ara estudiar los microorganismes en el labora lon, ¢9 decis, crecerlos. Ente 96 pusde realizar dle muchos modos, incly- yendo el uso de medins de cultive sélidos em placax de Petri, como se .qui, Lay células individaales quese extienden sobre ta placa, crecen y se coloitias. Aunque algunas principios autricionates se apli- iWon los onganiamos, muchos microoranibmos prose tritivas y de culfive que vitales, jodlos los microorganismos llevan a cabo reacciones que les perm ten ia. Para comprender emo viven las edlulas microbianas on sus habi- turales ev necesatio comprender su nutricidn y 6a bivenerpética. NUTRICION, CULTIVO Tae ROMO Pa OPUS Natricién microbiana Medios de cultive Cultivo de microarganismos en el laboratorio ara Bivenerpética Catalisis y enzimas Ose eo Onidaci6n-reduccion EL NAD como un transportador redox de elvetrones ‘Compuestos de alta enerpia y almacenamiento ide energia ae SUC OPA RON ea ea Ra De Conservacidn de la energia: opciones La glucolisis como ejemplo de fermentacisn Respiracion y transportadores de electrones asociados a membranas Canservacién de |a energia.a partir de Ja fuerza motriz de protones Flujo del earbono en la respiracién: et ciclo del icido citrieo aC eR ee ene Alternativas catabélicas Biosintesis de monémeros5.18 MUTRICION MICROBIANA # 103 de eleetrones 99 wstancs joe Pe arp tit ley sisi stan J foe se woluce dst ¢ proces a ‘at evicruoezanoant capa ot sat | Dienla wspwacion Ua sora etal le tas Las n= ‘kG buninteicas de Lela ‘mic rogaine que cree of temernia dO; sintwiaga {ATPama} complcjenci- ‘miicn multiprteno anclate en ta mem: fans que catiliza Ia sintests de ATP ropa o fuerza mine de proteres Autéerofe un wtxanorm caps debienme: ca oes oh moter ela pari el £1, sons nics fete de cate “etjnto de rea ba ‘quinscas que condlacena lr priced ‘erga ilizable po bce (noma vente ATT ARetalinedor | yu sustancissyue svclers unt "uc uremic feno jf se CE er irexcion ‘del delda cltrico ic ce wae ‘ames sadn como festa a comer ‘nin de acetaten de matulas she OO; tuna pequcra moterult mo p+ fea que particypa em una rece call fea como parte de ura enna Cultive axénice ¢ pore cuir micro: "ham qu cote ws ice romans Donador de slectrones wns sustancis (que purse coder vlertrones an aceon 7 ce etal ‘ue requiem eneria Energia de activacton es la crore re ‘queria para Tevat l sustrate aun estas reacnvo ergla Nore ovrsiainyiie poen a oe asc ea rato epee ot enviar proteins qtr capac de aver (caalzan wna eae lo racprifich Exotermica yee bis overs Fermentaciin’ otatlisan) arversbiss ot qos un compart rpinicy a ‘ise emp como come yom ocer- tur eleven yen ut ef ATP se pro- ‘ture por bstorducin nivel essa Fostortiaciin a nivel de sustrate pr ‘Suerte ae ATE por terrence to ums mula bode sft ener ‘ewe un compuwst ong fonkoracht hasta ADI Fosforiteciin oxidative price se "ATT expense la rea mtr dep ‘wes genetns pel taceporte de eax tron Fotofesfortiacién yrucuccine ATP me sfunte l fuerea meri de peotares forma ha por mucriones fotosmiéticas Fuerss motriz de protones wn etathy “enengticodela mena que cesivae Aeparacie de Licarga y lew elemerton eb agua (11° fmte a ON Jaa tarmea brane Ateotiehe ns rots }uspinscs weston la fal 96 ferment ba ghacona para pretacie feveegia (ATT y varios proctucton Fela fer de fa Fermentaciin. Tambien se dene mine ruta Se Lmbsden Meyeshat Medio compleja sss reesei cubis un, ‘varios muttientes que permite ef crecr invented bos micresnpanesrncn ‘Winseca (media en voldos) de ane say facia parasdomareeytrones Respiracién yroxesc on el qe ur com: puesto e# oxidade con O; (0 un sustinuto se O,), que funcna como aceptor tern hal de slectrones,y que normatmente se acompans ie la producrioa ste ATT por fosfordacce micativa Siderétoroe scenien quelantes de hier (que purcion