADP
dTTP

CDP

58
VI.4. Biosinteza propriu zis a acizilor nucleici
n ultima etap a biosintezei acizilor nucleici se realizeaz ncatenarea nucleozid-trifosfailor
n polinucleotide. Acest proces se realizeaz n mod diferite pentru ARN i ADN.
VI.4.1. Biosinteza acizilor deoxiribonucleici
n celulele vii, macromoleculele de ADN se sintetizeaz din unitile structurale de baz,
adic

din

deoxiribonucleozid-5-monofosfaii

corespunztori

activai

sub

form

de

deoxiribonucleozid-5-trifosfai. n procesul biosintetic este implicat o enzim nalt specific numit ADN-polimeraza ce a fost evideniat att la eucariote ct i la procariote. n afara celor patru
nucleozid-trifosfai precursori (adic dATP, dGTP, dCTP i dTTP), ADN-polimeraza mai necesit
prezena ionilor de Mg2+ i a unei catene de ADN cu rol de matri. Formarea legturilor
fosfodiesterice ntre resturile de deoxiribonucleotide se realizeaz sub aciunea ADN-polimerazei
conform urmtoarei scheme:
Mg2+
ADN + x dATP + y dGTP + z dCTP + u dTTP
ADN-polimeraz

ADN [dAMPx dGMPy dCMPz dTMPu] + (x + y + z + u)PPi

Succesiunea ncatenrii deoxiribonucleotidelor este determinat de matria de ADN, mai

exact de succesiunea bazelor azotate purinice i pirimidinice din aceasta. Deoarece n reacia de mai
sus particip ca matri o caten polinucleotidic preexistent, biosinteza ADN-ului este un proces
de tip replicativ (sau de copiere) i poart numele de replicare a ADN-ului. Acest proces se realizeaz printr-un mecanism complex care presupune despiralizarea dublu-helixului, desfacerea legturilor de hidrogen dintre bazele azotate complementare (sau pereche) ale celor dou catene i separarea acestora n cel puin o unitate de replicare.
n felul acesta, la nivelul punctului de replicare, molecula de ADN are aspectul literei T,
aceast structur fiind denumit bifurcaie de replicare. Despiralizarea dublu-helixului de ADN n
bifurcaia de replicare necesit prezena aa-numitelor proteine de dezrsucire a ADN i respectiv a
enzimelor de desfurare sau de relaxare. Catenele complementare astfel separate vor servi drept
matri pentru formarea noilor molecule de ADN.
n cadrul procesului biosintetic, elongarea catenelor de ADN se realizeaz numai n sensul
53 pe calea legrii radicalului ortofosfat din nucleozid-trifosfai cu grupele OH terminale ale
catenelor polideoxiribonucleotidice aflate n cretere (fig. 66).
ADN-polimeraza catalizeaz formarea legturii fosfodiesterice numai dac deoxinucleozidtrifosfatul respectiv este complementar cu baza azotat din matri conform regulilor de mperechere a nucleotidelor n moleculele de ADN. Deoarece ntre bazele azotate purinice i pirimidinice
exist o coresponden strict, pe fiecare matri de ADN (deci pe fiecare din cele dou catene

59
polinucleotidice ale moleculei mam) se sintetizeaz o caten nou, complementar. n felul acesta,
dintr-o molecul de ADN iau natere dou noi molecule absolut identice ntre ele i identice cu molecula iniial. Fiecare molecul nou de ADN conine o caten polideoxiribonucleotidic veche
(cea care a servit drept matri) i o caten nou sintetizat. Din aceast cauz, procesul de biosintez
a ADN mai este cunoscut i sub numele de replicare semiconservativ a ADN-ului.

n
e
t
a
C

n
e
t
a
C

e
h
c
e
v

u
o
n

z
a
B
O

H
OI C

i
P
P

H
O

OIP

a
z
a
r
e
m
i
l
o
p
N
D
A

MATRI

H
.
I.
O

O
~ H
OIP I O

O
~ H
OIP I O

O
H

z
a
B
O

H
OI C

H
IO

Caten
nou
I
O
I
CH 2

Caten
veche

Baz

M
A
T

R
HO P = O
O
I
CH 2

I
O

Baz

OH

Fig.66. Reprezentarea schematic a formrii legturilor fosfodiesterice n procesul

ncatenrii deoxiribonucleotidelor

60
Multe informaii referitoare la mecanismul intim al replicrii semiconservative a ADN-ului
au fost obinute abia n ultimii ani. Cercetrile efectuate pe diveri mutani de Escherichia coli au
condus la constatarea c de fapt exist trei AND-polimeraze distincte care au fost notate cu I, II i
III. Acestea catalizeaz biosinteza ADN-ului din deoxinucleozid-trifosfai n prezena unei matrie
i a unui poliribonucleotid ce joac rol de iniiator (ARN- primer) al sintezei noii catene.
ADN-polimeraza I posed att activitate polimerazic ct i activitate 35-exonucleazic,
respectiv 53-exonucleazic (fig. 67 i 68).
Situs de hidroliz pentru
activit.3'>5' exonucleazic
Caten n
crestere
,

5'

P
A

OH

3'

Caten
matrit
,

3'

5'

Fig. 67. Reprezentarea schematic a activitii 35-exonucleazice a ADN-polimerazei I

Situs pentru activitate
polimerazic

5'

Caten n
crestere
,

OH

3'

5'

3'

3'
Caten
matrit
,

5'

Situs de hidroliz pentru

activit.5'>3' exonucleazic

Fig. 68. Reprezentarea schematic a reaciei i a aciunii 53-exonucleazice a ADNpolimerazei I

Activitile polimerazic i respectiv 5-3-exonucleazic ale ADN-polimerazei I se pot

manifesta coordonat n sensul c poate avea loc cataliza simultan a polimerizrii unui nucleotid la
captul 3 ntr-o singur caten rupt a ADN-ului bicatenar. Din aceast cauz, activitatea 5-3exonucleazic joac un rol foarte important n excizia dimerilor pirimidinici care se formeaz n

61
urma iradierii cu raze ultraviolete a moleculelor de ADN. Deci, ADN-polimeraza I poate juca un rol
esenial n repararea ADN-ului.
Activitatea 35-exonucleazic, corelat cu activitatea polimerazic a ADN-polimerazei I
poate cataliza excizia nucleotidelor nemperecheate cu bazele azotate ale matriei i s corecteze n
felul acesta greelile care au fost comise n timpul ncatenrii.
ADN-polimeraza II este foarte asemntoare cu ADN-polimeraza I din punct de vedere
structural i funcional dar nu posed activitate 53-exonucleazic.
ADN-polimeraza III are, de asemenea, unele trsturi comune cu ADN-polimeraza I dar este
lipsit de activitate exonucleazic. La celulele de E. coli ea constituie adevrata ADN-polimeraz,
ndeplinind un rol esenial n replicarea cromozomului bacterian.
Celulele eucariote conin trei ADN-polimeraze n nucleu, notate cu , i i o ADNpolimeraz mitocondrial. Acestea nu posed activitate exonucleazic.
Un interes deosebit a aprut n ultimul timp n legtur cu descoperirea n virusurile oncogene a unei ADN-polimeraze-ARN-dependente care se mai numete revers-transcriptaz. Aceast
enzim este implicat n biosinteza ADN-ului prin utilizarea n calitate de matri a catenei de ARN.
ADN-ul rezultat pe aceast cale poate servi drept matri pentru multiplicarea virusului sau se poate
integra n genomul celulei gazd, reprezentnd cauza apariiei tumorilor.
Transcrierea invers reprezint o violare a dogmei centrale a biologiei moleculare, deoarece
revers-transcriptaza condiioneaz transferul informaiei genetice de la ARN la ADN.
VI.4.2. Mecanismul molecular al replicrii ADN
Deoarece catenele din molecula parental de ADN sunt antiparalele, structura unei catene
este orientat n direcie 53, iar structura celeilalte catene n direcia 35. Carena care, n
bifurcaia de replicare are sensul 53 se numete caten matri conductoare, iar cealalt (care
are sensul 35) reprezint catena matri ntrziat. Toate ADN-polimerazele realizeaz
ncatenarea mononucleotidelor numai n sensul 53. Din aceast cauz, biosinteza ADN-ului se
realizeaz n mod diferit pe cele dou catene matri. Astfel, pe catena matri conductoare, biosinteza ADN-ului se face n mod continuu, n direcia 53, iar pe catena matri ntrziat procesul
se desfoar discontinuu, n fragmente scurte tot n direcia 53, fragmente ce se asambleaz
ulterior.
O serie de studii experimentale au demonstrat faptul c biosinteza ADN-ului pe catena matri ntrziat debuteaz prin formarea unor poliribonucleotide scurte, ce conin aproximativ 100 de
ribonucleotide, fragmente denumite ARN-primer. Enzima care catalizeaz biosinteza ARN-primer
se numete ARN-primaz i este o ARN-polimeraz-ADN-dependent care direcioneaz biosinteza
de la captul 5 spre captul 3 n catena de ADN aflat n cretere (fig.57).

