Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
2
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
n legtur cu reactorul n care trebuie s aib loc procesul biologic sau biochimic,
apar urmtoarele probleme importante:
care este cel mai bun reactor pentru o transformare biochimic dat;
3
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
n sistem submers;
n culturi de suprafa.
n cazul cultivrii microorganismelor n sistem submers, mediul de cultur este
lichid, agitat i aerat; din punct de vedere al continuitii procesului, se disting trei moduri
de operare: discontinuu, semicontinuu i continuu.
Operarea n sistem discontinuu, adic n arje (sistem batch).
Cultivarea ncepe la timpul t = 0 i se termin la timpul t = t'. La nceput,
proliferarea celulelor are loc n condiii nelimitative. Dup ce s-a atins densitatea maxim
n celule are loc operarea n condiii limitative de substrat. Substratul se refer la unul
dintre nutrieni (sursa de carbon, sursa de azot etc.) sau la oxigen.
n particular, pentru oxigen, care este consumat foarte rapid, o aprovizionare
continu n mediu este posibil, astfel nct concentraia sa s nu scad sub o valoare
critic specific microorganismului.
Operarea n sistem discontinuu se noteaz DC, fiind reprezentat grafic
astfel:
4
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
L-L
heterogene:
unde:
L-L:
L-S:
lichid-solid -
multifazice
5
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
parcursul bioprocesului.
6
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
CARACTERIZAREA BIOREACTOARELOR
1. Bioreactorul discontinuu
Bioreactorul discontinuu este caracterizat prin amestecarea ideal a mediului de
cultur i prin operarea n arje: se ncarc componentele mediului, se inoculeaz, iar
dup un interval de timp determinat se descarc mediul de fermentaie coninnd produii
de biosintez.
2. Bioreactorul continuu
n cazul cultivrii continue, prelungirea fazei de cretere exponenial un timp nedefinit
se realizeaz prin adugarea continu n reactor a unei soluii de mediu proaspt cu un
debit volumetric i eliminarea continu a biomasei cu acelai debit, astfel nct volumul
biomasei din fermentator s rmn constant.
Pentru stabilirea ecuaiei ce genereaz dezvoltarea microorganismelor, trebuie s se
in seama de faptul c variaia concentraiei biomasei este datorat existenei a dou
fenomene antagoniste:
-creterea numrului microorganismelor datorit dezvoltrii populaiei
-scderea cantitii de microorganisme datorit eliminrii lor din sistem.
7
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
8
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
9
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
10
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
biologice pot fi pentru fermentaii aerobe sau anaerobe. Reactoarele biochimice pot fi:
cu enzime libere, cu enzime imobilizate icu faz solid.
Formele constructive i modurile de operare ale bioreactoarelor pot fi foarte diferite, n
funcie de cerinele i specificaiile proceselor tehnologice.
cu amestecare mecanic;
cu pomp de recirculare;
cu aer comprimat.
11
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
ALEGEREA BIOREACTOARELOR
Alegerea bioreactorului potrivit pentru un anumit proces biotehnologic se realizeaz
n funcie de o serie de factori predeterminai cum ar fi: natura microorganismului folosit,
proprietile mediului de cultur, parametrii biochimici ai procesului, amplasamentul
bioreactorului.
12
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
transfer mai bun al oxigenului i celulele sunt aprovizionate cu oxigen mai bine.
Mrimea i forma celulelor. Acestea au, de asemenea, o influen considerabil asupra
tipului de reactor necesar i a modului de operare. Celulele sferice sunt, de obicei, mai
mici i mai puin sensibile la forfecare dect microorganismele filamentoase.
Formarea celulelor sferice necesit un grad de dispersie mai mare a aerului dect
organismele filamentoase. Dimensiunile mici asigur un raport mare ntre suprafa i
volum, un consum mai mare al substratului i, de asemenea, o cretere rapid.
Celulele aerobe cu vitez mare de cretere necesit un consum al oxigenului mai
mare.
Organismele filamentoase cresc numai la captul hifelor. Aceasta conduce la
viteze mici de cretere i la cereri mici n oxigen. Deoarece astfel de celule sunt, de cele
mai multe ori, sensibile la forfecare, fore mari de dispersie pot cauza ruperea. De fapt,
este de dorit s se disperseze nu numai faza gazoas ci i microorganismul nsui.