unit hierto presente en tntty bbajas concentraciones Técnica aséptiea conjunie be manip: ‘tones wtilizadas para e19ir contarnina- tamer ducenie ef mune de objets entries mieianen 1 MUTRICION Y GULTIVO DE [ re ‘capacidad para llevar a cabo wicciunes quimicas pelea sin clove pcs ra eArochcab pt La expresidn final de esta iarganizacién es el creci: " tiieato (replicacidn). Antes de que und celula se xtivida, te- ‘henocurnir muchas macciones guimicas en la oflula, estas eacciones se dlencminan metabolismo. Las reacciones me~ “abglicas o bien fiberan energit, Hlamadas reacciones cata balicas, « bien consumen energy, lamaclas reacciones ana- _bilieas. Ea las.células ocurren varios tipos de reacciones “atabdlicas y anabolicas; en este capitulo y siguientes ext -minaremos algunas de: las ands importantes. ‘Antes de considerar algunas reacciones clave del meta- {tee explicate co xe cokivan ls micron mos en el Laboratorio. Por Ja mayor parte de to que fe sabe acerca de las actividades metabsslicas de kes micro- ‘ongarisnios procede vel estudio de calsivos en ol laboratine.. ‘Noscentraremos aqui enel ustuclio de los quimionrganotrafos, que utilizan com, de enengia distintos del quimicorganotnifia. Los organis ‘mos que empican estas alterrutivas tetablicas también se ‘cultivait en e! laboratorio, y mwichos de los principies bisicos de la nutricidn y de cultiva que ahora se comentan tambien, son applicable ellos. FEA setricién microbiana Recoriemos ki dicho en el Capitule 3 acerca de que las o&- Ila estan compuests furdamentalmen de arene alas y de agua y que las macramoléculas se componen unidades mas pequefias denominadas mondmenos (wise Seccion 3.2). En esencia, la nutricién microbiana consiste fe suministrar a Jas cétulas Jos ingredientes quimicos que pecesitan para haces monimervs. Estos compucstos gis micos son los nutrientes, Dilerentes organismos necesitan iferentes tipes de mutrientes y a menudd los requeri:104 # Capitulo 5 # MUTRICION, CULTIVG ¥ METABOLISMO MICROBIANO Carbone 1 Cs. companion organ, [cn rma, acetates pmevats amma am ‘nko de oem compuntan meat as mee etracto de tevndura, peptone | Hiddeagern 4) YO, puesto organic Hho. onpances ‘niger (0 10,0), compnsne HL0,0,, campuses. orgies ite (1 NINO, Nj-complorston rmpiticrs miteyenmton nmin NELCL (NLS KNOY MN gin ammnictin bases ying tan, ‘much fms compute organ co Fistor iP) ro KHIM, NaattrD, rat (3) HS. 90)? campueston eatinicos con 5, NASO, Nas8\0, NaS cateine 0 ote compuesion sluros metatices (eS Cu Zn, NES, ee) enginbie acuta tna (1) Kensolucidh nema vanessa con KCL RHO, ‘Magmesis (Ati, lg et sian cron varia sen con lg MCh Md, Sein (3) 9 gohan, NaCT en tas salen com Na NaCl Caen Ca} (Cat yaa, C4504 em tr ale co Cn ec, Herm (het Fe Fe emaohicion Tek FeO), FeCl, SO), varias eines i . guetots ‘ocummaroteas sai com Fe imientis son especificos, Adentus, no todos tas matrientes se requieren en las mismas canticades: algunos, Hamados ‘macronutrientes (Tabla 5.1), se precisan en grancles cantida- des mientray quetstios, amattos mictonutrientes, se tesie fen en menores cantidades, ¥ a veces solo en cantidadies trazas, Comengaremes considerande los macronstrirntes suds importantes, wf carbon y el serie Carbons y nitrégeno Muchos procariotas necesitam algun tipo de compuesto or pinico coma fuente de eatbana. Los estudios nutsicions- Jes han clemestrade que las bacterias puieden asimikir variow Compvesios ot sctrbonades y usatlos para hacer nue yo material vefalar, Los aminodcides, las acids grasers, kts acios organics, los azuicares, las bases nittogenadas, lox compuestos erumaticos y-unsinfin de compuestos organi cose ott tipo pueden ser nisadox por una a atra bacteria. Alguncss procariotas son autdtrafer, de construe ods sus esttucturas orginiens 