62
La captul 3 OH din ARN-primer, ADN-polimeraza III sintetizeaz un fragment de ADN
complementar catenei matri. Atunci cnd acest fragment de ADN nou sintetizat ajunge la circa
1000 de deoxiribonucleotide (la eucariote aproximativ 200), intervine ADN-polimeraza I care, posednd i activitate 53-exonucleazic, hidrolizeaz i ndeprteaz ARN-primer din catena mixt ARNADN. ndeprtarea fragmentului de ARN din catena aflat n cretere las anumite goluri
ntre fragmentele de ADN care poart numele de fragmente Okazaki (fig.69), dup numele autorului
care le-a pus n eviden prima dat. Golurile dintre fragmentele Okazaki sunt apoi completate datorit activitii polimerazice a ADN-polimerazei I care alungete segmentele de ADN de la captul
3 aflat mai aproape. n final, fragmentele de ADN astfel sintetizate pe catena ntrziat se unesc
formnd o copie complementar nentrerupt a catenei matri de ADN.
Aceast asamblare are loc sub aciunea ADN-ligazei, o enzim ce catalizeaz formarea legturilor fosfodiesterice ntre fragmentele de ADN rezultate, pe seama energiei furnizate de NADH n
celula bacterian i respectiv de ATP la bacteriofagi i n celulele animale. Din cele de mai sus rezult c replicarea ADN se face continuu pe o caten i discontinuu pe cealalt caten matri, fapt
ce poate explica creterea simultan n direcia 53 a ambelor catene n bifurcaia de replicare.
3'

Helicaza
oooo

5'

3'

Protein

oo o
o
5'
3'
5'
Caten matrit
conductoare

5'
3'
Caten matrit
ntrziat

3'

o oo
o

5'
o
o oo
3'

ARN-primer

Fragmente
Okazaki

5'

63
3'
5'
Caten matrit
conductoare
5'

oo

3'
Caten matrit
ntrziat

3'

o oo
o

oo

Punct de legare

Fragment de ADN dup

ndeprtarea ARN-primer

5'

3'
5'
Caten matrit
conductoare
5'

oo

3'
Caten matrit
ntrziat

3'

o oo
o

oo

5'

3'
Legarea catenelor de ADN
sub actiunea ADN-ligazei

5'

Fig. 69. Reprezentarea schematic a biosintezei catenelor polideoxi-ribonucleotidice pe

catena matri conductoare i catena matri ntrziat

Dup realizarea replicrii intervine ADN-giraza, enzim ce confer moleculelor de ADN

nou sintetizate starea superspiralizat necesar ndeplinirii rolului lor biologic. S-a demonstrat c
procesul replicrii semiconservative are un caracter universal, acest mecanism fiind specific att
procariotelor ct i eucariotelor. Prin intermediul acestui proces, informaia genetic este transmis
fidel celulelor fiice, fapt ce asigur att continuitatea fenomenului ereditar ct i reproducerea organismelor vii. La eucariote, replicarea ADN-ului se realizeaz n etapa S din interfaz, iar la procariote ea este potenial continu, pe tot parcursul ciclului celular, n condiii optime de cultivare.
Replicarea ADN-ului se realizeaz sub un control celular strict, efectuat la mai multe niveluri. La nivel molecular exist mecanisme care asigur corecia replicrii prin ndeprtarea
nucleotidelor mperecheate greit cu nucleotidele complementare din matri. n acest mecanism de
corecie este implicat ADN-polimeraza I. Erorile de inserare a nucleotidelor datorate aciunii unor
ageni mutageni sau ineficienei activitii de corectare a ADN-polimerazei I reprezint una din po-

64
sibilitile de apariie a mutaiilor prin care, alturi de recombinare, se asigur variabilitatea necesar procesului evolutiv.
VI.4.3. Biosinteza acizilor ribonucleici
Toate cele trei tipuri de ARN celular (ARNm, ARNt i ARNr) se sintetizeaz printr-un mecanism complex cunoscut sub numele de transcrierea ADN. Acest proces const n transmiterea informaiei

genetice de la ADN la ARN pe calea reproducerii exacte a secvenei

deoxiribonucleotidelor din molecula de ADN n succesiunea ribonucleotidelor din moleculele de

ARN. Rolul principal n acest proces biosintetic l joac enzima ARN-polimeraza-ADNdependent care necesit n calitate de substrate cei patru ribonucleozid-5-trifosfai (ATP, GTP,
CTP i UTP), a ionilor de Mg2+ i Mn2+, precum i prezena n calitate de matri a ADN-ului dublu
catenar. Reacia general catalizat de ARN-polimeraza-ADN-dependent poate fi redat schematic
astfel:
x ATP + y GTP + z CTP + u UTP

ADN
2+
Mg ; Mn2+

AMP x GMP y CMP z UMP u + (y + z + z + u) PP i

Conform reprezentrilor actuale, biosinteza ARN-ului sub aciunea ARN-polimerazei-ADNdependente se desfoar n mai multe etape:
legarea matriei;
iniierea transcrierii;
elongarea;
terminarea transcrierii.
Prima etap (legarea matriei) const n interaciunea ARN-polimerazei cu ADN-ul matriceal cnd se formeaz un complex binar ce poate lega n continuare ribonucleozid-trifosfatul pentru
a iniia sinteza lanului polinucleotidic de ARN.
Dei ARN-polimeraza manifest afinitate pentru toate segmentele din molecula de ADN, ea
se ataeaz stabil numai la nivelul anumitor fragmente ce aparin uneia din cele dou catene ale
ADN-ului matri. Aceste fragmente reprezint semnale de start ale matriei de ADN i se numesc
promotori. Promotorii reprezint fragmente cu pn la 50 de nucleotide localizate imediat naintea
genei sau grupului de gene a crei informaie genetic trebuie transcris n ARN.
ARN-polimerazele sunt molecule proteice mari, unele din ele fiind oligomere (adic au molecula alctuit din mai multe subuniti). De exemplu, ARN-polimeraza din Escherichia coli este o
enzim oligomer ce conine n molecul patru subuniti notate cu , , i i ioni de zinc. Masa sa molecular este de 495.000 Da, iar structura cuaternar a apoenzimei este de tipul [
2]
.
Se presupune c aceast enzim recunoate secvena nucleotidic a promotorului prin subunitatea .

65
Ataarea ARN-polimerazei la promotor determin despiralizarea parial a dublu-helixului de ADN
prin scindarea punilor de hidrogen dintre bazele azotate complementare ale catenelor matriei cu
formarea aa-numitului complex deschis care este capabil s declaneze biosinteza ARN-ului (fig.
70).
Succesiunea bazelor azotate din promotor nu este transcris n molecula de ARN nou sintetizat.
La eucariote se cunosc trei tipuri principale de ARN-polimeraze:
ARN-polimeraza I (A) este localizat preponderent n nucleol i catalizeaz biosinteza
ARN-ului ribozomal;
ARN-polimeraza II (B) este localizat n principal n nucleoplasm i este implicat n
biosinteza ARN-ului nuclear heterogen care include i ARN-ul informaional;
ARN-polimeraza III (C) este localizat n nucleoplasm i particip la biosinteza ARNului de transport i a altor tipuri de ARN cu mas molecular mic. n organismele superioare pot
exista cte mai multe ARN-polimeraze aparinnd fiecruia din tipurile descrise mai sus.

Fig. 70. Reprezentarea schematic a mecanismului de aciune a ARN-polimerazei ADNdependente

A doua etap o reprezint iniierea biosintezei catenei de ARN sub aciunea ARNpolimerazei care debuteaz prin reacia dintre ATP sau GTP cu o a doua molecul de ribonucleozidtrifosfat cu formarea unui dinucleotid care mai conine un radical ortofosfat la captul 3:

66
A sau G

PPi

3'
P

OH

P ~

P ~

OH

ADN

5'

A sau G

OH

Imediat ce biosinteza catenei de ARN a nceput, subunitatea se desprinde din complexul

format cu ARN-polimeraza i se poate ataa la o alt molecul de miez-enzim sau polimeraz minimal (care are structura cuaternar de tipul 2). Catena polinucleotidic se lungete apoi sub
aciunea miez-polimerazei.
Iniierea transcrierii poate fi inhibat n mod specific la procariote de rifamicin, iar la eucariote de -amanitin care este o toxin puternic produs de ciupercile aparinnd genului Amanita.
Elongarea catenei de ARN se realizeaz prin legarea succesiv a cte unui nou
ribonucleotid la grupa OH liber din poziia 3 a dinucleotidului, respectiv polinucleotidului precedent.
Formarea legturilor fosfodiesterice ntre ribonucleotide se realizeaz numai n direcia
53, ceea ce nseamn c ARN-polimeraza ncepe s acioneze la captul 3 al catenei de ADN
ce urmeaz a fi transcris. Aceasta nseamn c matria i transcriptul su sunt antiparalele. ARNpolimeraza primete informaia pentru biosinteza ARN-ului de la ADN-ul matri. Catena acestuia
formeaz cu catena de ARN aflat n cretere un hibrid molecular ADN ARN temporar prin intermediul punilor de hidrogen ce se stabilesc ntre bazele azotate complementare. Deci, catena de
ARN ce se sintetizeaz este complementar din punctul de vedere al structurii sale primare cu catena de ADN utilizat drept matri (fig. 71).
La un anumit nivel al genomului, numai una din catenele de ADN servete drept matri,
cealalt caten nefiind transcris. Aceasta nseamn c transcrierea este un proces asimetric.
Procesul de elongare a catenei de ARN este inhibat de antibioticul streptolidigin care este
un inhibitor al ARN-polimerazei. Actinomicina D inhib att ADN-polimerazele ct i ARNpolimerazele. Antibioticele care blocheaz procesul de transcriere i manifest efectul de inhibiie
acionnd asupra subunitilor ale ARN-polimerazei.

