Sunteți pe pagina 1din 20

Determinarea componentelor C3, C4 si C1 inhibitor esteraza prin

nefelometrie
Valori de referinta : C3 :0,9-1,8 g/L ; C4: 0,1-0,4 g/L
Diminuarea concentratiiilor serice ale C3 si C4 apare in principal in Lupus
eritematos sistemic (LES), in glomerulonefrite membranoproliferative si boli prin
complexe imune (boala seruluiI).
In LES, concentratiile serice ale factorilor complementului, reflecta
activitatea bolii.
Valori scazute C3 apar in glomerulonefrita acuta si glomerulonefrita
membranoproliferativa, iar valori scazute C4 apar in angioedemul ereditar si
anemia hemolitica autoimuna.
Ambele componente ale complementului reactioneaza ca proteine de
faza acuta si pot prezenta valori crescute la pacienti cu boli inflamatorii. Sunt
raportate si deficiente ereditare ale acestor componente ale sistemului
complement.
Limitele procedurii
Nu sunt interferente cu concentratiile trigliceridelor pana la valori 5,7g/L
(C3) sau 2,4 g/L (C4), bilirubina 600mg/L, hemoglobina(Hb) pana la 10g/L, sau
cu medicamente uzuale. Turbiditatea sau particulele din probe pot interfera.
C1 inhibitor esteraza este reglator important al caii clasice de activare a
complementului, care inhiba activitatea serinproteazelor C1s si C1r.
Determinarea C1 inh este utila pentru diagnosticul angioedemului ereditar si a
unei forme rare de angioedem asociate cu limfomul.
Deficitul genetic de C1inh determina angioedem ereditar.
Deficitul acut de C1inh apare in boli cu afectare a limfocitelor B, care se
pot asocia cu scaderi ale nivelului C1inh cum sunt leucemia limfatica cronica,
mielomul multiplu si alte limfoame maligne.
Valori de referinta : 0,21-0,39g/L
Particulele si turbiditatea probelor pot interfera cu determinarea.

Markeri ai inflamaiei bronice


din produse biologice recoltate prin:
Metode invazive:
biopsii
fluid de LBA
Metode neinvazive:
sput indus
aer expirat (ex. eNO)
snge (ex. ECP seric)
Urin
ECP (proteina cationic eozinofilica)

purificat n 1971 din celule mieloide la pacieni cu LMC


denumita recent RNA-za 3 (ribonucleaza 3)
dou izoforme (ECP1, ECP2)
omologie cu EPX (EDN)
gena pe cromozom 14q24-31
localizat n matricea granulelor specifice ale Eo din sngele periferic
sintetizat n promielocite, localizat n granulele primare i specifice
nivelurile serice ale ECP la indivizii sntoi: 2,7-15,8 g/L
Activitate:
efecte citotoxice:
pe celule epiteliale respiratorii, neuroni
antiparazitare (Schistosoma mansoni)
antimicrobiene (Staphylococcus aureus, E. coli)
antitumorale
antivirale
efecte netoxice:
eliberarea histaminei din bazofile
activarea mastocitelor cardiace
inhibarea degradrii proteoglicanilor n fibroblastele pulmonare
stimularea secreiei de mucus
stimularea expresiei ICAM-1 n celulele epiteliale

Utilitatea dozrii ECP:

monitorizarea inflamaiei alergice eozinofilice din astm la aduli i copii


estimarea rspunsului la corticoterapie, a gradului de severitate al
astmului
monitorizarea tratamentului cu glucocorticosteroizi inhalatori i ajustarea
dozelor

marker al activitii bolii n sindromul Churg-Strauss i dermatita atopic

Determinarea ECP prin metoda IMMUNOCAP FEIA


FEIA (FLUORO-ENZYME IMMUNO-ASSAY)

Ac anti-ECP cuplai covalent la ImmunoCAP reacioneaz cu ECP de la


pacient

dup splare, conjugatele enzim-Ac anti-ECP sunt adugate pentru a


forma un complex

dup incubare, conjugatele nelegate sunt splate, complexul legat este


incubat cu agentul de developare

dup stoparea reaciei, fluorescena este msurat cu FluoroCount96,


determinndu-se valorile serice ECP.

