Sunteți pe pagina 1din 21

Evidenierea fenomenului de nlnuire a genelor

plasate pe acelai cromozom, fenomenul de linkage


Teoria cromozomal a ereditii
Dup anul 1900, s-au adus n atenie cercettorilor din domeniul
biologiei, un sistem de evenimente despre ereditate, un asamblu de noiuni i
argumente experimentale care au contribuit la dezvoltarea ulterioar a
cercetrilor asupra mecanismului ereditar.
Descoperirea diviziuni celulare mitoza dar mai ales meioza, au dat
posibilitatea interpretrii citogenetice a legilor lui Mendel, care de altfel
consider c transmiterea ereditar a caracterelor i nsuirilor se datorete
unor factori ereditari. Ulterior W. Johannsen (1903) nlocuiete termenul cu
noiunea de gen (de la grecescul gerrein- a da natere), i care ulterior a
fost definit ca fiind cea mai mic unitate funcional, de mutaie i de
recombinare, prin care se realizeaz caracterele individuale ale
organismelor.
Argumentele experimentale n sprijinul fazei conform creia factorii
ereditari (genele) sunt localizai n cromozomi ce au fost aduse n anul 1902
de W. S. Sutton n S.U.A. i T. Boveri n Germania. Aceast argumentare a
plecat de la constatarea c nr. de cromozomi este mic fa de numrul
caracterelor determinate de gene, de unde concluzia c genele, ca uniti ale
cromozomilor se gsesc n numr mare pe fiecare cromozom.
Fundamentarea tiinific a existenei bazei naionale a ereditii, a
fazei plasrii genelor n cromozomi a fost fcut de Thomas Hunt Morgan
(1866-1945) i coala sa, prin elaborarea teoriei cromozomale a ereditii,
teorie care explic mecanismele de transmiterea caracterelor de ctre genele

plasate pe acelai cromozom, precum i consecinele acestor mecanisme


ereditare.
Morgan i colaboratorii si au ales ca obiect de cercetare Drosophila
melangaster, care prezint o serie de avantaje:
-se nmulete n laborator, are un ciclu de via scurt (12 zile), are un
numr mic de cromozomi (2n=8) care se deosebesc uor ntre ei din punct de
vedere morfologic.
n urma observaiilor fcute Morgan i colaboratorii au ajuns la teoria
ce dezvolt urmtoarele probleme:
1.fiecare gen ocup n cromozom o anumit poziie, pe care a numito locus (plural loci)
2. genele sunt dispuse liniar pe cromozomi ca mrgelele pe un fir de
a, ocupnd n mod constant acelai locus pe care l pstreaz, att n
cursul procesului de formare a gameilor ct i dup fecundare
3. unitatea de segregare n gametogenez nu este gena ci cromzomul,
care segreg cu toate genele pe care le deine, fenomen care poart
denumirea de nlnuirea genelor sau linkage.
4.Schimbul de segmente cromatidice ntre cromozomii homologi n
timpul meiozei i apariia gameilor recombinai, fenomen ce poart
denumirea crossing-over.
nlnuirea genelor plasate pe acelai cromozom (linkage)
Fenomenul de nlnuire a genelor a fost intuit pentru prima dat de
Sutton (1902), dar a fost demonstrat pentru prima dat de ctre Bateson i
Punnett (1906) la plante i de Morgan (1910) la Drosophila melanogaster.
nlnuirea genelor plasate pe acelai cromozom (sau linkage -ul)
reprezint fenomenul prin care genele, existente pe acelai cromozom ,
segreg i se transmit mpreun n procesul meiozei, fiecare cromozom

migrnd n celula sexual cu genele de care dispune. Deci unitatea de


segregare n gametogenz nu este gena ci cromozomul.
Caracterele i nsuirile controlate de gene localizate pe acelai
cromozom se transmit mpreun, nefiind posibil, libera combinare i
transmiterea independent a lor ca n cazul caracterelor determinate de gene
plasate pe cromozomi homologi diferii. Transmiterea nlnuit a genelor
plasate pe acelai cromozom, demonstreaz c legea liberei combinri i a
segregrii independente a caracterelor stabilite de Mendel are o valabilitate
limitat.
Fenomenul de linkage poate s fie complet sau incomplet, crossingover, sau se produce ntr-o anumit proporie.
Linkage complet
Acest fenomen a fost explicat de ctre T. A. Morgan prin experiene
de detaliu efectuate pe Drosophila melanogaster la care, pe lng tipul
slbatic (standard) exist mai multe mutante. Morgan a ncruciat musculie
cu corpul cenuiu i aripi normale, BBVV( tipul normal sau slbatic) cu
musculie cu capul negru i aripi vestigiale (bbvv) i a obinut n F 1 o
descenden uniform cu corpul cenuiu i aripi normale, adic
asemntoare cu printele homozigot dominant (tipul slbatic).
Urmrind prin hibridare modul de transmitere a celor dou caractere
n F2, a constatat c apare o abatere de la legile segregrii mendeliene din
dihibridare,

cele

dou

caractere

transmindu-se

monohibridrii (fig.1).
P

BB
vv

corp cenuiu
aripi normale

bb
vv
corp negru
aripi scurte

dup

modelul

F1

B
V

b
v
Bb

Bb

Vv

corp cenuiu
Vv

aripi normale

Fig. Raportul de segregare n F2 n cazul linkage-ului complet pentru


dou caractere la Drosophila.
Deci indivizii din F1 nu mai produc patru feluri de gamei (cazul unei
dehibridri mendeliene), ci numai dou feluri, n fiecare gamet gsindu-se
cte unul din cei doi cromozomi cu cele dou gene (BV) i (bv), deci
similari cu cei care au participat la formarea sa.
Astfel genele (BV) i (bv) merg mpreun la ncruciare, rmn
mpreun la formarea gameilor i ca atare, nu se mai poate produce
combinarea ntmpltoare.
Aceast constatare a dus la concluzia c cele dou caractere urmrite ,
se afl pe acelai cromozom, deci sunt nlnuite, se transmit i au tendina
s rmn asociate i la descendeni, fenomen ce poart denumirea de
linkage sau nlnuirea genelor.

Dac se realizeaz o retroncruciare a produilor din F 1 cu tipul


parental homozigot recisiv se obine un raport de segregare de 1:1 (sau
50%:50%) asemntor celui din monohibridare i nu de 1:1:1:1, cum ne-am
fi ateptat ntr-o hibridare (fig.2).
P mascul

Bb

Vv

vv

corp cenuiu
aripi normale

B
V
B

b b femela
corp negru
aripi scurte

b
v

b
v

V v

corp cenuiu

corp negru

aripi normale

aripi scurte

Fig. 2 Rezultatele retroncrucirii la Drosophila n cazul linkageului


complet (demonstreaz transmiterea nlnuit)
Devierea de la raportul de segregare ateptat se datorete faptului c
hibrizi heterozigoi din F1 folosii la retroncruciare, nu au produs dect
dou feluri de gamei (BV i bv), n loc de 4 feluri ct ar fi produs dac ar fi
avut loc o combinare liber a genelor prezente n genotip.
Faptul c nu apar i forme noi, recombinate, de genul: corp cenuiu i
aripi scurte i corp negru i aripi normale, dovedete existena unei nlnuiri
complete ntre cele dou gene situate pe acelai cromozom.
Pentru a sugera prezena genelor Bi V pe acelai cromozom, se
noteaz cele dou genotipuri sub form de fracie(