67

3'

5'
Matrit de ADN
A

NuTP
ADN-polimeraza-ADN-dependent
PPi

3'

5'
Matrit de ADN
A

ARN nou sintetizat

5'

3'

Separarea
catenelor

3'

5'
A

Matrit de ADN

+
U

5'

ARN nou sintetizat

3'

Fig. 71. Reprezentarea schematic a mecanismului transcrierii ADN

Terminarea transcrierii are loc atunci cnd n procesul de elongare este ntlnit de ctre
complexul ADN-matri ARN nou format ARN-polimeraz un aa-numit semnal de terminare
care este reprezentat de un anumit bloc de baze azotate perechi din catena de ADN ce a servit drept
matri. Cel mai adesea, semnalul de terminare este de tipul:
T T T T T.....
A A A A A.....

n acest moment are loc eliberarea catenei de ARN nou sintetizat i dezorganizarea complexului de transcriere. Unele semnale de terminare sunt recunoscute de ARN-polimeraz, iar altele
de aa-numitul factor care este o protein specific cu masa molecular de 200.000 Da. Din cele
de mai sus rezult c biosinteza catenei de ARN are loc cu o despiralizare a dublu helixului de ADN
n zona ce urmeaz a fi transcris i cu apariia aa-numitului ochi de transcriere:

68

Ochi de transcriere

Fragment de ADN ce urmeaz a fi transcris

Pe msur ce transcrierea se desfoar, n urm se reface structura dublu catenat a ADNului transcris. Aceasta nseamn c spre deosebire de replicarea ADN-ului, care este semiconservativ, transcrierea acestuia este un proces complet conservativ. Moleculele de ARN astfel sintetizate
sunt apoi supuse maturrii post-translaionale care se poate realiza prin mai multe ci:
clivarea catenelor lungi de ARN care pot fi n unele cazuri poligenice, deci conin mai
mult de o secven codificatoare;
adugarea de nucleotide la captul 3 al transcriptului;
ataarea de nucleotide la captul 5 al transcriptului;
unele modificri ale bazelor azotate (cum ar fi metilarea) n transcript, modificri ce se
produc cel mai frecvent n ARNt.
Numrul i profunzimea acestor modificri difer de la o specie la alta i condiioneaz existena unor nucleotide neobinuite n ARNt.

VII. BIOSINTEZA PROTEINELOR

n toate organismele vii, biosinteza proteinelor reprezint principalul proces prin intermediul
cruia se asigur expresia informaiei genetice codificat n succesiunea bazelor azotate din moleculele de ADN ntr-un tip de metabolism, specific fiecrei specii de vieuitoare n parte. Principala
caracteristic a procesului de biosintez a proteinelor const n exactitatea sa deosebit. Structura
proteinelor este programat genetic i se conserv din generaie n generaie, moleculele proteice
sintetizndu-se de mai multe ori n acelai organism, fr abateri eseniale de la succesiunea dat a
aminoacizilor. Aceast exactitate deosebit este asigurat de ctre mecanismele moleculare ce stau
la baza cilor de biosintez proteic.
La baza procesului complex de biosintez a proteinelor st aa-numitul principiu al sintezei
complementare pe matri, principiu ce se mai ntlnete att la replicarea ADN-ului ct i la biosinteza ARN-ului. n procesul de biosintez a proteinelor se folosete drept matri ARNm, acesta
fiind purttorul informaiei genetice de la ADN la ribozomi, organite subcelulare ce reprezint sediul biosintezei proteice. Determinarea genetic a procesului biosintetic vizeaz structura primar a
proteinelor nou sintetizate, adic succesiunea resturilor de aminoacizi din catenele polipeptidice.

69
Aceast succesiune este n concordan cu secvena deoxiribonucleotidelor din segmentul de ADN
ce codific informaia necesar biosintezei unei anumite proteine. Aceast relaie dintre acizii nucleici i proteine este mediat de aa-numitul sistem biochimic de codificaredecodificare.
VII.1. Codul genetic
n ncercarea de a descifra mecanismele care stau la baza codificrii succesiunii resturilor de
aminoacizi din catenele polipeptidice (structura primar) n procesul de biosintez a proteinelor, dea lungul timpului au fost emise mai multe ipoteze referitoare la codul genetic. ntr-o prim ncercare, Gamow a calculat cifra 20 (ce corespunde numrului de aminoacizi proteinogeni) prin combinarea nucleotidelor, considernd c informaia genetic nu este stocat ntr-o singur caten a moleculei de ADN ci n ambele. Admind acest postulat, autorul propune aa-numitul cod rombic conform cruia trei perechi succesive de baze azotate aparinnd ambelor catene formeaz 20 de combinaii n care intr o baz din prima caten, a doua pereche de baze complementare din ambele
catene i respectiv o baz din a treia pereche, baz ce aparine celei de-a doua catene. Acest lucru
poate fi reprezentat astfel:
C
A

T
A

Numrul total al romburilor este cu mult mai mic dect C44 = 256. Deoarece structura ADNului asigur condiii limit de combinare, diagonala mic a rombului unete ntotdeauna adenina cu
timina sau guanina cu citozina. Numrul 20 se obine dac se iau n considerare ca fiind reale (n
sensul codificrii aminoacizilor) formele stng i dreapt ale romburilor asimetrice:
A
A

A
T

A
C

Din cele 20 de romburi ce se pot obine, 8 prezint simetrie bilateral i 12 nu au aceast

simetrie (fig. 72).

70
C

A
A

G
T

A
T

Fig.72. Reprezentarea grafic a codului rombic genetic

Pot fi gsite i argumente stereochimice ce vin n sprijinul acestei teorii. Astfel, deoarece n
fiecare romb intr bazele azotate din trei perechi complementare succesive, codul este acoperit, adic dou baze situate de aceeai parte a rombului sunt comune pentru dou romburi vecine. Prin
aceasta se limiteaz drastic posibilitile succesiunilor celor 20 de litere (adic a succesiunilor aminoacizilor din viitoarele catene polipeptidice (fig. 73).

a,e,i i o se combin cu c,a,d,e,f,g,h,i,l,m,n,o,p,u i v

d,g,h i n se combin cu a,b,c,d,e,g,h,i,k,m,o,r,s i t
l,m i p se combin cu a,e,i,l,m,o i p
k,s i t se combin cu g,h,k,n,s i t
b,c i r se combin cu d,f,g,h,n,u i v
f,u i v se combin cu a,b,c,e,i,o i r

Fig. 73. Reprezentarea combinrii succesiunilor vecine conform codului rombic

71
S-au semnalat ncercri de a verifica valabilitatea acoperii codului rombic prin compararea
diferitelor combinri ale romburilor cu structura primar a unei polipeptide cunoscute (folosindu-se
pentru aceasta insulina i adrenocorticotropina). Aceste ncercri au demonstrat c succesiunea
aminoacizilor nu poate fi codificat prin codul rombic. n dezacord cu datele experimentale se afl
i teoria matriei bicatenare. ntr-adevr, n procesul propriu-zis al biosintezei proteice se copie informaia din ARNm care nu posed o structur reglatoare bicatenar. Plecnd de la aceste considerente, Gamow a propus aa-numita teorie a codului triunghiular. Autorul consider c orice aminoacid este codificat de cte o triplet de baze azotate pe care le localizeaz n unghiurile unui triunghi.
Numrul 20 se obine dac se iau n considerare toate triunghiurile obinute prin rotire i imagine n
oglind, ca n exemplul de mai jos:
A

G
A

T
G

G
A

A
A

Nici aceast teorie nu corespunde ns realitii, date experimentale ulterioare demonstrnd

codificarea fiecrui aminoacid din catenele polipeptidice nou sintetizate de cte o succesiune de trei
baze azotate (triplet) dintr-o singur caten polinucleotidic.
Reprezentrile actuale asupra transmiterii informaiei genetice converg ctre o prere unanim acceptat conform creia acest proces este extrem de complex i const, n esen, n copierea
pe moleculele de ARN a informaiei stocate n succesiunea bazelor azotate din catenele
polinucleotidice ale moleculelor de ADN i transcrierea (traducerea) acestei informaii n succesiunea resturilor de aminoacizi din catenele polipeptidice.
Plecnd de la faptul c n moleculele de ADN exist patru tipuri de baze azotate, iar n structura proteinelor intr de regul 20 de aminoacizi, prin calcul matematic se constat c secvena
nucleotidic suficient pentru codificarea unui aminoacid este reprezentat de o combinare de trei
nucleotide adiacente, aceasta primind numele de triplet sau codon. Din cele patru nucleotide se pot
forma C43 = 64 de triplete diferite, fapt ce ofer posibilitatea codificrii tuturor celor 20 de aminoacizi proteinogeni.
Raportul numeric nucleotide/aminoacizi = 3/1 a fost determinat i pe cale experimental.
Decodificarea codului genetic, adic stabilirea compoziiei nucleotidice concrete i a succesiunii
tripletelor pentru toi cei 20 de aminoacizi proteinogeni a fost elucidat relativ recent. Deoarece n
procesul de biosintez a proteinelor se decodific informaia coninut n ARNm, codonii se reprezint grafic de regul sub forma tripletelor de ribonucleotide (fig. 74).

