Structura ADN

Sarcina
NEGATIVA

Tehnici de studiu ale acizilor nucleici

Extractia
Electroforeza
Blotting (Southern blotting & Northern blotting)
Hibridizarea
PCR
Secventierea

Electroforeza

Extractia
DNeasy blood and tissue kit

Agar-agar si agaroza
Agaroza:
polimer de
agaropectina
(D-galactoza si
3,6-anhidro-Lgalactopiranoza)
Agar-agar:
Amestec de
agaroza si
agaropectina
(molecule mici)

Bromura de etidiu (EtBr)

Southern blotting & Northern

blotting
Bloting: transferul AND, ARN sau proteine din gel pe
o membrana inerta (nailon sau nitroceluloza). Dupa
transfer moleculele de interes sunt detectate fie
prin hibridare fie cu ajutorul anticorpilor.
-Southern blot (Edwin Southern)
-northern blot
-western blot
-etc.

SEECVENTIEREA
METODA MAXAM-GILBERT
SANGER

Marcare radioactiva la capatul 5 cu o kinaza

(folosind 32P ATP). Prin 4 reactii chimice diferite
molecula de AND este rupta in dreptul unei
anumite baze azotate.
A & G depurinate cu ac. formic
G metilate cu dimetil sulfat
hidroliza-piperidina
C &T metilate cu hidrazina
la cald

METODA

Descifrati secventa

A
A
T
T
C
C
C
G

Evolutia secventierii Sanger