Monoxidul de azot (NO)


descris n 1979 ca relaxant al musculaturii netede vasculare
folosit de organism ca molecul de semnalizare
funcii diferite n diferite sisteme ale organismului
(vasodilatator, neurotransmitor, bactericid)
radical liber diatomic,dimensiuni mici, liposolubil,
strbate uor membranele celulare
degradat/reacioneaz n cteva secunde
sintetizat din L-Arg (NOS)N-hidroxiArg(NOS)citrulina+NO
sinteza se produce n celule pulmonare, endoteliale i neuroni
Tipuri de NOS (nitric oxide sintetase):
NOS I
n neuroni centrali i periferici
dependent de Ca+2, rol n comunicare neuronal
NOS II
n majoritatea celulelor nucleate (n special macrofage)
inductibil de citokinele inflamatoare
independent de Ca+2 intracelular
NOS III
n celulele endoteliale vasculare
dependent de Ca+2
reglare vascular
Rolul NO n organism
sistem nervos - generare poteniale de aciune n neuroni
- rol n memorie
sistem circulator - relaxarea musculaturii netede
sistem muscular - relaxare muscular
sistem digestiv
sistem imunitar
activarea NOS II n majoritatea celulelor nucleate
(macrofage, n special), independent de Ca+2
inhibitor potent al replicrii virale
agent antimicrobian
produs din nitrai extrai din alimente la nivelul gingiilor
distruge bacteriile n cavitatea bucal
eNO (NO din aerul expirat) n astm
marker al inflamaiei alergice eozinofilice bronice (util pt. dg)
evaluarea controlului astmului (marker util pt. monitorizare)
optimizarea farmacoterapiei
depistarea precoce a pierderii controlului astmului
reducerea simptomelor i a severitii exacerbrilor

Msurarea eNO
reproductibilitate mare
neinvaziv, simpl i obiectiv
rezultat disponibil rapid
exprimare n ppb

Sczut
crescut
Aduli
Copii

Normal

<5
<5

suspect

Crescut

5-25
5-25
absent inflamaie

Foarte

25-45
25-35
Poate fi prezent

necesit investigaii

Inalt sugestiv

inflamaie eozinofilic

cauze posibile:
-diskinezie ciliar primara
-fibroz chistic
-displazie bronhopulmara
Not! Nu toi pacienii cu FENO crescute pot prezenta simptome
NIOX MINO
uor de manevrat
optim pentru spitale, cabinete, pacieni

> 45
> 35

Diagnosticul in vitro al bolilor alergice IgE mediate


Dozarea IgE alergen-specifice si totale in ser si alte lichide biologice
Evaluarea gradului de expunere la alergene de mediu
Teste de reactivitate celulara (mastocite, bazofile)
(triptaza serica, histamina plasmatica, metilhistamina urinara, teste de
eliberare a histaminei din bazofile la stimulare alergenica etc.)
Evaluarea inflamatiei alergice
markeri din sange
citologici (eozinofilie sanguina)
solubili (ECP, citokine, LT, molecule de adeziune, etc)
markeri citologici si solubili din alte fluide biologice
markeri histologici din biopsii
TRIPTAZA

serin proteaza mastocitara, marker de activare, implicata in reactii alergice


si anafilactice
doua izoforme ,-triptaza, similaritate structurala 92%
gene pe cromozom 16
tetramer, subunitati de 31-38 kDa,
cliveaza peptide si legaturi ester la grupari carboxil ale AA bazici
mitogen pentru celulele musculare netede din caile respiratorii
-triptaza la indivizi normali 4,5g/L
este crescuta in mastocitoza
-triptaza este forma predominanta stocata in granule si eliberata in timpul
degranularii
tetramer stabilizat de heparina
cliveaza si inactiveaza fibrinogenul
genereaza anafilatoxine C3a cu actiune vasoactiva si contractia fibrelor
musculare netede
la indivizii normali este nedectabila (<1g/L)
creste in anafilaxie

