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PRACTICA 5
Grupo 2351
EQUIPO 2
Martnez Hernndez Carolina
Pea Fabin Claudia
Rodrguez Rodrguez Hayleen
Snchez Lpez Eduardo Ignacio
Snchez Snchez Lorena Vanessa
principales
los
cuales
podemos
encontrar
en
diferentes
Clasificacin
-
Funcin
Las protenas, desarrollan un sinfn de acciones y actividades dentro de nuestro organismo.
Sus funciones principales son: estructurales, transporte, catalticas, comunicacin intracelular
y extracelular, contraccin y movimiento, coagulacin sangunea, proteccin inmunolgica,
reserva energtica, entre otras.
FUNDAMENTO
El mtodo de cuantificacin de protenas involucra las propiedades colorimtricas y de
absorcin de las protenas y puesto que la reaccin de Bradford no produce interferencia con
compuestos no proteicos inmiscuidos en el plasma de estudio. Por lo que la absorbancia a
595nm. Es directamente relacionada con la concentracin proteica del plasma estudiado.
Mtodo de Bradford: involucra la unin del colorante azul brillante de Coomassie G-250 a las
protenas. El colorante presenta tres estados de carga elctrica, con diferente espectro de
absorcin de la luz. Cuando este colorante es disuelto en una solucin cida, el colorante se
encuentra libre (sin unirse a la protena) en forma de catin y es de color rojizo, con una
mxima absorcin a 465nm. Sin embargo, cuando es disuelto en una solucin neutra, el
colorante se encuentra en un estado neutro y libre, expresando una coloracin verde. Cuando
el azul de Coomassie se encuentra unido a una protena, cambia a un estado anionico,
desarrollando un color azul, con una mxima absorcin a 595nm. La unin en un proceso
rpido (aprox. 2 minutos) y el complejo colorante-protena se mantiene estable hasta una hora
despus de producido.
OBJETIVO
Cuantificar la cantidad de protena total de una muestra de plasma humano.
Material y Equipo:
-
Reactivos
-
Material biolgico
-
Solucin salina: Pesar 4.3 mg. De cloruro de sodio y disolver en 500 ml. De agua destilada.
Solucin patrn: Pesar 5 mg. de albumina y diluirlos con 5 ml. de solucin salina.
Solucin blanco: colocar en el tubo etiquetado blanco 4 ml de solucin salina y 1 ml de
reactivo Bradford
-
Agregar 4.5 ml de solucin salina junto con .5 ml de solucin patrn y mezclar bien y
colocarlos en el primer tuvo.
Extraer 2.5 ml de la solucin obtenida y agregarlos en el segundo tubo junto con 2.5 ml de
solucin salina. Repetir la operacin hasta llegar al tubo nmero 6
RESULTADOS
% de Absorbancia
Blanco
0.00
0.069
0.063
0.036
0.030
0.020
0.009
Equipo
Muestra 1
Muestra 2
0.096
0.084
0.107
0.085
0.162
0.170
0.106
0.136
0.096
0.080
ANALISIS DE RESULTADOS
0.08
0.07
0.06
0.05
0.04
0.03
Absorbancia
0.02
0.01
0
Curva Patrn
Concentracin
CONCLUSIONES
De acuerdo con la comparacin de nuestros datos (resaltados en naranja) podemos concluir
que la concentracin de protenas en la muestra de plasma es elevada.
BIBLIOGRAFA
-Alberts B. A., Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts y P. Walter 2004 Biologa molecular de la
celula 3. Edicin. Omega. Espaa.
- DAVID L. NELSON; MICHAEL M. COX. Principios de bioqumica LEHNINGER. OMEGA,
2005 PP. 3-10
- WERNER, ESTERL. BIOQUIMICA fundamentos para medicina y ciencias de la vida.
REVERTE Barcelona 2008. PP 44-47
- Manual de prcticas para Laboratorio de Investigacin Formativa III FES Zaragoza.