4 partis del didxide de car bona (CO) con La enengia obtenida de la liz 0 de com ucstis inonginicns. En pesa seco, una edlula tipica can: iene un 50°% ce catbono el carbone esl prineipalvlements de todas las clases de macremuléculas. del carbon, ef siguiente elements ms abun dante en la cchulaes el nitrigena. Er-ama bacteria tipica al. reedor del 12% de su pose seco.es nittdygena, este elemento > importanie en lay 1 fos dcidos nucleiens y en otros constitayentes celulares. En la naturaleza, et nitroge- See rcertare ere leony crane (able Sia embargo, ts mayor parte del nitrsigeno natural dis rub etd en foema lentgiions oemia oeuers NH tratow (NO, JON, La de las hacterias ston capuices de usar amoniace como tinica fuente de aitrigenc. y otras muchas pueden usar nitrates. EL nitrégena gaseoso (N;) (pocde ser vsadii como fuente de nitnigeno por algunas bac~ ‘erias, las haters fiiatoras de mitégeno, v estuctianerness mds adelante las, de estos organismos con detitie Asaese Secciomes 129, 17.28 y 89.12), ed EDTA, F34 citat, ete Otros macronutrientes: P, S, K, Mg, Ca, Na 11 f6sforo se presenta en La naturaleza en forma de fost os Hicos © inorganicos, ¥ la céfula to necesita funda~ Tentalmcete pars lots de didlos nuke fost Hipwies. (1 azutre se porque es un componente ‘estructural ‘ad vn eearecices cistetha y metionina (ive Seccidny 3.6) y porque se presenta en clertas vitaminas, come la tiamina, la bietina, y el decide lipoicn, as/ coma ent el coenzima A, El ansfre sufre uno serie de transformacir nes Sipe oo to inal esr sha cukalens son Hlevadlas 2 cabo onchisivamente pror miicnscrgarastis (ir s¢ Seecién 19.13) yes utilizade por ellos em varias lormas quimicas, La mayoria del azutre celular procede de tuen- tes: cas, va sean sulfatos (SC,* ) oy sulfurces (HS) (Tabla 521. uy ie] es nevesario en todes las organismes. Una yan dleersiad de enna io espacsiaenite, COT POL: implicadas en la sintesis de tina El steal rcioml comes biandor de ec bosomas, las membrands cohulares y le dcilon nucletcus, y Jambien se necesita para la actividad de muchas enzimas. Plealcio (que ro-es tan nitrionte esencial para eleecimiente de muchas microorganisms) ayuda a estabilizar ta celular bacterlara y See nt funcon lyparttnte on ter. morresistencia de lasendosporas (ive Section 4.15). Elisa dives requeride por alguns micworgarism, aungise no todo, y Seneca aes relic det abit mie Cfoorgarusmo. or ejemplo, el mar tene urtelevin {do gunmen de wd fan edetoongasie marines nor- ‘malaente lo requieren para su cracietienter en cambio, otras especies muy relacionadas, pero deagua dulce, ceecen bien ry suisencia deveste cleaners, Hierro EY hierro es fundamental en la respitacién colilar y.os tambien un elemento clave para los citocrimes y para las que cantienen hieéro y azuire impticadas ne transport de lectemes anac Sereita ST y Tabla5.1 = MUTRIGION MICROBIANA = 105 Reajuerider por hm maamideros pa 6! metabolism de la ghana: 6 desconre low En La respnac in, citron ¢oxidasa, ert fastens pstecianana Y en gins types Activador de muchas zim presse 0 ljunas saperdaics inmates y 49 a lan ‘Algsmas cruise voniienen Hayman: etrogeriea nirato eeuctass, ulier mad, [a mayoria de las hidigrnasas: commzima Fi sde metanoygenws. deshudeogenasa del ormatedesticeegrst agamas hrtrogenasan y sminnicido selenncrstena Antulrass carhwica,atcabol deshidrogenina. RNA y DNA polimerasgs. nets proteins Emma Cr) a eer fs epee Eat Cay ‘Vaan Ih; tearwcarlcnllns (hacer ded Sho prope} ior (Cu) ddesmasaase ‘laniganesis(M) ye romp el agen tears ena ‘Muir sp DAISO-TMACI azductanas yalpuion formate desbiktrogersaae Not 1) rmonvitid de carbon y woast selene) Eames (W) Algumassfornanvaeshsdrogenins ynentranstrrases flee hrpertermtins Nara) Vainio pitngenass, che Pu (Pas ae