Fenomenul de linkage complet se ntlnete foarte rar, dac nr. genelor


nlnuite ar fi foarte mare i s-ar transmite ca atare, ar fi un fenomen
nedorit, pentru c s-ar micora variabilitatea, limitndu-se astfel posibilitatea
de selecie.
Grupe de nlnuire a genelor
Th. H. Morgan i colaboratorii au constatat c genele identificate la un
anumit genotip se grupeaz i se nlnuiesc ntre ele n mod constant,
formnd grupe de nlnuire a genelor sau grupe de linkage. ncrucind
musculie normale cu musculie care prezentau caractere mutante, ei au
grupat cele peste 500 de mutante n patru grupe de nlnuire,
corespunztoare celor 4 perechi de cromozomi omologi astfel:
grupa I- cromozomii sexului -141 mutante
grupa a II-a -perechea a 2-a de cromozomi -228 mutante
grupa a-III-a perechea a 3-a de cromozomi 156 mutante
grupa a-IV-a perechea a 4-a de cromozomi 12 mutante
Cnd se ncrucieaz mutantele care au caractere ce aparin la dou
grupe diferite de linkage, segregarea se produce dup legile mendeliene, iar
cnd se ncrucieaz mutante care au caractere ce aparin aceleeai grupe de
linkage, transmiterea carcterelor se face nlnuit.
Se poate constata c numrul grupelor de nlnuire are caracter
limitat, n funcie de nr. perechilor de cromozomi, numrul grupelor de
nlnuire corespund cu nr. haploid de cromozomi.
Cunoaterea grupelor de linkage, i a perechilor de gene nlnuite,
pentru principalele caractere ale unei specii are importan att pentru
cercetrile genetice ct i pentru cele de ameliorare.
Linkage-ul incomplet

S-a dovedit tot pe Drosophila c cele mai frecvente cazuri de


transmitere nlnuit a genelor sunt tipul linkage-ului incomplet.
ncrucindu-se tipul standard cu ochii roii i aripi normale (RV/RV)
cu tipul mutant cu ochi purpurii i aripi scurte (rv/rv) se obin n F1, indivizi
asemntori tipului standard.
Prin retroncruciarea hibrizilor F1, cu forma parental recesiv, se
obine n generaia de dup retroncruciare (B1), un raport segregare de :9
pri musculie standard; 1 parte musculie cu ochii roii i aripi scurte; 1
parte musculie cu ochii purpurii i aripi normale; 9 pri musculie cu ochii
purpurii i aripi scurte (fig.3).
Rezultatele obinute dovedesc existena unor schimburi prin crossingover ntre cromozomii deintori ai genelor ce determin cele dou caractere,
ns frecvena crossing-overului este foarte redus. Aceasta dovedete
tendina celor dou gene de a rmne nlnuite. Deoarece au aprut i forme
noi recombinate, fenomenul poart denumirea de linkage incomplet.

Fig. 3 Rezultatele retroncrucirii la Drossophila, n cazul linkageului incomplet (demonstreaz existena crossing-overului la femel).
Lucrare
1. Din ncruciarea a 2 soiuri de Lathyrus odoratus, unul cu flori
purpurii i polen de form alungit cu formula ereditar cu un alt soi cu flori
roii i polen sub form rotund , se obin n F1 numai plante cu flori roii i
polen de form alungit. n F2 se obin plante cu flori purpurii i polen de
form alungit i plante cu flori roii i plen de form rotund. S se
ntocmeasc schema de ncruciare, stabilirea raportului de segregare i
explicarea fenomenului.
2. Din ncruciarea indivizilor standard (la Drosophila) cu corp
cenuiu i membre neproase, cu indivizi mutani de culoare neagr i
picioarele proase, rezult n F1 indivizi asemntori tipului standard. Prin
retroncruciarea hibrizilor din F1 cu forma parental mutant se obin n
generaia de retroncruciare, indivizi standard i asemntori tipului
mutant.

Explicai

fenomenul,

ntocmii

schema

de

ncruciare

retroncruciare i executai analiza genetic.


3. Prin acelai exemplu, explicai posibilitatea de apariie a unor forme
de culoare standard i picioare proase n proporie de 6 % i a unor forme
de culoare neagr i picioare neproase de 6%, ntocmind schema de analiz
genetic.
*La Drosophila fenomenul de crossing-over nu are loc dect la 0+.

