Coloane si detectori in HPLC

Schema cromatografului de
lichide
eluent lichid sau gazos (FM)

injector

coloana (FS)

detector

Intrare proba
de analizat

Traitement
Interpretare
dusemnal
signal
signal

debimetru

temps
temps

Iesire eluat

DETECTORI in HPLC
Detectorii optici sunt cei mai utilizati in cromatografia de lichide. Principiul lor
de functionare are la baza trecerea unui fascicul de lumina prin efluent, asa cum
iese din coloana( ~ 10 ml) volumul din celula. Variatiile in intensitate provocate
de absorbtia in UV, emisia de fluorescenta, sau modificari ale indicelui de
refractie(depinzand de tipul de detector utilizat) din componentii probei care trec
prin celula, sunt monitorizati cu ajutorul variatiilor de potential de iesire, ele
furnizand informatii in ceea ce priveste timpul de retentie si ariile picurilor.
Cel mai utilizat detector in LC este detectorul de absorbtie in ultraviolet pe un
domeniu de lungimi de unda intre 190 si 460-600 nm, util pentru detectia
majoritatii probelor analitice.
Alti detectori sunt: cu indice de refractie (RI), fluorescenta (FL), electrochimic
(EC) si spectrometrul de masa (MS). Detectorul cu indice de refractie este
universal, dar mai putin sensibil. Detectorii FL si EC sunt sensibili si selectivi.
Detectorul MS este cel mai performant.

- Cel mai utilizat

-Sisteme simple : emisie intensa la
254 nm a lampii.
- detectori de absorbtie full-scale
intr-un domeniu 0.0005-3 unitati de
absorbtie cu un zgomot de fond 1%
full scale.
- buni pentru elutie cu gradienti cu
solventi non-absorbtivi

Detector spectrofotometric cu celula de 0.5cm care contine numai 8 L de

solutie.

Detectori de flurescenta:
Aceste instrumente sunt utile in detectia componentilor care au proprietati de
chemiluminescenta ca fluorescenta sau fosforescenta. Sunt mai sensibili decat
detectorii de absorbtie in UV cu cel putin un ordin de marime. Fluorescenta se
observa prin detectarea fasciculului de radiatie emis la un unghi de 90-grade
fata de fasciculul de excitatie. Compusii fluorescenti se intalnesc in industria
petroliera (PAH), produsi farmaceutici si produsi naturali (aflatoxine).
Numarul de specii fluorescente poate fi crescut prin derivatizare post-coloana
prin reactii ale componentilor eluatie sau derivatizare pre-coloana(ale probei)
cu reactivi speciali:e.g., analiza of aminoacizilor, carbamatilor, etc...

Detectorul cu indice de refractie (RI) :

Detectorii RI prezinta avantajul semnificativ ca raspund la aproape toti
solutii. Diferenta intre indicele de refractie al fazei mobile fata de acela al
efluentului coloanei conduce la detectarea componentilor separati ca picuri
in cromatograma. Datorita extremei sensibilitati fata de faza mobila, acest
detector nu poate fi utilizat cu pompa de pulverizare in pulsuri si nici pentru
elutia cu gradient datorita modificarii compozitiei fazei mobile. Limitele de
detectie sunt mai mici fata de acelea ale detectorilor de absorbanta.

Detectorul cu indice de refractie

- Este sensibil fata de majoritatea solutilor, dar se utilizeaza in determinarea zaharurilor si
a unor polimeri
- Limita de detectie : inferioara cu 2-3 ordine de marime in comparatie cu detectorul UV
- nu se poate utiliza in elutia cu gradient
- sensibil la variatii de presiune si temperatura (0.01)
- nu este util in analiza de urme
- domeniu redus de liniaritate

Detectorul electrochimic
Detectorii electrochimici masoara compusi care participa la reactii de oxidare
sau de reducere. Masoara transferul de electroni dintre componentii probei
intre electrozii introdusi in solutie, la diferente cunoscute de potential electric.
Sensibilitatea detectorului electrochimic este de 10 -12 to 10-13 g/ml.
Detectorii amperometrici sunt utilizati in cromatografia de lichide de inalta
performanta (HPLC). Gruparile functionale organic detectabile cuprind:
hidrocarburi, olefien, amide, amine, grupari diazo, nitro, grupari fenolice,
chinolinice, halogeni, eteri, cetone si aldehide.Detectorul amperometric este
construit dintr-o celula in flux in strat subtire cu un volum de (1-5 microlitri), si
un sistem de electrozi cu un electrod (indicator) de sticla, grafit, aur sau platina.

Detectorul amperometric format dintr-o celula cu strat subtire pentru HPLC

Detectorul de conductivitate
Acest detector prezinta un raspuns reproductibil si prezinta o buna sensibilitate
pentru speciile incarcate electric. Acest detector este utilizat intr-un sistem
cromatografic pentru identificarea si analiza cantitativa a anionilor, cationilor,
cationilor metalici, acizilor organici si surfactantilor cu limite de detectie de
ordinul ppb. Adaugarea unui supresor chimic (un schimbator de ioni) intre
coloana si detectorul de conductivitate conduce la reducerea conductivitatii
eluentului si implicit la reducerea semnalui liniei de
Intr-o determinare de concentratii reduse de anioni, eluentul este transformat in
specii ionizate cu o conductivitate mica(de exemplu Na2CO3 in acid carbonic)
pentru a reduce linia de baza sau zgomotul de fond

In acelasi timp, ionii analitului sunt convertiti in specii cu o conductivitate mai

mare, (e.g., NaCl to HCl), crescand astfel semnalul relativ al analitului.