se ure al DNA, Hicens (Her tgs ‘Clocrows,catalisas. pesonidasas, poeta con hier y auto, cco y toca is ‘ve mos Has mseeantrias fa sn enrol Ils, as w nein SAKE MUCHA wy pt ‘Sersua movie cts ae ots ertalen Norman eons toner War $2), in condiciones anaeribicis, el hierro se encuentra eh rete et ota deamheciin ty essoluble, iNembange. bajo condiciones serdbicas suele estar en el setasdo de oxidacion +3 y forma Yaris minerales ins fables. Pare wttener hierny de tales minerales, las celu- is producen agentes qjuclantes de Hiern Hamadion sie- fifores «jue snlubilizan el hicrro y ki transportan denies! de la cétula, Un grupe importante de sideroforos de: Aan del icido hidrurcimice y quolan of hivrra férricw (he"} Inertemente (Figura 5.10), Una vez que el c ~ fatierardracsue yuna thesia Serres tern yelhidroxamato puede salir y ser reutilizado de nuevo para el transporte de} hierro, Las bacterios como Fscheri- thie coll ¥ Salmonella typhivcariuen producen siderdfuras fenoliens,esiructuralmente complejes, Ilamados entero bactinas (Figura 5.41). Estos sidlerdiones derivan del com- puesto arvmatice calecol y tienen ana elevada afiniad de union de hivrro. Sin tales agentes quclantes de hierre muchas bactorias paldgenus serian incapaces de iniciar la fadcesin debice La lemitaciin dle hiro (ovense Seceio es 217 y 21.8), Tin as aguas marinas, «| hierna es prieticamente inde- eetable (Las aguas ucedinicas sipetficiales contieners tipics- erie silo unos cuanto parygrames de hierro por mililitn) J) s4/han encontrado bactesias marinas que pruducen side Toforosestructuralmeriie complejos capaces de secuestrae el hierrn presente ent. concenttraciones tan bajas. Estos siclero fores poscen una regidn peptidica que compleja el Fey Luna region lipicica que se asocia con ta membrana celulat, Campuesios como la aquacetin (Figura LSchunen hiver, sragreganen micelas, y luego trarmportan ct hierrs ala ct lula. Algunos pricariitas puucelen orcer en aussencia total le hier. Por eemplo, las bacteria Fatobucifus plantar y Aurrlia bungdor{rii (usta ultima os el agente etiologion de la enfermedad de Lyme, ease Seccién 27.4) no contienen hierro. EI Mn’” sustituye en.estas bacterias al hierra.come serapomerte metdio elas enzimae jue normalenee c- tienen Fe. Micronutrientes (elementos traza) Aunyue Jos micrinuttientes se requieren en muy peque ‘tas cantidades son tan importantes para ef funcionamien- to celular come los macronutrients, Los micromatnientes son metates, muchos de los cudles thenen una funeidier ex ‘nactural en varias enzimnas (los catalizadiores de las céulas). La Tabla 5.2 resume los principales micronutrientes en los sisters vivosy las erizimas que los contienen. Debido a que la necesidad de estos elementos traza es. ‘muy pequesia en cuanto a su coneentiacin, con frecuer ‘olt noes neuesarie afadirlas a los meuies de cultive para cultivar microorganismes eri el laborstorio, No obstante, si un medio de cultive contiene compuestos amy puro, isuettos en agua cestitada de-elevada pureza, puede dar. se una deficiencia en algdn elomento traza. En tales casos. se afiade al medio una pequefa cantidad de una solucién, ide metales taza (Tabla §.2) a fin de suministrar los metas les necesation, Factores de crecimiento Los factores de crecimiento son compuesters ontnicistyue, ‘coma los micronutrients, #e nevesitan en muy Pequerias cantidades y s6lo por algunas células. Los factores de en simiente son vitaminas, aminosciclos. purinas y pirimk nas. Aungae la mayoria de los microorganismes som capa: ces de sintetizar estos. compurestos, en algunos case es hhevesarie suministrarkes en ef medtie de cultiva,108 * Capitulo 5 * MUTRICION, CULTIVG Y METABOLISMO MICROBIANG Cova herein he urn at Fa Ackto prammobentokw —— Hracursr sa ci fico ‘Aria