Metode de determinare a triptazei serice

ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)


determina formele mature ale si -triptazei
utilizeaza 2 tipuri de Acm:
Acm B12 (fata de epitopi conformationali) pt.captura
Acm G5 pentru detectare

FEIA (FLUORO-ENZYME IMMUNO-ASSAY )

determina triptaza totala (forme mature si precursori si )


Acm B12 (fata de epitopi conformationali) pt.captura
Acm G4 (fata de epitopi liniari) pentru detectare

triptaza totala serica elib. de mastocite in circulatie dupa reactii


anafilactice la medicamente, alimente, venin insecte
cresterea triptazei serice:
anafilaxie la medicamente, alimente, venin, mastocitoza
cresterea triptazei in fluidul de lavaj nazal: rinita alergica, dupa provocare
cu alergene

Utilitatea clinica:
anafilaxie/mastocitoza
diagnostic postmortem
soc fara cauza cunoscuta
inainte de initierea ITS cu venin de himenoptere
(determinarea triptazei bazale, ptr. excluderea mastocitozei

IMMUNOCAP FEIA PRINCIPIU


triptaza (ser) + Acm anti-triptaza (B12) cuplati covalent la suport solidceluloza (ImmunoCAP)
spalare

Acm anti-triptaza(B12)- triptaza + Acm anti-triptaza(G4)-E


spalare

Acm anti-triptaza(B12) -triptaza- Acm anti-triptaza(G4)-E +


agent de developare masurarea fluorescentei

raportarea rezultatelor la o curba de calibrare


interval de referinta: 0,4-10,9g/L

recoltarea probelor: fara anticoagulant/EDTA, heparina


centrifugare, separare, stabile 2 zilela TC; 5 zile (4-80C);-200C

se recolteaza:
proba I in prima ora dupa reactia anafilactica
proba II intre 3-6 h de la anafilaxie
proba III la cel putin 24h dupa eveniment (excluderea mastocitozei)
postmortem:
se recolteaza pana la 24h de la deces, deoarece in absena activitatii
metabolice, nivelul triptazei este stabil
daca se recolteaza de unde a fost perfuzat, se indeparteaza primii 5 ml de
ser si apoi se recolteaz proba

Metode de identificare si cuantificare aeroalergene

Metode morfologice pentru polenuri metode gravitationale


dispozitiv Durham
mostre de polen recoltate pe lama de sticla cu aderenta grasa,
protejata
determinarea numar grauncioare polen / cm 2 /24 ore
avantaj: metoda accesibila, putin costisitioare
dezavantaj: particule usoare sau in conditii de vnt puternic sunt
subestimate
metode volumetrice
dispozitiv Ogden
mostre de polen recoltate prin impact
pe lame adezive pe brat rotator
determinarea cantitativa, mai exacta

dispozitiv Burkard
mostre de polen recoltate prin suctiune
in sistemul de flux intern in unghiuri drepte
eficienta inalta pentru particulele mici

Cuantificarea polenului din aer


pollen count = nr. grauncioare de polen de un anumit tip / m 3 aer / 24 h
scazut
< 30 gr. polen / m3 aer
moderat
30-49 gr. polen / m3 aer
crescut
50-149 gr. polen / m3 aer
( induc simptome la majoritatea blonavilor)
foarte crescut
> 150 gr. polen / m3 aer
Cuantificarea riscului expunerii la polen
pollen index = indicator de risc evaluat in functie de:
vegetatia locala
caracteristicile vremii
previziunile meteorologice
scazut
1-3
moderat
4-5
mare
6-7
foarte mare
8 - 10
Grauncioarele (granulele) de polen
Dimensiunile

variaza in functie de specie


intre 5 si 200 m
granulele aeropurtate au 5-60 m
Forma caracteristica poate fi recunoscut la microscop
Structura
protoplast, purtator al materialului genetic (gameti masculini)
sporoderma inconjuratoare cu
strat intern = intina, bogat in celuloza
strat extem, exina, cu deschideri spre exterior prin colpi sau pori
operculati
Metode morfologice pentru acarieni

metoda aspirativa cu examinare la microscop

dispozitiv de colectare a prafului de casa


cu filtru de celuloza conectat la aspirator cu flitru HEPA

examinare la microscop
dupa dispersie cu acid lactic in cutie Petri
coloratie cu roz lignina
rezolutie peste x 20

