UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

ZARAGOZA

Laboratorio de Investigacin Formativa III

PRACTICA 5

CUANTIFICACIN DE PROTENAS POR EL MTODO DE BRADFORD

PROFESORA: Biol. Reynalda Roldan P (BMC I)

Grupo 2351
EQUIPO 2
Martnez Hernndez Carolina
Pea Fabin Claudia
Rodrguez Rodrguez Hayleen
Snchez Lpez Eduardo Ignacio
Snchez Snchez Lorena Vanessa

CUANTIFICACIN DE PROTENAS POR EL MTODO DE BRADFORD

INTRODUCCIN
Las protenas son polmeros de unidades conocidas como aminocidos. Son macromolculas
de elevado peso molecular, formadas por cadenas lineales donde los aminocidos estn
unidos por enlaces peptdicos, tales enlaces se presentan entre un grupo amino del carbono
alfa de un aminocido y el grupo carboxilo del carbono alfa de otro aminocido. Los
aminocidos estn formados por un carbono asimtrico al cual estn unidos de manera
covalente un grupo amino, un grupo carboxilo, un hidrgeno y el grupo R, el cual es una
cadena lateral de longitud variable cuyas propiedades qumicas son variables.
Existen 20 aminocidos
conformaciones:

principales

los

cuales

podemos

encontrar

en

diferentes

Primaria: Cadena de ms de 50 aminocidos unidos por enlaces de tipo peptdico, se

denominan polipptidos.
Secundaria: Plegamiento de la cadena polipeptdica gracias a la formacin de puentes
de hidrgeno entre los tomos que forman el enlace peptdico, formando una cadena
en espiral.
Terciaria: depende del ordenamiento tridimensional de toda la secuencia lineal, junto
con las conformaciones secundarias. Los plegamientos se ven favorecidos por
interacciones de afinidad entre las regiones polares por un lado y de las no polares por
otro, la estructura se estabiliza por enlaces covalentes.
Cuaternaria: Unin de protenas (cadenas polipeptdicas) a travs de interacciones
mediadas por grupos prostticos, uniones de afinidad y puentes de disulfuro.

Clasificacin
-

De acuerdo al grupo R pueden ser: bsicos, cidos, polares y no polares.

Segn la estructura terciaria son protenas fibrosas, cadenas lineales de polipptidos.
Segn la estructura cuaternaria son protenas globulosas, cadenas peptdicas plegadas
de tal manera que forma una estructura compacta y esfrica.

Funcin
Las protenas, desarrollan un sinfn de acciones y actividades dentro de nuestro organismo.
Sus funciones principales son: estructurales, transporte, catalticas, comunicacin intracelular
y extracelular, contraccin y movimiento, coagulacin sangunea, proteccin inmunolgica,
reserva energtica, entre otras.

FUNDAMENTO
El mtodo de cuantificacin de protenas involucra las propiedades colorimtricas y de
absorcin de las protenas y puesto que la reaccin de Bradford no produce interferencia con
compuestos no proteicos inmiscuidos en el plasma de estudio. Por lo que la absorbancia a
595nm. Es directamente relacionada con la concentracin proteica del plasma estudiado.

Mtodo de Bradford: involucra la unin del colorante azul brillante de Coomassie G-250 a las
protenas. El colorante presenta tres estados de carga elctrica, con diferente espectro de
absorcin de la luz. Cuando este colorante es disuelto en una solucin cida, el colorante se
encuentra libre (sin unirse a la protena) en forma de catin y es de color rojizo, con una
mxima absorcin a 465nm. Sin embargo, cuando es disuelto en una solucin neutra, el
colorante se encuentra en un estado neutro y libre, expresando una coloracin verde. Cuando
el azul de Coomassie se encuentra unido a una protena, cambia a un estado anionico,
desarrollando un color azul, con una mxima absorcin a 595nm. La unin en un proceso
rpido (aprox. 2 minutos) y el complejo colorante-protena se mantiene estable hasta una hora
despus de producido.
OBJETIVO
Cuantificar la cantidad de protena total de una muestra de plasma humano.
Material y Equipo:
-

2 pipetas de cinco ml.

3 pipeta de 1 ml.
11 tubos de ensaye
1 vaso de 100 ml
1 gradilla
1 espectrofotmetro

Reactivos
-

NaCl 0.8 mg.

Albumina 2 mg.
Reactivo de Bradford 15 ml.

Material biolgico
-

5ml de plasma humano

PROCEDIMIENTO

Solucin salina: Pesar 4.3 mg. De cloruro de sodio y disolver en 500 ml. De agua destilada.
Solucin patrn: Pesar 5 mg. de albumina y diluirlos con 5 ml. de solucin salina.
Solucin blanco: colocar en el tubo etiquetado blanco 4 ml de solucin salina y 1 ml de
reactivo Bradford
-

Etiquetar 6 tubos de ensaye numricamente y un sptimo con la etiqueta de blanco

(servir para calibrar el espectrofotmetro)
Realizar una dilusin seriada:

Agregar 4.5 ml de solucin salina junto con .5 ml de solucin patrn y mezclar bien y
colocarlos en el primer tuvo.
Extraer 2.5 ml de la solucin obtenida y agregarlos en el segundo tubo junto con 2.5 ml de
solucin salina. Repetir la operacin hasta llegar al tubo nmero 6

Preaparacin de la muestra: tomar un tubo de ensaye limpio y agregar .5 ml de plasma

humano y 4.5 ml de solucin salina. De esta solucin tomar 1 y 2 ml para colocarlos en dos
tubos distintos y completar el volumen a 5 ml con solucin salina.
A las preparaciones de la curva patrn y a las muestra se les extrae 1 ml de su totalidad y se
les agrega 1 ml de reactivo Bradford
Ajustar la absorbancia del espectrofotmetro a cero con ayuda de la solucin blanco a una
longitud de onda de 595 nm.
Leer la absorbancia de la curva patrn y de las muestras.

RESULTADOS

Datos para curva patrn

N de tubo

% de Absorbancia

Blanco

0.00

0.069

0.063

0.036

0.030

0.020

0.009

Resultados de soluciones problema

Equipo

Muestra 1

Muestra 2

0.096

0.084

0.107

0.085

0.162

0.170

0.106

0.136

0.096

0.080

ANALISIS DE RESULTADOS
0.08
0.07
0.06
0.05
0.04
0.03

Absorbancia

0.02
0.01
0

Curva Patrn

Concentracin

CONCLUSIONES
De acuerdo con la comparacin de nuestros datos (resaltados en naranja) podemos concluir
que la concentracin de protenas en la muestra de plasma es elevada.

BIBLIOGRAFA
-Alberts B. A., Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts y P. Walter 2004 Biologa molecular de la
celula 3. Edicin. Omega. Espaa.
- DAVID L. NELSON; MICHAEL M. COX. Principios de bioqumica LEHNINGER. OMEGA,
2005 PP. 3-10
- WERNER, ESTERL. BIOQUIMICA fundamentos para medicina y ciencias de la vida.
REVERTE Barcelona 2008. PP 44-47
- Manual de prcticas para Laboratorio de Investigacin Formativa III FES Zaragoza.