fli Metateoma she cumpeeston lesan rather ransom de grapen ike Barns Wionintsts de aro gras: {etewarhomlacnnen: algunas evccomes de cin ce CO; Cobalamin (Bad Aeviocion ytarwierenca resis ‘avon ottoman mene Mesostthome ‘Ac tipico {Tansfernia ae grea ace fa aewarteein el Pineal y ett Acido cote (macina)——-Procursor det NABD fine Figura 5.10) transfer de lertrones en raccuites de vain ruchucck Acido panteténeess Pevcuso eka oem A; ‘ctivackin fel aselibyy sertvados acide Rbotiavins Previn del PMN (core gue SL1BL FAD en flivepreteinas tunplicadis.en el transpose de selec trones| “Flamin (th) 2 Descarboilaiones: transcetolisa Vitae fh rps ‘Tasforrmacirmes de manent PPirclosal piridoramina) yeahs ‘Grape vitamins K: ‘Transportes elortanes: stots ‘quinone deestingllpitin. Hidroxamstow ‘Compuestin que unen hier, Las vitaminas son Jos factores de crecimiento que se ne cesitan con mayor frecuencia. Muchas vitaminas fancionan, formando parte de coenzimas (iviense, por las Fi guiras 3.10), 5.12.9 5.25) coma se indica en la Tabla 5.3. La ‘snayor parte de los mécroorganismos son capaces de sinte- tizar todos kis componentes de sus coenzimas, pero alg nos no lo son y necesitan que se le stuminisinen certas pat es de estos coenzimas en forma dle vitamins. Las bacteria lcticas, tales como: los goers Strrpiacoccus. Laitohweilis, Leuconostoc y otros (rvtse Secei6n 12.19), dlestacan por sux requerimientos vitaminices complejos, mucho mls amplios que Jos humanos (vase Tabla 54). Las principales vitars- jueridas por los microorganismos son tiamina (vita ‘rina Bi), biotina, piridoxina (vitamina Bl) y piridensina (vie ‘tamina B,). CTI Aoeries custartes ce riero praduades gor micwoor [GATES (a) Michoxamata. El wero 84 une comme Fe” y weber cen wo da tt cetuia come Fe". EL hicroxarrato wale ego ce a cute ean ofcico_ tb) Enterobactina térnca de EScheNcPea Col Los at mos de oxigenc de cada molicula de eatecol ve indican en arco. (618) siderbtore eepteien sequacuetnaft Revinhin de conceptes Um contenares de com cos presenies onus Dbvive or farran a partie precies Hamadoe nari fos covert gs er ecole rence carded de ptt mctanttricnden micntvos ue lon yoctilesy lo Gon Frssonsrscrs que se nxuicten em pert canta se Seminar microttrienites facteresde ecm, resp wanenne 4:0 din clases de mokiculas contionen la mayor parte del itrgeno en sana cébla? ¥ Por qué un elemento como el Cot? se considera wn nticro- utrente y vn elemento como ef C un macronutriente? ¥ ,Que funciones desarvolla ef hierroen el metabolism celui hart 4 {Qué mecanismes sm lee rosponsables ale la captacién del hhiwera? FEE Medios de cutive Laexplicacisn anterior sobre fa nuatrickon microbiana sere ‘sume viendo la composicion quimica de los mextios de cul- tiv (Tabla 5.4). Los medios de cultive son las soluiciones ‘atritivas que se usin ene! laboratorio para el cuttiverde los mictoorganiomar. En microbiokgéa, 9¢ usan dos tipos ge- terales de medion ss cultivlos quimicamente detinidox Jylos complejos («no definiddos), Los medios definidos se repacan aftactiende cantidadtes previsas tle compueston. or- [et sere Kimo, 74 KANTO, OA Rue, 2h KILI, ag BNLSO, hg NHC) 35 MSC), tp MBO, OL yg Gan, oA thom 25 (hesee tg ‘Accu sities 30 amr trae Ci (GUN, Mo} de 2:10 yp sacs unas ‘A esta 1 88 phe mete 20 juydecada uno ‘Agua testitada o me “foo ws a el det eon eset = Rady ft Ui, Sol 1 0001 (4) etm ephedra uo 52" MEDIOS DE CULTIVO = 107 tnioas o inonginicos purificados a.un volumen en ayaa destilada. Por tanto, se sab la composicion yuimica acta de tun medio detinida Sis embarga.en muchos casos la com posiciOn exacta de an mextio no es importante. Les medion complejas pueden serentonces adeeuaders¢ incluso venta joss por varias razones. A menudo, Jos medios complejos emplean hidtolizados