Umiditatatea relativa din interior este factor cheie, care influenteaza


prevalenta acarienilor din praful de casa (Dermatophagoides
pteronyssinus si Dermatophagoides farinae
apartinand familiei
Pyroglyphidae subordinului Astigmata)

au respiratie cutanata, absorb apa din aer, prin secretia unei solutii
hiperosmolare din glandele supracoxale de deasupra primei perechi de
picioare, care curge spre cavitatea preorala

D. farinae mor prin deshidratare la U.R. 40-50% in functie de temp. 25-34C


la U.R. > 70% R.H. acarianul isi dubleaza volumul.
Fluctuatiile sezoniere ale alergenelor de acarieni sunt paralele cu fluctuatiile
sezoniere in U.R. de interior corelate cu sezoanele calde si ploioase
Metode morfologice pentru mucegaiuri

metoda sedimentarii pe placi

placi Petri cu medii cu agar si antibiotice

culturi pe placi plasate in interiorul locuintei


sporii fungilor aeropurtati, se sedimenteaza la temperatura camerei
n 20 minute

identificare la microscop
cuantificare prin numararea coloniilor

EPITELII ANIMALE

Pisica (Felis domesticus)


= sursa de alergene provenite din scuame epidermice, urina si saliva.
= cea mai importanta cauza de sensibilizare dintre animalele domestice
Cainele (Canis familiaris)
alergene identificate in saliva,descuamatiile epidermice si in urina.
Rozatoarele
Hamsterii, soarecii, sobolanii, cobaii sunt folositi in cercetarea medicala si
farmaceutica, iar uneori sunt crescuti ca mici animale de apartament
Urina lor bogata in proteine, mai ales cea a masculilor, este sursa cea mai
importanta de alergene.
Metode imunochimice rapide pentru determinarea alergenelor de interior
Test
Acarex test

Principiu
Alergene determinate
Comentarii
dozare guanina
acarieni
colorimetric
dejectii acarieni
semicantitativ
Rapid test
Ac monoclonali
acarieni, gandaci
alergene grup II
mb. Nitroceluloza
pisica, caine
imunocromatografic
Dustscreen Ac monoclonali
acarieni, gandaci
tehnica imunodot
mb. nitroceluloza
pisica
Aclotest
Ac policlonali
acarieni
tehnica dotblot
mb. nitroceluloza
imunocromatografica
negativ
slab pozitiv
intens pozitiv

fara spot
spot discret roz
spot roz

< 0,5 mcg acarieni / g praf


0,5-2 mcg acarieni / g praf
> 2 mcg acarieni / g praf

Determinarea IgE in laboratorul de Alergologie si Imunologie

metode semicantitative
metode cantitative

Dozarea IgE alergen-specifice serice


Determinarea IgE totale serice
Determinarea IgE totale in lacrimi
Determinarea IgE totale siIgE alergen-specifice in ser
metode semicantitative
imunocromatografice (rapide)
metode cantitative
radioimunoanaliz (RIA)
metode imunoenzimatice (EIA)
nefelometrie (NF)
Metode imunocromatografice semicantitative (rapide) pentru determinarea
IgE totale
One Step Hexagon IgE etc.