Formarea de micelii i aglomerri are un efect considerabil asupra alegerii
reactorului. Aglomerrile de celule au un raport mic ntre suprafa i volum, o vitez mic
de consum a substratului i o vitez mic de cretere.
Viteza mic de consum a oxigenului permite folosirea reactoarelor care disperseaz
aerul ntr-un grad mic sau moderat.
Celulele care formeaz aglomerri sunt uor de separat din mediile de cultur i
reintroduse n reactor n scopul ridicrii densitii celulare. n multe reactoare, densitatea
celular se diminueaz considerabil cu creterea nlimii (de exemplu, reactoarele turn).
Cnd ieirea mediului este plasat la captul reactorului, numai o cantitate mic de celule
sunt ndeprtate din turn. n acest fel, timpul de staionare a celulelor n reactor poate fi
extins considerabil, fr creterea timpului de staionare n mediu.
Deci, aglomerarea de celule permite operarea n sistem continuu a reactorului de
producere a metaboliilor, fr o separare special a celulelor (de exemplu, prin
centrifugare sau filtrare).
Aglomerrile de celule pot avea diferite morfologii. Acestea depind nu numai de
tulpina productoare, ci i de condiiile unui stres mecanic din reactor. n condiiile unui
stres mecanic mic, multe organisme filamentoase (de exemplu, fungii) formeaz
aglomerri voluminoase, interacionnd unele cu altele, care conduc la vscoziti mari ale
mediului. Aceste aglomerri sunt adesea sensibile la stresul de forfecare, care poate
conduce la ruperea filamentelor.
13
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
14
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
bioreactorului. In cazul n care substratul prezint inhibiie sau represie asupra creterii
microorganismului, procesul este condus n sistem semicontinuu, cu alimentare continu
de substrat (fermentaie cu adaosuri).
In cazul n care produsul de biosintez induce inhibiie sau represie cnd sunt n
concentraie mare (de exemplu, glucoza i celobioza la Trichoderma viride, etanolul la
Sacharomyces cerevisiae), este de dorit s se foloseasc aranjamentul n mai multe
trepte.
O alt caracteristic, ce influeneaz alegerea unui anumit tip de bioreactor sau a
unui anumit sistem de operare, o constituie prezena n mediul de cultur a unei
componente care se degradeaz n timpul operaiei de sterilizare (termolabile). n acest
caz este necesar sterilizarea separat a acestor materiale.
O alt proprietate a mediului de cultur care influeneaz procesul de fermentaie
este tendina de coalescen, adic formarea de bule de gaz care micoreaz transferul
de oxigen n mediul de cultur. n acest caz se introduc n bioreactor sisteme de disipare a
bulelor, cu efect local (mijloace mecanice).
Comportarea reologic a mediului are o mare influen asupra unui bioproces.
Mediile cu vscozitate mic nu creeaz probleme de agitare i de vitez de transfer a
oxigenului. O cretere a vscozitii mediului poate avea diferite cauze:
-concentraia mare n substrat (n particular la operarea n sistem batch", la nceputul
cultivrii);
-secreia de produse vscoase pe parcursul biosintezei, cum ar fi pullulanul i xantanul;
-morfologia microorganismului.
O caracteristic a mediului important, care implic alegerea unui anumit tip de
bioreactor, este spumarea n timpul cultivrii. Formarea de spum conduce de cele mai
multe ori la blocarea ieirii aerului, inundarea filtrelor de aer, scderea volumului de mediu
n bioreactor, infecia mediului de cultur i, deci, compromiterea procesului de biosintez.
Exist mai multe metode pentru prevenirea fenomenului de spumare:
-conducerea procesului astfel nct s nu se formeze spum; de exemplu o vitez mare de
transfer a oxigenului (printr-o agitare corespunztoare, variabil n funcie de nivelul
concentraiei de oxigen dizolvat msurat continuu) transform procesul ntr-unui cu
limitare de substrat; n acest caz concentraia oxigenului nu mai este un factor limitativ i
nu este necesar mrirea debitului de aer care conduce la spumare excesiv. Aceast
metod se poate aplica n cazul n care spumarea se datoreaz proteinelor dizolvate,
15
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
16
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI