Sunteți pe pagina 1din 14

METODE DE ANALIZ A

NICOTINEI DIN TUTUN

METODE DE ANALIZ A NICOTINEI DIN TUTUN

Nicotina este un alcaloid obinut din frunzele de tutun. Se prezint ca un lichid uleios, incolor,
inodor i foarte volatil, solubil n ap; n contact cu aerul capat culoare uor glbuie.
Nicotina, principalul constituent din Nicotiana tabacum, face parte din clasa alcaloizilor
pirolidinici. Datorit neurotoxicitii sale, a fost utilizat mai nti ca insecticid. n prezent, nu are
valoare terapeutic, ns se folosete pentru determinarea tipului de receptor (este agonist al
receptorilor nicotinici).
Este o substan foarte toxic la om doza letal este de 60 mg (o pictur); ntr-o igaret, pe
lng nicotin se gsesc i unele elemente radioactive (poloniu, stroniu) i gudroane (apar n fumul
de igar), care au aciune iritant i au potenial cancerigen.

Istoric
Pare paradoxal, dar nu s-a fumat tutun dect dup anul 1500. n antichitate grecii i romanii se
pare c fumau plante aromate cum ar fi piperul, eucaliptul, menta. Cu toate acestea n mormntul lui
Ramses al II-lea s-au descoperit frunze de tutun, fapt care ridic numeroase ntrebri. tim sigur c
civilizaiile amerindiene, att din America de Sud, ct i America de Nord, au fumat, utiliznd
tutunul n pipe, sau pentru otrvirea vrfurilor sgeilor (denumindu-l "petum"). Indigenii l cultivau
n insulele Tobago (Antilele Mici), incaii i aztecii l fumau zilnic sau la marile srbtori religioase.
Europa l descoper odat cu Cristofor Columb care l aduce n Spania. Plantele de tutun au fost
menionate pentru prima oar de Fernando Hernandez de Toledo, medicul lui Filip al II.

Ctre

mijlocul secolului XVI-lea este aclimatizat n Portugalia, iar ambasadorul Franei la Lisabona, Jean
Nicot de Villemain trimite circa 1500 de frunze de tutun tocate Catherinei de Medici, descriind
tutunul ca fiind capabil s calmeze migrenele. Treptat tutunul ncepe s se raspndeasc n ntreaga
Europa, ncepe s fie consumat n cantiti din ce n ce mai mari. n 1690 agronomul Jean de la
Quintinie descoper proprietile insecticide ale tutunului, iar extractul apos de tutun se folosea
pentru stropirea pomilor. n 1735 botanistul Linne folosete pentru prima oar termenul de nicotin.
n 1828 nicotina este izolat de ctre Posselt i Reinmann, sinteza sa fiind realizat prima oar de
Pictet n 1913.

Biosintez
Nicotina provine de la aminoacidul ornitin, prin condensri aldolice, sau de tip Mannich n
prezena enzimelor ce au drept coenzima piridoxal fosfat.

Proprieti fizico-chimice
Lichid incolor este antrenabil cu vapori de ap (proprietate care folosete la izolarea sa), cu miros
puternic de tutun, levogir, doza letal fiind de 40mg/kg corp.

Coninutul n nicotin a diferitelor produse


Sursa

Coninut (mg)