72
P L V
h e a yC
e u s
l

G
A
C
U
G
A
C
U
G
A
C
U
G
A

U C AG U C A G

AG

G U

A
G

A C

A
C U G A
C
U

GA

G U
C

C
U

UC

A
CU
UG
G A UG AC
C

UG

etc.
C
A
G
U
C
A
G
U
C
A
G
U
C
A

Fig. 74. Reprezentarea schematic a codonilor din ARNm

Aceiai informaie, codificat ns sub forma tripletelor de deoxiribonucleotide, este coninut i n catena de ADN care a servit drept matri la biosinteza ARNm. Din cei 64 codoni posibili,
numai trei dau semnalul de terminare a translaiei i anume tripletele UAA, UAG i UGA, ele fiind
denumite codoni terminatori sau codoni non sens. Ali doi codoni (AUG i GUG) marcheaz debutul biosintezei catenei polipeptidice, acetia fiind denumii codoni de iniiere sau codoni iniiatori. Deoarece pentru codificarea celor 20 de aminoacizi proteinogeni exist 64 3 = 61 codoni,
deci un numr triplu de posibiliti, unii aminoacizi pot fi codificai de doi sau chiar mai muli
codoni, acetia fiind cunoscui sub numele de codoni sinonimi (tab. VIII).

Tabelul VIII
Codonii din ARNm(*
Aminoacidul

Codonul din ARNm

Aminoacidul

Codonul din ARNm

Alanin

UGG, GCC, AGC

Izoleucin

AUU, AAU

Acid aspartic

AAC, AUG, AGC

Leucin

AUU, UUG, UUC,

Acid glutamic

AAG, AUG, AGC

Arginin

GCC, AAG, UGC, AGC

Lizin

AAA, AAU

AAU, AUC, AAC

Metionin

AUG

Prolin

ACC, UCC, GCC

Serin

UCU, UCG, UCC,

Asparagin
Cistein

UUG
UUU, UUC

UUU

73
Fenilalanin

AGG, UGG, GGC

AGC, UCA, AGU

Glicocol

AAC, AAG, AUG

Tirozin

Glutamin

ACC, AUC

Treonin

Histidin

AUU
ACC, AUC

Triptofan

UGG

Valin

UUG, AUG

*) Ochoa, S. 1965
De exemplu, serina este codificat de 6 codoni: UCU, UCC, UCA, UCG, AGU i AGC.
Aceast particularitate de codului genetic poart numele de degenerare. Dei codul genetic este
degenerat, el se caracterizeaz printr-o ambiguitate foarte redus. Nici un codon, n afar de GUG,
nu codific mai mult de un aminoacid. Codonul GUG codific formil-metionina la nceputul translaiei, dar codific i valina atunci cnd se situeaz n interiorul mesajului.
O alt caracteristic a codului genetic o constituie universalitatea sa. Aceasta nseamn c
un anumit codon codific acelai aminoacid la toate organismele vii. O a treia caracteristic a codului genetic o constituie faptul c acesta este neacoperit i fr virgule. Aceasta nseamn c tripletele succesive, vecine ntr-o gen nu se acoper, adic nu au nucleotide comune. Deci, codonii reprezint uniti de sine stttoare, nesuprapuse. Pe de alt pare, ntre sfritul unei triplete i nceputul
tripletei urmtoare nu exist nucleotide izolate. n ultimul timp s-a stabilit c n anumite situaii,
procesul de biosintez a proteinelor poate avea loc i n mitocondrii unde informaia genetic este
codificat n succesiunea bazelor azotate ce intr n structura ADN-ului mitocondrial (fig. 75).
NUCLEU
ADN genomic

ARN

ARN
Cicloheximid

-Amanitin

Protein

CITOSOL
Protein
importat

MITOCONDRIE
(sau cloroplast)
ADN mitocondrial

ARN

Acridin,
bromur de
etidiu

Protein sintetizat
n mitocondrii

Cloramfenicol,
eritromicin,
tetraciclin

Fig. 75. Reprezentarea schematic a biosintezei proteinelor n mitocondrii (cloroplaste)

74

VII.2. Biosinteza proteinelor

Procesul propriu-zis de biosintez a proteinelor se realizeaz la nivelul ribozomilor n mai
multe etape: activarea aminoacizilor, iniierea translaiei, translaia propriu-zis, terminarea translaiei i modificarea post-translaional a proteinelor.
VII.2.1. Activarea aminoacizilor

Biosinteza proteinelor este, poate, cel mai complex proces biochimic ce are loc in vivo. Prima etap a acestui proces biosintetic este reprezentat de etapa de recunoatere. n aceast etap,
fiecare aminoacid dizolvat n citosol recunoate prin intermediul unei enzime specifice ARNt-ul su
specific cu care formeaz un complex activ de tipul aminoacil-ARNt. Aceast recunoatere este
nalt specific n sensul c fiecrui aminoacid proteinogen i corespunde un anumit ARNt i se realizeaz datorit naltei specificiti de substrat a enzimei ce catalizeaz aceast reacie i care se numete aminoacil-ARNt-sintetaza. Aceast enzim conine trei situsuri de legare, din care dou sunt
nalt specifice: un situs de legare a aminoacidului, unul pentru ARNt i al treilea situs (cu o specificitate mai larg) pentru legarea ATP-ului.
Interaciunea dintre aminoacil-ARNt-sintetaz i substratul nucleotidic (ARNt) depinde de
succesiunea nucleotidic a acestuia din urm. S-a demonstrat astfel, c nlturarea a dou dublete
nucleotidice (succesiunea GG de la extremitatea catenei poliribonucleotidice i succesiunea AC
localizat aproximativ la mijlocul acesteia), sau nlocuirea lor cu alte nucleotide, determin pierderea capacitii moleculei de ARNt de a se lega la centrul activ al enzimei (fig. 76). S-a concluzionat
de aceea c aceste fragmente nucleotidice sunt direct implicate n mecanismul legrii moleculei de
ARNt la nivelul centrului activ al aminoacil-ARNt-sintetazei.

Fig. 76. Reprezentarea succesiunilor nucleotidice din ARNt ce interacioneaz cu centrul

activ al aminoacil-ARNt-sintetazei
Studiul mecanismului recunoaterii fiecrei molecule de aminoacid de ctre ARNt-ul su
specific reprezint unul din aspectele care s-au bucurat de o atenie deosebit din partea cercettorilor. Procesul recunoaterii directe este exclus dat fiind faptul c extremitatea catenei de ARNt ce
leag aminoacidul este universal, adic absolut identic pentru toate moleculele de ARNt. S-a demonstrat experimental c recunoaterea ARNt de ctre aminoacidul su specific se face indirect,

75
prin intermediul aminoacil-ARNt-sintetazei, adic la nivelul enzimei implicate direct n activarea
aminoacizilor. Numai acest mecanism explic existena a 20 de enzime necesare biosintezei complecilor aminoacil-ARNt pentru cei 20 de aminoacizi proteinogeni. Aceasta nseamn c
aminoacil-ARNt-sintetazele sunt efectiv implicate n transmiterea informaiei genetice deoarece
catalizeaz legarea fiecrui aminoacid de ARNt-ul su specific.
Implicarea ARNt n succesiunea reaciilor ce alctuiesc procesul de biosintez proteic este
actualmente pe deplin elucidat. Exist ns un detaliu (demonstrat experimental) ce merit o atenie
deosebit. Antibioticul numit puromicin distruge multe specii de microorganisme prin blocarea
biosintezei proteinelor n celulele acestora. S-a demonstrat experimental c puromicina nu acioneaz n primele etape ale procesului n care se formeaz complecii aminoacil-ARNt, ci intervine abia
n etapa a 3-a n care se realizeaz biosinteza propriu-zis a catenelor polipeptidice, chiar i n concentraii foarte mici de doar 0,03 M. Aciunea s-a se explic prin faptul c puromicina este un analog structural al nucleotidului terminal din ARNt (fig. 77).
NH 2
N