Tema.
Evidenierea fenomenului schimbului de gene dintre cromozomii
homologi fenomenul de crossing-over.
Cunoatem c linkage-ul incomplet constituie o abatere de la
transmiterea complet nlnuit a genelor plasate pe acelai cromozom i se
datorete fenomenului de crossing-over.
Pe lng fenomenul de linkage, teoria cromozomal a ereditii definete i
stabilete fenomenul de crossing-over.
1.Crossingover-ul este fenomenul prin care se realizeaz un schimb
de fragmente cromatidice ntre cromozomii homologi n timpul meiozei,
avnd ca urmare apariia unor gamei recombinai, diferii de ai formelor
parentale. Prin unirea acestor gamei vor apare forme noi recombinate.
Existena acestui fenomen demonstreaz c nlnuirea nu este n
toate cazurile complet sau absolut.
Th. H. Morgan, a pus n eviden acest fenomen tot n experineele cu
Drosophila i anume chiar cu mutantele cu care a demonstrat fenomenul de
linkage, deci cu musculie care aveau corpul cenuiu i aripi normale
dezvoltate (tipul normal sau slbatec), ncruciate cu tipul mutant, corp
negru, aripi vestigiale.
Fenomenul de linkage total a aprut atunci cnd s-au retroncruciat
masculi heterozigoi din F1, cu femele homozigote recesive din generaia
prinilor. n cazul ncrucirii femelelor heterozigote din F1 cu masculii
homozigoi recesivi din generaia prinilor, se vor obine n F2 cele patru
combinaii posibile, dar nu n numr egal ci n urmtoarele proporii (fig.1).
-41,5 % musculie cu corp cenuiu i aripi normale (tipul slbatic).
-41,5 % musculie cu corp negru i aripi scurte (tipul mutant).

-8,5 % musculie cu corp cenuiu i aripi scurte (recombinate).


-8,5 % musculie cu corp negru i aripi normale (recombinate).
Aceast proporie de 83 %, indivizi cu caractere nlnuite i 17 %
indivizi cu caractere recombinate, demonstreaz existena unui linkage
incomplet, avnd loc manifestarea fenomenului de crossing-over, prin care
se face schimb de gene ntre cromozomi homologi.

Fig.1. Rezultatele retroncrucirii unei femele heterozigote cu un


mascul homozigot recesiv la Drosophila melanogaster, care explic
fenomenul de crossing-over.
Apar astfel cromozomi, recombinai diferii de formele parentale,
fiecare coninnd numai cte una din cele dou gene pn atunci nlnuite.
Astfel gameii produi de femela heterozigot au fost de patru feluri: dou
tipuri identice cu cei materni (BV i bv) i 2 tipuri recombinai (Bv i bV).
2. Frecvena crossingover-ului sau valoarea de schimb.
Este dat de procesul formelor noi recombinate, ceea ce nseamn c
pentru exemplu citat este de 17 %.
Crossingoverul nu se produce dect ntre dou cromatide nesurori, din cele 4
ale unei perechi de cromozomi homologi, astfel c frecvena crossingoverului nu poate depi 50 %.
3. Cauzele crossing-overului.
Referitor la cauze i mecanismul biologic al crossing-overului exist
dou ipoteze.
-ipoteza ruperii cromatidelor i schimbului

reciproc de segmente

cromatidice sau teoria chiasmatopiei (considerat a fi cea real).


-ipoteza copierii inverse, respectiv replicaia selectiv a cromatidelor
n timpul sintezei materialului cromozomial.
4. Tipul de crossing-over.
Crossing-overul poate fi:
-simplu, cu recombinarea unui singur segment de cromatid
-dublu, cu recomandarea a dou segmente cromatidice
-triplu
-multiplu.

Cu ct cromozomul este mai lung, exist posibilitatea ca numrul de


gene localizate pe el s fie mai mare, astfel c schimbul de fragmente
cromatidice poate fi dublu sau multiplu.
Frecvena mai mare sau mai mic a crossing-overului depinde i de
distana ntre genele nlnuite pe acelai cromozom, n sensul c, cu ct
aceast distan este mai mare i