IgE din ser la valori > 150 UI/mL


se cupleaza cu componenta monoclonala in faza mobila: Ac monoclonali IgG
de soarece anti-IgE, conjugati cu colorant
complexele imune prin migrare capilara sunt fixate de catre Ac policlonali
de capra anti-IgE fixati la nivelul benzii test

conjugatul colorat - Ac monoclonali anti-IgE in exces este fixat de Ac


policlonali de capra anti-IgG de soarece la nivelul benzii de control (rozrosie)

IgE din ser la valori mici < 150 UI/mL


nu apare banda test
apare banda control (care indica veridicitatea testului)

Metode de imunoanaliza cantitativa pentru determinarea IgE totale serice


anti-IgE cuplati covalent la suport solid (ImmunoCAP - UniCAP)
reactioneaza cu IgE serice ale bolnavului

dupa spalare, se adauga Ac anti-IgE marcati enzimatic (betagalactozidaza)

dupa incubare, conjugatele nelegate sunt spalate, complexul legat este


incubat cu 4-metilumbeliferil-beta galactozid

citirea fluorimetrica

Metode nefelometrice cantitative pentru determinarea IgE totale


Nefelometru laser tip Behring laser cu antiser specific, amplificat latex
Principiu: metoda de precipitare in care intensitatea fascicului laser
incident este modificata prin difuzie in functie de complexele Ag-Ac
formate (proportional cu cantitatea de precipitat format)
Valori normale ale IgE totale serice
Varsta
la nastere
nou-nascut < 1 luna
1 luna - 6 luni
7-12 luni
1 - 2 ani
2 - 6 ani
6 - 10 ani
11 - 16 ani
adulti > 16 ani

in functie de varsta

Valoare(UI/mL)
< 0,5 (IgE materne nu strabat placenta)
< 0,5-1,5 (valori nedetectabile la nou-nascut)
< 10 (in primul an de viata cresterea IgE
< 20 e comparabila cu cea a IgA, dar < IgG)
< 30 (crestere lenta la copilul mic)
< 50-70
< 100 (crestere importanta in copilarie)
< 150-200 (valori maxime in adolescenta)
< 100 (scadere cu varsta)

Valori crescute ale IgE totale serice in afectiuni alergice


astm bronsic alergic
sd. Churg-Strauss
aspergiloza bronhopulmonara alergica
rinita alergica
eczema atopica
Valori crescute ale IgE totale serice in afectiuni nealergice
pneumonia eozinofilica cronica idiopatica (boala Carrington)
nefropatii tubulointerstitiale induse medicamentos
Valori crescute ale IgE totale serice in imunodeficiente
Imunodeficiente congenitale
sindrom hiper-IgE (Job- Buckley)
sindrom Omenn
sindrom Wiskott-Aldrich (ID T X-linkata)
Imunodeficiente secundare
infectia HIV (inducerea sint. de citokine Th2 cu cresterea gradata a IL-4 si
IgE = raspuns alergic la prot. gp120 HIV-1)
Valori crescute ale IgE totale serice in boli autoimune
pemfigoid bulos

artrita reumatoida juvenila


scleroza sistemica
lupus eritematos sistemic

Sinteza policlonala de IgE


boala grefa vs gazda
infectia cu CMV, EBV
polipoza nazala nealergica
sarcoidoza (predomina stimularea policlonala IgG)
mieloame IgE (foarte rare)
limfoame hodgkiniene si non-hodgkiniene
limfom cutanat cu celule T (mycosis fungoides), Sd. Sezary
boala Kimura (boala inflam. cronica rara, adenopatie regionala,
afect. parotide, eczema cronica, hipereozinofilie, valori crescute IgE frecvent)
fumatori
alcoolismul cronic moderat si excesiv poate amplifica
nivelurile IgE daca valorile au fost initial crescute
Valorile crescute ale IgE totale
sugereaza atopia, dar nu sunt patognomonice si nu au semnificatie dg.
pacientii cu valori ale IgE totale > 200 kUI/L sunt probabil alergici
valorile crescute pot fi utile pentru depistarea pacientilor cu T.C. negative
la aeroalergenele de screening pot necesita T.C. la alergene suplimentare
valorile foarte crescute > 1000 kUI/L pot interfera cu unele metode de
determinare a IgE specifice, datorita legarii nespecifice
Niveluri crescute de IgE specifice la un singur alergen pot apare la
pacienti cu valori ale IgE totale in limite normale
IgE totale nu trebuie utilizate pentru excluderea pacientilor de la T.C. sau
determinarea IgE specifice
38% din adultii cu boli alergice au valori normale ale IgE totale
pacientii cu valori foarte mici ale IgE totale < 5 kUI/L foarte putin probabil
sa fie alergici
Indicatii absolute ale determinarilor IgE specifice ca alternativa a testarii
cutanate alergologice
teste prick sau i.d. negative sau echivoce la pacienti cu mare suspiciune
clinica de sensibilizare alergica
testarea indicata pentru alergene nedisponibile ca extracte standardizate
pentru testare cutanata (latex, chimice industriale)
aspergiloza bronhopulmonara alergica (parte a evaluarii de rutina)
pacienti tratati cu medicamente care inhiba testele cutanate
(antihistaminice sau medicamente cu efecte antihistaminice) sau
contraindica utilizarea adrenalinei (beta-blocante, IMAO), in situatiile in
care tratamentele nu pot fi intrerupte