HO CH

N(CH 3)2
N

HO CH 2
O

NH
I
O = C CH CH
I
NH 2

Puromicin

O CH

N
N

O
I
O = C CH R
I
NH 2
Nucleotidul terminal
din ARN t

Fig. 77. Analogia structural dintre puromicin i nucleotidul terminal al catenei de ARNt
Altfel spus, aciunea puromicinei este un exemplu tipic de aciune a unui antimetabolit care,
datorit similitudinii structurale, nlocuiete molecula de aminoacil-ARNt inserndu-se n catena
polipeptidic i stopnd desfurarea n continuare a procesului elongrii. Experimental s-a demonstrat c n prezena acestui antibiotic, biosinteza catenelor polipeptidice se ntrerupe la nivelul formrii de oligopeptide ce conin la captul C-terminal un rest de puromicin.
Formarea complexului aminoacil-ARNt debuteaz prin activarea aminoacidului cu ajutorul
energiei din ATP, procesul avnd loc sub aciunea acelorai aminoacil-ARNt-sintetaze:

76
PP i

ATP

H 2N CH COOH
I
Aminoacil-ARN t-sintetaza
R

O
II
E [H 2N CH C ~ O AMP]
I
R

Aminoacid

Aminoacil-AMP
(complex ES)

Se formeaz deci complexul hiperreactiv dintre enzim i dou din cele trei substrate, adic
aminoacidul i molecula de ATP. Acest complex interacioneaz apoi cu cel de-al treilea substrat
care este ARNt-ul specific aminoacidului activat:
O
II
E [H2N CH C ~ O AMP]
I
R

ARNt

Aminoacil-AMP

AMP Enzim
O
II
H2N CH C ~ ARNt
I
R
Aminoacil-ARN t

Sub aceast form, aminoacizii sunt api de a intra n procesul propriu-zis de biosintez a
proteinelor.
VII.2.2. Biosinteza propriu-zis a proteinelor (translaia)

Complecii aminoacilARNt sintetizai n citoplasm sunt transportai spre ribozomi unde

are loc procesul propriu-zis de biosintez a catenelor polipeptidice ce vor alctui viitoarele molecule
proteice. Etapa ribozomal a biosintezei proteinelor poart numele de translaie deoarece acest proces const n traducerea (sau translarea) informaiei genetice stocat n succesiunea
mononucleotidelor ce formeaz ARNm n succesiunea resturilor de aminoacizi din proteina nou
sintetizat. Translaia informaiei genetice din ARNm n structura primar a proteinelor se realizeaz
la rndul ei n trei etape distincte:
iniierea translaiei;
elongarea sau translaia propriu-zis;
terminarea translaiei.
VII.2.2.1. Iniierea translaiei

n aceast etap are loc recunoaterea semnalului de start din catena polinucleotidic a
ARNm,, asocierea subunitilor robozomale, legarea complexului aminoacilARNt corespunztor la
aceste subuniti i formarea complexului ribozomal activ. Alegerea complexului aminoacilARNt
corespunztor se face n funcie de complementaritatea dintre bazele azotate ce intr n alctuirea
punctului de start i bazele azotate din anticodonul existent n ARNt. Existena punctului de start
strict localizat creeaz posibilitatea ca procesul biosintetic s nceap de la o secven strict determinat a nucleotidelor din ARNm numit codon de iniiere. Cel mai frecvent, codonul de iniiere
este codonul metioninei, adic tripleta AUG.
n structura ribozomului se ntlnesc dou situsuri specifice:

77
situsul A, numit i situs acceptor sau situs aminoacilic;
situsul P, numit i situs donor sau situs peptidilic.

situs A

situs P

Iniierea biosintezei proteice debuteaz prin asocierea moleculei de ARNm la suprafaa subunitii mici a ribozomului, ntr-un punct situat la aproximativ 10 nucleotide de captul 5 al catenei, deoarece citirea programului genetic stocat n ARNm se face n sensul 53. n limitele unei
subuniti ribozomale se pot ncadra spaial doar doi codoni. Formarea complexului ARNm subunitate mic este declanat de aa-numitul factor de iniiere IF-3. La complexul binar astfel format se ataeaz apoi complexul aminoacil-ARNt iniiator i o molecul de GTP, acest proces fiind
dependent de factorul de iniiere IF-2. La procariote, complexul aminoacil-ARNt iniiator este reprezentat de N-formil-metionil-ARNt, ceea ce nseamn c procesul biosintetic ncepe ntotdeauna
cu N-formil-metionina, iar la eucariote, procesul de biosintez a catenelor polipeptidice ncepe ntotdeauna cu metionina.
Iniiatorul se fixeaz n situsul P al ribozomului, moment n care anticodonul din molecula
de ARNt iniiator se mperecheaz n mod specific (n funcie de complementaritatea bazelor azotate) cu codonul AUG sau GUG din ARNm. Iniierea se desvrete prin legarea subunitii
ribozomale mari cu formarea ribozomului funcional activ.
VII.2.2.2. Elongarea catenei polipeptidice (translaia propriu-zis)
Biosinteza oricrei catene polipeptidice ncepe ntotdeauna de la captul N-terminal care
este ocupat de N-formil-metionin la procariote, iar la eucariote de metionin. La rndul ei, faza de
elongare a catenei polipeptidice se realizeaz n trei etape distincte:
a) legarea urmtorului complex aminoacil-ARNt;
b) transpeptidarea;
c) translocaia.
Prima etap a elongrii debuteaz cu stabilirea n situsul A al complexului aminoacil-ARNt
corespunztor codonului liber din acest situs. Recunoaterea acestui codon din ARNm se face datorit complementaritii bazelor sale azotate cu tripleta de baze azotate ale anticodonului din ARNt
care transport aminoacidul specificat de acel codon.

78
Aminoacil-ARN t I

Aminoacil-ARN t II
ARN m
A P

Datorit acestor complementariti ntre succesiunile de baze azotate ale codonului din
ARNm i anticodonului din ARNt, succesiunea resturilor de aminoacizi din viitoarea caten
polipeptidic este decis dinainte.
Transpeptidarea. Dup legarea celei de-a doua molecule de aminoacil-ARNt, se desfoar
a doua etap a elongrii care presupune sinteza legturii peptidice ntre cei doi aminoacizi sub aciunea peptidil-transferazei:
O
O
II
II
H2N CH C ~ ARN t I + H2N CH C ~ ARN t II
I
I
R1
R2

Aminoacil-ARNt I

Aminoacil-ARNt II

ARN t I

Peptidil-transferaz

O
O
II
II
H2N CH C N CH C ~ ARN t II
I
I
I
H R2
R1
Dipeptidil-ARN t II

Dup ce s-a format legtura peptidic, ARNt care a cedat aminoacidul rmne nc n situsul
P, iar dipeptidil-ARNt format se afl nc legat de situsul A.
Cea de-a treia faz a elongrii o reprezint translocaia. Acest fenomen se realizeaz n prezena factorului de elongare EF-G numit i translocaz i const n glisarea ribozomului de-a lungul moleculei de ARNm, pe parcursul unei triplete. Factorul EF-G determin eliberarea moleculei de
ARNt I din situsul P. n momentul urmtor, n situsul P astfel eliberat se transfer dipeptidil-ARNt
II. Se elibereaz astfel situsul A care, la rndul lui, este capabil s lege un nou aminoacil-ARNt.
Mecanismul fazei de elongare a catenei polipeptidice din cadrul procesului de transcripie a
fost reprezentat schematic foarte explicit de ctre Yost, H. nc n 1972 cnd studiul mecanismelor
intime ale procesului de biosintez a proteinelor era nc n faza de pionierat (fig. 78).

79
Met
Gly

50 S

Tre

Val

Ala

Ser

ARN t

ARN t

U
G G

U
A C

ARN t

ARN t
A

G U C

G C U
A

ARN t

G
C

U
A

etc.

ARN m

30 S

Fig. 78. Reprezentarea schematic a fazei de elongare a catenei polipeptidice (Yost, H.