de caseina (la proteina dle Ia leche), carne, soja, levaduras u otras sustancias muy nuttitivas {peru sn ember ne seis qutmicarer ie) Toe tolizades estin disponibles comercialmente en forma she polvo y pueden ser pesados con focilidad y disuellos en gta destilada para preparar ue sedio. No obstante, ana imitacion importante al usar un mextio complejo es que ev se puede controlar su.campesicion nutritivarxacta Requerimientos nutricionales y capacidad biosintética La Tabla 5.4 muestra los ingredientes de tres medios de cul- tivo. clos definidas y uno complejo. EI medio complejo es el mis facil de preparar y permite un buen crecimientu de eual- qqiera de fos oxganismos indicados en la tabla, la bacteria centévica Escherichia vito ta bacteria Lietica Lrucavastie me senternifes (una bacteria =quisquillosas, por sts exigencias nutritivas) El medio definiclo mas: permite unbuen erecimniento de E cal, pero node L. mesenteroides; el cutive de este ultimo en mesho definide requiereta adiciém de va Foe nutrients orpinicen y de factors de cractaersto quae hho sirvnevesarios para 2 coli (Taba 5.4). Teniencla esto en Sacond 159 Extracto de evaiua 5 5 Pepiena 55. KINO, 25 ‘Agua clestiada 1 000m mm Aminaacidos (alanis, atgiina sxparragin patti, cise ithutamato.glunarnina, hein histidina.fleucin. Jeucina, Hs, (eit, proina, *Scrinds tec, Nps teen, vali) 206 jt de cada wn ‘Panis y parienelinas (erin, gam, ‘aeac, satin) 10 ng ae eae une ‘Vitaainas (biting, flats, Acido nicutinie patdowal, puridosamuna piideosina, bedlaving, Hamina, pantera, seid ppamincdonzie} 1-1 gaa wn, ‘Elements taza (rw la primeracolamn} a none p he estertm npn whats108 = Capitulo 5 = NUTAICION, CULTIVO ¥ METABOLISMO MICRO! ruent4, Cobe preguntarse cul de estos organismos tended mayor capacidad biosintética. La respuesta ex abvia: E.coli, pues su capacidad para crecer en un medio simple definices significa que es capaz de sintetizar fades sus commponentes oe lulares.a partir de uns sinica fuente de carbono. en este caso la glucosi (labla 5.9), Por el contrario, {mesenteroides te- qquicremultipes factores de crecimiento, lo que indica una sapacklad de inosintests limitada. Las comphejs necesicta- des nutricionales de L, meseniereides se pueden suministrar Prepurtando un medio definides cooo el que se inca en la Tabla 54 (locual llevaria bastante tiernsso) o usando el me- diocompleja indieado en la misma tabla, que pode prepa rarse de forma rapa. (Cuando se examinan os ingredtientes de medion de cul tivo com don «que se etemplifican en la Tabla 54, es impoctartle ener en cuenta que diferentes microorganisines pucden poseer qwerimicntos nutricknales may diferentes. Poe tanto, para el caaltivo cormecto de tun mictoorganismo determinado es ne ‘cesar. conocer sus exigencias nutritivas y suministrattas en les mextios de cultive con lis nutrients esenciales en la for: ima y proporcidn adecuiadas Si se tomael debi cuidadoren l-preparacion de los mextios de cultive, salts olativamen- te ficil cultivar en ef laborateria muchas tipos diferentes de microorganisoos. Explicansmens los procedimientos usados para cultivar microorganism a continuacki Lom mites dle cultivo sitisiaoyn las nevesidades nutritivas de fos microorpanisones ¥ pueden ser quimicamentsibefinidos ‘cumple (on definiden) (Ror gad es mas Sei el cultive rutinan te Cetccato: me sevcteroadry en an mextio complejo que er un medic definate? De los medtios mostridis en la Tabla 34, shale en qué mie: dio detinidory complejo crocenia mas rpichs [ss feria volt ¥ por que Cultive de microorganismos en el laborator Una Ger que ha sido propsradis un mods dle, aaltive, pre de ser incculadi (es decir, 6 le adadon organisms) y a co finuacian incubado en condiciones que faverezean el creel miento migrubiano. En