igaret

13-32

muc de igaret

5-7

igar de foi

15-40

1 gr tutun prizat

12-16

1 plasture cu nicotin

8.3-11

1 spray nazal cu nicotin

0.5

Nicotina - C10H14N2

Nume: alfa 3 piridil-N-metilpirolidina


Formul chimic: C10H14N2
Mas molecular: 162,23 g/mol
Densitate: 1,01 g/mol
Punctul de topire: -7,9C
Punctul de fierbere: 247C
Nicotina este o amin teriar constituit dintr-un inel piridic i unul pirolidinic. Exist 2
stereoizomeri ai nicotinei, un izomer activ ce leag receptorii nicotin-colinergici i se gsete n
tabac si un anatagonist slab al receptorilor colinergici ce se gsete n fumul de igar.
Nicotina este un compus anorganic, un alcaloid ce se gsete natural n planta de tabac, cu o
concentraie mare n frunze. Reprezint 0,3-5% din plant. Nicotina se gsete n frunzele de tutun
sub forma srurilor cu acizii citric i malic, Nicotiana tabacum coninnd cca 2% nicotin, iar
Nicotiana rustic cca 8%. Este o potent otrav a nervilor i este inclus n multe insecticide. n
concentraii mai mici, substana este un stimulant i este unul dintre factorii principali ce conduc la
plcere i calitile obinuinei de a fuma tabac. Nicotina are efecte cancerigene limitate, inhibnd
abilitatea corpului de a distruge poteniale celule canceroase, oricum nu promoveaz dezvoltarea
cancerului n celulele sntoase. Pe lng prezena sa n planta de tabac, ea se mai gsete, n
cantiti mai mici, n ali membri ai familiei solanaceelor, cum ar fi: roii, cartofi, vinete i piper
verde. Alcaloizii nicotinei se gsesc deasemenea n frunzele nucii de cocos.
Nicotina este un ulei higroscopic lichid, miscibil cu apa n forma sa iniial. Este incolor n
clipa extragerii dar n contact cu aerul i cu lumina se coloreaz n brun.Ca baz nitrogenic,
nicotina formeaz sruri cu acizii care sunt deobicei solizi i solubili n ap. Nicotina penetreaz
uor pielea i formeaz vapori la temperaturi nalte.
4

De obicei, nicotina brut se prepar din praf de tutun prin tratare cu NaOH, distilare cu vapori
de ap i extragere cu un solvent organic. Ea se purific prin distilare n atmosfer de gaz inert sau
prin recristalizarea oxalatului corespunztor.
Srurile nicotinei sunt dextrogire. Nicotina se dizolv n ap, n orice proporie, la temperaturi
mai mici de 600C i mai mari de 2100C. ntre aceste limite este numai parial miscibil cu apa.
Nicotina este solubil n solveni organici, iar n aer se coloreaz brun.
Structura nicotinei a fost stabilit prin reacii de degradare i prin sintez. Oxidarea cu diveri
ageni oxidani conduce la obinerea acidului piridin carboxilic, numit acid nicotinic. Prin
urmare, nicotina este un derivat al piridinei, avnd o grup C 5H10N n poziia . Grupa aceasta s-a
dovedit a fi N metilpirolidin, nicotina fiind, aadar, ( piridil) N metilpirolidina.
Structura sa este urmtoarea:

Efectele fizice, chimice i farmaceutice ale nicotinei


Fumul de igar este compus din faze volatile i particulare. Aproximativ 500 de compui gazoi,
printre care i azotul, monoxidul de carbon, dioxidul de carbon i benzenul au fost identificate n
faza volatil, ce reprezint aproximativ 95% din greutatea fumului de igar, celelalte 5% sunt
reprezentate de faza particular.
Exist aproximativ 3500 de diferii compui n faza particular, dintre care cel mai important
este alcaloidul nicotina. Materia particular fr alcaloid i fr coninut de ap poart numele de
gudron. Multe substane cancerigene, printre care se numr: hidrocarbonul polinuclear aromatic,
N-nitroamine i amine aromate au fost identificate n gudron.

Absorbia nicotinei din produsele tabacului


Nicotina este distilat din tabacul ars i mici picturi de gudron ce conin nicotin sunt inhalate i
depozitate n mici sculei cu aer i alveole. Nicotina este o baz slab i n timpul absorbiei prin
membranele celulare depinde de pH. pH-ul fumului eliberat de majoritatea igrilor americane este
acid (pH 5,5). La acest pH, nicotina este n mare parte ionizat i nu poate trece liber prin
membranele celulare. n consecin, nicotina din fumul acestor igri nu poate fi absorbit prin
mucoasa bucal. Oricum, pH-ul fumului din tabacul din pipe i trabucuri este alcalin (pH 8,5), iar
nicotina

este

mare

parte

neionizat

se

absoarbe

foarte

bine

din

gur.

Cnd nicotina din fumul de igar ajunge n alveolele pulmonare din plmni, este tamponat de
ctre pH-ul psihologic i absorbit rapid n alveolele pulmonare capilare i vene, i dus direct n
sistemul arterial. De acici, nicotina este rapid distribuit prin organism. Dureaz ntre 10 i 19
secunde pentru ca nicotina s ajung la creier. Sistemul arterial al creierului conine nivele de
nicotin deoarece este depit nivelul de nicotin din vene. Nivelele de nicotin din plasm, ca i
cele din snge scad rapid datorit distribuiei nicotinei ctre esuturile periferice i datorit
eliminrii. De vreme ce nici una din terapiile de nlocuire a nicotinei (NRT) utilizeaz ruta
pulmonar de absorbie, nimic nu poate mima ct de mul i ct de repede crete concentraia
nicotinei din artere n momentul inhalrii produselor tabagice sau rapidele efecte farmacinetice pe
care acestea le produc. Timpul tipic al creterii nivelului nicotinei n vene, dup fumarea unei igri
este deasemenea mult mai rapid dect al celorlali nlocuitori.

Testarea unei metode SIM-GC/MS de evaluare a expunerii la fumul de igar n


localuri publice

n prezent, exist la nivel mondial o preocupare accentuat pentru monitorizarea contaminrii


aerului cu produi de ardere din fumul de igar. Tot mai multe voci din lumea medical susin
reglementarea sau chiar interzicerea fumatului n orice spaiu nchis, avnd n vedere c fumatul
pasiv mrete riscul de cancer pulmonar, determin boli cardiace, atacuri cerebrale , induce i
exacerbeaz astmul la copii , cauzeaz boli cronice periodontale, infecii ale tractului respirator
inferior, poate afecta auzul sau chiar dezvoltarea ftului.
O atenie mrit este acordat protocoalelor de determinare a gradului de expunere a fumtorilor
pasivi, prin determinarea concentraiei unor biomarkeri n fluide biologice, de exemplu cotinina din
plasma sanguin sau din urin. Cotinina este un metabolit al nicotinei i serveste la evaluarea
gradului de expunere la fum de igar, avnd o durat de persisten n organism mai mare dect a
nicotinei.

cotinina

n cadrul grantului, a fost elaborat o metod cromatografic de analiz a unor contaminani ai


aerului (COV, PAH, nicotina), provenind din fumul de igar. S-a analizat fumul main-stream i
side-stream, n cazul unor mrci de igarete comercializate la noi in ar. A fost testat o metod de
determinare cantitativ a nicotinei din aer i a nivelului de cotinin din urin, n cazul unor
nefumtori expui pe termen lung.

C:\Xcalibur\data\nicotina\N5TCB

03/22/2004 03:25:38 PM

RT: 3.50 - 8.05

NL:
9.17E5
TIC M S
N5TCB

180
160
140
Relative Abundance

Nicotine
120
5.70

100
80

IS

60
4.75
40
20

3.90

3.68

0
3.6

3.8

4.04 4.15 4.26 4.41 4.58


4.0

4.2

4.4

4.6

5.95 6.11 6.22 6.35

4.88 5.07 5.10 5.34 5.42 5.61


4.8

5.0

5.2

5.4

5.6

5.8
6.0
Time (min)

6.2

6.4

6.58 6.74 6.90


6.6

6.8

7.14 7.22
7.0

7.2

7.44
7.4

7.70 7.77
7.6

7.8

7.94
8.0

N5TCB #191 RT: 5.70 AV: 1 NL: 5.74E5


T: + c SIM ms [ 83.50-84.50, 97.50-98.50, 132.50-133.50, 160.50-161.50, 161.50-162.50, 175.50-176.50, 179.50-180.50, 181.50-182.50]
84.0
100