probabilitatea de apariie a crossing-

overului este mai mare, i invers, cu ct distana este mai mic i


posibilitatea de apariie a crossing-overului este mai mic.
Cercetarea i constatarea fenomenelor de nlnuire a genelor din
acelai cromozom i a schimbului de gene ntre cromozomii homologi, au
condus la concluzia c genele sunt aezate ntr-o ordine liniar n cromozomi
la anumite distane.
5. Testul cis-trans sau testul de complementaie.
La Drosophila i n special la microorganisme s-a dovedit c
fenomenul de crossing-over se realizeaz nu numai ntre gene diferite, ci i
n interiorul genei, ntre diferite subdiviziuni ale genei , care ocup subloci
diferii n cadrul locusului ocupat de gen (crossing-over intragenic).
Exemplu.
-La Drosophila n cazul mutaiei vermilion notat cu v, ce se afl
localizat pe cromozomul x i care se manifest prin incapacitatea de sintez
a enzimei triptofan-oxidaz, rezultatul fenotipic fiind culoarea roie deschis
a ochilor.
- Gena v are dou pri (subdiviziune) notate cu v36 + i v48a (fig.2).
Cnd cele dou subdiviziuni se gsesc pe cei cromozomi homologi
(fig.2 a), se spune c sunt n poziia trans i efectul este manifestat fenotipic
prin ochi de culoare roie deschis.

Cnd cele dou subdiviziuni, vin n urma crossing-overului intragenic


pe acelai homolog (fig.2 b) se spune c sunt n poziia cis i efectul genei
mutante (v36t i v48a), nu se manifest fenotipic deoarece cromozomul
homolog are gene normale v+, v+), care acoper efectul celor mutante i deci
vor apare ochi de culoare normal.

Fig.2. Reprezentarea schematic a unui crossing-over intragenic.


A- poziia trans
B- poziia cis
Acest fenomen poart denumirea i de efectul cis-trans.

Dac dou gene (subdiviziuni ale unei gene) au efectul cis-trans, deci
se complementeaz nseamn c fac parte din aceeai gen, iar dac nu dau
acest efect nseamn c fac parte din dou gene diferite.
Testul prin care se determin dac dou mutante aparin aceleiai gene
sau unor gene diferite poart numele de test de complementaie.
Pe baza acestui fenomen s-a reuit ntocmirea unor hri genetice ale
genelor, asemntoare hrilor cromozomale.
*n funcie de felul de aranjament al genelor pe cromozomi homologi,
exist i n acest caz o denumire identic cu cea de mai sus.
Astfel dac genele dominante sau cele mutante sunt situate pe acelai
cromozom (AB sau ab) fenomenul a fost denumit cuplare, iar cnd o gen
dominant sau mutant se gsete pe un cromozom, i cealalt pe
cromozomul homolog, (Ab i aB)denumirea dat a fost de repulsie (fig.3).
Termenul de cuplare i repulsie a fost introdus n 1905 de Bateson,
Sanders i Punnett. n 1942 Haldane propune nlocuirea termenului de
cuplare prin cis iar cel de repulsie prin trans.
Prin retroncruciare se poate stabili dac gene situate n cromozomi
homologi sunt n poziia cis sau trans.
Astfel, dac fenotipurile dublu dominant i dublu recesiv sunt n
proporie mare (deci apar n urma retroncrucirii formele parentale) atunci
poziia celor dou alele de la cei doi loci este cis. Dac din contr,
fenotipurile dublu dominant i dublu recisiv sunt n proporie mic, deci apar
forme recombinate n proporie mare, atunci poziia celor dou gene de la
fiecare locus este trans.
Concluznd asupra celor cunoscute pn n prezent n legtur cu
producerea crossing-over se pot desprinde urmtoarele:

*La organismele superioare, crossing-overul are loc n timpul profazei


meiozei primare i anume n diplonem, cu toate c Matsuura (1950),
plaseaz acest fenomen mult mai trziu, n metafaza meiozei primare. Datele
experimentale demonstreaz i existena unui crossing-over somatic la
Drosophila sau la fungi.
*Crossing-overul este precedat de sinapsa cromozomilor homologi.
*Crossing-overul este un rezultat al schimbului dintre cromatide nu
dintre cromozomi, iar ntr-un singur crossing-over sunt implicate numai
dou din cele 4 cromatide. Pot avea loc n acelai moment mai multe
crossing-overe, n diferite puncte ale cromozomilor. Schwartz (1955),
noteaz un gen de crossing-overe ntre cromatidele aceluiai cromozom,
fenomen fr implicaii genetice, pentru structura celor dou cromatide
surori, obinute n urma replicrii, este identic.
*Crossing-overul este reciproc i simetric, se poate ns ntmpla s
aib loc i un crossing-over neegal sau chiar foarte rar , un crossing over
neomolog ( Sturtevant,1925).
*Crossing-overul este afectat, influenat de diveri factori cum ar fi
genotipul, temperatura, vrsta, sexul, apropierea de centromer, cantitatea de
heterocromatid, aberaiile cromozomiale (de exemplu inversia).
6. Principii de ntocmire a hrilor genetice cromozomale.
Hrile cromozomale sunt reprezentri grafice ale locilor n care
se gsesc localizate genele n cromozomii unui organism. ntocmirea hrilor
cromozomale presupune: 1. identificarea grupelelor de nlnuire a genelor
este posibil prin aplicarea tehnicii indicate n cadrul expunerii fenomenului
de linkage i const n efectuarea unei retroncruciri (test-cross) ntre un
organism dublu heterozigot i un organism homozigot dublu recesiv;

2.distana dintre acestea; 3. stabilirea ordinii genelor din cadrul aceluiai


cromozom.
Dac fenotipurile aprute n descenden indic raportul de 1:1,
rezult c cele dou gene aparin aceluiai grup de nlnuire, deci se gsesc
pe acelai cromozom.
Stabilirea distanei dintre dou gene aparintoare aceluiai grup de
nlnuire se realizeaz prin considerarea proporiei formelor recombinate n
descenden.
Cunoscnd c frecvena crossing-overului este o funcie direct
proporional cu distana dintre gene se poate trece la claculul reciprocitii
dintre acestea.
Frecvenele de recombinare fiind aditive, exprimarea raporturilor de
linkage se poate face sub forma distanelor dintre gene . O unitate de
recombinare este egal cu 1% crossing-over, corespunznd frecvenei de
recombinare ntre o pereche de gene .
Distanele dintre gene se exprim n uniti de recombinare sau n
morgoni.
Principiul metodei de determinare a poziiei genelor i a distanei
dintre gene n cadrul fiecrui grup de nlnuire este urmtorul:
- dac 2 gene Ai B sunt nluite i se determin c n acelai timp
exist o nlnuire i ntre genele Ai C rezult c i genele B i C sunt
nlnuite. Dac frecvena crossing-overului ntre segmentul purttor ale
genei A i segmentul cu gena B este de 30% i ntre Bi C este de 15%,
atunci pentru determinarea distanei dintre gene i a poziiei genelor se
utilizeaz proprietatea de aditivitatea frecvenelor, rezultnd c ntre genele

Ai C este o distan de 45 morgoni, frecvena crossing-overului dintre


acestea fiind de 45%. Poziia (secvena) celor 3 gene pe cromozom va fi:

Dac frecvena de recombinare ntre Ai C este de 10% atunci poziia


genelor A, B i C va fi.
Cu ajutorul acestor metode redate sub form de principii s-au ntocmit
hrile cromozomale pentru diferite specii.
Probleme
1. Se consider dou linii la Drosophila melanogaster, din care una are
caractere normale

(tipul slbatic), iar cealalt caractere mutante (tipul

mutant).
Tipul slbatic prezint: -ochii roii (+)
-corp gri (+)
-aripi normale (+)
Tipul mutant prezint: - ochi maron (m)
-corp negru (+)
-aripi trunchiate (tr).
Se ncrucieaz un mascul de tip slbatic cu o femel mutant. n F1
toi indivizii prezentau caractere slbatice. Se ncrucieaz apoi o femel din
F1 cu un mascul mutant.
S se stabileasc harta factorial pe baza rezultatelor urmtoare:

F2 ochi (m) +

Corp (n) +

Aripi( tr)+
715

+
180

tr
157

+
145

tr
719

Rspuns calcularea % recombinare va permite alctuirea hrii


genetice:
%recombinare ntre m i tr
75+76+157+145 = 20,17 = 453x100
2.245

2245

% recombinare ntre n i tr.


180+178+75+76 = 22,67 % = 509
2245

2245

= 22,67