general, se tratard del crecimiento de un cullive axénico o puro, esti es, de un cultive quecon- tiene silo un iinicn Lipa de micreorganisme, Para obtener y EETIITIEE Gerncie ce cicnins boctoranas, Las eclonaa won ‘mans aston do Alas tue e fran por lac dna o vanes een, I amaf, form, Wexlay Code una. cobra ms prope dh ‘age orgrrr. Dependhero delta els cbUNas 5 ace oats pero de cso cada una ce flas puncte un eme- 10 mu varub tan promotes a ellen Pca Auanloni toaudie. |) Sarat sharceacars cuties wn ger bas Ceontey fl ume e we colonia antrores} Panucoreran a suis carn or ger tion Seba Ch Shiga Barra utc aoa Maan.‘mantener sen cultiver axénice 0 putt eseserclal evitar Laer: ‘mada en ¢1 de otros organismos. Los organismas no dese. dos, Hamadios puniaminintes, son Auzy ubleuos (come Pas leur puso de muanifiesto hace msds de 125 afios. oie Seceidn 15], por ln que se han diseftado tenieas microbis pant evitarfox. Lin método iamportante para cbtener: pkinicns 4 puros ¥ paraasegurar ta purer de un cutive es ‘thus de madtios satktos en placas de Peni. ‘Medios de cultive liquides versus medios de cultivo sélidos ‘Hasta ahora sto hemos consideracks la preparaciin de me- dios de cultive ligquiclos, come kos medias definislos y com que aparecen en los tubos de la Tabla 34. Sia ett. ides mevtion decultive se prepatan con frecuencia en forma semisdlida o silida mediante la adicién al media li- ‘guido de un agente solidificanie. Los medios sélidos in- ‘movilizan a las octulas, permit cerecer y fortar mai $45 aislaiay visibles Hlamadas colonias (Figura 5.2). Las tied fy cel onpatenss lar crre ies cur dependiendy del organisme, las condiciones: ti i ser ase a Be presente), y otros pardmetios fisiologicns. Algunas as prettier rc dat foley btn wn ‘Figura 52). Independientemente de sts posible pigment. “ie bs cslenias permilenal micrabidlogo mcancee la pr ‘reaa del cultivo, las placas que contengan mas de un tipo de ‘oni rs fueron sembradas con un cultiveaxenice o puro. ‘Deeste modo, a placa de Petr: se ba venide utilizande per ‘mds de un sight como criterio para establecer la purezat en Jos cuttevis (reese Seccion 1.5) Los meuiios sitidurs se | any que bos Higuiidios: ‘salvo que, antes de esterilizar ea sl to fia ahd ager _foma agente gelificante, normalmente al 15%. EL oxgair se funde durante-el proceso deesteriizacion y el media fun “lide 90 vier'e sobre placas de cristal a de plisticn, y se deja “que solidifique antes de usarse (Figura 5.2). Técnica aséptica “Dado que los microorganismos son tibicuos, los medios ce “aikive deben ser estenitizados antes do usarse.'ara la ma- _otia de los mectios ie eultives esto se eal, ta _Dioualmesige mevtiante caloe framedo ens un gran recipiente “a presion Jlamacks autoctare. Las principios y aperastonies del autoclave se comentarin mis adelante asi come otrus mitodes de esterilizacxin (evise Secetn: ML). Una vez preparade un medio de cultivo estéril, puede oreaibir un iniewl de wn cultive puro y cultivarle nueva mete. Esta rogues el uso det la téeniea aséptica. La tée- ‘nica aseptiva Conwiste en una serie de procedimientos ue “evitan Ja contaminacion durante la manipulaciin de “tutivos y de liy mexdios de cultive estériles (Figura 5.3 y $4). Su aprondizaje es esencial para tener éxito en el le boratorie de iicrobiuiogia y tepresenia uty de 108 pri _ameros:metodos que Hee que dominar el micnobiolog El | sus comin fa contaminacie ambiental asa: Yel aire, yo quie este siempre contiene polvo en suis: “pension que gencralmente lleva una comunidad We msi: “cuanganismes. Cutando las placas o tubes se abren deben ‘manejarse de tal mode que los contaminants del aire no 5.3." GULTIVO DE MIGROORGANISMOS EM EL LABONATORIO © 109 penetren (Figura 53 y 5.4), La transferencia aséptica de tun cultive desde wn tubs con medi ofro, se tvaliza ha- bitualmente con el asa © aguja de siembea previamente es terilizada a la Itama por meandescencia (Figura 5.3). Las eultivos.en fos que ha habido ervcimiento se pueden tears “Tansierencie asepica ja)Elasade sombra we caer ‘fasta Laincandescencia y se entra bravernerte alate, th) Eituba st ‘desiapa.