limitarea testarii alergologice la pacienti cu astm, rinita, dermatita atopica


(in concordanta cu recomandarile internationale)
risc crescut de reactie sistemica la testarea cutanata sugerat anamnestic
(anafilaxie) sau perioada evolutiva severa a bolii (astm necontrolat)
teste prick de control pozitiv - negative
sarcina, copii foarte mici si varstnici
dermografism sever si afectiuni dermatologice extinse (ihtioza, psoriazis,
eczeme)
aprecierea cantitativa a rezultatelor poate avea utilitate clinica in
evaluarea eczemei atopice
lipsa extractelor alergenice indicate
pacientii necooperanti din motive psihice si fizice
afectiuni cardiovasculare care contraindica utilizarea adrenalinei
afectiuni severe cu alterarea raspunsurilor imune (imunodeficiente,
afectiuni autoimune, neoplazice)
evaluarea reactivitatii incrucisate la veninuri de himenoptere,polenuri cu
unele trofalergene
postmortem in anafilaxia fatala (aditional eventual determinarii triptazei)

Metode imunoenzimatice semicantitative pentru determinarea IgE specifice


ex. Acti.tip, Allergodip etc
reactia Ag-Ac implica legarea IgE ser testat cu Ac anti-IgE capra marcati cu
peroxidaza de hrean
substratul cromogen = tetrametilbenzidina culoare albastra
(citire vizuala sau fotometrica)
Determinarea cantitativa a IgE alergen-specifice serice
Masurarea IgE alergen-specifice in ser are valoare diagnostica similara testelor
cutanate alergologice dar o reproductibilitate mai mare
Tehnica standard a fost descrisa initial in anii saizeci ca
RAST (RadioAllergoSorbent Test) - metoda generatia I
- sensibilitatea RAST este limitata datorita fazei solide utilizate
- folosirea reactivi marcati radioactiv (125I) este dificila
- masurarea radioactivitatii necesita camera de scintilatie
Metodele de generatie noua pentru evaluarea in vitro a
IgE specifice implic o varietate de tehnici bazate
pe Ac anti-IgE marcati - metode gen. II, folosind alergene
in faza solida
in faza lichida
pe alergene marcate, in faza lichida - metoda gen. III.
Aceste metode moderne utilizeaza reactivi marcati enzimatic i sunt diferite prin:
diversitate de enzime:
beta-galactozidaza
fosfatazaalcalin
peroxidaz de hrean

diferena de substrat:
BCIP / NBT
P-nitrofenilfosfat
4-metil umbelliferil fosfat
o-fenilendiamin
3,3 ', 5,5' tetrametilbenzidin
dioxetan
diversitatea tehnicilor:
radioimunoanaliz
fluorescen
chemiluminescen
colorimetrie