Relative Abundance

80
60
40

133.0
161.1

20
98.0

0
90

100

176.1
110

120

130

140

150

160

170

182.0
180

m/z

Separarea cromatografic a nicotinei i a standardului intern. Spectrul de mas al nicotinei, n


modul SIM
Pentru analiza cantitativ a nicotinei din aer i a cotininei din urin, au fost elaborate i testate
metode de colectare/extracie/concentrare. Analiza cromatografic s-a fcut prin separare pe
coloan capilar Rtx-5MS, 15 m x 0.25 mm, 0,25 m film faza staionar.
Programul de temperatur a fost: 50 oC, constant 2 minute, apoi 8 oC/minut la 250 oC, constant
10 minute.
S-a utilizat ca detector specific spectrometrul de mas quadrupolar cuplat cu cromatograful de
gaze, Thermo Quest Trace DSQ GC/MS.
Figura prezint ca exemplu, separarea cromatografic a nicotinei i a standardului intern,
precum i spectrul de mas al nicotinei, nregistrat n modul SIM (selected ion monitoring), la nalt
rezoluie. S-a studiat liniaritatea rspunsului SIM-GC/MS i limita de detecie pentru un raport
semnal:zgomot de 5:1.
8

Metoda propus a fost testat n practic, evalundu-se expunerea nefumtorilor la ETS


(environmental tobacco smoke) n diferite localuri publice din ora. Au fost examinate valorile
concentraiei de nicotina din aer i au fost comparate nivelurile de cotinina (metabolit al nicotinei)
din urin, n cazul subiecilor fumtori i respectiv nefumtori. S-a observat o corelaie ntre
concentraia de nicotin din aerul nchis i nivelul crescut de cotinina n urin subiecilor umani.
Avnd n vedere numrul mare de fumtori din ara noastr, n multe spaii gradul de contaminare
cu produi de ardere din fumul de igar este destul de mare. Aceast metod de
colectare/extracie/separare/detecie poate fi util pentru evaluarea concentraiei acestor poluani n
aer sau pentru monitorizarea calitii aerului din diverse spaii publice unde fumatul este permis.

Nicotina din tutun


Tutunul are un coninut complex. Dac majoritatea fumtorilor cunosc faptul c tutunul conine
nicotin, puini tiu c acesta mai conine i alte aproximativ 4000 de substane chimice duntoare,
dintre care peste 40 sunt cancerigene. Coninutul n nicotin i alte substane depinde de varietatea
de tutun, de condiiile i metodele de cultur, precum i de poziia pe plant a frunzelor recoltate
(frunzele de la baza plantei conin, de regul, mai puin nicotin). n mod obinuit, nicotina
reprezint aproximativ 5 % din greutatea plantei de tutun. Din aceste motive exist variaii destul de
mari ale coninutului diferitelor tipuri de igri de pe pia. De exemplu, coninutul de nicotin care
este asimilat de organismul uman poate varia ntre 0,1 i 1,3 mg/igaret. Prelucrarea frunzelor de
tutun necesit parcurgerea a 3 etape: uscarea la aer, mbtrnirea (conservarea timp de un an sau
mai mult) i fermentarea. Aceast ultim etap tinde s reduc coninutul de nicotin i s creasc
coninutul altor substane toxice.
La prima vedere, identificarea celor peste 4000 de substane chimice din fumul de
tutun pare o aciune imposibil. Cercetrile intensive i progresele nregistrate n toxicologie i
carcinogenez din ultimii ani au permis izolarea compuilor cu cea mai crescut activitate toxic.
Dintre acetia, monoxidul de carbon i nicotina sunt agenii toxici majori ai fumului de igar, pe
lng acetia existnd i alii cu aciune mai redus: oxizi de azot, cianuri, amoniac, aldehide
volatile, hidrocarburi aromatice polinucleare, etilenoxid, clorur de vinil, amine heterociclice,
acrilamid, acrolein, benzopiren i benzen. Efectele nicotinei constau n modificarea modului n
care funcioneaz creierul i alte organe, dup cum urmeaz:

Cauzeaz iniial o eliberare rapid de adrenalin, hormonul lupi sau fugi, dup cum este
denumit n literatura de specialitate;

Blocheaz eliberarea hormonului numit insulin, ceea ce nseamn c nicotina determin


apariia unei hiperglicemii, existnd n organismul uman un nivel al glicemiei mai ridicat
dect cel normal;

Accelereaz puin ritmul metabolismului, astfel c se pot arde mai multe calorii dect atunci
cnd nu au loc activiti;

Descarc glutamatul (un neurotransmitor cu funcii de nvare i memorare) care


mbuntete conexiunile ntre grupurile de neuroni;

Pe termen lung poate mri nivelul colesterolului duntor, care contribuie la deteriorarea
arterelor.

Toxicocinetica. Efectele nocive ale nicotinei asupra organismului uman


Ptrunde n organism pe cale digestiv, respiratorie i cutanat. Pe msur ce nicotina intr n
organism este rapid distribuit n snge, de asemenea poate trece bariera hematoencefalic.
Metabolizarea are loc n ficat (circa 80-90%).Eliminarea are loc mai ales pe cale renal, dar se poate
elimina mai ales prin plmni, transpiraie, lapte, saliv; circa 10-20% se elimin ca atare, restul sub
form de metabolii (cotinin, ca atare sau hidroxilat).Urina acid accelereaz eliminarea, n cazul
urinei alcaline are loc o reabsorbie la nivelul rinichiului. Acioneaz la nivelul receptorilor
colinergici centrali la numai 7 secunde de la inhalare, se pare c influeneaz n mod pozitiv
activitatea adrenalinei.

ci de metabolizare ale nicotinei

10

n doze mari nicotina este depolarizant al receptorilor nicotinici. n plus determin creterea
nivelului dopaminei la nivelul creierului, datorit inhibrii MAO (monoamin oxidaza) responsabil
de metabolismul dopaminei. ns nu se tie sigur dac aceast aciune poate fi atribuit nicotinei sau
altor componeni din fumul de igar (hidrocarburile cancerigene). Aceast aciune asupra
dopaminei este similar celei produse de cocain i heroin, un motiv pentru care persoanele
fumeaz: meninerea unui nivel ridicat de dopamin, care determin senzaia de plcere. Nicotina i
metaboliii si au fost studiai pentru tratamentul unor boli cum ar fi: boala Parkinson, maladia
Alzheimer. Cercetrile actuale au demonstrat faptul c nicotina singur nu poate dezvolta cancerul,
nu are proprieti mutagene i determinnd creterea activittii acetilcolinei, duce la mpiedicarea
apopotozei (moarte programat) prin care organismul ii distruge anumite tipuri de celule, moarte
sau mutante, astfel acestea dezvoltndu-se in celule cancerigene. Excitant al sistemului nervos
central si periferic, n doze mici inhibnd toi ganglionii simpatici. Induce voma, scade diureza i
crete activitatea motorie intestinal. Asupra sistemului cardiac produce tahicardie, creterea
presiunii sanguine i determin creterea glucozei n snge. Nu se acumuleaz n organism datorit
faptului c se metabolizeaz repede avnd timpul de njumtire de circa 2 ore; se folosete pentru a
determina tipul de receptori.
Receptorii nicotinici sunt cei mai bine cunoscui neurologilor, care-i studiaz de mai multe
decenii, dat fiind faptul c exist att substane care stimuleaz aceti receptori, cum ar fi
acetilcolina i nicotina, ct i substane care-i inhib, cum ar fi veninul anumitor erpi.
11