(c} Se pasa extreme dal 1460 por la Nara. jl Se extra a susie con of amt extent 6) Tea toa cesta Con at wuetvea famear of extremo del tubo ¥ a muestra ve depanaa en wn acto eatri. |S wehe atapar af hubo. Elsa se recatorta de nue antes cn tnaizar sa tienen110 # Capitulo 5 © WUTRICION, GuLTIVE Y fo © Tr ‘Método da hacer una extensiGn en placa para oblener cultivas axénicos o purce. (a) Se eslerliza-e asa y luego be lor nal muss ‘va. do no el tubo. (Se reaitza wna siemra por estra sobre une placa de agar Con medio estérl, exteneiendo txen los orgariamas, es ues de una esta ruc! $0 Tacen estas subtguies en angulc ya fal ne yuRive a esterzar el asa fe] Aspecto de ta paca membrada tres smcubacion. Se rata ue COLONES de fy acter Micrococcus luteus Culvadas en placas de agar sangre. Dp las cOlorvas (he CIRCE aisladas 68 ‘ounden Uoterer Nornalnentiecurives axencos a puras ie lungoa a superficie de placas con agar (Figues 5.4), donde se destrnollaran colunias como resultads del ere iments y slivision de las celuilas atslauas que han side sembradas, La toma y-resiembra por extension de una cu linia aishada es une métody idénee para obtener cultivos aaxénicat 6 pruros a partir de mezclas complefis yt con tienen maichos organismas diferentes ¥ 5. Revision de comceptos Enel laboratoric, lem microoeganiamen se puri culliver en meaty se ative que camenenen kos rutretten nevenatiow, Lo blencidin de culties axénicns 0 pros requtere le puesta en Prictia de técnicas sséptiras, (Que signilics la palabra estéril? (Qué ocurriria si ee me iHios de cullive no se eslerilizaran tras su peeparariin? of {Bor qué es necenaris ts técnica aséption ep lw obtencida de ‘oultivon dxénicowo purus ett of laburaterio? I ENERGIA Y ENZIMAS En ef Copitulo 2 consicleramos la existoncia de diferentes. tiposdemicroorganismos en funcion de-su fuente de ener- a puimioorganol raj, guirmctitot rapes y fletrafos ninse Sec ‘én 24}, Sea eual sea su mode de-viela, todo microorga: nnismo debe ser capidz de obtener energia de compuestos quimicos a de la haz y. ademés, conservar la envrgia come ATE: Vamos a considerar ahora los principios de conserva- Cidn de la energia utiizando algunas leyes sercias de la quimica y de la fisica que nes ayuddarana su comprersion, yy comsideraremos 4 continuacion la accion de tas envimas, {jue son los biocatalizadones celulares. Bioenergética La enemfa se define como la eapaciddad de realizar un trabajo. En: microbiologia, la energia se mide normalmente ‘en blpjulios (K)), una unidad de enerpia calowifica. Las re- acciones quimicas se acompanan de cambios de energia. Aungueen toa reaccidn quimica se pier alge de energia en forma de calor, fo que nos interesa en microbiologia ‘considerar la energia libre (abreviada come G), que se te- fine cone la enengla liberada que es tiaable para reuizar um fratuje. El cambio en enengia libre durante una reaccin se ‘expresa como AG”. donde el simbola 4 debe levine come cambio er. Los indices «cero» y «apéatrofe~ indican que unvvator dado de enengia libre ha sido obienide bajo com diciones estandar o habstuales: a pH 7, 25°C y-con tod his Feactives ¥y productos a una eoncentracion micial de LAR Aes cals cag Wiper arias om ponte {at erent ioe or esi aime Wr tsar ep itoricis rns anne Aleut mae Ee tree 3 mnie vsenat te hdc verte er ene {ares ale ce artes mnt pte aor aca Ufa {td le woes de mas na ate Secs Ty PF) ce este ata bet eal ert Apraen