1972)
VII.2.2.3. Terminarea translaiei

Finalizarea procesului de biosintez a catenei polipeptidice are loc atunci cnd complexul
aminoacil-ARNt n ajunge la aa-numitul codon de terminare sau codon non-sens. Exist trei
codoni non-sens care stopeaz acest proces i anume tripletele UAA, UAG i UGA. Aceti codoni
i manifest rolul lor de stopare a elongrii catenei polipeptidice datorit faptului c n citoplasm
nu exist nici un ARNt care s conin anticodoni complementari cu codonii de terminare.
Codonii de terminare aflai n situsul A sunt recunoscui de unele proteine specifice solubile
numite factori de eliberare care sunt notate cu EF-1 i EF-2. Factorul EF-1 recunoate codonii
UAA i UAG, iar factorul EF-2 recunoate codonii UAA i UGA. Celulele eucariote conin doar un
singur factor de terminare notat cu CRF care este capabil s recunoasc toi cei trei codoni nonsens. Deseori se ntlnete i situaia cnd doi codoni non-sens sunt localizai succesiv pentru o mai
bun garanie a terminrii translaiei.
n urma interaciunii specifice a factorului de eliberare cu codonul non-sens i cu ribozomul,
are loc o modificare a specificitii de aciune a peptidil-transferazei din subunitatea mare a ribozomului. n acest moment, enzima catalizeaz transferul restului peptidil din complexul peptidilARNt aflat n situsul P pe molecula de ap:
O
II
H2N CH CO NH CH CO .............NH CH C ~ ARN t n
I
I
I
R2
Rn
R1

80
H2O

ARNt n
H2N CH CO NH CH CO.......... NH CH COOH
I
I
I
R2
Rn
R1

Aceasta nseamn c are loc hidroliza legturii esterice dintre radicalul peptidil i ARNt, iar
n urma acestui proces catena polipeptidic nou sintetizat de detaeaz de ribozom.
Acest mecanism al biosintezei catenelor polipeptidice demonstreaz faptul c doar structura
primar a proteinelor este codificat genetic. Nivelele superioare de organizare structural ale proteinelor, fiind condiionate n mod direct de structura loc primar, se desvresc post-translaional
datorit interaciunilor specifice dintre resturile de aminoacizi ce intr n alctuirea catenelor
polipeptidice respective.
VII.2.3. Modificarea post-translaional a proteinelor

Deseori, catenele polipeptidice eliberate de pe ribozom sufer unele modificri posttranslaionale. La procariote de exemplu, este ndeprtat gruparea formil de la restul de N-formilmetionin cu care ncepe procesul biosintetic.
Cum nu toate catenele polipeptidice posed la extremitatea loc N-terminal restul de metionin, att la procariote ct i la eucariote se realizeaz deseori hidroliza specific a restului de metionin chiar i n timpul elongrii, sub aciunea unor aminopeptidaze specifice.
Dup ncheierea translaiei pot avea loc i alte modificri n structura catenelor polipeptidice
cum ar fi: formarea punilor disulfidice, hidroxilarea prolinei i lizinei n cazul colagenului i altor
proteine, ataarea resturilor glucidice la asparagin n cazul glicoproteinelor, fosforilarea grupelor
OH ale resturilor de serin sau treonin, legarea gruprilor prostetice de apoproteine etc. n urma
acestor modificri se contureaz structura spaial final a proteinelor, de aceasta depinznd modul
n care ele i vor exercita funciile biologice specifice.
VII.2.4. Unele particulariti ale biosintezei proteinelor

Viteza de biosintez a proteinelor este, n general, foarte mare. La bacterii de exemplu, se

ncateneaz ntre 20 i 40 de aminoacizi pe secund, iar la eucariote aproximativ un aminoacid pe
secund. Aceast vitez crescut de ncatenare poate fi explicat, printre altele, prin faptul c moleculele de ARNm pot fi translate simultan de mai muli ribozomi. Complecii activi formai din
ARNm, doi sau mai muli ribozomi i catena polipeptidic aflat n cretere se numesc polisomi
(fig.79).

81
Caten
polipeptidic

ARNm

Fig. 79. Alctuirea unui sistem polisomic

Dei biosinteza proteinelor are loc cu o vitez mare, aminoacizii sunt condensai n lanurile
polipeptidice n succesiunea strict indicat de structura primat a ARNm prin mperecherea
codonilor acestuia cu anticodonii din ARNt. Cu toate acestea, pot avea loc unele inserri greite ale
resturilor de aminoacizi. Acest fapt poate fi explicat prin aceea c orice codon 3 xyz 5 din
ARNm se cupleaz antiparalel cu anticodonul 5 xyz 3 din ARNt. Primele dou nucleotide din
codon, ncepnd cu captul 5 sunt constante, iar ultimul nucleotid, cel de la captul 3, poate fi
diferit. Acest grad de libertate explic parial degenerarea codului genetic. De exemplu, cei patru
codoni care codific treonina au ntotdeauna secvena AC la captul 5, dar se deosebesc prin
nucleotidul din poziia 3 care poate fi U, C, A sau G. Acest aspect al degenerrii codului genetic
este cunoscut sub numele de ipoteza concordanei neechivalente. Anticodonii unor ARNt conin
deseori nucleotide modificate la captul 5 cum ar fi de exemplu acidul inozinic (IMP). Acestea
corespund poziiei neechivalente n codon. Drept urmare, o anumit molecul de ARNt poate recunoate unul, doi sau chiar trei codoni diferii n care primele dou nucleotide sunt identice.
Numrul de catene polipeptidice care se sintetizeaz pe o molecul de ARNm este diferit la
procariote i eucariote. Captul 5 al catenei de ARNm din celulele eucariote ncepe cu 7-metilguanozina. Se presupune c acest derivat al guaninei joac un rol important n citirea punctului de
start al biosintezei catenei polipeptidice. ntotdeauna, codonul AUG aflat cel mai aproape de acest
capt al ARNm constituie codonul de iniiere. Nici un alt codon de tip AUG nu poate juca acest rol
de iniiere. Aceasta nseamn c la eucariote, pe fiecare molecul de ARNm se poate sintetiza o singur caten polipeptidic.
La procariote, ARNm nu are adausuri la capete dar conine mai muli codoni de iniiere i de
terminare pe aceiai caten polinucleotidic. Fragmentul din ARNm care codific n acest caz o caten polipeptidic se numete cistron. Deci, ARNm la procariote este de obicei policistronic, n timp
ce la eucariote este ntotdeauna monocistronic.
VII.2.5. Reglarea celular a biosintezei proteinelor
Celula vie are capacitatea de a-i regla biosinteza proteinelor n funcie de condiiile variabile de existen. Celulele tuturor organismelor vii conin unele proteine ce se sintetizeaz cu aceiai
vitez, indiferent de condiiile de mediu. Aceste proteine sunt cunoscute sub numele de proteine

82
constitutive. Alte proteine se sintetizeaz cu viteze variabile, n funcie de modificrile condiiilor
de via. Viteza de biosintez a acestor proteine este reglat la nivel celular prin dou mecanisme
complexe numite inducie i represie.
Inducia este procesul prin care are loc declanarea sau intensificarea biosintezei proteinelor
(inclusiv enzimelor) ca urmare a ptrunderii n celul a unei anumite substane. Proteinele a cror
biosintez se regleaz prin intermediul induciei se numesc proteine inductibile. Substanele care
stimuleaz viteza de biosintez a proteinelor inductibile se numesc inductori. De regul, inductorul
este reprezentat de substratul unei enzime induse, un compus nrudit structural cu acesta etc.
Represia este fenomenul prin care are loc ntreruperea biosintezei unei proteine sau a unui
grup de proteine (inclusiv enzime) care poart numele de proteine represibile. Rolul de represor
poate fi jucat de produsul final al unei secvene metabolice, unele substane micromoleculare etc.
Reglarea biosintezei proteinelor n general i a enzimelor n special pe calea induciei i
represiei se realizeaz la nivelul transcrierii, adic la nivelul biosintezei ARNm pe o caten de ADN
utilizat drept matri. Conform ipotezei elaborat de Jacob i Monod, la baza procesului de reglare
a biosintezei proteinelor la procariote se afl operonul. Acesta este reprezentat de o serie de gene
structurale care codific prin intermediul ARNm biosinteza proteinelor corespunztoare. n imediata
vecintate a genelor structurale sunt localizate genele operatoare care controleaz intrarea n funciune i respectiv decuplarea genelor structurale, determinnd n felul acesta nivelul activitii lor,
adic viteza cu care sunt folosite la procesul biosintetic. Este posibil ca fiecare grup de gene structurale care codific biosinteza unor proteine cu funcii conexe s posede o gen operatoare proprie.
Gena operatoare, mpreun cu genele structurale formeaz operonul. Gena operatoare se
nvecineaz n cromozom cu o gen numit promotor care este capabil s recunoasc ARNpolimeraza i s declaneze transcrierea genelor structurale. Activitatea promotorului depinde de
gena operatoare i de interaciunea acesteia cu diferite substane i se afl sub controlul genei reglatoare care nu este vecin cu operonul, ea fiind localizat ntr-o cu totul alt zon a cromozomului,
deoarece i exercit funcia prin intermediul unei proteine specifice numit represor.
Toi represorii se leag cu gena operatoare i blocheaz biosinteza ARNm i deci i biosinteza proteinelor corespunztoare. Represorul poate trece dintr-o form activ n una inactiv i invers,
numai forma activ fiind capabil s interacioneze cu gena operatoare. Mecanismul induciei
(fig.80) i represiei (fig.81) const n urmtoarele: represorul, sintetizat pe ARNm-ul care reprezint
copia genei reglatoare, se leag de gena operatoare.