Toxicitate
Este un toxic puternic i cu aciune rapid; iniial se mrete activitatea ganglionar, iar n faza
urmtoare se produce o inhibare a ganglionilor, cnd apare aciunea depresiv i
paralizant.Intoxicaiile pot avea diferite cauze:
- accidentale (atunci cnd se folosete pentru duntori)
- profesionale la persoanele care vin n contact cu soluiile de nicotin
- intenionate, prilej cu care toxicologul belgian Stas pune la baz metoda extraciei alcaloizilor
din cadavre, metod care cu modificrile aduse de Otto sio Ogier este folosit i astzi.
Poate da natere la:
- Intoxicaie supraacut de obicei accidental, care se produce la ingerarea accidental, moartea
survine instantaneu, prin convulsii puternice
- Intoxicaia acut care se produce la ingerare. Se manifest prin:
- tulburri digestive
- tulburri nervoase: cefalee, paloare, convulsii cu micri musculare necontrolate,
transpiraie abundent, delir asfixie
- tulburri cardiace: puls neregulat, HTA, respiraia se ngreuneaz, poate surveni moartea
prin sincopa cardiac, sau prin paralizia muchilor respiratori i a centrului respirator bulbar.
Intoxicaia cronic este foarte ntlnit n rndul fumtorilor: la fumtorii nceptori se observ
tulburri nervoase i vasomotorii, palpitaii, tulburri digestive, greuri, tulburri care pot duce in
final la toxicomanie (nicotinism)
Fumatul suprim senzaia de foame, la fumtorii cronici 90-98% din nicotina inhalat este
reinut n plmni i constituie alturi de gudroanele rezultate din ardere, una din cauzele
principale de cretere a cancerului pulmonar.

Nicotina i efectele ei

12

Datorit asocierii cu fumatul i cu efectele nocive ale fumatului, efectele nicotinei sunt
ntotdeauna catalogate ca duntoare. Cu toate acestea, exist i multe efecte benefice ale nicotinei,
atunci cnd aceasta este utilizat n doze controlate de ctre medici.

Un vaccin antifumat injectabil pentru a evita recidiva la fumtorii care ncearc s renune la
tutun este n atenia industriei de mai bine de zece ani.
Dependena de tutun se datoreaz nicotinei, un drog natural fabricat i el de creier. Prezena n
fumul de igar, cnd este inhalat n plmni ajunge pn n alveole, trece ca oxigenul n sngele
arterial i se regsete aproape instantaneu n creier.
Acolo, stimuleaz neuronii dopaminergici care produc senzaia de plcere i dependen.
Problema este c nicotina este o foarte mic molecul care trece uor bariera snge-creier, fr a fi
detectat de organism (la fel ca proteinele virusurilor sau ai bacteriilor strine de corp).

13

De aici, ideea americanilor de la Nabi (colaboratori ai GSK), a elveienilor de la firma Cytos


(colaborator al Novartis) i a britanicilor de la Xenova de a face detectabil nicotina natural.
Scopul este de a o mpiedica s treac n creier i de a reduce astfel dorina, chiar nevoia de a fuma.
Cele trei laboratoare au cuplat-o cu o protein viral sau cu o toxin a holerei genetic modificat
pentru ca s nu fie periculoas. Cnd ansamblul nicotin-toxin este injectat n corp, el este
recunoscut ca un element strin de ctre sistemul imunitar care comand celulelor sale s produc
anticorpi. Anticorpii circul n snge, recunoscnd nicotina din tutun, i se lipesc de ea.
Acest lucru duce la o molecul att de mare nct devine incapabil s treac de barierele care
protejeazcreierul.
n final, o problem etic i vizeaz pe adolescenii care ar trebui vaccinai ca s nu nceap s
fumeze. De obicei, vaccinarea se face pentru a evita o boala, nu un comportament.
n concluzie, nicotina este un compus halocinogen licit, dar cu o influen extrem de
controversat asupra organismului uman datorit att aciunilor benefice, dar mai ales celor
nefavorabile.

14