RIA
FEIA
CLIA
ELISA

Metoda UniCAP-FEIA pentru IgE specifice


alergenul cuplat covalent la ImmunoCAP reactioneaza cu IgE specifice din proba
de ser
dup spalarea IgE nespecifice Ac anti-IgE marcati cu beta-galactozidaza
sunt adaugate pentru a forma un complex
dupa incubare, conjugatele nelegate sunt spalate, complexul legat este
incubat cu agent developare (4-metilumbeliferil beta galactozid)
stoparea reactiei si citirea fluorescentei cu FluoroCount 96
intensitatea
semnalului
fluorescent
este
proportionala
cu concentratia IgE specifice din proba

pentru evaluarea rezultatelor, rezultatele probe de la pacienti sunt


raportate direct la curba de calibrare
Metoda ImmunoCAP ISAC (Immuno-Solid phase Allergen Chip)
Metoda de diagnostic molecular pentru Ig E specifice bazat pe componente
alergenice
platform de imunoanaliz n miniatur
tehnologie modern biochip
msurarea multiplex a IgE sp. fa de 112 componente alergenice
specifice sau crossreactive si de 40 de surse alergenice intr-un singur test
componente naturale purificate/ recombinante fixate la suportul solid
(biochip)
nanotehnologia
IgE sp se leag la componentele alergenice imobilizate
Ac anti IgE marcai cu fluorescein
cuantificate cu un scanner biochip
semicantitative corelaie bun cu teste cantitative ImmunoCAP

Metode de chemiluminescen
ADVIA Centaur, AlaSTAT, IMMULITE 2000

IgE din ser covalent legat la


Ac anti-IgE la particule paramagnetice sau bile de polistiren(faza solid)
alergene biotinilate n exces se leaga de IgE alergen specifice cuplate la
faza solida
streptavidina marcat cu ester acridinic (sau adamantil dioxietan fosfat) se
leag de alergenele biotinilate
Metoda RIDA X-Screen pentru IgE specifice(EAST)
Metoda de analiza imunoenzimatica pe membrana de nitroceluloza (imunoblot)
EAST=enzyme-linked immunosorbent test
alergenul fixat la mb nitroceluloza reactioneaza cu IgE specifice din proba
dup spalarea IgE nespecifice Ac anti-IgE conjugati cu biotina
dupa incubare, conjugatele nelegate sunt spalate, complexul legat este
incubat cu conjugat streptavidina-fosfataza alcalina
Enzima transforma substratul incolor (BCIP/NBT)intr-unul colorat in
albastru/lila
Intensit. culorii este proportionala cu cantitatea IgE specifice
Rezultatele sunt interpretate cu sistemul de clasificare EAST cu 6 clase
EUROLINE EUROIMMUN
Metoda de analiz imunoenzimatic cromogen, utilizeaz minim 2o de
alergene naturale inalt purificate sau recombinante fixate la membran de
nitroceluloz cu marker CCD pentru determininanti carbohidrat cross reactivi
prezenti in alergene glicoproteice.

Avantaje:
rapid i uor de realizat
volum mic de prob ( util la copii)
evaluare automat cu EUROLINE SCAN
rezultate clasificate n sistem EAST
corelaie bun cu Pharmacia CAP

Interpretarea rezultate Euroline


Concentraia [kU/l] Clasa EAST Explicaia
< 0.35
0.35 - 0.7

0
1

nedetectabil
foarte sczut, deseori fr simptome
clinice, cu sensibilizare

existent
0.7 - 3.5

3.5 - 17.5
17.5 - 50

3
4

sczut, sensibilizare existent,


adesea cu simptome clinice la
niveluri superioare
crescut, simptome clinice prezente
moderat crescut, aproape
ntotdeauna cu simptome

existente
50 - 100
> 100

5
6

foarte crescut
foarte crescut

EUROIMMUN IgE alergen specifice ALLERCOAT 6 test uniparametru


Metoda de analiz imunoenzimatic spectrofotometric de tip ELISA,
cu alergene fixate la faza solid reprezentat de discuri sub form de
inel

Determinarea concentratiilor unui singur tip de IgE specific


usor si rapid de realizat (~3 ore)
calibrare cu standard WHO (pana la 4 placi cu aceeasi curba)
Automatizare cu analizor EUROIMMUN
sau alte statii de lucru ELISA
Allercoat 6 (ELISA)
Incubare
60 min cu ser(50L)
60 min cu conjugat
30 min cu substrat

Incubare
60 min cu ser(50L)

60 min cu conjugat
30 min cu substrat