83
OPERON
Gene structurale
Gen reglatoare

Gen operatoare

B
ADN

ARNm

ARNm

represor
enzima 1

inductor

enzima 2

proteine

represor
inactiv

Fig. 80. Reprezentarea schematic a mecanismului reglrii biosintezei proteinelor prin inducie

n consecin, este blocat accesul ARN-polimerazei la promotor i nu se poate realiza transcrierea genelor structurale. n aceast situaie nu se sintetizeaz ARNm, deci nici proteinele corespunztoare. Cnd n celul apare inductorul, acesta interacioneaz cu represorul, modificndu-i
conformaia i deci inactivndu-l. Represorul inactiv i pierde afinitatea fa de gena operatoare, iar
aceasta, eliberndu-se de sub blocajul represorului, cupleaz transcrierea genelor structurale pe care
le controleaz. n felul acesta este permis biosinteza ARNm-ului corespunztor i deci a proteinelor
codificate de acesta.

84
OPERON
Gene structurale
Gen reglatoare

Gen operatoare

ADN

represie

ARNm

ARNm

represor
activ
represor

enzima 1
S
corepresor

P1

enzima 2
P2

proteine
P

Fig. 81. Reprezentarea grafic a mecanismului reglrii biosintezei proteinelor prin represie

VII.2.6. Biosinteza heteroproteinelor

Componentele proteice ale heteroproteinelor de sintetizeaz dup mecanismele descrise mai
sus. Gruprile prostetice au ci proprii de biosintez, specifice fiecrei clase de compui de care
aparin (lipide, glucide etc.). Ionii metalelor se leag direct de apoproteinele lor pentru formarea
metaloproteinelor, iar radicalii ortofosfat necesari biosintezei fosfoproteinelor sunt luai ca atare din
citosol. Legarea celor dou componente se face n mod specific fiecrei clase. Astfel, catenele
polipeptidice ale glicoproteinelor leag componentele glucidice la nivelul resturilor de asparagin,
sau prin grupele carboxilice libere ale resturilor de acid aspartic i glutamic.
Fixarea componentei glucidice n procesul de biosintez a glicoproteinelor nu se face la ntmplare i este determinat de un cod asigurat de componenta proteic n primele etape ale sintezei, respectiv de primele resturi glucidice ncatenate n cazul etapei de desvrire a structurii
glicoproteinelor. S-a demonstrat experimental existena cert a unei uniti structurale a componentei glucidice de extremitatea nereductoare a catenei.
Din aceast cauz, cel mai adesea se ntlnesc secvene de tipul neuraminil (sau fucozil)
galactozil N-acetilglucozamin. n cazul glicoproteinelor rspunztoare de grupele sanguine,
secvenele terminare sunt specifice fiecrei grupe. Acizii sialici, fucoza i diferite oze se situeaz n
poziii terminale i se unesc prin legturi -glicozidice (-N-acetil-galactozamina i respectiv -

85
galactopiranoza n cazul grupelor sanguine A i B). Se consider c fixarea unui rest de acid sialic,
fucoz sau a unui anomer reprezint semnalul de terminare a sintezei componentei glucidice.
Localizarea componentelor glucidice n glicoproteine prezint o geometrie bine determinat,
fiind constituite prin ncatenarea regulat a unitilor diglucidice. ntr-o prim etap, conjugarea
ozelor cu holoproteinele este codificat de acestea din urm prin structura lor primar. n continuare, ncatenarea resturilor de N-acetilozamine i acizi uronici depinde de conformaia tridimensional a secvenei oligozaharidice Gal-Gal-Xil. Restul terminal de galactoz ndeplinete o funcie de
uronil-transferaz, cel de acid uronic funcia de N-acetil-ozaminil-transferaz, iar restul de Nacetilozamin ndeplinete funcia de uronozil-transferaz.
n 1964, n urma unor studii asupra conjugrii N-acetilglucozaminei cu resturile de
asparagin ale catenelor polipeptidice din componenta proteic, J. Montreuil a emis ipoteza codificrii de ctre componenta proteic a legturii glican-protein care este de tip 2-acetamido-1--[L-aspartamido-]-1,2-dideoxi-D-glucoz. n aceste experimente, autorul a obinut 8 glicopeptide prin
hidroliza pronazic a unor glicoproteine (orosomucoidul, ovomucoidul, IgG din diverse surse biologice, transferina etc.). Toate aceste glicopeptide conineau un -hidroxi-aminoacid (serin sau
treonin) legat direct de restul de asparagin la nivelul cruia se ataeaz componenta glucidic.
Numeroase glicoproteine posed secvena C-terminal menionat mai sus (Gal-Gal-Xil)
localizat n vecintatea punctului de conjugare glican asparagin. n urma unor experimente
(Neuberger 1968, Montreuil 1969, Spiro 1969 .a.) s-a concluzionat c nu este totui exclus ca
secvena Asn-X-Ser s aib aceiai semnificaie.
Autorii sus-menionai au generalizat noiunea de codificare artnd c grefarea unui rest
de N-acetil-glucozamin la nivelul unui rest de asparagin din catena polipeptidic se realizeaz
atunci cnd exist o triplet n care un rest de -hidroxi-aminoacid se afl n poziia b fa de restul
de asparagin cel mai apropiat de captul C-terminal al catenei polipeptidice. Cel mai elocvent n
acest sens este cazul ribonucleazelor B, C i D.
n aceste glicoproteine, componenta glucidic se ataeaz la nivelul restului Asn34 dei mai
exist nc alte 9 resturi de asparagin n molecul. Aceasta nseamn c secvena Asn34-Leu-Thr
reprezint secvena acceptor pentru componenta glucidic, iar resturile de asparagin din celelalte
secvene (Asn24-Tyr-Cys, Asn27-Gln-Met, Asn44-Thr-Phe, Asn62-Val-Ala, Asn67-Gly-Gln, Asn71-CysTyr, Asn94-Cys-Ala, Asn03-Lys-His i respectiv Asn113-Pro-Tyr) nu pot codifica cuplarea catenei
polipeptidice cu componenta glucidic (tab. IX).

86
Tabelul IX
Secvenele tripeptidice C-terminale din vecintatea punctului de conjugare a N-acetil-glucozaminei
i asparaginei n diferite glicoproteine(*
Glicoproteina

Secvena

Fibrinogen uman

Asn-Lys-Thr

IgG

Asn-Ser-Thr

Deoxiribonucleaza bovin

Asn-Ala-Thr

Ribonucleazele B, C i D bovine

Asn-Leu-Thr

Ribonucleaza de obolan

Asn-Cys-Thr sau Asn-Thr-Thr

Ribonucleaza porcin

Asn-Met-Thr sau Asn-Ser-Thr

Tiroglobulina uman

Asn-Ala-Thr

Orosomucoidul uman

Asn-Gly-Thr

Cazeina de vac

Asn-Val-Thr

Conalbumina

Asn-Val-Thr

Avidina

Asn-Leu-Thr

Transferina uman

Asn-Val-Thr

Lactotransferina uman

Asn-Gln-Thr

Bromelaina

Asn-Glu-Ser

IgM

Asn-Asp-Ser

Lactalbumina de vac

Asn-Ile-Ser

*) Montreuil,J. 1972
innd cont de aceste observaii, J. Montreuil propune o schem general a biosintezei catenelor oligoglucidice din glicoproteine. Prima etap o reprezint cuplarea unui rest de N-acetilglucozamin cu un rest de asparagin, codificarea fiind realizat de o secven de tipul Asn-X-Thr
sau Asn-X-Ser. n etapa urmtoare se realizeaz o serie de ncatenri repetate ale resturilor de oze,
dirijate de secvenele peptidice din vecintatea punctului de cuplare a celor dou componente, secvene diferite de prima sau care o nglobeaz pe aceasta i care sunt recunoscute de transferazele
implicate n procesul biosintetic.

87
GLICOPROTEINE

Dol-DP-GlcNAc
CMP-Man
GDP-Fuc
Pi

UDP-Gal
UDP-GlcNAc

UDP-GlcNAc

Dol-DP
Dol-DPGlc-NAcGlcNAc Man

Dol-MP

GDP-Man
Dol-MP-Glc
Dol-DPGlcNAcGlcNAcManManGlc

Dol-DPGlcNAcGlcNAc Man
Dol-MP Man

Dol-DPGlcNAcGlcNAcManMan
Protein
acceptor

Fig. 82. Reprezentarea grafic a glicozilrii proteinelor n hepatocite pe calea dolicolului

(Behrans, N. H., Tabora, E. 1978)

A treia etap o reprezint transglicozilarea, care este codificat de nucleul oligozaharidic

format n primele dou faze. Natura ozelor i punctul lor de cuplare depind de specificitatea
transferazelor care intervin n recunoaterea structurilor oligoglucidice aflate n cretere. n ultima
etap, cnd se realizeaz terminarea biosintezei componentei glucidice, acioneaz neuraminiltransferazele, fucozil-transferazele sau -glicozil-transferazele ce ataeaz ultimul rest glucidic.
Principala cale de biosintez a glicoproteinelor este calea dolicolului ce se realizeaz n
hepatocite (fig. 82).
n cazul cromoproteinelor, procesele de biosintez sunt mult mai complicate, dat fiind
structura gruprilor prostetice i complexitatea modului de legare a celor dou componente. n cale
ce urmeaz, vom analiza mai n detaliu procesele de biosintez a cromoproteinelor.
VII.2.7. Biosinteza hemoglobinei
Procesul de biosintez a hemoglobinei este un proces complex, strns legat de cile metabolice ale altor biomolecule (fig. 60) i se realizeaz n mai multe etape:
biosinteza nucleului porfirinic;
formarea protohemului;

88
biosinteza globinei;
legarea hemului de globin.
VII.2.7.1. Biosinteza nucleului porfirinic
Acest proces a fost studiat prin utilizarea metodei izotopilor radioactivi. Cu ajutorul acestei
metode s-a demonstrat c biosinteza nucleului porfirinic utilizeaz drept precursori glicocolul i
succinil-CoA, ceea ce nseamn c acest proces biosintetic este corelat cu metabolismul aminoacizilor i cu ciclul acizilor tricarboxilici (fig. 83). Fiecare heterociclu pirolic este sintetizat prin utilizarea a dou molecule de glicin i a dou molecule de succinil-CoA. n prima etap are loc o reacie
de condensare ntre glicocol i succinil-CoA sub aciunea -aminolevulinat-sintetazei.

Hemoglobine

Ciclul
Krebs

2H

Fe 3+

Protohem
4.99.1.1.

Succinil-CoA
2.3.1.

Feed back
negativ

Gly
CoA-SH + CO

Protoporfirina IX
1.3.3.4.

H 2O
O2

Protoporfirinogen III

Acid -aminolevulinic

1.3.3.3.
MITOCONDRIE

CO 2
O2

Coproporfirinogen III

Acid -aminolevulinic
4.2.1.24.

CITOSOL
2 H 2O

Porfobilinogen
4.3.1.8.

4 NH 3
H 2O

Hidroximetilbilan

4.2.1.75.

4 CO 2
Uroporfiinogen III

4.1.1.37

Coproporfirinogen III

Fig. 83. Reprezentarea schematic a interaciunilor dintre biosinteza porfirinelor i ciclul

Krebs (1.3.3.3.Coproporfirinogen-oxidaza; 1.3.3.4.Protoporfirinogen-oxidaza; 2.3.1.37.Aminolevulinat-sintaza;
4.1.1.37.Uroporfirinogen-decarboxilaza;4.2.1.24.Porfobilinogensintaza; 4.2.1.75.Uroporfirinogen III-sintaza; 4.3.1.8.Porfobilinogen-dezaminaza (sau
Hidroximetilbilan-sintaza); 4.99.1.1. Ferochelataza (sau Protohem-fero-liaza)

89
n calitate de cofactor enzimatic este utilizat piridoxal-5-fosfatul, iar ca produs intermediar
al transformrii se formeaz acidul -amino--cetoadipic. Prin decarboxilare, acesta trece apoi n aminolevulinat:
COOH
I
CH 2
I
+
CH 2
O

CH 2 COOH
I
NH 2

CoA-SH

-Aminolevulinatsintaza

C ~ S-CoA

Glicocol

COOH
I
CH 2
I
CH 2
I
C=O
I
H C COOH
I
NH 2

Succinil-CoA

CO 2

Acid -amino-ceto-adipic

COOH
I
CH 2
I
CH 2
I
C=O
I
CH 2
I
NH 2

Acid -aminolevulinic

n urmtoarea etap acioneaz enzima numit aminolevulinat-dehidrataza (sau

porfobilinogen-sintaza) cnd dou molecule de acid -amino-levulinic condenseaz cu formare de
porfobilinogen:
COOH
I
CH 2
I
C H2
I
C=O
I
CH 2
I
NH 2

COOH
I
CH 2
+
I
CH 2
I
O=C
I
H 2 N CH 2

2 H 2O
Porfobilinogensintaza

Acid -aminolevulinic
COOH
I
COOH CH 2
I
I
CH 2
CH 2
I
I

COOH
I
COOH CH 2
I
I
CH 2
CH 2
I
I

N
CH 2
I
NH 2

CH 2
I
NH 2

N
I
H

Porfobilinogen

n etapa urmtoare are loc cuplarea a patru molecule de porfobilinogen sub aciunea
porfobilinogen-dezaminazei cu formare de hidroximetil-bilan:

90
COOH
I
CH 2
I
CH 2
I

COOH
I
CH 2
I

4 NH

Porfobilinogendezaminaza
CH 2
I
NH 2

N
I
H

Porfobilinogen
COOH
I
CH 2
I
CH 2
I
HOOC CH

COOH
I
CH 2
I

NH

CH 2 CH 2 COOH

HN

HO CH 2

NH
CH 2
I
CH 2
I
COOH

HN

I
CH 2
I
COOH

CH 2 COOH
I
CH 2
I
CH 2
I
COOH

Hidroximetilbilan

Hidroximetilbilanul astfel rezultat poate forma uroporfirinogen I prin reacie spontan:

COOH
I
CH2
I
CH2
I
HOOC CH2

COOH
I
CH2
I
CH2 CH2 COOH

NH

HN

NH

HN

HO CH2

CH2
I
CH2
I
COOH

I
CH2
I
COOH

CH2 COOH

I
CH2
I
CH2
I
COOH

Hidroximetilbilan

91
COOH
I
CH2
I
CH2
I
HOOC CH2

CH2
I
CH2
I
COOH

COOH
I
CH2
I
CH2 CH2 COOH

NH

HN

NH

HN

I
CH2
I
COOH

CH2 COOH

I
CH2
I
CH2
I
COOH

Uroporfirinogen I

Sub aciunea uroporfirinogen IIIsintazei ns, hidroximetil-bilanul este convertit n

uroporfirinogen III, iar acesta din urm, prin decarboxilare sub aciunea uroporfirinogendecarboxilazei, trece n coproporfirinogen III:
COOH
I
CH 2
I
CH 2
I
HOOC CH 2

COOH
I
CH 2
I

HO CH 2

CH 2
I
CH 2
I
COOH

H2O

CH 2 CH 2 COOH

HN

NH

Uriporfirinogen IIIsintaza
NH

HN

I
CH 2
I
COOH

CH 2 COOH

I
CH 2
I
CH 2
I
COOH

Hidroximetilbilan
COOH
I
CH2
I
CH2
I
HOOC CH2

NH

COOH
I
CH2
I
CH2 CH2 COOH

HN

CO2

Uroporfirinogendecarboxilaza
NH
CH2
I
COOH

I
CH2
I
CH2
I
COOH

HN

CH2 COOH

I
CH2
I
CH2
I
COOH

Uroporfirinogen III

92

COOH
I
CH2
I
CH2
I
H3C

H3C

CH3
I

NH

HN

NH

HN

I
CH2
I
CH2
I
COOH

CH2 CH2 COOH

CH3

I
CH2
I
CH2
I
COOH

Coproporfirinogen III

Copropofirinogenul III joac rol de precursor pentru biosinteza protoporfirinei IX. Aceasta
din urm reprezint precursorul comun al gruprilor prostetice din structura hemoproteinelor, putnd ngloba fierul heminic sub aciunea unei chelataze specifice:
COOH
I
CH 2
I
CH 2
I
H3 C

CH 3
I
HN

NH

CH 2 CH 2 COOH

1/2 O 2

3 H 2O

CO 2

Coproporfirinogenoxidaza
H 3C

NH

HN

I
CH 2
I
CH 2
I
COOH

CH 3
I
CH 2
I
CH 2
I
COOH

Coproporfirinogen III
CH2
II
CH
I
H3C

NH

CH3
I
CH2 CH2 COOH

HN

1/2 O2

H3C

NH
I
CH2
I
CH2
I
COOH

HN

CH3

I
CH2
I
CH2
I
COOH

Harderoporfirinogen

3 H2O

CO2

Coproporfirinogenoxidaza

93

CH2
II
CH
I
H3C

H3C

CH3
I
CH = CH2

NH

HN

I
CH2
I
CH2
I
COOH

CH3

I
CH2
I
CH2
I
COOH

Protoporfirina IX

Protoporfirina IX astfel format poate intra n structura hemului, clorofilei, catalazei, peroxidazei i citocromilor n funcie de specie i n funcie de necesitile organismului.
VII.2.7.2. Formarea protohemului
n aceast etap acioneaz fiero-chelataza, enzim ce catalizeaz reacia de ncorporare a
fierului n protoporfirina IX cu formare de protohem:
Fe2+
Protoporfirina IX

2H

Fiero-chelataza

Protohem

VII.2.7.3. Biosinteza globinei

Componenta proteic a hemoglobinei se sintetizeaz prin mecanismul general al biosintezei
catenelor polipeptidice. n cazul globinei, aceasta se sintetizeaz n ribozomii eritroblatilor.
VII.2.7.4. Complexarea hemului cu globina
Aceasta reprezint ultima faz a hemoglobinogenezei cnd globina leag n mod specific
hemul cu formarea hemoglobinei fiziologic active. ntregul proces de biosintez a hemoglobinei se
desfoar n mduva osoas.